Name: Nieprzewidywalny protokół przewlekłego łagodnego stresu do wywoływania anhedonii u myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-24T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: Poznaj protokół nieprzewidywalnego przewlekłego łagodnego stresu (UCMS) u myszy do wywoływania anhedonii i zmian w poziomie BDNF w hipokampie. Ta metoda umożliwia badanie patofizjologii depresji oraz testowanie skuteczności leków przeciwdepresyjnych w modelu o wysokiej trafności translacyjnej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy chcieliby podziękować Gali Breuer za pomoc w produkcji wideo. Badania te były wspierane przez izraelskie Ministerstwo Nauki, Technologii i Przestrzeni (grant nr 313552), przez Narodowy Instytut Psychobiologii w Izraelu (NIPI-208-16-17b) oraz przez Fundację Uniwersytetu Otwartego.

Wszystkie opisane tutaj metody zostały zatwierdzone przez Instytucjonalną Komisję ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania Akademickiej Wyższej Szkoły Tel-Awiw-Jafej.
1. Zwierzęta
<ol>
	<li>Użyj niekrewniaczych samców myszy Instytutu Badań nad Rakiem (ICR) w wieku przedadoleżnym (tj. 3 tygodnie).</li>
	<li>Losowo przydziel myszy do dwóch grup stresu o równej wielkości (UCMS vs. naiwne). Użyj 15 myszy na grupę leczoną (np. jeśli są 3 grupy leczenia farmakologicznego, użyj łącznie 90 myszy; 2 [UCMS vs. naiwne] × 3 [leczenie] × 15 [myszy] = 90)</li>
	<li>Myszy domowe według grupy stresu, a mianowicie myszy nienaiwne z samymi naiwnymi myszami i myszy z grupy UCMS z myszami tylko z grupy UCMS.</li>
	<li>Zwierzęta trzymane w standardowych klatkach domowych (30 × 15 × 14 cm; 5 myszy w klatce; każda klatka zawiera myszy ze wszystkich grup poddanych działaniu substancji [tj. grup leczonych farmakologicznie]; myszy należy utrzymywać w tej samej klatce przez cały czas trwania eksperymentu, chyba że wskazano inaczej).</li>
	<li>Wypełnij domowe klatki świeżymi trocinami (wymienianymi dwa razy w tygodniu) i dodaj kawałek waty dla wzbogacenia.</li>
	<li>Zwierzęta trzymane w klatce domowej przez okres aklimatyzacji wynoszący jeden tydzień. Zezwalaj ad libitum na dostęp do karmy dla gryzoni i wody (z wyjątkiem zastosowań stresorów UCMS).</li>
	<li>Utrzymuj stały 12-godzinny cykl światła/ciemności (chyba że wskazano inaczej). Podczas zabiegów UCMS utrzymuj naiwne myszy w ich domowej klatce.</li>
</ol>
2. UCMS
<ol>
	<li>Wyznacz oddzielne pomieszczenie w laboratorium, do wyłącznego użytku protokołu UCMS.</li>
	<li>Zaprojektuj 4-tygodniowy schemat stresorów, w którym każdy z siedmiu stresorów (tj. mokra klatka, zwilżone trociny, przechylona klatka, pusta klatka, stres społeczny, ograniczenie myszy i zakłócenie cyklu światła/ciemności) jest stosowany raz w tygodniu, w innym dniu każdego tygodnia (dla możliwego projektu patrz Tabela Uzupełniająca 1).</li>
	<li>Po 1 tygodniu aklimatyzacji (patrz 1.6) rozpocząć aplikację stresorów (upewnić się, że myszy mają około 4 tygodni).</li>
	<li>Każdego dnia, przed zastosowaniem stresora, należy przenieść klatki z grupy UCMS z pomieszczenia mieszkalnego do pomieszczenia UCMS.</li>
	<li>Podczas aplikacji stresorów zablokuj dostęp do karmy dla gryzoni i wody dla grupy UCMS (z wyjątkiem odwrócenia cyklu światła/ciemności). 
	UWAGA: Można to uzyskać poprzez wymianę oryginalnej pokrywy klatki (która zawiera żywność i wodę) na pustą pokrywę klatki.</li>
	<li>Zastosować następujące czynniki stresogenne zgodnie z wcześniej opracowanym schematem (patrz 2.2):
	<ol>
		<li>Mokry koszyk
		<ol>
			<li>Umieść myszy razem z ich odpowiednikami w klatce domowej w pustej klatce (tj. klatce bez trocin).</li>
			<li>Napełnij pustą klatkę wodą o temperaturze 24 ± 1 °C na głębokość 1 cm (wlewać ostrożnie, aby uniknąć bezpośredniego rozlania wody na myszy). Trzymaj myszy w mokrej klatce przez 4 godziny.</li>
			<li>Przenieś każdą mysz do oddzielnej, tymczasowej klatki do suszenia z lampą grzewczą nad nią, poduszką grzewczą pod nią i pościelą z ręcznika papierowego. Umieścić termometr w klatce przejściowej, aby sprawdzić, czy temperatura nie przekracza 37 °C.</li>
			<li>Trzymaj każdą mysz w tymczasowej klatce, aż wyschnie i będzie wyglądać na ożywioną (około 10-15 minut). Przywróć myszy do klatki domowej z tymi samymi odpowiednikami.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Zwilżone trociny
		<ol>
			<li>Wlej wodę o temperaturze 24 ± 1 °C do klatki domowej, aż trociny zostaną umiarkowanie zwilżone (wlewaj ostrożnie, aby uniknąć bezpośredniego rozlania wody na myszy). 
			UWAGA: Nie jest konieczne używanie świeżych trocin przed zalaniem wodą.</li>
			<li>Po 4 godzinach wysuszyć myszy w przejściowych klatkach, jak opisano w 2.6.1.3. Umieść myszy z domowymi odpowiednikami w klatce w sterylnej klatce ze świeżymi trocinami.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Pochylona klatka
		<ol>
			<li>Klatki uchylne pod kątem 45° względem ściany przez 4 godz. 
			UWAGA: W tym okresie myszy stresorowe pozostają w swojej klatce domowej ze swoimi odpowiednikami.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Pusta klatka
		<ol>
			<li>Przenieś myszy, wraz z ich specyficznymi odpowiednikami w klatce domowej, z klatki domowej do pustej klatki na 4 godziny.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Stres społeczny
		<ol>
			<li>Przenieś myszy, wraz z ich specyficznymi odpowiednikami w klatce domowej, z klatki domowej do klatki, która była trzymana przez inną grupę myszy przez okres co najmniej 3 dni przed zastosowaniem stresora. Trzymaj myszy w nieznanej klatce przez 4 godziny 
			UWAGA: Aby uniknąć niepewności, umieść naklejkę na każdej klatce, aby wskazać, że klatka pochodzi od myszy.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Powściągliwość myszy
		<ol>
			<li>Umieść każdą mysz osobno w czystym ograniczniku myszy na 4 godziny. Włóż myszy do klatki domowej z tymi samymi odpowiednikami.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Przerwanie cyklu światło/ciemność
		<ol>
			<li>Przenieś myszy w ich domowej klatce z ich specyficznymi odpowiednikami do pokoju UCMS. Trzymaj światło włączone przez 24 kolejne godziny 
			UWAGA: Tylko podczas tego stresora myszy będą miały dostęp ad libitum do karmy dla gryzoni i wody.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Po zastosowaniu stresora należy zwrócić klatki z grupy UCMS z pomieszczenia UCMS do pomieszczenia inwentarza.</li>
	<li>Podczas 4 tygodni ekspozycji na stres trzymaj naiwną grupę w klatkach domowych znajdujących się w pomieszczeniu mieszkalnym. 
	UWAGA: Myszy wcześniej nieleczone nie są przenoszone do pomieszczeń UCMS, ponieważ narażenie na kontakt z innymi myszami poddawanymi procedurze stresu może wywołać efekt stresogenny, nawet bez bezpośredniego narażenia na stresor89,90.</li>
	<li>Monitorowanie zwierząt podczas UCMS
	<ol>
		<li>Podczas aplikacji stresorowych (z wyjątkiem przerwania cyklu światła/ciemności) monitoruj myszy co 30 minut przez doświadczonego eksperymentatora. W przypadku zaobserwowania nietypowego stresu (np. drżenia, letargu, braku ruchu) (należy zachować szczególną ostrożność w przypadku potencjalnej hipotermii podczas "mokrej klatki" i "zwilżonych trocin"), natychmiast uwolnij mysz od stresora.</li>
		<li>Codziennie sprawdzaj każdą mysz pod kątem ran lub innych nieprawidłowości fizycznych lub behawioralnych. Jeśli są one kontrolowane, należy skonsultować się z lekarzem weterynarii laboratorium, aby zdecydować, czy mysz powinna zostać wykluczona z eksperymentu.</li>
		<li>Waż każdą mysz co 3 dni. Znaczne zmniejszenie masy ciała (tj. zmniejszenie o >10% w stosunku do masy wyjściowej lub >15% zmniejszenie w stosunku do ostatnio zmierzonej masy) należy zgłosić lekarzowi weterynarii laboratorium, a mysz należy wykluczyć z doświadczenia.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Badania przesiewowe na obecność leków przeciwdepresyjnych
<ol>
	<li>Następnego dnia po zaprzestaniu stosowania protokołu UCMS należy rozpocząć podawanie przypuszczalnych terapeutycznych środków farmakologicznych (tj. escitalopramu [15 mg/kg; i.p.; 3 tygodnie; przy podawaniu dziennie]30,50, lub nowatorskiego leczenia ziołowego [NHT; 30 mg/kg; i.p.; 3 tygodnie; jedno podanie dziennie]30,50). 
UWAGA: W celu uzyskania informacji na temat dawek innych leków nieuwzględnionych w niniejszym protokole patrz: flouksetyna46, 47, 49, 89, 90, paroksetyna51, imipramina35,41,42,43, dezypramina18,44,45, maprotylina46,47, mianseryna48, melatonina43,49, URB59754 i inne naturalne związki37,55,56,57,58. 
	UWAGA: NHT to ziołowa formuła, która została opracowana w naszym laboratorium. Składa się z 4 składników: 
	Crataegus pinnatifida, Triticum aestivum, Lilium Brownie i Fructus zizyphi jujube. Preparat przygotowuje się przez rozpuszczenie składników (uzyskanych w postaci liofilizowanych granulek) razem w soli fizjologicznej zawierającej 1% DMSO, aby uzyskać końcowe stężenie 0,47 mg/ml (każdy)27,50.</li>
	<li>Należy włączyć grupę kontrolną i podawać jej sól fizjologiczną (i.p.; 3 tygodnie; jedno wstrzyknięcie dziennie).</li>
	<li>Obliczyć dawkę leku w zależności od masy ciała myszy, uzyskanej podczas poprzedniego ważenia.</li>
	<li>Leki należy podawać przewlekle (zwykle jedno podanie leku dziennie we wstrzyknięciu dootrzewnowym [i.p.] przez 3 tygodnie). 
	UWAGA: Nie ma potrzeby znieczulania myszy przed wstrzyknięciem i.p.</li>
	<li>Kontynuuj ważenie myszy co 3 dni; ostatnie ważenie powinno mieć miejsce 3 dni przed ostatnim podaniem leku.</li>
</ol>
4. Ocena tonu hedonicznego w SPT
<ol>
	<li>Po fazie leczenia wyjmij każdą mysz z klatki domowej i umieść ją pojedynczo w klatce wypełnionej świeżymi trocinami i kawałkiem waty w celu wzbogacenia.</li>
	<li>Przygotuj dwie butelki, jedną z wodą destylowaną, a drugą z 2% roztworem sacharozy (można użyć innej substancji: np. sacharyna91, ethanol30). 
	UWAGA: Każda butelka powinna zawierać taką samą objętość płynu. Przed wprowadzeniem płynów nie są potrzebne ani wcześniejsze fazy aklimatyzacji, ani przyzwyczajenia.</li>
	<li>Zważyć dwie butelki i umieścić je na pokrywie klatki, aby umożliwić myszom ad libitum dostęp do obu roztworów przez okres (jeden z następujących): 24/48/72/144 h.</li>
	<li>Umieść dwie butelki na obu końcach pokrywy klatki. Umieść karmę dla gryzoni między dwiema butelkami, aby umożliwić ad libitum dostęp do jedzenia.</li>
	<li>Butelki należy wymieniać co 24 godziny, używając sterylnych butelek ze świeżym płynem. 
	UWAGA: Ponieważ myszy są trzymane pojedynczo, nie ma potrzeby wymiany trocin nawet po 144 h92.</li>
	<li>Zmieniaj pozycje dysz co 12 godzin (gdy czas trwania testu wynosi 24 godziny) lub raz dziennie (gdy czas trwania testu przekracza 24 godziny), aby zrównoważyć możliwość, że wyniki zostały zakłócone przez preferencję pozycji.</li>
	<li>Waż butelki każdego dnia, aby oszacować zużycie z każdej butelki.</li>
	<li>Obliczyć preferencję sacharozy jako stosunek spożycia sacharozy do całkowitego spożycia płynów (tj. sacharoza/sacharoza + woda).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

O ile MDD jest szeroko rozpowszechnionym, wysoce wyniszczającym zaburzeniem, które tylko częściowo jest rozwiązywane przez obecne opcje terapeutyczne, naukowe poszukiwanie lepszych metod leczenia jest nadal palącą kwestią. Wraz z innowacjami w technikach psychologicznych konieczne jest dodatkowe farmakoterapie dla dużej części pacjentów, którzy nie reagują na istniejące leki. Skrupulatne modele zwierzęce depresji są kluczowym elementem w tym zadaniu. Takie modele ułatwiają badania przesiewowe innowacyjnych leków przeciwd...

Duże zaburzenie depresyjne (MDD) jest wyniszczającym stanem, który został wskazany jako jedenasta przyczyna globalnego obciążenia chorobą1, z częstością występowania w ciągu całego życia 11–16%2,3. MDD wiąże się z poważnym upośledzeniem funkcjonowania społecznego i zawodowego pacjentów, obniżeniem jakości życia, licznymi zaburzeniami psychicznymi i fizycznymi oraz zwiększonym ryzykiem śmiertelności4,5,6,7. Istnieje kilka skutecznych farmakoterapii i interwencji psychologicznych w leczeniu MDD; Jednak więcej niż jedna trzecia pacjentów nie osiąga remisji przy istniejących opcjach terapeutycznych8,9,10,11. W związku z tym lepsze mapowanie patofizjologii MDD i opracowywanie nowych leków mają nadal ogromne znaczenie. Aby sprostać tym zadaniom, konieczne jest wykorzystanie naukowo potwierdzonych modeli zwierzęcych.
Nieprzewidywalny przewlekły łagodny stres (UCMS) to znany paradygmat gryzoni używany do wywoływania zachowań depresyjnych i lękowych12,13,14,15. Głównym celem UCMS jest generowanie deficytów behawioralnych (takich jak anhedonia i rozpacz behawioralna12,15) u myszy i szczurów oraz promowanie badań przesiewowych pod kątem potencjalnych terapeutycznych środków farmakologicznych. Procedura została po raz pierwszy wprowadzona przez Katz16, a następnie rozwinięta przez Willner17,18, przynosząc ogromne wyniki behawioralne i neurobiologiczne przypominające symptomatologię depresyjną12. Początkowo został zaprojektowany dla szczurów, a później dostosowany do myszy13,19. W tej procedurze młode zwierzęta są przewlekle narażone na różne nieprzewidywalne łagodne czynniki stresogenne. Następnie podawane są środki farmakologiczne. Wskaźniki behawioralne i biologiczne uzyskuje się po zakończeniu leczenia. Jednym z ważniejszych testów przeprowadzanych po UCMS jest test preferencji sacharozy (SPT). SPT opiera się na wrodzonej preferencji gryzoni do słodzonego roztworu, a nie do wody i jest powszechnie uznawany za niezbędny model translacyjny do oceny anhedonii12,18,20,21 (który jest podstawowym objawem ludzkiej depresji22,23).
Wkraczając w czwartą dekadę od jego wprowadzenia, UCMS został zastosowany na myszach i szczurach w niezliczonych badaniach. W większości tych badań wykorzystano UCMS jako metodę wywoływania zachowań podobnych do depresyjnych12,13,21,24. W badaniach wykorzystano również model do generowania efektów przeciwlękowych25,26,27,28,29. Preferencje dotyczące sacharozy i sacharyny są głównymi testami stosowanymi do oceny anhedonii po UCMS12,18,30,31,32,33. Inne godne uwagi miary wyników, które są szeroko uwzględniane w literaturze UCMS, to: test zawieszenia ogona (TST)28,34,35, test wymuszonego pływania (FST)28,34,36,37 (oba mierzą radzenie sobie ze stresem/rozpacz behawioralną), test otwartego pola (OFT; mierzący zachowanie eksploracyjne, zachowanie podobne do lęku i aktywność lokomotoryczną)25,28,38, podwyższony labirynt plus (EPM; mierzący zachowanie podobne do lęku)25,39,40 oraz dodatkowe testy mierzące zachowania depresyjne, lękowe, funkcje poznawcze i zachowania społeczne12. Przewlekłe podawanie trójpierścieniowych leków przeciwdepresyjnych (TCAs; imipramine35,41,42,43, desipramine18,44,45), tetracykliczne leki przeciwdepresyjne (TeCAs; maprotiline46,47, mianserin48), selektywne inhibitory wychwytu zwrotnego serotoniny (SSRIs; fluoksetyna46,47,49, escitalopram30,50, paroxetine51,52), melatonina43,49, agomelatine53, inhibitor hydrolazy amidowej kwasów tłuszczowych (FAAH) URB59754 i kilka naturalnych związków30,37,50,55,56,57,58 wykazano, że odwraca objawy depresyjne i lękowe wywołane przez UCMS. Ogólnie rzecz biorąc, te efekty terapeutyczne nie zostały uzyskane dzięki leczeniu doraźnemu12 (np. paroksetyna51,52, imipramine53,54,59,60, fluoksetyna53, agomelamina53, URB59754, brofaromina<klasa sup="xref">60).
Narażenie na stres w dzieciństwie i okresie dojrzewania jest głównym czynnikiem ryzyka przedniego powstawania MDD (wśród kilku innych zaburzeń psychicznych) w wieku dorosłym61,62,63. Oś podwzgórze-przysadka-nadnercza (HPA) jest głównym układem neuroendokrynnym regulującym biobehawioralną odpowiedź na stres64. Długotrwały stres we wrażliwych okresach neurorozwojowych w dzieciństwie i okresie dojrzewania zaburza równowagę osi HPA. Może wywołać stan zwiększonej aktywacji układu współczulnego, niezrównoważoną reaktywność i hiperkortyzolemię trwającą przez cały stan spoczynku; W ten sposób osoby stają się podatne na psychopatologie związane z depresją lub lękiem65,66,67,68. UCMS odpowiednio tłumaczy tę patogenezę: stosowanie stresu w okresie dojrzewania myszy wywołuje długotrwałą podatność podobną do depresyjnej. Co więcej, deficyty behawioralne wywołane przez UCMS są podszyte znaczącymi zmianami w funkcjonowaniu osi HPA (np. poprzez spowodowanie zmniejszenia neurotroficznego czynnika pochodzenia hipokampowego pochodzącego z mózgu [BDNF; białko wysoce zaangażowane w równowagę osi HPA69,70]30, lub poprzez upośledzenie regulacji wydzielania kortykosteronu do krwi71,72), podobnie jak patofizjologia u ludzi12,50,73.
UCMS ma kilka wzmacniających cech jako model depresji: np. (i) wywołanie anhedonii (która jest uważana za endofenotyp MDD23,74); (ii) UCMS umożliwia ocenę szerokiej gamy zachowań podobnych do depresji, takich jak rozpacz behawioralna, zmniejszone zachowania społeczne, pogorszenie stanu sierści i inne34; oraz (iii) przewlekłe (2-4 tygodnie), ale nie ostre, podawanie leków przeciwdepresyjnych po ekspozycji na stres może wywołać przedłużony efekt terapeutyczny równoległy do efektu uzyskanego u ludzi przez te same środki30,75,76,77.
Te cechy wzmacniają trafność UCMS w porównaniu z innymi zwierzęcymi modelami depresji. FST78 i TST79 to dwa modele, które są używane do wywoływania lub oceny zachowań podobnych do depresji. Jako modele do wywoływania zachowań depresyjnych mają wyraźne braki w porównaniu z UCMS; Nie skłaniają one do długoterminowych zmian w zachowaniu i mogą jedynie odzwierciedlać dostosowanie się do ostrego stresu, a nie powodować trwałej manifestacji podobnej do depresji76.
Alternatywnym, zwierzęcym modelem depresji jest model porażki społecznej. W przeciwieństwie do FST i TST, ten model (podobnie jak UCMS) wymaga zastosowania przewlekłego stresu (id est [tj.], powtarzającego się poddawania zwierzęcia awersyjnym spotkaniom społecznym z dominującymi odpowiednikami)76,77,80,81,82. Główną zaletą modelu porażki społecznej jest to, że wykorzystuje on bodźce społeczne jako stresory, odzwierciedlając w ten sposób rolę stresu psychospołecznego w patogenezie depresji u człowieka. Podobnie jak w przypadku UCMS, model porażki społecznej wywołuje długotrwałe zachowania podobne do depresji i zmiany neuroendokrynne. Równolegle do UCMS, deficyty wywołane porażką społeczną mogą zostać odwrócone poprzez przewlekłe, ale nie ostre, podawanie leków przeciwdepresyjnych. Ogólnie rzecz biorąc, istnieje duże poparcie dla wykorzystania zarówno UCMS, jak i porażki społecznej jako przedklinicznych aparatów do badania patofizjologii depresji76,77,81,82. Jednak główną wadą modelu porażki społecznej jest to, że można go zastosować tylko do samców gryzoni, ponieważ samice nie wykazują wystarczająco agresywnych zachowań wobec siebie nawzajem83. W przeciwieństwie do tego, wykazano, że UCMS wywołuje kilka efektów podobnych do depresji zarówno u samców, jak i samic myszy34.
Przewidywalny przewlekły łagodny stres (PCMS) to kolejny model gryzoni, który wymusza reżim codziennej powtarzającej się ekspozycji na stres ograniczający28,84,85,86,87. Kilka badań wykazało, że PCMS zwiększa zachowania podobne do lęku28,87; chociaż istnieją sprzeczne doniesienia na temat zdolności PCMS do wywoływania długotrwałych zachowań depresyjnych. W przeciwieństwie do UCMS, PCMS przyniósł mniej zadowalające wyniki, odnosząc się do jego zdolności do wywoływania stanu podobnego do anhedonicznego28,84,86. Jest to zgodne z fenomenologią człowieka, w której nieprzewidywalne stresory są bardziej szkodliwe niż te przewidywalne88.

<table><tbody><tr><td>Lampa grzewcza</td><td>Ikea</td><td>AA-19025-3</td><td></td></tr><tr><td>Poduszka grzewcza</td><td>Sachs</td><td>EF-188B</td><td></td></tr><tr><td>Ogranicznik</td><td></td><td></td><td></td>myszy</tr><tr><td>Przenośna waga elektroniczna (*.** g)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Standardowy gumowy korek, rozmiar 5</td><td>Ancare</td><td>#5.5R</td><td>Aby uniknąć rozlania podczas SPT</td></tr><tr><td>Prosta otwarta rurka do picia (2.5")</td><td>Ancare</td><td>OT-100</td><td>Aby uniknąć rozlania podczas SPT (włóż rurkę do picia do gumowego korka)</td></tr> <tr><td>2% roztwór</td><td></td><td></td><td></td>sacharozy</tr><tr><td>50 ml stożkowa probówka wirówkowa</td><td></td><td></td><td>Dla SPT</td></tr><tr><td>Myszy przedmłodzieżowe (około 20 dni) ICR</td><td>Envigo</td><td>Hsd:ICR (CD-1)</td><td></td></tr></tbody></table>

nieprzewidywalny protokół przewlekłego łagodnego stresu do wywoływania anhedonii u myszy

The Unpredictable Chronic Mild Stress Protocol for Inducing Anhedonia in Mice

Depresja jest bardzo powszechnym i wyniszczającym stanem, który jest tylko częściowo zwalczany przez obecne farmakoterapie. Brak odpowiedzi na leczenie ze strony wielu pacjentów skłania do opracowania nowych alternatyw terapeutycznych i lepszego zrozumienia etiologii zaburzenia. Modele przedkliniczne o zaletach translacyjnych są podstawowe dla tego zadania. W tym miejscu przedstawiamy protokół metody nieprzewidywalnego przewlekłego łagodnego stresu (UCMS) u myszy. W tym protokole dorastające myszy są przewlekle narażone na wymianę nieprzewidywalnych łagodnych stresorów. Podobnie jak w przypadku patogenezy depresji u ludzi, narażenie na stres w wrażliwym okresie dojrzewania myszy wywołuje fenotyp podobny do depresji, widoczny w wieku dorosłym. UCMS może być stosowany do badań przesiewowych leków przeciwdepresyjnych pod kątem różnorodności zachowań podobnych do depresji i wskaźników neuromolekularnych. Jednym z bardziej znanych testów oceniających zachowania podobne do depresji u gryzoni jest test preferencji sacharozy (SPT), który odzwierciedla anhedonię (podstawowy objaw depresji). SPT zostanie również przedstawiony w niniejszym protokole. Zdolność UCMS do wywoływania anhedonii, wywoływania długotrwałych deficytów behawioralnych i umożliwiania odwrócenia tych deficytów poprzez przewlekłe (ale nie ostre) leczenie lekami przeciwdepresyjnymi, wzmacnia ważność protokołu w porównaniu z innymi protokołami zwierzęcymi dotyczącymi wywoływania zachowań podobnych do depresji.

W celu potwierdzenia skuteczności procedury UCMS w indukowaniu deficytów typu depresyjnego przeprowadzono kontrolę manipulacji. Samce myszy ICR (linia outbred) zostały losowo przydzielone do grupy UCMS lub grupy naiwnej (4 tygodnie, zgodnie z opisem w protokole 2.2). Następnie przeprowadzono test SPT (6 dni, zgodnie z opisem w protokole 4), aby ocenić, czy myszy po poddaniu UCMS wykazywały deficyty hedoniczne. Wkrótce potem myszy uśmiercono i całkowicie wypreparowano hipokamp w celu oceny...

Tutaj prezentujemy nieprzewidywalny protokół chronicznego łagodnego stresu u myszy. Protokół ten indukuje długoterminowy fenotyp podobny do depresji i umożliwia ocenę skuteczności przypuszczalnych leków przeciwdepresyjnych w odwracaniu behawioralnych i neuromolekularnych deficytów depresyjnych.

Nieprzewidywalny protokół przewlekłego łagodnego stresu do wywoływania anhedonii u myszy

Depression is a highly prevalent and debilitating condition, only partially addressed by current pharmacotherapies. The lack of response to treatment by ...

Główną zaletą tej techniki jest to, że odpowiednio tłumaczy główne cechy neurobiologiczne i behawioralne związane z patogenezą, etiologią i leczeniem depresji. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w zrozumieniu patofizjologii lęku i depresji oraz promować rozwój nowych metod leczenia farmakologicznego. Implikacje tej techniki rozciągają się na terapię depresji, ponieważ umożliwia ona badania przesiewowe w kierunku potencjalnych leków przeciwdepresyjnych, przypominając jednocześnie przedłużony przebieg remisji widoczny u ludzi.Zacznij od wypełnienia domowych klatek świeżymi trocinami i dodaj kawałek waty dla wzbogacenia. Trzymaj zwierzęta w klatce domowej przez okres aklamacji wynoszący jeden tydzień i utrzymuj stały 12-godzinny cykl światła/ciemności. Pozwól ad libitum na dostęp do karmy dla gryzoni i wody.Zaprojektuj czterotygodniowy schemat stresorów, w którym każdy z siedmiu stresorów jest wykorzystywany raz w tygodniu, w innym dniu każdego tygodnia. Po tygodniu aklamacji zainicjuj aplikację stresorów na czterotygodniowych myszach w pomieszczeniu UCMS. W przypadku pierwszego stresora umieść myszy razem z ich odpowiednikami w klatce domowej w pustej klatce.Napełnij pustą klatkę wodą o temperaturze 24 stopni Celsjusza plus minus jeden do głębokości jednego centymetra i trzymaj myszy w mokrej klatce przez cztery godziny. Następnie przenieś każdą mysz do osobnej tymczasowej klatki do suszenia z lampą grzewczą nad nią, poduszką grzewczą pod nią i ręcznikiem papierowym. Umieść termometr w klatce przejściowej, aby sprawdzić, czy temperatura nie przekracza 37 stopni Celsjusza.Trzymaj każdą mysz w klatce przejściowej, aż wyschnie i będzie wyglądać na ożywioną, a następnie wróć myszy do klatki domowej z tymi samymi odpowiednikami. W przypadku zwilżonych trocin, słaba woda utrzymuje się w temperaturze 24 stopni Celsjusza plus minus jeden stopień Celsjusza do klatki domowej, aż trociny zostaną umiarkowanie zwilżone. Po czterech godzinach wysusz myszy w przejściowych klatkach.Następnie umieść myszy z ich odpowiednikami w domowej klatce w sterylnej klatce ze świeżymi trocinami. W przypadku następnego stresora przechyl klatkę pod kątem 45 stopni do ściany przez cztery godziny. W przypadku pustej klatki przenieś wszystkie pięć myszy wraz z ich specyficznymi odpowiednikami z klatki domowej do pustej klatki na cztery godziny.W przypadku piątego stresora przenieś myszy wraz z ich specyficznymi odpowiednikami z klatki domowej z klatki domowej do klatki, która była trzymana przez inną grupę myszy przez okres co najmniej trzech dni przed zastosowaniem stresora. Trzymaj myszy w nieznanej klatce przez cztery godziny. W przypadku szóstego czynnika stresogennego umieść każdą mysz osobno w czystym ograniczniku myszy na cztery godziny.Następnie włóż myszy z powrotem do klatki domowej z tymi samymi odpowiednikami. W przypadku ostatniego stresora przenieś myszy w ich domowej klatce z ich określonymi odpowiednikami do pokoju UCMS. Utrzymuj światło włączone przez 24 kolejne godziny.Na koniec, po zastosowaniu czynnika stresogennego, należy zwrócić klatki grupy UCMS z pomieszczenia UCMS do pomieszczenia z pomieszczeniami inwentarskimi. Podczas czterech tygodni ekspozycji na stres trzymaj naiwną grupę w ich domowych klatkach znajdujących się w pomieszczeniu mieszkalnym. Następnego dnia po zaprzestaniu stosowania protokołu UCMS należy rozpocząć podawanie przypuszczalnych terapeutycznych środków farmakologicznych.Po fazie leczenia wyjmij każdą mysz z klatki domowej i umieść ją osobno w klatce wypełnionej świeżymi trocinami i kawałkiem waty w celu wzbogacenia. Następnie przygotuj dwie butelki, jedną z wodą destylowaną, a drugą z 2% roztworem sacharozy. Zważyć dwie butelki i umieścić je na obu końcach pokrywy klatki, a następnie umieścić karmę dla gryzoni między dwiema butelkami, aby umożliwić myszom ad libitum dostęp zarówno do roztworów, jak i pokarmu przez okres 24, 48, 72 lub 144 godzin.Po 12 godzinach lub raz dziennie, jeśli czas trwania testu przekracza 24 godziny, zważ butelki, aby oszacować zużycie z każdej butelki i zamień pozycje dysz, aby zrównoważyć możliwość, że wyniki zostały zakłócone przez preferencję pozycji. Na koniec waż butelki każdego dnia, aby oszacować spożycie z każdej butelki. Grupa UCMS wykazała zmniejszoną preferencję sacharozy w porównaniu z grupą nieleczoną, co sugeruje, że protokół UCMS był skuteczny w wywoływaniu anhedonii.Co więcej, grupa UCMS wykazała zmniejszone poziomy BDNF w hipokampie w porównaniu z grupą nieleczoną, co sugeruje, że protokół UCMS doprowadził do zmniejszenia poziomów BDNF w hipokampie, co jest widoczne w ludzkiej depresji. Wyniki wykazały, że grupa z solą fizjologiczną UCMS wykazała znaczny spadek preferencji sacharozy w porównaniu z grupą wcześniej leczoną solą fizjologiczną, a także w porównaniu zarówno z grupą escitalopramu UCMS, jak i grupą UCMS NHT, co sugeruje, że zarówno escitalopram, jak i NHT normalizowały anhedonię wywołaną przez UCMS. Ponadto grupa UCMS z solą fizjologiczną wykazała obniżone poziomy BDNF w hipokampie w porównaniu z grupą nieleczoną solą fizjologiczną, a także w porównaniu zarówno z grupą escitalopramu UCMS, jak i grupą UCMS NHT, co sugeruje, że zarówno escitalopram, jak i NHT normalizowały wywołane przez UCMS obniżenie poziomów BDNF w hipokampie.Zgodnie z tą procedurą można wykonać inne metody, takie jak test zawieszenia ogona, test wymuszonego pływania i podwyższony labirynt plus. Testy te służą do oceny rozpaczy behawioralnej, a także zachowań eksploracyjnych i lękowych.

the-unpredictable-chronic-mild-stress-protocol-for-inducing-anhedonia

Research

JoVE Journal

Behavior

Zachowanie

Ten film pokazuje metodę wywoływania przewlekłego stresu u myszy poprzez wielokrotne unieruchomienie, prowadzące do uwalniania kortykosteronu i zmniejszonej aktywności receptora glutaminianu w neuronach, co skutkuje zachowaniem podobnym do depresji.

Wywoływanie zachowań podobnych do depresji u myszy poprzez stres związany z unieruchomieniem

Źródło: Yan, Z.,  i wsp. Ocena działania przeciwdepresyjnego Xiaoyaosan na przewlekle zestresowane myszy. J. Vis. Exp. (2019). Film przedstawia proces tworzenia mysiego modelu przewlekłej depresji wywołanej stresem i oceny zachowań depresyjnych. Przewlekłe stosowanie różnych stresorów wyzwala uwalnianie kortykosteronu, co prowadzi do nadmiernego pobudzenia neuronów i ostatecznie śmierci neuronów, co skutkuje objawami podobnymi do depresji u myszy.

Indukcja i ocena depresji u myszy poprzez przewlekłą ekspozycję na stres

Tutaj opisano metody rozwoju mysiego modelu podchronicznego i łagodnego stresu związanego z porażką społeczną i wykorzystano je do zbadania patogennych cech depresji, w tym objawów podobnych do hiperfagii i polidypsji po wzroście masy ciała.

Mysi model podchronicznego i łagodnego stresu porażki społecznej w celu zrozumienia deficytów behawioralnych i fizjologicznych wywołanych stresem

Protokół nieprzewidywalnego chronicznego łagodnego stresu (UCMS) jest sprawdzoną metodą badania zmian behawioralnych i fizjologicznych związanych z przewlekłym stresem i objawami depresyjnymi. Osiem tygodni od nałożenia protokołu UCMS wywołuje zmiany w zachowaniu i złe wyniki zdrowotne u gryzoni obu płci.

Nieprzewidywalny protokół przewlekłego łagodnego stresu w celu wywołania objawów depresyjnych, zmian w zachowaniu i negatywnych skutków zdrowotnych u gryzoni

Ten artykuł dostarcza uproszczony i ustandaryzowany protokół indukcji zachowań depresyjnych u myszy chronicznie unieruchomionych za pomocą ogranicznika. Ponadto wyjaśniono zachowanie i techniki fizjologiczne w celu weryfikacji indukcji depresji.

Protokół przewlekłego stresu unieruchamiającego w celu wywołania zachowań podobnych do depresji u myszy

Zadanie bariery labiryntu Y to test zachowania, który bada motywację do wydatkowania wysiłku na nagrodę. W tym miejscu omawiamy testowanie wielu dobrze zweryfikowanych przewlekłych stresorów, w tym przewlekłego kortykosteronu i stresu porażki społecznej z tym zachowaniem, a także nowego przewlekłego niedyskryminującego stresu porażki społecznej (CNSDS), który jest skuteczny u kobiet.

Przewlekły stres zmienia zachowania związane z wysiłkiem w zadaniu bariery Y-Maze u myszy

Ten protokół przedstawia model chronicznego nieprzewidywalnego łagodnego stresu (CUMS) dla depresji oparty na mongolskiej teorii medycznej, wraz z metodami walidacji testów behawioralnych.

Przewlekły nieprzewidywalny łagodny stres u szczurów na podstawie medycyny mongolskiej

Ten protokół szczegółowo opisuje, jak przeprowadzić 10-dniowy przewlekły stres społeczny u wcześnie dorastających samców myszy, aby doprowadzić do długotrwałego unikania społecznego w wieku dorosłym u ponad 60% myszy.

Przewlekły stres związany z porażką społeczną u myszy we wczesnym okresie dorastania

Poprzez integrację czterech codziennych stresorów społecznych, niniejsze badanie opisuje model wielokrotnego zintegrowanego stresu społecznego (MISS) dla zaburzeń psychicznych u samic myszy C57BL/6J. Po dziesięciu dniach powtarzającej się ekspozycji na MISS myszy rozwinęły fenotypy podobne do depresji i lęku, zapewniając w ten sposób naturalny, oparty na etiologii model zwierzęcy do badania zaburzeń psychicznych u kobiet.

Wieloraki zintegrowany model stresu społecznego dla zaburzeń psychicznych u samic myszy C57BL/6J

Ten artykuł opisuje wykorzystanie chronicznego stresu społecznego intruza jako etologicznie istotnego paradygmatu do modelowania depresji poporodowej i lęku u gryzoni w okresie laktacji.

Wykorzystanie przewlekłego stresu społecznego do modelowania depresji poporodowej u gryzoni w okresie laktacji

Poznaj protokół nieprzewidywalnego przewlekłego łagodnego stresu (UCMS) u myszy do wywoływania anhedonii i zmian w poziomie BDNF w hipokampie. Ta metoda umożliwia badanie patofizjologii depresji oraz testowanie skuteczności leków przeciwdepresyjnych w modelu o wysokiej trafności translacyjnej.

Nieprzewidywalny protokół przewlekłego łagodnego stresu do wywoływania anhedonii u myszy

Przeglądaj więcej filmów