Name: Zastosowanie wysokowydajnego zautomatyzowanego systemu mikrobioreaktorów do produkcji modelowej IgG1 w komórkach CHO (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: Poznaj protokół zautomatyzowanej produkcji przeciwciał IgG1 w komórkach CHO przy użyciu systemu mikrobioreaktorów. Metoda umożliwia równoległą hodowlę 48 kultur z precyzyjną kontrolą parametrów.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Autorzy chcieliby podziękować Scottowi Lute za wsparcie analityczne, którego udzielili. Częściowe wewnętrzne finansowanie i wsparcie dla tych prac zostało zapewnione przez CDER Critical Path Program (CA #1-13). Projekt ten został częściowo wsparty przez powołanie do Programu Staży/Uczestnictwa w Badaniach w Biurze Produktów Biotechnologicznych Amerykańskiej Agencji ds. Żywności i Leków, zarządzanego przez Oak Ridge Institute for Science and Education na mocy umowy międzyagencyjnej między Departamentem Energii USA a FDA.

<ol><li>Köhler, G., Milstein, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1172191">Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity.</a> Nature. 256, 495-497 (1975).</li>
<li>Buss, N. A., Henderson, S. J., McFarlane, M., Shenton, J. M., de Haan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibody+therapeutics%3A+history+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibody therapeutics: history and future.</a> Current Opinion in Pharmacology. 12 (5), 615-622 (2012).</li>
<li>Jakobovits, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+fully+human+antibodies+by+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Production of fully human antibodies by transgenic mice.</a> Current Opinion in Biotechnology. 6 (5), 561-566 (1995).</li>
<li>Maksimenko, O. G., Deykin, A. V., Khodarovich, Y. M., Georgiev, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+Transgenic+Animals+in+Biotechnology%3A+Prospects+and+Problems%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Naturae%22%5BJournal%5D)">Use of Transgenic Animals in Biotechnology: Prospects and Problems.</a> Acta Naturae. 5 (1), 33-46 (2013).</li>
<li>Jayapal, K. P., Wlaschin, K. F., Hu, W., Yap, M. G. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/279541139_Recombinant_Protein_Therapeutics_from_CHO_Cells_-_20_Years_and_Counting">Recombinant protein therapeutics from CHO cells-20 years and counting.</a> Chemical Engineering Progress. 103 (10), 40(2007).</li>
<li>Velugula-Yellela, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+media+and+antifoam+selection+on+monoclonal+antibody+production+and+quality+using+a+high+throughput+micro-bioreactor+system%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Progress%22%5BJournal%5D)">Impact of media and antifoam selection on monoclonal antibody production and quality using a high throughput micro-bioreactor system.</a> Biotechnology Progress. , (2017).</li>
<li>Foltz, I. N., Karow, M., Wasserman, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+Emergence+of+Therapeutic+Monoclonal+Antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Evolution and Emergence of Therapeutic Monoclonal Antibodies.</a> Circulation. 127 (22), 2222-2230 (2013).</li>
<li>Kondragunta, B., Drew, J. L., Brorson, K. A., Moreira, A. R., Rao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+clone+selection+using+high-throughput+bioreactors%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Progress%22%5BJournal%5D)">Advances in clone selection using high-throughput bioreactors.</a> Biotechnology Progress. 26 (4), 1095-1103 (2010).</li>
<li>Altamirano, C., Paredes, C., Cairo, J., Godia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+of+CHO+cell+culture+medium+formulation%3A+simultaneous+substitution+of+glucose+and+glutamine%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Progress%22%5BJournal%5D)">Improvement of CHO cell culture medium formulation: simultaneous substitution of glucose and glutamine.</a> Biotechnology Progress. 16 (1), 69-75 (2000).</li>
<li>Selvarasu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+in+silico+modeling+and+metabolomics+analysis+to+characterize+fed-batch+CHO+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Combined in silico modeling and metabolomics analysis to characterize fed-batch CHO cell culture.</a> Biotechnology and Bioengineering. 109 (6), 1415-1429 (2012).</li>
<li>Seth, G., Ozturk, S., Zhang, C. <a target="_blank" href="https://www.amazon.com/Cell-Culture-Bioprocess-Engineering-Wei-Shou/dp/0985662603">Cell Culture Bioprocess Engineering</a>. Hu, W. -S. , Wei-Shou Hu. Ch. 4 97-126 (2012).</li>
<li>McKeehan, W. M. K., Ham, R. <a target="_blank" href="http://journals.sagepub.com/doi/pdf/10.1177/000456328201900613">The Growth Requirements of Vertebrate Cells In vitro</a>. Ham, R., Waymouth, C., Chapple, P. , Ch. 223 223-243 (1981).</li>
<li>Jordan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+culture+medium+improvement+by+rigorous+shuffling+of+components+using+media+blending%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Cell culture medium improvement by rigorous shuffling of components using media blending.</a> Cytotechnology. 65 (1), 31-40 (2013).</li>
<li>Castro, P. M. L., Hayter, P. M., Ison, A. P., Bull, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+a+statistical+design+to+the+optimization+of+culture+medium+for+recombinant+interferon-gamma+production+by+Chinese+hamster+ovary+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Microbiology+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Application of a statistical design to the optimization of culture medium for recombinant interferon-gamma production by Chinese hamster ovary cells.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 38 (1), 84-90 (1992).</li>
<li>Liu, C. -H., Chu, I. M., Hwang, S. -M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factorial+designs+combined+with+the+steepest+ascent+method+to+optimize+serum-free+media+for+CHO+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Enzyme+and+Microbial+Technology%22%5BJournal%5D)">Factorial designs combined with the steepest ascent method to optimize serum-free media for CHO cells.</a> Enzyme and Microbial Technology. 28 (4-5), 314-321 (2001).</li>
<li>Parampalli, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developement+of+serum-free+media+in+CHO-DG44+cells+using+a+central+composite+statistical+design%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Developement of serum-free media in CHO-DG44 cells using a central composite statistical design.</a> Cytotechnology. 54 (1), 57-68 (2007).</li>
<li>Hsu, W. -T., Aulakh, R. P., Traul, D. L., Yuk, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+microscale+bioreactor+system%3A+a+representative+scale-down+model+for+bench-top+bioreactors%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Advanced microscale bioreactor system: a representative scale-down model for bench-top bioreactors.</a> Cytotechnology. 64 (6), 667-678 (2012).</li>
<li>Janakiraman, V., Kwiatkowski, C., Kshirsagar, R., Ryll, T., Huang, Y. -M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+high-throughput+mini-bioreactor+system+for+systematic+scale-down+modeling%2C+process+characterization%2C+and+control+strategy+development%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Progress%22%5BJournal%5D)">Application of high-throughput mini-bioreactor system for systematic scale-down modeling, process characterization, and control strategy development.</a> Biotechnology Progress. 31 (6), 1623-1632 (2015).</li>
<li>Kim, B. J., Diao, J., Shuler, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mini-scale+bioprocessing+systems+for+highly+parallel+animal+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Progress%22%5BJournal%5D)">Mini-scale bioprocessing systems for highly parallel animal cell cultures.</a> Biotechnology Progress. 28 (3), 595-607 (2012).</li>
<li>Legmann, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+predictive+high-throughput+scale-down+model+of+monoclonal+antibody+production+in+CHO+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">A predictive high-throughput scale-down model of monoclonal antibody production in CHO cells.</a> Biotechnology and Bioengineering. 104 (6), 1107-1120 (2009).</li>
<li>Schäpper, D., Alam, M. N. H. Z., Szita, N., Lantz, A. E., Gernaey, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+microbioreactors+in+fermentation+process+development%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Application of microbioreactors in fermentation process development: a review.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 395 (3), 679-695 (2009).</li>
<li>Hegab, H. M., ElMekawy, A., Stakenborg, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+microfluidic+microbioreactor+technology+for+high-throughput+submerged+microbiological+cultivation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">Review of microfluidic microbioreactor technology for high-throughput submerged microbiological cultivation.</a> Biomicrofluidics. 7 (2), 021502(2013).</li>
<li>Rameez, S., Mostafa, S. S., Miller, C., Shukla, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+miniaturized+bioreactors+for+cell+culture+process+development%3A+Reproducibility%2C+scalability%2C+and+control%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Progress%22%5BJournal%5D)">High-throughput miniaturized bioreactors for cell culture process development: Reproducibility, scalability, and control.</a> Biotechnology Progress. 30 (3), 718-727 (2014).</li>
<li>Xu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+TAP+Ambr+250+disposable+bioreactors%2C+as+a+reliable+scale-down+model+for+biologics+process+development%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Progress%22%5BJournal%5D)">Characterization of TAP Ambr 250 disposable bioreactors, as a reliable scale-down model for biologics process development.</a> Biotechnology Progress. 33 (2), 478-489 (2017).</li>
<li>Delouvroy, F., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3981575/">Evaluation of the advanced micro-scale bioreactor (ambr™) as a highthroughput tool for cell culture process development.</a> BMC Proceedings. 7 (6), 1-3 (2013).</li>
<li>Kelly, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+performance+of+semi-continuous+cell+culture+in+an+ambr15+microbioreactor+using+dynamic+flux+balance+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Progress%22%5BJournal%5D)">Optimizing performance of semi-continuous cell culture in an ambr15 microbioreactor using dynamic flux balance modeling.</a> Biotechnology Progress. , (2017).</li>
</ol>

Zastrzeżenie: Ta publikacja odzwierciedla poglądy autora i nie powinna być interpretowana jako reprezentująca poglądy lub politykę FDA.

Prawidłowe i wydajne działanie zautomatyzowanego systemu mikrobioreaktorów wymaga terminowego wykonania wielu zautomatyzowanych kroków. Jednym z najważniejszych elementów działania systemu jest programowanie oprogramowania. Jeśli podczas pisania programu wystąpi jakikolwiek błąd, w eksperymencie wystąpią poważne błędy, które mogą skutkować nieoczekiwanymi zmianami w procesie, strategii żywienia, strategii pobierania próbek lub jakości produktu końcowego, które mogą unieważnić wyniki badania. Innym ważnym aspektem działania systemu jest prawidłowe umieszczenie i dokręcenie płyty zaciskowej, aby zapewnić prawidłową kontrolę tlenu rozpuszczonego. Najczęstszą oznaką nierównomiernego dokręcenia płyty zaciskowej są nieoczekiwane zmiany w pomiarach DO dla zbiorników 1, 6, 7 i 12 (narożne zbiorniki reaktora). Ogólna niestabilność DO wskazuje na poluzowanie uszczelek na przewodach dolotowych gazu w płytach zaciskowych. Taki scenariusz może utrudnić osiągnięcie wartości zadanej tlenu rozpuszczonego. Inną powszechną pułapką, której należy unikać podczas rozpoczynania eksperymentu, jest pozostawienie komórek zbyt długo podczas etapu inokulacji, co powoduje ich osiadanie. Im mniej czasu komórki spędzają w pozycji siedzącej, tym mniejsza szansa, że stopniowo zmniejszająca się liczba komórek inokulum zostanie dodana chronologicznie do naczyń reaktora, co może wywołać znaczne odchylenie, które nieświadomie szkodzi wynikom badań. Lepiej jest zaszczepiać w wielu etapach, tj. zaszczepiać każdą stację hodowlaną jedna po drugiej, z przerwami pomiędzy nimi, aby komórki nie siedziały na płytce zaszczepiającej dłużej niż 15 minut.
Jeśli chodzi o codzienne użytkowanie, utrzymanie sterylności ma kluczowe znaczenie. Chociaż system znajduje się w komorze bezpieczeństwa biologicznego, sterylność nie jest gwarantowana ze względu na częste ruchy do i z kaptura. W związku z tym wszystko, co trafia do okapu, musi być spryskane 70% IPA. Po drugie, ważne jest, aby podczas hodowli wystąpiło minimalne pienienie; Media mogą zatykać przewody gazowe i wydechowe, prowadząc do uszkodzenia płyty zaciskowej, a nawet podstawowych elementów poniżej. Prewencyjne dodawanie środka przeciwpieniącego ma kluczowe znaczenie w każdym projekcie programu mikrobioreaktora. W przypadku "wypienienia się" korzystne byłoby przestrzeganie protokołu czyszczenia producenta, co może zapobiec trwałemu uszkodzeniu płyt zaciskowych. Alternatywnie, użycie naczyń bez spryskiwania może być korzystne w przypadku mniejszej gęstości komórek lub podczas pracy w trybie wsadowym, ponieważ wyższy stosunek powierzchni do objętości umożliwia wydajne dostarczanie tlenu nawet przy braku rozpylacza. Jednak naczynia bez rozprysku mogą nie być przydatne w hodowlach o dużej gęstości komórek lub perfuzji, ponieważ przestrzeń nad głową jest niewystarczająca, aby nadążyć za rosnącym zużyciem tlenu przez hodowle.
System mikrobioreaktora ma wiele zalet, ponieważ umożliwia równoległe prowadzenie wielu kontrolowanych kultur na małą skalę z większą kontrolą niż w przypadku kolb wstrząsowych. 17 W związku z tym system ułatwia przeprowadzanie badań przesiewowych, DoE, wysokoprzepustowych badań klonów i badań transfekcji. Zautomatyzowana obsługa cieczy zmniejsza również zmienność między analitykami, jednocześnie minimalizując żmudną i czasochłonną pracę przeszkolonego personelu. Chociaż system ma kilka zalet, istnieje kilka kluczowych wad, które należy wziąć pod uwagę. Po pierwsze, objętość hodowli wynosząca 15 ml znacznie ogranicza pobieranie próbek w trakcie procesu i końcowego materiału do zbioru, a ostatnio dostępnych jest wiele alternatywnych bioreaktorów na małą skalę (do 500 ml). Jednym z najnowszych osiągnięć systemu jest integracja zautomatyzowanego bioreaktora w mikroskali z analizatorem BioProfile FLEX 2 firmy Nova Biomedical, co łagodzi problem pobierania próbek w trakcie procesu poprzez zmniejszenie objętości próbki do analizy gęstości komórek i składników odżywczych. Korzyści mogą obejmować szybką konfigurację i praktycznie brak czyszczenia, co prowadzi do oszczędności operacyjnych, jednak koszt jednostek jednorazowych powinien być brany pod uwagę w przypadku projektów długoterminowych, ponieważ zakup jednostek może być droższy niż konwencjonalnych systemów wielokrotnego użytku.
Metoda omówiona w tym artykule nadaje się przede wszystkim do hodowli komórkowych w trybie wsadowym, ale może być modyfikowana w zależności od potrzeb użytkownika. Każda stacja hodowli posiada niezależną kontrolę temperatury, natomiast DO i pH mogą być zmieniane na poziomie poszczególnych zbiorników reaktora. Sartorius oferuje również oprogramowanie do planowania DoE, zaprojektowane specjalnie w celu umożliwienia dostosowania eksperymentów do systemu mikrobioreaktorów. Badania DoE na dużą skalę z wykorzystaniem nowego oprogramowania DoE dostarczonego przez producenta mogą pomóc w optymalizacji pożywek i suplementów. Chociaż system mikrobioreaktora nie jest tutaj stosowany, umożliwia również badania partii zasilających. System nie został jeszcze zoptymalizowany pod kątem perfuzyjnych hodowli komórkowych. Przeprowadzono jednak ograniczone badania i próby mające na celu naśladowanie operacji hodowli komórek perfuzyjnych w obecnym systemie mikrobioreaktorów. 26 Metodę tę można zmodyfikować w celu naśladowania kultur perfuzyjnych o dużej gęstości poprzez osadzanie komórek. Zmieniając wysokość, na jaką pipeta jest wkładana do reaktora i optymalizując czas stabilizacji, pożywka może być usuwana i uzupełniana, aby odzwierciedlić tryb obfitości hodowli. W tym rozwijającym się obszarze pojawiają się nowe produkty, które mogą działać lepiej niż przedstawiony tutaj system, jeśli pożądany jest tryb hodowli perfuzyjnej.
Podsumowując, badanie to demonstruje zastosowanie zautomatyzowanych mikrobioreaktorów i związanych z nimi analiz w operacjach hodowli komórek CHO w celu wytworzenia i scharakteryzowania modelowego przeciwciała monoklonalnego IgG1. Podkreślono w nim rolę, jaką mikrobioreaktory na małą skalę odgrywają w produkcji bioprocesowej oraz ich wpływ na rozwój kultur komórkowych i badania przesiewowe pożywek. Chociaż korzystanie ze zautomatyzowanych systemów na małą skalę ma wiele zalet, aby w pełni wykorzystać ich korzyści, konieczne jest zrozumienie procesu i charakterystyka analityczna. Badanie to dostarcza użytkownikowi wskazówek dotyczących korzystania ze zautomatyzowanego systemu reaktora w mikroskali, który może być rozwijany i ulepszany zgodnie z indywidualnymi potrzebami badawczymi.

Przeciwciała monoklonalne (mAb) zostały po raz pierwszy wytworzone w mysich komórkach hybrydoma w 1975 roku1. Od tego czasu nastąpił wzrost produkcji rekombinowanych białek w celu humanizacji mAb w celu zwiększenia bezpieczeństwa i skuteczności in vivo2,3,4. Większość procesów produkcji białek rekombinowanych wykorzystuje komórki jajnika chomika chińskiego (CHO) ze względu na łatwość, z jaką można je przystosować do pożywki wolnej od surowicy, ich zdolność do wytwarzania białek o podobnych modyfikacjach potranslacyjnych do wrodzonego białka ludzkiego oraz ich niezawodność jako komórek gospodarza5,6.
Rośnie zapotrzebowanie na szybsze dostarczanie produktów dla większych populacji pacjentów o stałej jakości. Oprócz korzyści ekonomicznych, repertuar chorób leczonych za pomocą mAb rośnie, który obecnie obejmuje choroby autoimmunologiczne, powikłania potransplantacyjne, zapalenie stawów i nowotwory7. Średnie plony dla nowoczesnych komercyjnych linii produkcyjnych mAb mieszczą się zazwyczaj w zakresie 5-6 g/L i nadal rosną5. Częściowo udało się to osiągnąć dzięki inżynierii ogniw CHO i ulepszonemu badaniu przesiewowemu linii produkcyjnych przy użyciu bioreaktorów o wysokiej przepustowości8. Jednak większość wzrostu produkcji białka przypisuje się ulepszeniom procesów, w tym postępom w optymalizacji pożywek, warunkach hodowli komórkowych i ulepszonych strategiach żywienia7,9,10. Suplementacja składników odżywczych jest niezbędna nie tylko dla prawidłowego wzrostu komórek, ale także dla wydajnej produkcji wysokiej jakości białka. Co więcej, komórki wymagają stechiometrycznego dodawania określonych składników odżywczych, co wymaga dodatkowej wiedzy w celu optymalizacji strategii żywienia6,11. Tradycyjne metody optymalizacji obejmują miareczkowanie poszczególnych składników pożywki i mieszanie pożywek z projektami mieszanin. Metody te są jednak czasochłonne, pracochłonne i wiążą się z ryzykiem związanym z błędem ludzkim12,13.
Badania nad optymalizacją mediów wcześniej opierały się na kolbach do wytrząsania i bioreaktorach o pojemności 1-2 litrów, które mogą być zbyt drogie pod względem surowców i kapitału ludzkiego. Zastosowano również mikropłytki, ale metody te zapewniają ograniczoną skalowalność. Co więcej, może to nadal wymagać wielu czasochłonnych przebiegów, które wprowadzają zmienność między partiami, która zasłania zmienność CQA spowodowaną składem podłoża i strategią podawania14,15,16. W związku z tym pojawiło się zapotrzebowanie na wysokowydajne i wysoce spójne równoległe systemy bioreaktorów17,18,19,20.
Biorąc pod uwagę znaczne koszty związane z eksploatacją tradycyjnych bioreaktorów laboratoryjnych (0,5-5 L), mikrobioreaktory stanowią redukującą koszty alternatywę dla oceny produkcji leków pochodzenia biologicznego. 21 Bioreaktory z mieszadłem na skalę laboratoryjną są niezawodne i dostarczają gęste dane za pomocą tablic sensorycznych. Systemy sterowania ze sprzężeniem zwrotnym pozwalają na łatwy nadzór nad pracą. Jednak montaż, kalibracja, czyszczenie, koszty pracy, koszty podłoża i wymagania dotyczące sterylizacji sprawiają, że bioreaktory laboratoryjne z mieszadłem są drogie i pracochłonne w eksploatacji. Kolby wstrząsowe i płytki do mikromiareczkowania eliminują niektóre koszty i problemy związane z pracą związaną z bioreaktorami na większą skalę, ale te alternatywy zapewniają słabą kontrolę nad warunkami przetwarzania i generują dane o niskiej gęstości, często tylko pomiary punktu końcowego. 22
Alternatywnie, mikrobioreaktory wykorzystują małą objętość roboczą, aby zapewnić podejście do rozwoju linii komórkowych i procesów poprzedzających w dół. Skala eksperymentów z mikrobioreaktorami może znacznie obniżyć koszty eksploatacji dzięki mniejszemu wykorzystaniu energii, substratu, pracy, przestrzeni i mediów. 23 Mikrobioreaktory są jak kolby do wytrząsania, ponieważ są łatwe w obsłudze ze względu na swoje rozmiary, ale zachowują zalety tradycyjnych bioreaktorów laboratoryjnych dzięki kontroli online pH, temperatury, rozpuszczonego tlenu i zużycia kwasu/zasady, a także wyprowadzaniu danych w czasie rzeczywistym dotyczących parametrów jakościowych, w tym składu gazu wyjściowego. Skala mikrobioreaktora pozwala na wysokoprzepustowe badania przesiewowe, które mogą być przydatne do selekcji klonów i opracowywania procesów. 24
Wykazano, że zaawansowany bioreaktor mikroskalowy jest skutecznym narzędziem do charakteryzowania i rozwoju procesu hodowli komórek CHO18. W tym przypadku zautomatyzowany system ambr15, składający się z 48 mikrobioreaktorów połączonych równolegle, które okazały się porównywalne z klasycznymi reaktorami zbiornikowymi z mieszadłem w badaniach na dużą skalę, 25 został użyty w sposób analogiczny do wcześniejszych prac, które zoptymalizowały skład pożywki dla linii komórkowej CHO-DG44 produkującej modelową chimeryczną klasę IgG1<sup="xref">6. Porównano i przeanalizowano wpływ różnych warunków pożywek na wzrost i miano. W artykule przedstawiono ogólne wytyczne dotyczące obsługi systemu mikrobioreaktora i analizy próbek pożywek surowych.

<table><tbody><tr><td>CHO DG44 Linia komórkowa</td><td>Invitrogen</td><td>A1100001</td><td></td></tr><tr><td>Zautomatyzowany system mikrobioreaktorów AMBR 15 Automatyczny mikrobioreaktor</td><td>Sartorius</td><td>001-2804</td><td>Kultura</td></tr><tr><td>komórkowa AMBR 15 Jednorazowe bioreaktory - Sparged</td><td>Sartorius</td><td>001-2B80</td><td></td></tr><tr><td>1 ml jednorazowe końcówki do pipet, sterylizowane</td><td>Pipeta jednorazowa Sartorius</td><td>A-0040</td><td></td></tr><tr><td>5 ml końcówki, sterylizowane</td><td>Sartorius</td><td>A-0039</td><td></td></tr><tr><td>24 Płytki głębinowe</td><td>Sartorius</td><td>A-0038</td><td></td></tr><tr><td>1 Płytki studzienne</td><td>Sartorius</td><td>A-0068</td><td></td></tr><tr><td>Licznik komórek Vi-Cell XR</td><td>Beckman Coulter</td><td>731050</td><td>automatyczny licznik komórek</td></tr><tr><td>EX-CELL&nbsp; Przeciwpieniący (napromieniowany promieniami gamma)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>59920C-1B</td><td></td></tr><tr><td>CD OptiCHO AGT Medium</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A1122205</td><td></td></tr><tr><td>200 mM L-glutamina</td><td>Corning</td><td>25-005-CV</td><td></td></tr><tr><td>100X Penicylina/Streptomycyna</td><td>Corning</td><td>30-001-CI</td><td></td></tr><tr><td>125 mL Termosy z dnem F (sterylne, wentylowane)</td><td>Fisher Scientific</td><td>PBV12-5</td><td></td></tr><tr><td>Szklane kolby obrotowe 125 ml</td><td>Corning Life Sciences Glass</td><td>4500-125</td><td></td></tr><tr><td>250 mL PP Stożkowe probówki wirówkowe (sterylne)</td><td>Nalgene (Thermo Scientific)</td><td>376814</td><td></td></tr><tr><td>Automatyczny licznik komórek TC20</td><td>BioRad Laboratories, Inc.</td><td></td><td></td>1450103</tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>10x PBS</td><td>Corning</td><td>46-013-CM</td><td></td></tr><tr><td>BioProfile FLEX Analyzer</td><td>Nova Biomedical</td><td>49418</td><td>Analizator składników odżywczych</td></tr><tr><td>Octet Red 96</td><td>Pall Fort&eacute; Życiorys&nbsp;</td><td>99-0042</td><td>Białko A Biosensor</td></tr><tr><td>Białko A Zanurz i odczyt Biosensory</td><td>Pall Fort&eacute; Życiorys&nbsp;</td><td>18-5010</td><td></td></tr><tr><td>Polipropylenowa 96-dołkowa mikropłytka, F-bottom, kominowa,</td><td>Greiner Bio-One</td><td>655209</td><td></td></tr></tbody></table>

zastosowanie wysokowydajnego zautomatyzowanego systemu mikrobioreaktorów do produkcji modelowej igg1 w komórkach cho

Use of High-Throughput Automated Microbioreactor System for Production of Model IgG1 in CHO Cells

Zautomatyzowane mikroreaktory (15 ml) mogą być użytecznym narzędziem dla inżynierów zajmujących się hodowlą komórek. Ułatwiają one jednoczesne wykonywanie szerokiej gamy warunków eksperymentalnych, jednocześnie minimalizując potencjalną zmienność procesu. Zastosowania tego podejścia obejmują: badania przesiewowe klonów, zmiany temperatury i pH, optymalizację pożywek i suplementów. Co więcej, małe objętości reaktorów sprzyjają projektowaniu dużych eksperymentów, które badają szeroki zakres warunków. Pozwala to na znaczną optymalizację procesów poprzedzających przed zwiększeniem skali, w przypadku gdy zakres eksperymentów jest bardziej ograniczony ze względu na ograniczenia czasowe i ekonomiczne. Zautomatyzowane systemy bioreaktorów w mikroskali oferują różne zalety w porównaniu z tradycyjnymi jednostkami do hodowli komórkowych na małą skalę, takimi jak kolby do wytrząsania lub kolby obrotowe. Jednak podczas opracowywania procesu na skalę pilotażową należy zwrócić szczególną uwagę na to, aby korzyści te zostały zrealizowane. Przy ostrożnym uruchomieniu system może umożliwić automatyzację na wysokim poziomie, można go zaprogramować do uruchamiania DOE z większą liczbą zmiennych i może skrócić czas pobierania próbek po zintegrowaniu z analizatorem składników odżywczych lub licznikiem komórek. Integracja przedstawionych tutaj heurystyk wywodzących się od ekspertów z obecnymi zautomatyzowanymi eksperymentami z bioreaktorami w mikroskali może zminimalizować powszechne pułapki, które utrudniają uzyskanie miarodajnych wyników. W skrajnych przypadkach nieprzestrzeganie przedstawionych tutaj zasad może prowadzić do uszkodzenia sprzętu, które wymaga kosztownych napraw. Ponadto systemy mikrobioreaktorów mają małe objętości hodowli, co utrudnia scharakteryzowanie warunków hodowli komórkowych. Liczba i ilość próbek pobieranych w trakcie procesu hodowli w trybie wsadowym jest ograniczona, ponieważ objętość robocza nie może spaść poniżej 10 ml. W ramach tej metody omówione zostaną zalety i wady systemów bioreaktorów w mikroskali.

Monitorowanie krytycznych parametrów procesu oraz innych parametrów hodowli komórkowych w trakcie ich prowadzenia jest istotnym aspektem bioprocesowania. Licznik komórek oraz analizator składników odżywczych zostały wykorzystane do ilościowego określenia pięciu parametrów charakteryzujących wzrost komórek, zużycie składników odżywczych i powstawanie produktów ubocznych. Liczbę komórek ustalano codziennie dla wszystkich warunków hodowli. Średnie gęstości żywych komórek oraz ich żywotność przedstawiono na Rysunku 3 wraz z przedziałem ±1 SD. Profile składników odżywczych i produktów ubocznych również przedstawiono z przedziałem ±1 SD w fazie stacjonarnej hodowli. Nachylenie tego profilu reprezentuje średnie tempo zużycia glukozy i glutaminy oraz tempo produkcji mleczanu. Ogólnie rzecz biorąc, wyniki te potwierdzają możliwość monitorowania tych parametrów w systemie mikrobioreaktora, a także zdolność tego systemu do utrzymywania tych parametrów w wąskim zakresie.
Całkowitą produktywność kultur komórkowych określono przy użyciu systemu biosensorów białka A po przefiltrowaniu zebranego medium hodowlanego przez filtr PVDF o rozmiarze porów 0,2 mikrona. Specyficzna produktywność na komórkę wynosiła od 0,87 pg/cell-d do 1,15 pg/cell-d, co przedstawiono na Rysunku 4. Na podstawie tych wyników można zbadać szeroki zakres warunków w celu doboru składu pożywki oraz strategii dożywiania, które zmaksymalizują ilość produkowanego białka przy minimalnym nakładzie pracy w procedurach eksperymentalnych.
<img alt="Schemat ustawienia pipetowania laboratoryjnego; obejmuje roztwory PBS i NaOH oraz końcówki do pipet do celów badawczych." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58231/58231fig1.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rycina 1"> 
Rysunek 1: Układ systemu mikrobioreaktora z 4 stacjami hodowlanymi (CS), z których każda posiada 12 naczyń reakcyjnych. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58231/58231fig1large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej figury.</a>
<img alt="Diagram równowagi gry alokacji zasobów; przedstawia rundy, wybory i wyniki wypłat." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58231/58231fig2.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2: Przykład konfiguracji płytki z próbkami dla podstawowego eksperymentu ilościowego z regeneracją w systemie biosensora białka A. wiersz 1 (czerwone „R”) jest zarezerwowany dla próbki referencyjnej (t.j. matryca bez analitytu); wiersz 2 (akwamarynowy) to zestaw wzorców (stężenia podano w µg/mL); wiersze 3 i 4 (pomarańczowe) to zestawy niskich i wysokich kontroli pozytywnych (odpowiednio „PL” i „PH”); wiersze od 5 do 10 (fioletowe) zawierają nieznane próbki; wiersze 1 i 12 (szare) to domyślne pozycje programu dla buforów regeneracyjnych („R”) i neutralizujących („N”). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58231/58231fig2large.jpg" target="_blank">Prosimy kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Wykresy wzrostu komórek i profilu metabolitów; żywotność, VCD, glukoza, glutamina, mleczan w funkcji czasu." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58231/58231fig3.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rycina 3"> 
Rysunek 3: a) Profile średniej gęstości żywych komórek oraz żywotności w czasie trwania procesu w danej partii. Przedstawiono również ± 1 SD, co wskazuje na ścisłą kontrolę wzrostu komórek w systemach mikrobioreaktorów. b) Średni profil poziomu składników odżywczych dla glukozy i glutaminy, a także średni profil produktów ubocznych dla mleczanu. Przedstawiono również ± 1 SD, co wskazuje na ścisłą kontrolę składu pożywki w systemach mikrobioreaktorów. (N=3, wszystkie warunki przeprowadzono w trzech powtórzeniach). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58231/58231fig3large.jpg" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Wykres pudełkowy porównujący warunki hodowli w pożywkach; wykres przedstawia wartości Qp dla trzech warunków." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58231/58231fig4.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rysunek 4"> 
Rycina 4: Reprezentatywny wykres pudełkowy średniej wydajności specyficznej dla różnych warunków pożywek. (N=3, wszystkie warunki przeprowadzono w trzech powtórzeniach) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58231/58231fig4large.jpg" target="_blank">Prosimy kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>

Przedstawiono szczegółowy protokół jednoczesnego działania 48 równoległych kultur komórkowych w różnych warunkach w systemie mikrobioreaktora. Opisano proces hodowli komórek, zbiór i późniejszą analizę miana przeciwciał.

Zastosowanie wysokowydajnego zautomatyzowanego systemu mikrobioreaktorów do produkcji modelowej IgG1 w komórkach CHO

Automated microscale bioreactors (15 mL) can be a useful tool for cell culture engineers. They facilitate the simultaneous execution of a wide variety of ...

Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na niektóre z ważnych pytań w dziedzinie produkcji procesów biologicznych dotyczących aspektów charakterystyki linii komórkowych oraz optymalizacji pośrednich i procesów. Zaletą tej techniki jest to, że zapewnia większą kontrolę w kolbach wstrząsowych i umożliwia automatyzację oraz wykonywanie dużej liczby badań na małą skalę w celu szybkiego generowania danych. Procedurę zademonstrują Sai Rashmika Velugula i Casey Kohnhorst, pracownicy naukowi w moim laboratorium.Zacznij od zanurzenia bulionu trzy razy 10 do siódmych komórek pokazowych na mililitr zamrażarki w łaźni wodnej o temperaturze 37 stopni Celsjusza. Gdy pozostanie tylko mały skrawek lodu, delikatnie odpipetuj szybko rozmrożoną zawiesinę komórkową kilka razy i przenieś jeden mililitr komórek do sterylnej 125-mililitrowej wentylowanej kolby wstrząsającej zawierającej 29 mililitrów pożywki OptiCHO. Umieścić kolbę w inkubatorze do hodowli komórkowych w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 8% CO2, potrząsając nią z prędkością 130 obr./min.Hodowla komórek po 72 godzinach w 100 mililitrach świeżej pożywki o temperaturze 37 stopni Celsjusza w 125-mililitrowej kolbie przędzalniczej przez kolejne 72 godziny inkubacji w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 8% CO2 z mieszaniem przy 70 obr./min. Trzeciego dnia subhodowli dodać świeżą, wstępnie ogrzaną pożywkę do kolby przędzarki, aby utrzymać komórki na poziomie co najmniej 90% żywotności przez ostatnie 24 godziny hodowli. Następnego ranka kliknij ikonę pulpitu zdalnego i kliknij połącz.Po podłączeniu zdalnego pulpitu otwórz oprogramowanie licznika komórek i zainstaluj nowy Reagent Pak. Następnie opróżnij korek Trypan Blue i zalej system. Następnie zminimalizuj połączenie zdalne i otwórz oprogramowanie mikro bioreaktora, używając istniejącego eksperymentu jako szablonu do utworzenia nowego eksperymentu.Przed rozpoczęciem cyklu należy zdefiniować płytki używane podczas przebiegu w sekcji naśladowczej oprogramowania i umieścić 12 sterylnych naczyń hodowlanych w każdej stacji hodowlanej. Umieść autoklawizowane płytki zaciskowe na wierzchu naczyń i umieść płytki mieszające na wierzchu płytek zaciskowych, upewniając się, że każdy kołek jest bezpiecznie włożony. Następnie zabezpiecz clamp płytki za pomocą dostarczonych śrub i końcówek.Aby uruchomić system, zeskanuj kod kreskowy dostarczony z każdym naczyniem do hodowli. System zainicjuje się i sprawdzi obecność odpowiednich naczyń. Ustaw regulator temperatury na 37 stopni Celsjusza, a mieszanie na 1 000 obr./min i włącz monitor pH tlenu rozpuszczonego.Następnie uruchom program ładowania średniego. Po załadowaniu całej pożywki, 35 mikrolitrów EX-CELL Antifoam zostanie dodane z płytki Antifoam do naczyń hodowlanych. Po 30 minutach rozpocznij rejestrację rozpuszczonego tlenu i pH w pożywce hodowlanej, pozwalając rozpuszczonemu tlenowi osiągnąć wartość zadaną 50%Po zrównoważeniu rozpuszczonego tlenu włącz dodawanie zasad w tle, aby osiągnąć nastawę pH 7,1 dla wszystkich naczyń hodowlanych.Następnego ranka wykonaj wstrzymany krok PH i przenieś całą zawartość kolby wirowej do sterylnej stożkowej probówki o pojemności 250 mililitrów w celu odwirowania. Zawiesić osad w wystarczającej ilości świeżego podłoża, aby końcowa gęstość wynosiła od 10 do 6 komórek CHO na mililitr po dodaniu inokulum do naczyń hodowlanych i dodać zawieszone komórki do odpowiednich studzienek sterylnej płytki 24-dołkowej z pokrywką. Dodaj trzy mililitry inokulum do każdej studzienki i umieść płytkę inokulum na wyznaczonym biurku wewnątrz kaptura.Następnie pozwól naczyniom hodowlanym zrównoważyć się przez co najmniej godzinę i zainicjuj pięć kroków zliczania komórek EX-CELL w programie. Do codziennej analizy składników odżywczych i metabolitów w drugim dniu należy umieścić płytki z uchwytami probówek z próbkami na wyznaczonych pokładach i załadować otwarte probówki do mikrowirówek do odpowiednich uchwytów. Następnie umieść próbki w tacy analizatora, aby przeprowadzić analizę składników odżywczych.Aby zakończyć bieg, najpierw wyłącz regulację temperatury, a następnie mieszanie. Zatrzymaj kontrolę pH tlenu rozpuszczonego i dodawanie bazy tła, wszystkie inne elementy sterujące i monitor systemu. Odkręć zacisk i mieszaj płytki, wyjmij naczynia hodowlane i wkręć płytki suszące do stacji hodowlanej.Następnie wykonaj dwugodzinny cykl suszenia w programie; Kliknięcie przycisku Stop w oprogramowaniu bioreaktora po zakończeniu cyklu suszenia. Aby zebrać komórki, przenieś płyn z hodowli komórkowej z naczyń reaktora do odpowiednich stożkowych probówek do odwirowania i przefiltruj supernatanty przez sterylne filtry PVDH o średnicy 0,22 mikrometra. Następnie przenieś jeden mililitr każdego sterylnego supernatantu do hodowli komórkowej do pojedynczych probówek wirówkowych o pojemności 1,5 mililitra w celu przechowywania w temperaturze minus 20 stopni Celsjusza do analizy miana.Aby zmierzyć miana IgG próbek, najpierw włącz system biosensorów wspomagających białko. Po ogrzaniu lampy przez co najmniej jedną godzinę, pozwól próbkom zrównoważyć się do temperatury pokojowej i zanurz jedną końcówkę wspomagającą białko na próbkę w pożywce ze świeżymi komórkami przez co najmniej 30 minut. Następnie ustaw temperaturę płyty na 26 stopni Celsjusza.Załaduj próbki do systemu i uruchom test przy użyciu domyślnego testu o wysokiej czułości z regeneracją w oprogramowaniu do akwizycji danych. Korzystając ze zintegrowanego licznika komórek, można codziennie uzyskiwać średnią gęstość i żywotność żywotnych komórek we wszystkich warunkach hodowli. Za pomocą analizatora składników odżywczych możemy również uzyskać profile składników odżywczych i produktów ubocznych, wykazując możliwość monitorowania tych atrybutów w systemie mikrobioreaktora.Co więcej, całkowitą produktywność kultur komórkowych w różnych warunkach hodowli można określić ilościowo za pomocą systemu biosensorów wspomagających białko, jak pokazano. Próbując wykonać tę procedurę, należy pamiętać, że protokół działa tylko wtedy, gdy programowanie jest wykonane poprawnie; Zapewnienie terminowego wykonywania kroków protokołu przy minimalnych błędach. Zgodnie z tą procedurą można zastosować inne metody, takie jak: chromatografia cieczowa, spektrometria mas i wielokątowe rozpraszanie światła, aby odpowiedzieć na dodatkowe pytania dotyczące właściwości fizycznych i chemicznych wytwarzanego produktu.

use-high-throughput-automated-microbioreactor-system-for-production

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioinżynieria

Opisano wysokoprzepustową, zautomatyzowaną platformę rozwoju linii komórkowych do produkcji białkowych leków terapeutycznych. Wdrożenie sortera komórek BD FACS Aria, obrazownika CloneSelect Imager oraz systemu do obsługi cieczy TECAN Freedom EVO wykazało znaczące zwiększenie wydajności przetwarzania w procesie rozwoju linii komórkowych, przy jednoczesnej poprawie jakości linii komórkowych i wysokiej powtarzalności.

Wysokoprzepustowa zautomatyzowana platforma do opracowywania linii komórkowych produkcyjnych dla białkowych produktów terapeutycznych

Film wyjaśnia proces wytwarzania przeciwciał w komórkach gospodarza ssaków, od ekspresji genów do wydzielania. Obejmuje transkrypcję, translację, rozpoznawanie sygnału, prawidłowe fałdowanie i ostateczne uwolnienie do ośrodka zewnątrzkomórkowego przez pęcherzyki wydzielnicze.

Produkcja i oczyszczanie rekombinowanych przeciwciał z komórek ssaków

Film demonstruje metodę wytwarzania przeciwciał terapeutycznych przy użyciu stabilnie transfekowanych komórek ssaków. Suplementacja tryptonem stymuluje podział komórek, powodując przerost i wspierając wyższą wydajność przeciwciał. Pożywka zawierająca przeciwciała jest zbierana, filtrowana i przechowywana do dalszego wykorzystania.

Wytwarzanie przeciwciał z okresowej hodowli przerostu transfekowanych komórek ssaków

Synteza ludzkich przeciwciał monoklonalnych jest pierwszym krokiem w badaniach mających na celu rozwikłanie patofizjologicznych mechanizmów odpowiedzi immunologicznej za pośrednictwem autoprzeciwciał. Opracowaliśmy protokół wytwarzania rekombinowanych przeciwciał monoklonalnych ludzkiej immunoglobuliny G (IgG) z komórek B posortowanych krwią, w tym izolację komórek B, klonowanie przeciwciał i syntezę in vitro.

Wytwarzanie rekombinowanych ludzkich przeciwciał monoklonalnych IgG z unieśmiertelnionych sortowanych komórek B

Laboratoryjna produkcja białek eukariotycznych z odpowiednią modyfikacją potranslacyjną stanowi istotną barierę. Oto solidny protokół z szybkim ustanowieniem i przekształceniem w ekspresję białek przy użyciu systemu ekspresji ssaków. System ten wspomaga selektywne znakowanie aminokwasów, selektywne znakowanie białek i małocząsteczkowych modulatorów składu glikanów.

Wysoka ekspresja rekombinowanych białek ludzkich z przejściową transfekcją komórek HEK293 w zawiesinie

Ten protokół opisuje produkcję przeciwciała terapeutycznego w systemie ekspresji ssaków. Opisane metody obejmują przygotowanie DNA wektora, stabilną transfekcję i adaptację ludzkiej linii komórkowej 293 zarodka nerki bez surowicy, stworzenie kultur na dużą skalę i oczyszczanie za pomocą chromatografii powinowactwa.

Produkcja i oczyszczanie przeciwciała terapeutycznego na skalę laboratoryjną

Ten manuskrypt opisuje ogólne podejście do projektowania dostosowanych do potrzeb pożywek do uprawy mikrobiologicznej. Jest to możliwe dzięki iteracyjnemu procesowi pracy, łączącemu eksperymentalny projekt oparty na Krigingu i technologię mikrobioreaktorów w celu uzyskania wystarczającej przepustowości uprawy, która jest wspierana przez robotykę laboratoryjną w celu zwiększenia niezawodności i szybkości przygotowywania pożywek do pracy z cieczami.

Ogólny protokół optymalizacji produkcji białek heterologicznych przy użyciu technologii zautomatyzowanych mikrobioreaktorów

Opisano szczegółowy protokół oczyszczania i późniejszej analizy przeciwciała monoklonalnego z pobranego płynu do hodowli komórek (HCCF) zautomatyzowanych mikrobioreaktorów. Przedstawiono również wykorzystanie analiz do określenia krytycznych atrybutów jakości (CQA) i maksymalizacji ograniczonej objętości próbki w celu wyodrębnienia istotnych informacji.

Oczyszczanie i analiza przeciwciała monoklonalnego z komórek jajnika chomika chińskiego przy użyciu zautomatyzowanego systemu mikrobioreaktora

Tutaj przedstawiamy szczegółową procedurę przeprowadzania projektu eksperymentu w zautomatyzowanym mikro-bioreaktorze, a następnie zbierania komórek i kwantyfikacji białka za pomocą kolumny Białko A.

Optymalizacja procesów z wykorzystaniem zautomatyzowanych mikrobioreaktorów o wysokiej przepustowości w hodowli komórek jajnika chomika chińskiego

Białko rekombinowanego przeciwciała wyrażone w komórkach pIRES2-ZSGreen1-rAbs-APN-CHO oraz przeciwciała monoklonalne wytworzone przy użyciu tradycyjnej technologii hybrydoma mogą rozpoznawać i wiązać się z białkiem N (APN) aminopeptydazy świni.

Wytwarzanie przeciwciał monoklonalnych skierowanych przeciwko aminopeptydazie N w nabłonku błony śluzowej jelit świń

Ten protokół opisuje, jak używać Jednokomórkowego Systemu Mikrolitrowego Zarządzania Kulturami Kropelkowymi (komórka MISS) do przeprowadzania izolacji, hodowli i pobierania mikrobiologicznego monoklonu. Komórka MISS osiąga zintegrowany przepływ pracy oparty na technologii mikroprzepływowej kropelkowej, która zapewnia doskonałą monodyspersyjność kropel, wysoką hodowlę równoległą i wysokowydajne wykrywanie biomasy.

Zautomatyzowana i wysokowydajna mikrobiologiczna hodowla monoklonalna i zbiór z wykorzystaniem systemu omicznego do hodowli mikrolitrowych mikrolitrów

Poznaj protokół zautomatyzowanej produkcji przeciwciał IgG1 w komórkach CHO przy użyciu systemu mikrobioreaktorów. Metoda umożliwia równoległą hodowlę 48 kultur z precyzyjną kontrolą parametrów.

Zastosowanie wysokowydajnego zautomatyzowanego systemu mikrobioreaktorów do produkcji modelowej IgG1 w komórkach CHO

Przeglądaj więcej filmów