Name: Elastyczne barwienie na szkiełkach zatopionych w parafinie tkanki raka żołądka pT3N0M0 (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-01T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 36 s
Description: Poznaj metodę elastycznego barwienia tkanki raka żołądka pT3N0M0 zatopionej w parafinie. Technika ta umożliwia patologom precyzyjną ocenę inwazji komórek nowotworowych poza blaszkę sprężystą.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy dziękują za wsparcie częściowo od National Natural Science Foundation (NO.81401902 i NO.81501992) oraz Hunan Natural Science Foundation (NO.2017SK2134, NO.2018JJ2238). Rękopis został napisany przez Guang Lei. Cały eksperyment przeprowadzają Guang Lei i Haiyan Yang. Autorzy dziękują za pomoc patologom i współpracownikom, którzy monitorują dane pacjentów.

Między 1994 a 2005 rokiem, próbki pacjentów zostały wybrane przez dwóch doświadczonych patologów przewodu pokarmowego w Affiliated Cancer Hospital of Xiangya School of Medicine, Central South University, od pacjentów, którzy przeszli resekcję żołądka z powodu nowotworów żołądka, z pooperacyjnym patologicznym rozpoznaniem raka żołądka w stadium pT3N0M0 (zgodnie z siódmym stopniem zaawansowania TNM). Badanie to zostało zatwierdzone przez komisję ds. oceny etyki.
1. Podział na sekcje
<ol>
	<li>Umieść blok parafiny w stałym uchwycie mikrotomu sań, który może poruszać się do tyłu i do przodu po ostrzu. Dostosuj optymalny kąt między blokiem a nożem do mikrotomów. 
	UWAGA: Optymalny kąt zależy nie tylko od geometrii ostrza, ale także od prędkości i techniki cięcia.</li>
	<li>W razie potrzeby przyciąć blok parafiny i pokroić go na przekroje o grubości 5 μm.</li>
	<li>Umieścić odcinki parafiny 5 μm w łaźni wodnej o temperaturze około 40 - 45 °C, a następnie zamontować je z wody na szkiełku podstawowym, po jednej sekcji na szkiełko.</li>
	<li>Ostrożnie dociśnij zamontowaną część do ręcznika papierowego, aby usunąć resztki wody i potencjalne pęcherzyki powietrza.</li>
	<li>Pozostaw sekcje do wyschnięcia na powietrzu przez 30 minut, a następnie piecz je w piekarniku w temperaturze 45 - 50 °C przez 2 godziny.</li>
</ol>
2. Deparafinizacja i ponowne nawodnienie wszystkich preparatów
<ol>
	<li>Zanurz szkiełka w ksylenie w słoiku Coplin na 10 minut.</li>
	<li>Wyjmij szkiełka z pierwszego słoika z ksylenem i zanurz je w ksylenie w innym słoiku na 10 minut.</li>
	<li>Teraz zanurz szkiełka w 100% etanolu w słoiku Coplin na 5 minut.</li>
	<li>Zanurz szkiełka w 100% etanolu w innym słoiku Coplin, również na 5 minut.</li>
	<li>Zanurz szkiełka w 95% etanolu w słoiku Coplin na 2 minuty.</li>
	<li>Zanurz szkiełka w 70% etanolu w słoiku Coplin na 2 min. 
	UWAGA: Upewnij się, że szkiełka są całkowicie zanurzone w roztworach podczas wykonywania powyższych kroków.</li>
	<li>Krótko opłucz szkiełka wodą destylowaną w nowym słoiku.</li>
</ol>
3. Barwienie
<ol>
	<li>Przed przystąpieniem do barwienia zetrzyj nadmiar roztworów wokół tkanki na szkiełku bibułą.</li>
	<li>Umieść szkiełka w warunkach temperatury i wilgotności pokojowej, aby uniknąć wysuszenia tkanki na szkiełku przez cały proces barwienia.</li>
	<li>Utleniać szkiełka kilkoma kroplami nadmanganianu potasu przez 5 minut. Upewnij się, że objętość nadmanganianu potasu jest wystarczająca do pokrycia części tkanki na każdym szkiełku.</li>
	<li>Opłucz utlenione szkiełka wodą destylowaną w słoiku Coplin z 2 - 3 zmianami. Obserwuj niebieski kolor tkanki.</li>
	<li>Teraz wybiel te szkiełka, dodając kilka kropli kwasu szczawiowego przez 5 minut. Upewnij się, że objętość kwasu szczawiowego jest wystarczająca, aby całkowicie pokryć część tkanki na każdym szkiełku.</li>
	<li>Opłucz szkiełka, zanurzając je w słoiku Coplin wypełnionym wodą destylowaną. Wykonaj płukanie 2x - 3x.</li>
	<li>Teraz umyj te szkiełka krótko w 95% alkoholu, a następnie zanurz je w roztworze elastyny (5 g/L) na 8 - 24 godziny 
	UWAGA: Roztwór elastyny jest lotny, a jego czas barwienia jest stosunkowo długi, dlatego najlepiej zanurzyć szkiełka z elastycznym barwieniem w szczelnie zamkniętym pojemniku, takim jak przezroczysta szklana butelka z nakrętką uszczelniającą. Pojemność pojemnika i objętość roztworu elastyny zależy od liczby zanurzonych szkiełek, o ile umożliwia to całkowite zanurzenie wszystkich szkiełek.</li>
	<li>Zanurz te szkiełka bezpośrednio w 95% etanolu na 1-2 minuty, aby dobrze rozróżnić każdy fragment tkanki. 
	UWAGA: Różnicowanie odnosi się do zmiany ładunku sekcji tkankowej, która usuwa nadmiar zabarwienia wchłoniętego przez tkankę i sprawia, że kolory są wyraźniejsze. Po barwieniu roztworem elastyny próbek nie należy myć wodą destylowaną, aby uniknąć trudności w rozróżnieniu. W razie potrzeby sprawdź pod mikroskopem, czy nie ma niebiesko-czarnych elastycznych włókien i szarego tła. Lepiej jest nieco zaniżyć tkankę, ponieważ późniejsze przeciwbarwienie Van Giesona może również nieco usunąć elastyczną plamę.</li>
	<li>Po rozróżnicowaniu całkowicie spłukać szkiełka wodą destylowaną.</li>
	<li>Przeciwbarwić szkiełka roztworem Van Giesona przez 1 min. 
	UWAGA: Objętość roztworu Van Giesona musi być wystarczająca, aby móc całkowicie zanurzyć wycinek tkanki na każdym szkiełku.</li>
	<li>Szybko upuść 95% etanolu na te plastry na kilka sekund, aby dobrze rozróżnić każdy fragment tkanki. 
	UWAGA: Nie spłukuj szkiełek żadną wodą po barwieniu Van Giesona, ponieważ może to osłabić lub nawet wymyć kolor barwienia Van Giesona.</li>
</ol>
4. Odwodnienie i narastanie
<ol>
	<li>Zanurz szkiełka w 95% alkoholu na 5 minut, aby szybko się odwodniły.</li>
	<li>Kontynuuj odwadnianie tych plastrów przez 2 zmiany 100% alkoholu, za każdym razem zanurzając szkiełka na 5 minut.</li>
	<li>Zanurz szkiełka w 2 przemianach ksylenu, za każdym razem na 3 minuty.</li>
	<li>Dodaj jedną kroplę żywicznego podłoża montażowego do szkiełka i umieść szkiełko nakrywkowe na wierzchu.</li>
</ol>
5. Obserwacja mikroskopowa preparatów
<ol>
	<li>Znajdź kierunek surowiczości i obserwuj wyniki barwienia elastycznego: włókna elastyczne (blaszka) są zabarwione na niebiesko-czarno, włókna kolagenowe są zabarwione na czerwono, a włókna mięśniowe są zabarwione na żółto.</li>
	<li>Poszukaj komórek rakowych na całym slajdzie: komórki rakowe są zabarwione na żółto12.</li>
	<li>Określ zależność położenia między komórkami rakowymi a blaszką elastyczną. 
	UWAGA: Będą tu dwie sytuacje. Tak długo, jak istnieje jedna komórka nowotworowa, która zaatakowała poza blaszkę elastyczną w całym szkiełku, to przypadek ten można uznać za inwazję blaszki elastycznej. Z drugiej strony, tylko wtedy, gdy nie ma komórki nowotworowej, która zaatakowała poza blaszkę elastyczną w całym szkiełku, przypadek ten można uznać za nieinwazję blaszki elastycznej.</li>
</ol>

<ol><li>Jiang, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinicopathologic+characteristics+and+prognosis+of+gastric+cancer+invading+the+subserosa%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Clinicopathologic characteristics and prognosis of gastric cancer invading the subserosa.</a> Journal of Surgical Oncology. 102 (7), 737-741 (2010).</li>
<li>Amin, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAmin%2C+MB+%22AJCC+Cancer+Staging+Manual.+8th+ed%22">AJCC Cancer Staging Manual. 8th ed</a>. , Springer. New York, NY. (2017).</li>
<li>Kojima, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastic+laminal+invasion+in+colon+cancer%3A+diagnostic+utility+and+histological+features%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Oncology%22%5BJournal%5D)">Elastic laminal invasion in colon cancer: diagnostic utility and histological features.</a> Frontiers in Oncology. 2, 179(2012).</li>
<li>Ludeman, L., Shepherd, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serosal+involvement7+in+gastrointestinal+cancer%3A+its+assessment+and+significance%5BTitle%5D)+AND+%22Histopathology%22%5BJournal%5D)">Serosal involvement7 in gastrointestinal cancer: its assessment and significance.</a> Histopathology. 47 (2), 123-131 (2005).</li>
<li>Shepherd, N. A., Baxter, K. J., Love, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prognostic+importance+of+peritoneal+involvement+in+colonic+cancer%3A+a+prospective+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">The prognostic importance of peritoneal involvement in colonic cancer: a prospective evaluation.</a> Gastroenterology. 112 (4), 1096-1102 (1997).</li>
<li>Liang, W. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrospective+evaluation+of+elastic+stain+in+the+assessment+of+serosal+invasion+of+pT3N0+colorectal+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Surgical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Retrospective evaluation of elastic stain in the assessment of serosal invasion of pT3N0 colorectal cancers.</a> American Journal of Surgical Pathology. 37 (10), 1565-1570 (2013).</li>
<li>Carter, D., True, L., Otis, C. N. Serosal membranes. <a target="_blank" href="https://www.amazon.com/Histology-Pathologists-Stacey-Mills-MD/dp/0781762413">Histology for Pathologists. 3rd ed</a>. Mills, S. E. , Lippincott Williams and Wilkins. Philadelphia, PA. 547-562 (2007).</li>
<li>Knudsen, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+peritoneal+elastic+lamina%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Anatomy%22%5BJournal%5D)">The peritoneal elastic lamina.</a> Journal of Anatomy. 177, 41-46 (1991).</li>
<li>Shepherd, N. A., Baxter, K. J., Love, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+local+peritoneal+involvement+on+pelvic+recurrence+and+prognosis+in+rectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Influence of local peritoneal involvement on pelvic recurrence and prognosis in rectal cancer.</a> Journal of Clinical Pathology. 48 (9), 849-855 (1995).</li>
<li>Uitto, J., Li, Q., Urban, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+complexity+of+elastic+fibre+biogenesis+in+the+skin--a+perspective+to+the+clinical+heterogeneity+of+cutis+laxa%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Dermatology%22%5BJournal%5D)">The complexity of elastic fibre biogenesis in the skin--a perspective to the clinical heterogeneity of cutis laxa.</a> Experimental Dermatology. 22 (2), 88-92 (2013).</li>
<li>Kazlouskaya, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+utility+of+elastic+Verhoeff-Van+Gieson+staining+in+dermatopathology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cutaneous+Pathology%22%5BJournal%5D)">The utility of elastic Verhoeff-Van Gieson staining in dermatopathology.</a> Journal of Cutaneous Pathology. 40 (2), 211-225 (2013).</li>
<li>Lei, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastic+staining-a+rejuvenated+method+to+reassess+prognosis+and+serosal+invasion+in+patients+with+pT3N0M0+gastric+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Pathology%22%5BJournal%5D)">Elastic staining-a rejuvenated method to reassess prognosis and serosal invasion in patients with pT3N0M0 gastric cancer.</a> Human Pathology. 65, 79-84 (2017).</li>
<li>Hernández-Morera, P., Travieso-González, C. M., Castaño-González, I., Mompeó-Corredera, B., Ortega-Santana, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segmentation+of+elastic+fibres+in+images+of+vessel+wall+sections+stained+with+Weigert%27s+resorcin-fuchsin%5BTitle%5D)+AND+%22Computer+Methods+and+Programs+in+Biomedicine%22%5BJournal%5D)">Segmentation of elastic fibres in images of vessel wall sections stained with Weigert's resorcin-fuchsin.</a> Computer Methods and Programs in Biomedicine. 142, 43-54 (2017).</li>
<li>Kojima, M., Nakajima, K., Ishii, G., Saito, N., Ochiai, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+elastic+laminal+invasion+of+colorectal+cancer%3A+the+diagnostic+utility+and+clinicopathologic+relationship%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Surgical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Peritoneal elastic laminal invasion of colorectal cancer: the diagnostic utility and clinicopathologic relationship.</a> American Journal of Surgical Pathology. 34 (9), 1351-1360 (2010).</li>
<li>Nakanishi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reappraisal+of+Serosal+Invasion+in+Patients+With+T3+Colorectal+Cancer+by+Elastic+Stain%5BTitle%5D)+AND+%22ARCHIVES+OF+PATHOLOGY+%26+LABORATORY+MEDICINE%22%5BJournal%5D)">Reappraisal of Serosal Invasion in Patients With T3 Colorectal Cancer by Elastic Stain.</a> ARCHIVES OF PATHOLOGY & LABORATORY MEDICINE. 140 (1), 81-85 (2016).</li>
<li>Grin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+elastic+lamina+invasion%3A+limitations+in+its+use+as+a+prognostic+marker+in+stage+II+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Pathology%22%5BJournal%5D)">Peritoneal elastic lamina invasion: limitations in its use as a prognostic marker in stage II colorectal cancer.</a> Human Pathology. 44 (12), 2696-2705 (2013).</li>
<li>Stewart, C. J., Brennan, B. A., Crook, M. L., Russell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Value+of+elastin+staining+in+the+assessment+of+peritoneal+implants+associated+with+ovarian+serous+borderline+tumours%5BTitle%5D)+AND+%22Histopathology%22%5BJournal%5D)">Value of elastin staining in the assessment of peritoneal implants associated with ovarian serous borderline tumours.</a> Histopathology. 51 (3), 313-321 (2007).</li>
<li>Kojima, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathological+diagnostic+criterion+of+blood+and+lymphatic+vessel+invasion+in+colorectal+cancer%3A+a+framework+for+developing+an+objective+pathological+diagnostic+system+using+the+Delphi+method%2C+from+the+Pathology+Working+Group+of+the+Japanese+Society+for+Cancer+of+the+Colon+and+Rectum%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Pathological diagnostic criterion of blood and lymphatic vessel invasion in colorectal cancer: a framework for developing an objective pathological diagnostic system using the Delphi method, from the Pathology Working Group of the Japanese Society for Cancer of the Colon and Rectum.</a> Journal of Clinical Pathology. 66 (7), 551-558 (2013).</li>
<li>Elston, C. A., Kazlouskaya, V., Elston, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastic+staining+versus.+fluorescent+and+polarized+microscopy+in+the+diagnosis+of+alopecia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Academy+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Elastic staining versus. fluorescent and polarized microscopy in the diagnosis of alopecia.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 69 (2), 288-293 (2013).</li>
<li>Vos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predominance+of+Nonatherosclerotic+Internal+Elastic+Lamina+Calcification+in+the+Intracranial+Internal+Carotid+Artery%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Predominance of Nonatherosclerotic Internal Elastic Lamina Calcification in the Intracranial Internal Carotid Artery.</a> Stroke. 47 (1), 221-223 (2016).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Ta zaproponowana tutaj metoda zapewnia dokładne podejście do identyfikacji elastycznej blaszki podsurowiczej. Metodę można wykorzystać do oceny, czy komórki nowotworowe zaatakowały elastyczną blaszkę w raku żołądka pT3N0M012. Blaszka elastyczna jest czerwonawa w skrawkach zabarwionych H&E, których nie można było łatwo odróżnić od włókien kolagenowych, a inne istniejące pomocnicze metody diagnostyczne, takie jak cytologia i immunohistochemia, również miały ograniczoną wartość diagnostyczną. Stwierd...

Zgodnie z systemem oceny stopnia zaawansowania nowotworu, węzła i przerzutów (TNM), rokowanie raka żołądka w stadium patologicznym pT4 jest znacznie gorsze niż w pT3 (8. UICC/AJCC)1. W przypadku raka żołądka klasyfikacja guza pierwotnego (pT) zwykle zależy od głębokości inwazji guza2. Rak żołądka w stadium patologicznym pT3 definiuje się jako raka atakującego przez mięśnie właściwe do tkanek podsurowiczych, podczas gdy rak żołądka pT4 definiuje się jako raka przenikającego do powierzchni otrzewnej trzewnej. Obecność inwazyjności powierzchni otrzewnej jest kluczem do rozróżnienia tych dwóch etapów2. Ponieważ jednak warstwa komórek międzybłonka otrzewnej jest bardzo cienka, może zostać uszkodzona podczas operacji, leczenia pooperacyjnego i utrwalenia3. Co więcej, zmiany zapalne i zwłóknienie związane z nowotworem mogą uszkodzić normalną anatomię otrzewnej, co bardzo utrudnia dokładną ocenę inwazji powierzchni otrzewnej przy użyciu tylko barwienia H&E4. Obecne pomocnicze metody diagnostyczne, takie jak cytologia i immunohistochemia, mają ograniczoną wartość diagnostyczną5,6, ponieważ są fałszywie dodatnie lub mają niską opłacalność.
Błona surowicza obejmuje otrzewną, opłucną i osierdzie, i składa się z mezotelium, błony podstawnej i warstwy podmiędzybłonkowej7. Jedną z powszechnych cech histologicznych błony surowiczej jest obecność elastycznej blaszki w warstwie podmiędzybłonka, przylegającej do komórek międzybłonka8,9. Blaszka elastyczna ma silne właściwości przeciwuszkadzające i może służyć jako alternatywny marker prognostyczny, jeśli komórki międzybłonka zostaną zniszczone przez ciężkie zapalenie związane z nowotworem lub zwłóknienie3. Blaszka elastyczna składa się głównie z elastyny i mikrofibryny10, które można uwidocznić za pomocą elastycznego barwienia. Głównym powodem stosowania barwienia elastycznego jest to, że elastyna tworzy wiązanie wodorowe z grupą fenolową rezorcyny w roztworze elastyny, powodując zabarwienie włókien elastycznych na niebiesko-czarno. Po barwieniu kontrastowym Van Giesona (VG) włókna kolagenowe mogą być zabarwione na czerwono, a włókna mięśniowe i czerwone krwinki mogą być zabarwione na żółto8,11,12,13.
Ósma edycja oceny TNM dotyczącej raka płuc definiuje inwazję trzewnej opłucnej (T2) jako inwazję guza poza elastyczną blaszkę lub inwazję na powierzchni opłucnej trzewnej2. Badania nad rakiem jelita grubego wykazały, że inwazja blaszki elastycznej w raku jelita grubego pT3 może być przyczyną złych rokowań. Udowodniono również, że 5-letni wskaźnik całkowitego przeżycia raka jelita grubego jest wolny od choroby i jest podobny do pT4a13,14,15. Na podstawie naszych poprzednich badań nad barwieniem elastycznym stwierdzono, że inwazja blaszki elastycznej ma znaczący negatywny wpływ na rokowanie w raku żołądka pT3 i powinna być leczona w taki sam sposób, jak rak żołądka pT4a12. W związku z tym ta prosta i opłacalna metoda może pomóc w wyeliminowaniu niepewności wyników uzyskanych za pomocą barwienia H&E oraz innych typowych ograniczeń związanych z innymi pomocniczymi metodami diagnostycznymi, w tym między innymi cytologią i immunohistochemią. Metoda ta może być skutecznie stosowana do diagnozowania inwazji powierzchni otrzewnej raka przewodu pokarmowego, zwłaszcza w niektórych niejednoznacznych przypadkach. Jest to wygodne, ponieważ plamy H&E i inne plamy zwykle utrudniają identyfikację takich inwazji. Metoda ta zapewnia również wiarygodność wyników, ponieważ jest bardzo selektywna, szczególnie w przypadku włókien elastycznych. Tutaj przeprowadzamy barwienie elastyczne, aby ustalić, czy komórki nowotworowe zaatakowały elastyczną blaszkę w pT3N0M0 rak żołądka12.
Ta metoda jest używana do identyfikacji elastycznych włókien w tkankach na odcinkach utrwalonych formaliną, zatopionych w parafinie, i może być również używana do zamrożonych odcinków. Tutaj wybieramy skrawki zatopione w parafinie, aby jak najlepiej utrzymać morfologię komórek i tkanek. Wszystkie kroki w tym protokole odbywają się w temperaturze pokojowej. W prezentowanym badaniu zastosowano komercyjny zestaw do barwienia, który zawiera roztwór nadmanganianu potasu, roztwór kwasu szczawiowego, roztwór elastyny i roztwór Van Giesona.

<table><tbody><tr><td>Zestaw do barwienia Elastin-Van Gieson</td><td>Baso</td><td>BA4083B</td><td>Służy do barwienia włókien elastycznych, włókien kolagenowych i włókien mięśniowych&nbsp;</td></tr><tr><td>Medium montażowe Permount TM</td><td>MXB Biotechnologies</td><td>DAB-0033</td><td>Służy do montażu</td></tr><tr><td>etanolu</td><td>LMAI Bio&nbsp;</td><td>LM64-17-5&nbsp;</td><td>W 100%</td></tr><tr><td>Ksylen</td><td>LMAI Bio&nbsp;</td><td></td><td></td>LX820585</tr></tbody></table>

elastyczne barwienie na szkiełkach zatopionych w parafinie tkanki raka żołądka pt3n0m0

Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

Elastyczna blaszka, która zwykle znajduje się w warstwie podmiędzybłonkowej, przylegającej do komórek międzybłonka otrzewnej, jest amfifilowa na barwieniu hematoksyliną i eozyną (H&E), ale może być uwidoczniona przez barwienie elastyczne. Jedną z ważnych zalet elastycznego barwienia jest to, że ułatwia określenie, czy komórki nowotworowe zaatakowały poza elastyczną blaszkę. Pomaga to w badaniu stopnia inwazji powierzchni otrzewnej, rozróżniając w ten sposób etapy pT3 i pT4 w raku przewodu pokarmowego. W niniejszej pracy przedstawiono protokół identyfikacji włókien elastycznych w utrwalonych formaliną, zatopionych w parafinie skrawkach tkanki raka żołądka pT3N0M0. Przygotowujemy skrawki parafinowe 5 μm utrwalone na szkiełkach, a następnie wszystkie szkiełka są odparafinowane i ponownie uwodnione podczas procedury barwienia. Następnie wszystkie sekcje są utleniane nadmanganianem potasu, bielone kwasem szczawiowym, barwione elastycznym barwieniem i barwione przeciwwagowo przez Van Giesona. Na koniec badamy efekt barwienia; Blaszka elastyczna jest zabarwiona na niebiesko-czarno, a włókna kolagenowe są zabarwione na czerwono, podczas gdy komórki rakowe są zabarwione na różne odcienie żółtego. Szczegółowo opisano również metody stosowane do określania zależności pozycyjnej między komórkami nowotworowymi a blaszką elastyczną. Metoda ta jest prosta, tania i szeroko stosowana w identyfikacji inwazji powierzchni otrzewnej w raku przewodu pokarmowego ze względu na wyjątkową selektywność włókien elastycznych i autentyczne wyniki.

Prawidłowe barwienie włókien elastycznych wyraźnie ujawnia błonę sprężystą oraz komórki nowotworowe w raku żołądka pT3. Rysunek 1 – pole przy małym powiększeniu, sprawdzone mikroskopowo po barwieniu roztworem elastyny, przed zastosowaniem barwienia kontrastowego metodą Van Gieson zgodnie z opisanym protokołem – pokazuje, że błona sprężysta znajduje się blisko komórek mezoteliów błony surowiczej i jest zabarwiona na kolor ciemnoniebieski w formie włókien, a po...

Tutaj prezentujemy protokół elastycznego barwienia w celu identyfikacji elastycznych włókien w tkankach raka żołądka pT3N0M0 na odcinkach utrwalonych w formalinie, zatopionych w parafinie. Następnie opisujemy metodę określania, czy komórki nowotworowe atakują poza elastyczną blaszkę.

Elastyczne barwienie na szkiełkach zatopionych w parafinie tkanki raka żołądka pT3N0M0

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

Metoda ta pomaga określić, czy komórka nowotworowa została zaatakowana poza blaszką elastyczną w raku żołądka pT3. erozja blaszki elastycznej w obrazie prognostycznym raka żołądka pT3. Główną zaletą tej techniki jest to, że jest to wygodne i dokładne podejście do identyfikacji elastycznej blaszki, co sprawia, że patolog może bardziej precyzyjnie ocenić, czy komórki nowotworowe atakują poza elastyczną blaszkę w raku żołądka pT3.Technika ta może być w kierunku patologicznej diagnozy etapu badania raka płuc i raka. Metoda ta może być również zastosowana w systemie TNM w raku płuc i raku jelita grubego i odbytnicy. Najpierw zanurz szkiełka w ksylenie w słoiku Coplin na 10 minut.Wyjmij szkiełka z tego słoika i zanurz je w świeżym ksylenie w innym słoiku Coplin na kolejne 10 minut. Zanurz szkiełka w 100% etanolu na pięć minut, a następnie przenieś je do świeżego 100% etanolu na kolejne pięć minut. Następnie zanurz szkiełka w 95% etanolu na dwie minuty.Przenieś szkiełka do słoika zawierającego 70% etanolu na dwie minuty. Następnie krótko spłucz szkiełka wodą destylowaną w nowym słoiku Coplin. Najpierw użyj bibuły, aby zetrzeć nadmiar roztworu ze szkiełka lub wokół chusteczki.Umieść szkieł

elastic-staining-on-paraffin-embedded-slides-pt3n0m0-gastric-cancer

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Badania nad rakiem

Zredukowana lub brakująca ekspresja Pms2 i/lub ERCC1 w całych kryptach jest częstym zjawiskiem w obszarze 10 cm po każdej stronie gruczolaków okrężnicy, co prawdopodobnie stanowi podstawę defektu pola o wysokiej zmienności i progresji do nowotworu. Niedobór Ku86 lub CcOI jest znacznie rzadszy w tych defektach pola.

Niedobory Pms2, ERCC1, Ku86, CcOI w defektach polowych podczas progresji do raka jelita grubego

W tym filmie demonstrujemy elastyczne barwienie skrawków uzyskanych z tkanki nowotworowej przewodu pokarmowego. Ta procedura barwienia umożliwia wizualizację drobnych włókien elastycznych i pomaga określić inwazję komórek nowotworowych poza elastyczną blaszkę.

Barwienie elastycznych włókien odcinków szkiełka: technika obserwacji przerzutów raka żołądka

Istnieje wyraźna potrzeba poprawy informacji na temat molekularnych czynników napędzających przełyk Barretta. Barwienie immunofluorescencyjne jest przydatną techniką do zrozumienia wpływu sygnalizacji komórkowej na morfologię komórki. Przedstawiamy prosty, skuteczny protokół stosowania barwienia immunofluorescencyjnego do oceny leczenia terapeutycznego w komórkach przełyku Barretta.

Immunofluorescencyjna metoda charakteryzacji komórek przełyku Barretta

Tutaj opisujemy procedurę analizy całego genomu metylacji DNA w nowotworach przewodu pokarmowego. Procedura ta ma znaczenie dla badań, które badają związki między wzorcami metylacji genów a czynnikami przyczyniającymi się do kancerogenezy w nowotworach przewodu pokarmowego.

Analiza całego genomu metylacji DNA w raku przewodu pokarmowego

Ten protokół opisuje identyfikację i resekcję wartowniczych węzłów chłonnych, aby operacja była jak najłatwiejsza i jak najmniej inwazyjna.

Mapowanie węzłów wartowniczych i biopsja raka endometrium we wczesnym stadium za pomocą laparoskopii

W erze immunoterapii nowotworów, zainteresowanie wyjaśnieniem dynamiki mikrośrodowiska guza znacznie wzrosło. Protokół ten szczegółowo opisuje technikę obrazowania spektrometrii mas w odniesieniu do etapów barwienia i obrazowania, które pozwalają na wysoce zmultipleksowaną analizę przestrzenną.

Poszerzanie wiedzy na temat mikrośrodowiska guza za pomocą obrazowania spektrometrią mas próbek tkanek utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie

Ten eksperymentalny protokół opisuje i optymalizuje metodę barwienia metodą immunohistochemii multipleksowej (IHC), głównie poprzez optymalizację warunków inkubacji przeciwciał jednokanałowych i dostosowanie ustawień przeciwciał i kanałów do rozwiązania problemów autofluorescencji i przesłuchu kanałowego w tkankach raka płuc pochodzenia klinicznego.

Multipleksowe barwienie immunohistochemiczne tkanki raka płuc zatopionej w parafinie

Protokół ten określa metodę immunobarwienia całego żołądka, zmodyfikowaną na podstawie techniki "Swiss roll" pierwotnie opracowanej dla jelita myszy.

Ulepszone mapowanie przestrzenne warstw mięśni żołądka myszy z wykorzystaniem zmodyfikowanej techniki Swiss Roll

Ten protokół pokazuje, jak generować fluorescencyjnie oznaczone, genetycznie zdefiniowane guzy klonalne w oku/czułkach Drosophila imaginal discs (EAD). Opisuje, jak rozdzielić EAD i mózg od larw trzeciego stadium rozwojowego i jak je przetworzyć w celu wizualizacji i ilościowego określenia zmian ekspresji genów i inwazyjności guza.

Model guza dysku imaginalnego Drosophila: wizualizacja i kwantyfikacja ekspresji genów i inwazyjności guza za pomocą mozaik genetycznych

Wieloparametrowa immunohistochemia fluorescencyjna może być wykorzystana do oceny liczby, względnego rozmieszczenia i lokalizacji populacji komórek odpornościowych w mikrośrodowisku guza. Niniejszy manuskrypt opisuje zastosowanie tej techniki do analizy subpopulacji komórek T w raku jamy ustnej i gardła.

Czterokolorowa immunohistochemia fluorescencyjna subpopulacji komórek T w archiwalnych próbkach ludzkiego raka płaskonabłonkowego jamy ustnej i gardła utrwalonego w formalinie, zatopionych w parafinie

Poznaj metodę elastycznego barwienia tkanki raka żołądka pT3N0M0 zatopionej w parafinie. Technika ta umożliwia patologom precyzyjną ocenę inwazji komórek nowotworowych poza blaszkę sprężystą.

Elastyczne barwienie na szkiełkach zatopionych w parafinie tkanki raka żołądka pT3N0M0

Przeglądaj więcej filmów