September 5th, 2018
Tutaj prezentujemy protokół mający na celu poprawę podziału parafiny. Metoda ta łączy cięcie i pływanie za pomocą prostej studzienki termostatycznej, aby uniknąć procesu przenoszenia wymaganego przez metodę konwencjonalną. W rezultacie znacznie poprawiła się wydajność i liczba nienaruszonych skrawków parafiny.
Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie morfologii, takie jak sekcja parafinowa. Główną zaletą tej techniki jest to, że kulminacja procesu cięcia i składania oraz unikanie procesu przenoszenia, który jest wymagany metodą konwencjonalną. Na początek zbierz wszystkie wstępnie przetworzone części w dygestorium.
Użyj chloroformu, aby połączyć siedem desek akrylowych, jak pokazano tutaj. Produktem końcowym będzie zbiornik wyposażony w kanał sekcyjny i łaźnię wodną. Zamontuj rurowy elektryczny element grzejny przez otwór w płycie akrylowej numer dwa.
Za pomocą wiertarki elektrycznej wykonaj mały otwór w płycie akrylowej numer siedem i zainstaluj cyfrowy termostat na zbiorniku, upewniając się, że znajduje się on co najmniej jeden centymetr poniżej poziomu zamierzonej powierzchni wody, co wskazuje kropka na zbiorniku. Dostosuj napięcie tak, aby było poniżej 24 woltów przed włączeniem urządzenia. Wyjmij tackę na odpady sekcyjne z mikrotomu.
Następnie użyj neutralnego szczeliwa silikonowego, aby połączyć kanał sekcji z uchwytem ostrza mikrotomu, uważając, aby nie dostać się uszczelniacza powyżej górnej części ostrza. Pozostaw zestaw do wyschnięcia na noc, aby dać czas na zestalenie się chloroformu i neutralnego szczeliwa silikonowego. Następnego dnia zainstaluj ostrze w uchwycie ostrza.
Dodaj wodę do łaźni wodnej, upewniając się, że powierzchnia wody dotyka tylko górnej części ostrza. Po wykonaniu konwencjonalnego cięcia parafiny włącz sprzęt, aby rozpocząć ulepszone cięcie parafiny. Użyj przełącznika wykrywania temperatury, aby otworzyć grzejnik.
Ustaw docelową temperaturę w zakresie od 38 stopni Celsjusza do 40 stopni Celsjusza na godzinę, aby podgrzać wodę. Użyj noża, aby zmodyfikować blok parafiny uzyskany przez zatapianie parafiny. Następnie umieść blok na kasecie mikrotomu clamp i zablokuj go.
Wytnij grubsze sekcje, aby szybko zbliżyć się do próbki. Dostosuj do odpowiedniej grubości przekroju dla próbek. Obracanie pokrętła ręcznego spowoduje automatyczne załadowanie sekcji do sekcji, kanału i wanny.
Następnie pokrój próbkę powolnym i równomiernym ruchem cięcia. Poprowadź sekcje do komory kąpieli tak, aby unosiły się w linii. Jeśli część głowicy przylega do ścianki komory, użyj prowadnicy szczotki, aby utrzymać ją w ruchu.
Po całkowitym rozłożeniu skrawków w kąpieli wodnej za pomocą pęsety oddziel kilka, a następnie podnieś je na szkiełku mikroskopowym. Przełóż szkiełka do piekarnika nastawionego na 42 stopnie Celsjusza do wyschnięcia przez noc. Szkiełka można następnie przechowywać w temperaturze pokojowej przez czas nieokreślony, aż będą gotowe do analizy.
Gdy będziesz gotowy do analizy, użyj barwienia hematoksyliną-eozyną, aby ocenić skrawki przy użyciu ulepszonej metody. W tym badaniu zastosowano ulepszoną metodę przygotowania skrawków parafiny dla tkanki hipokampa dorosłej myszy, nerek dorosłych myszy, embrionalnych mózgów myszy i oczu danio pręgowanego. Jak pokazano tutaj, nowa metoda pozwala uniknąć utraty skrawków i zwiększa udział nienaruszonych skrawków w każdym typie badanej tkanki.
Podczas wykonywania przekroju całych serii zaobserwowano, że metoda ta przyspiesza prędkość cięcia parafiny we wszystkich badanych próbkach. Innymi słowy, metoda ta zapewnia wyższą jakość cięcia parafiny w krótszym czasie niż metoda konwencjonalna. Szeregowe odcinki siatkówki wzrokowej danio pręgowanego są następnie obserwowane przez barwienie hematoksyliną-eozyną.
Stwierdzono, że skrawki zebrane przy użyciu ulepszonej metody mają lepszą integralność niż te zebrane przy użyciu konwencjonalnej metody cięcia parafiny. Chociaż nie ma znaczących różnic w jakości większości zebranych części w porównaniu z tymi dwiema metodami, niektóre części zebrane metodą konwencjonalną są postrzegane jako mające stosunkowo niską jakość. Nie zapominaj, że praca z chloroformem może być bardzo niebezpieczna, a podczas wykonywania tej procedury należy zawsze zachować środki ostrożności, takie jak wyciąg
.Próbując wykonać tę procedurę, należy pamiętać, aby ostrożnie dodawać wodę i unikać przepełnienia.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Ten artykuł przedstawia protokół zaprojektowany w celu poprawy sekcjonowania parafinowego poprzez łączenie cięcia i unoszenia w komorze termostatycznej, eliminując konieczność tradycyjnego procesu transferu. Ta modyfikacja znacznie poprawia zarówno efektywność, jak i integralność sekcji parafinowych.
Paraffin sectioning remains a bottleneck in histology workflows, particularly for high-throughput target validation and phenotypic screening in discovery biology. This method improves section integrity and throughput, reducing technical variability that can confound downstream assay readouts and mechanistic de-risking efforts. By enabling reliable, reproducible tissue preparation, it supports predictive confidence in target engagement studies across neuroscience and oncology models.
The method fits within the discovery continuum from early target validation to lead optimization, where reliable histology informs go/no-go decisions.