Name: Hiperandrogenny model myszy do badania zespołu policystycznych jajników (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-02T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Poznaj hiperandrogenny model myszy do badania zespołu policystycznych jajników z wykorzystaniem pelletów dihydrotestosteronu. Ta metoda pozwala badać wpływ hiperandrogenizmu na potomstwo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez National Institutes of Health (Granty R00-HD068130 dla S.W.) oraz Baltimore Diabetes Research Center: Pilots and Feasibility Grant (dla S.W.).

Tutaj prezentujemy szczegółowe protokoły przygotowania i wprowadzania granulatu DHT oraz testów reprodukcyjnych i metabolicznych. Myszy użyte w tym badaniu miały mieszane tło (C57/B6, CD1, 129Sv) i były utrzymywane z jedzeniem i wodą ad libitum w cyklu 14/10 godzin światła/ciemności w temperaturze 24 °C w obiekcie dla zwierząt Broadway Research Building w Johns Hopkins University School of Medicine. Wszystkie procedury zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt Uniwersytetu Johnsa Hopkinsa.
1. Utwórz model myszy podobny do PCOS
<ol>
	<li>Przygotowanie granulatu DHT
	<ol>
		<li>Autoklaw rurki silastyczne do sterylizacji. Wytnij rurki silastyczne na długość 15 mm za pomocą żyletki;</li>
		<li>Uszczelnij jedną stronę, wstrzykując silikonowy klej medyczny do probówki za pomocą igły o sile 20 G przymocowanej do strzykawki o pojemności 3 ml. Tłok należy wyjąć ze strzykawki, a następnie wprowadzić klej do zbiornika. Tłok jest ponownie wkładany, a klej wciskany w dół, aż zacznie wychodzić z igły. igłę wykonuje się poprzez przecięcie ostrej końcówki igły 20 G dowolnymi mocnymi nożyczkami. Długość silikonu w tubie powinna być większa niż 2 mm, aby umożliwić przycinanie po produkcji;</li>
		<li>Suszyć przez noc; sprawdzić, czy po uszczelnionej stronie nie ma pęcherzyków powietrza. Te bez pęcherzyków powietrza są używane do granulek DHT. Inne mogą być używane do granulek kontrolnych bez DHT.</li>
		<li>Załóż rękawice, maskę, okulary i fartuch laboratoryjny przed zrobieniem granulatu DHT w kapturze, aby uniknąć narażenia na DHT na skórę.</li>
		<li>Wsypać proszek DHT do plastikowej łódki wagowej i wcisnąć otwartą stronę nasadek z klejem (wyprodukowanych w A1.1) do proszku DHT.</li>
		<li>Proszek DHT można ubić za pomocą dużego spinacza do papieru, który jest wyprostowany. Kontynuuj, aż DHT osiągnie wysokość 4 mm (lub pożądaną długość). Sprawdź długość DHT linijką i uszczelnij otwartą stronę silikonem, wysusz przez noc.</li>
		<li>Wytnij każdą uszczelnioną stronę, aby uzyskać długość silikonu o długości 2 mm. Całkowita długość pelletu wyniesie 8 mm.</li>
		<li>Uszczelnij obie strony pustej rurki silastycznej jako pelety kontrolne (bez DHT).</li>
		<li>Przechowuj granulki w stożkowej probówce o pojemności 50 ml owiniętej folią (aby zapobiec ekspozycji na światło) w temperaturze pokojowej do momentu użycia. Granulki DHT zachowują pełną skuteczność przez co najmniej 3 miesiące przechowywania.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wprowadzanie i zastępowanie DHT
	<ol>
		<li>Do 20 granulek DHT lub granulek kontrolnych zanurza się oddzielnie w stożkowej probówce o pojemności 50 ml z 30 ml sterylnej 0,9% soli fizjologicznej przez 24 godziny w temperaturze 37 °C w celu zrównoważenia tuż przed włożeniem.</li>
		<li>Przed zabiegiem powierzchnie i rękawice są dezynfekowane za pomocą clidox, a powierzchnie robocze są pokrywane czystym papierem chłonnym z tworzywa sztucznego (podkładka chirurgiczna). Wszystkie narzędzia, które mają kontakt ze zwierzętami, są odkażane przed wejściem do obiektu dla zwierząt poprzez autoklawowanie. Narzędzia zostaną pozostawione do wyschnięcia i ostygnięcia przed użyciem.</li>
		<li>Wykorzystuje się 2-miesięczne samice myszy (4–5 myszy w klatce). Myszom wstrzykuje się dootrzewnowo ksylazynę (3,5 mg/kg masy ciała) i ketaminę (78,8 mg/kg masy ciała) za pomocą strzykawki insulinowej. Obliczenia dotyczące mieszania i dozowania znieczulenia znajdują się w Tabeli 1. </li>
		<li>Po uzyskaniu odpowiedniego znieczulenia, mierzonego utratą odruchu u nogi i spowolnionym oddechem, mysz zostanie przygotowana do operacji.</li>
		<li>Zdezynfekuj skórę obszaru za pomocą betadyny za pomocą sterylnej gazy i wyczyść 70% etanolem. Obszar zostanie ponownie pomalowany betadyną.</li>
		<li>Wytnij otwór o długości około 5 mm nożyczkami pod skórą w pobliżu szyi. Za pomocą trocharu 10 G wykonaj mały tunel (15 mm) w kierunku rostralnym. Osad jest wprowadzany grzbietowo z trocharem.</li>
		<li>Otwór jest następnie uszczelniany klejem chirurgicznym. Ręcznie przybliż krawędzie rany za pomocą kleszczy i delikatnych pociągnięć szczotką, aby nałożyć cienką warstwę płynnego kleju na przybliżone krawędzie rany. Nałóż 3 cienkie warstwy kleju, aby zapewnić równomierne rozprowadzenie kleju na ranie. Klej powinien sięgać 1 cm z każdej strony przylegających do siebie krawędzi rany. Do zamknięcia otworu można również użyć szwów lub klipsów chirurgicznych. Umieść myszy z powrotem w klatce, trzymanej pojedynczo, z poduszką grzewczą w celu odzyskania sprawności. Wymieniaj granulki co 4 tygodnie, aby utrzymać stały poziom ekspozycji na androgeny. Oryginalny granulek zostanie usunięty, a nowy granulek zostanie włożony zgodnie z opisem w A1.15 w podobnej pozycji.</li>
		<li>Przetestuj cykliczność rujową po 3 dniach od wprowadzenia DHT. Etap cyklu rujowego ocenia się za pomocą cytologii pochwy. Komórki pochwy są pobierane przez 16 kolejnych dni za pomocą pipetora p10 w celu wstrzyknięcia sterylnego roztworu soli fizjologicznej (około 10 μl) do jamy pochwy, a następnie pobrania soli fizjologicznej za pomocą tej samej sterylnej końcówki pipety. Komórki pochwy złuszczone ze ściany pochwy mieszają się z solą fizjologiczną i są zbierane.</li>
		<li>Rozprowadź sól fizjologiczną z komórkami na oznaczonym szkiełku. Każdy szkiełko może zawierać sześć próbek. Szkiełka są oznaczone w celu odnotowania, która próbka jest umieszczona w każdej z sześciu lokalizacji.</li>
		<li>Po całkowitym wyschnięciu soli fizjologicznej na szkiełku włóż szkiełka do pojemnika ze 100% etanolem, aby utrwalić komórki. Szkiełka powinny być utrwalone przez co najmniej 5 minut, ale mogą pozostać w utrwalaczu przez czas nieokreślony do dalszego użycia.</li>
		<li>Umieść szkiełka w roztworach barwiących na 1 minutę każde dla buforu B i C. Umyj szkiełka wodą z kranu i wysusz w temperaturze pokojowej.</li>
		<li>Zbadaj morfologię komórek pod mikroskopem światła obiektywowego 10X. Morfologia komórek w celu rozróżnienia proestrus (P), estrus (E), metestrus (M) i diestrus (D) jest opisana w references27,28,29.</li>
		<li>Policz dni w każdym etapie i podziel je przez łączną liczbę dni, aby obliczyć procent czasu na każdym etapie.</li>
		<li>Przetestuj tolerancję glukozy po 21 dniach od wprowadzenia DHT, poszcząc myszy przez noc (16 godzin) i wstrzykując dootrzewnowo 2 g / kg masy ciała 20% dekstrozy. Na przykład, jeśli masa ciała myszy wynosi 25 g, mysz ta zostanie wstrzyknięta 250 μl 20% dekstrozy za pomocą strzykawki insulinowej o pojemności 50 ml (0,5 ml). Poziom glukozy ocenia się za pomocą glukometru i pasków testowych, pobierając próbki krwi z żyły ogonowej po 0, 15, 30, 60, 90, 120 min. Jest to szczegółowo opisane w innym miejscu30.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Pobieranie krwi
	<ol>
		<li>Krew należy pobierać w różnych dniach po wprowadzeniu DHT (ograniczamy objętość kolekcji do 100 μl dla steroidu i 30ul dla testu LH / FSH) między 9 a 10 rano przez krwawienie z żyły podżuchwowej lancetem. Jest to opisane w11.</li>
		<li>Odwirować krew w temperaturze 6 000 x g w temperaturze 4 °C przez 10 minut i zebrać warstwę surowicy do innej probówki o pojemności 1,5 ml, którą można przechowywać w temperaturze -80 °C do czasu oznaczenia.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Oceń profile reprodukcyjne żeńskiego potomstwa z przewlekle wprowadzonych matek DHT
<ol>
	<li>gody
	<ol>
		<li>Samica myszy, która ma być poddana badaniu, jest przenoszona do klatki z udowodnionym płodnym samcem (który wcześniej miał młode z samicą myszy) po 15 dniach od wprowadzenia osadu. </li>
		<li>Dokumentuj masę ciała matki co tydzień, aby określić, czy mysz jest w ciąży. Wzrost masy ciała matki o więcej niż 3 g w ciągu tygodnia wskazuje na ciążę.</li>
		<li>Krew matek należy pobrać w drugim tygodniu po zaobserwowaniu wzrostu masy ciała matek powyżej 3 g w stosunku do poprzedniego tygodnia. </li>
	</ol>
	</li>
	<li>Dojrzewanie oceniane na podstawie otwarcia pochwy i pierwszej rui
	<ol>
		<li>Sprawdzaj otwarcie pochwy za pomocą oględzin codziennie po odsadzeniu szczeniąt w 21 dniu po urodzeniu (PND), zmierz odległość odbytu i narządów płciowych i zapisz wiek otwarcia pochwy.</li>
		<li>Po otwarciu pochwy należy codziennie pobierać komórki pochwy, jak opisano w 1.2.8–1.2.11, aby sprawdzić cykliczność rujową.</li>
		<li>Obserwuj morfologię komórki, jak opisano w 1.2.12, a pierwsza ruja jest zdefiniowana jako data, w której wszystkie komórki są zrogowaciałymi komórkami nabłonka. </li>
	</ol>
	</li>
	<li>Masa ciała i uderzenie w ucho
	<ol>
		<li>Zanurz końcówkę lancetu w paście do tatuażu i oznacz każde szczenię tatuażem na palcu u nogi, jak opisano w reference12 przy 7 PND i waż myszy co 7 dni do 70 dnia życia.</li>
		<li>Myszy do dziurkowania uszu numerują je za pomocą systemu w <silna klasa="xfig">Rysunek 1 od 12 do 16 PND. Aby odróżnić płeć, zbadaj brzuszną stronę ciała, samice będą miały widoczne sutki.</li>
		<li>Pobrać krew w wieku 21, 26, 70 PND po urodzeniu, jak opisano powyżej w 1.3.1</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Test hormonalny
	<ol>
		<li>Poziomy DHT w surowicy krwi są mierzone zarówno za pomocą testu immunoenzymatycznego (ELISA), jak i za pomocą tandemowej spektrometrii mas chromatografii cieczowej (LC-MS)23,24,31,32. T mierzy się za pomocą LC-MS, czyli testu ELISA szczur/mysz, który został zatwierdzony przez University of Virginia Ligand Assay Core w Center for Research in Reproduction23,24.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pregnancy+complications+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod.+Update%22%5BJournal%5D)">Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome.</a> Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).</li>
<li>Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implications+of+polycystic+ovary+syndrome+for+pregnancy+and+for+the+health+of+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Obstet.+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Implications of polycystic ovary syndrome for pregnancy and for the health of offspring.</a> Obstet. Gynecol. 125 (6), 1397-1406 (2015).</li>
<li>de Wilde, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+and+Metabolic+Health+of+74+Children+From+Women+Previously+Diagnosed+With+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Comparison+With+a+Population-Based+Reference+Cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Sci%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular and Metabolic Health of 74 Children From Women Previously Diagnosed With Polycystic Ovary Syndrome in Comparison With a Population-Based Reference Cohort.</a> Reprod. Sci. , 1933719117749761 (2018).</li>
<li>Caldwell, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+reproductive%2C+metabolic%2C+and+endocrine+features+of+polycystic+ovary+syndrome+in+female+hyperandrogenic+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Characterization of reproductive, metabolic, and endocrine features of polycystic ovary syndrome in female hyperandrogenic mouse models.</a> Endocrinology. 155 (8), 3146-3159 (2014).</li>
<li>van Houten, E. L., Kramer, P., McLuskey, A., Karels, B., Themmen, A. P., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproductive+and+metabolic+phenotype+of+a+mouse+model+of+PCOS%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Reproductive and metabolic phenotype of a mouse model of PCOS.</a> Endocrinology. 153 (6), 2861-2869 (2012).</li>
<li>Cardoso, R. C., Puttabyatappa, M., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroidogenic+versus+Metabolic+Programming+of+Reproductive+Neuroendocrine%2C+Ovarian+and+Metabolic+Dysfunctions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroendocrinology%22%5BJournal%5D)">Steroidogenic versus Metabolic Programming of Reproductive Neuroendocrine, Ovarian and Metabolic Dysfunctions.</a> Neuroendocrinology. 102 (3), 226-237 (2015).</li>
<li>Dumesic, D. A., Abbott, D. H., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polycystic+ovary+syndrome+and+its+developmental+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Endocr.+Metab+Disord%22%5BJournal%5D)">Polycystic ovary syndrome and its developmental origins.</a> Rev. Endocr. Metab Disord. 8 (2), 127-141 (2007).</li>
<li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol Reprod. 93 (3), 69(2015).</li>
<li>Kelley, S. T., Skarra, D. V., Rivera, A. J., Thackray, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Gut+Microbiome+Is+Altered+in+a+Letrozole-Induced+Mouse+Model+of+Polycystic+Ovary+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The Gut Microbiome Is Altered in a Letrozole-Induced Mouse Model of Polycystic Ovary Syndrome.</a> PLoS One. 11 (1), e0146509(2016).</li>
<li>Kafali, H., Iriadam, M., Ozardali, I., Demir, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Letrozole-induced+polycystic+ovaries+in+the+rat%3A+a+new+model+for+cystic+ovarian+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Med.+Res%22%5BJournal%5D)">Letrozole-induced polycystic ovaries in the rat: a new model for cystic ovarian disease.</a> Arch. Med. Res. 35 (2), 103-108 (2004).</li>
<li>Maliqueo, M., Benrick, A., Stener-Victorin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+polycystic+ovary+syndrome%3A+phenotypic+presentation%2C+pathophysiology%2C+and+the+effects+of+different+interventions%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Reprod.+Med%22%5BJournal%5D)">Rodent models of polycystic ovary syndrome: phenotypic presentation, pathophysiology, and the effects of different interventions.</a> Semin. Reprod. Med. 32 (3), 183-193 (2014).</li>
<li>Yanes, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular-renal+and+metabolic+characterization+of+a+rat+model+of+polycystic+ovary+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Gend.+Med%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular-renal and metabolic characterization of a rat model of polycystic ovary syndrome.</a> Gend. Med. 8 (2), 103-115 (2011).</li>
<li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol. Reprod. 93 (3), 69(2015).</li>
<li>Filippou, P., Homburg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+foetal+hyperexposure+to+androgens+a+cause+of+PCOS%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod.+Update%22%5BJournal%5D)">Is foetal hyperexposure to androgens a cause of PCOS?</a> Hum. Reprod. Update. 23 (4), 421-432 (2017).</li>
<li>Wang, Z., Shen, M., Xue, P., DiVall, S. A., Segars, J., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+Offspring+From+Chronic+Hyperandrogenemic+Dams+Exhibit+Delayed+Puberty+and+Impaired+Ovarian+Reserve%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Female Offspring From Chronic Hyperandrogenemic Dams Exhibit Delayed Puberty and Impaired Ovarian Reserve.</a> Endocrinology. 159 (2), 1242-1252 (2018).</li>
<li>Abbott, D. H., Barnett, D. K., Bruns, C. M., Dumesic, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androgen+excess+fetal+programming+of+female+reproduction%3A+a+developmental+aetiology+for+polycystic+ovary+syndrome%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod.+Update%22%5BJournal%5D)">Androgen excess fetal programming of female reproduction: a developmental aetiology for polycystic ovary syndrome?</a> Hum. Reprod. Update. 11 (4), 357-374 (2005).</li>
<li>Abbott, D. H., Dumesic, D. A., Franks, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+origin+of+polycystic+ovary+syndrome+-+a+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Developmental origin of polycystic ovary syndrome - a hypothesis.</a> J. Endocrinol. 174 (1), 1-5 (2002).</li>
<li>Padmanabhan, V., Veiga-Lopez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sheep+models+of+polycystic+ovary+syndrome+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Sheep models of polycystic ovary syndrome phenotype.</a> Mol. Cell. Endocrinology. 373 (1-2), 8-20 (2013).</li>
<li>Pierre, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysregulation+of+the+Anti-Mullerian+Hormone+System+by+Steroids+in+Women+With+Polycystic+Ovary+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Dysregulation of the Anti-Mullerian Hormone System by Steroids in Women With Polycystic Ovary Syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 102 (11), (2017).</li>
<li>Dumesic, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperandrogenism+Accompanies+Increased+Intra-Abdominal+Fat+Storage+in+Normal+Weight+Polycystic+Ovary+Syndrome+Women%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Hyperandrogenism Accompanies Increased Intra-Abdominal Fat Storage in Normal Weight Polycystic Ovary Syndrome Women.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 101 (11), 4178-4188 (2016).</li>
<li>Fassnacht, M., Schlenz, N., Schneider, S. B., Wudy, S. A., Allolio, B., Arlt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+adrenal+and+ovarian+androgen+generation%3A+Increased+peripheral+5+alpha-reductase+activity+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Beyond adrenal and ovarian androgen generation: Increased peripheral 5 alpha-reductase activity in women with polycystic ovary syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 88 (6), 2760-2766 (2003).</li>
<li>Dikensoy, E., Balat, O., Pence, S., Akcali, C., Cicek, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+risk+of+hepatotoxicity+during+long-term+and+low-dose+flutamide+treatment+in+hirsutism%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Gynecol.+Obstet%22%5BJournal%5D)">The risk of hepatotoxicity during long-term and low-dose flutamide treatment in hirsutism.</a> Arch. Gynecol. Obstet. 279 (3), 321-327 (2009).</li>
<li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androgen+Receptor+in+the+Ovary+Theca+Cells+Plays+a+Critical+Role+in+Androgen-Induced+Reproductive+Dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Androgen Receptor in the Ovary Theca Cells Plays a Critical Role in Androgen-Induced Reproductive Dysfunction.</a> Endocrinology. , en20161608(2016).</li>
<li>Andrisse, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+Dose+Dihydrotestosterone+Drives+Metabolic+Dysfunction+via+Cytosolic+and+Nuclear+Hepatic+Androgen+Receptor+Mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Low Dose Dihydrotestosterone Drives Metabolic Dysfunction via Cytosolic and Nuclear Hepatic Androgen Receptor Mechanisms.</a> Endocrinology. , en20161553(2016).</li>
<li>Andrisse, S., Billings, K., Xue, P., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+signaling+displayed+a+differential+tissue-specific+response+to+low-dose+dihydrotestosterone+in+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Insulin signaling displayed a differential tissue-specific response to low-dose dihydrotestosterone in female mice.</a> Am. J. Physiol.Endocrinol. Metab. 314 (4), E353-E365 (2018).</li>
<li>van Houten, E. L., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+to+study+polycystic+ovary+syndrome%3A+a+possible+link+between+metabolism+and+ovarian+function%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse models to study polycystic ovary syndrome: a possible link between metabolism and ovarian function?</a> Reprod. Biol. 14 (1), 32-43 (2014).</li>
<li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19575469">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Curr. Protoc. Neurosci. , Appendix 4, Appendix 4I (2009).</li>
<li>Wu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+knockout+of+the+androgen+receptor+in+gonadotropes+reveals+crucial+roles+for+androgen+in+gonadotropin+synthesis+and+surge+in+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Conditional knockout of the androgen receptor in gonadotropes reveals crucial roles for androgen in gonadotropin synthesis and surge in female mice.</a> Mol. Endocrinol. 28 (10), 1670-1681 (2014).</li>
<li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL%2F6J+mice%3A+I.+Cycle+frequency%2C+length+and+vaginal+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biol. Reprod. 27 (2), 327-339 (1982).</li>
<li>Dinger, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+Glucose+Tolerance+Test%2C+Measurement+of+Lung+Function%2C+and+Fixation+of+the+Lung+to+Study+the+Impact+of+Obesity+and+Impaired+Metabolism+on+Pulmonary+Outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), (2018).</li>
<li>Nilsson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+a+Comprehensive+Sex+Steroid+Profile+in+Rodent+Serum+by+High-Sensitive+Gas+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Measurement of a Comprehensive Sex Steroid Profile in Rodent Serum by High-Sensitive Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry.</a> Endocrinology. 156 (7), (2015).</li>
<li>McNamara, K. M., Harwood, D. T., Simanainen, U., Walters, K. A., Jimenez, M., Handelsman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+sex+steroids+in+murine+blood+and+reproductive+tissues+by+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Steroid+Biochem.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Measurement of sex steroids in murine blood and reproductive tissues by liquid chromatography-tandem mass spectrometry.</a> J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 121 (3-5), 611-618 (2010).</li>
<li>Klein, S. L., Bird, B. H., Glass, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+differences+in+Seoul+virus+infection+are+not+related+to+adult+sex+steroid+concentrations+in+Norway+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Sex differences in Seoul virus infection are not related to adult sex steroid concentrations in Norway rats.</a> J. Virol. 74 (17), 8213-8217 (2000).</li>
<li>Siracusa, M. C., Overstreet, M. G., Housseau, F., Scott, A. L., Klein, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((17beta-estradiol+alters+the+activity+of+conventional+and+IFN-producing+killer+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">17beta-estradiol alters the activity of conventional and IFN-producing killer dendritic cells.</a> J. Immunol. 180 (3), 1423-1431 (2008).</li>
</ol>

Nic do ujawnienia.

Hiperandrogenizm jest kluczową cechą PCOS. Poziomy DHT w surowicy (dwa razy wyższe u myszy DHT niż u myszy bez DHT) stosowane w tym protokole są niższe niż te zgłaszane przez innych badaczy w poprzednich badaniach i są skalibrowane tak, aby proporcjonalnie naśladować kobiety z PCOS 5,19,20,21. W przeciwieństwie do innych modeli, ten 2-krotny model DHT nie zmienia masy ciała i składu całego ciał...

Hiperandrogenizm jest cechą charakterystyczną zespołu policystycznych jajników (PCOS) według kryteriów NIH oraz Towarzystwa Nadmiar Androgenów i PCOS (AE-PCOS). Kobiety z PCOS mają trudności z zajściem w ciążę i mają zwiększone ryzyko powikłań ciąży1. Nawet jeśli zajdą w ciążę, ich potomstwo płci żeńskiej ma niekorzystne skutki zdrowotne2,3. Modele zwierzęce zostały opracowane przy użyciu różnych strategii4,5,6,7,8,9,10,11,12 i wykazujące wiele cech PCOS (brak owulacji i/lub upośledzona tolerancja glukozy i insuliny) ze zwiększoną masą ciała i otyłością związaną z powiększeniem wielkości adipocytów i zwiększoną masą adipocytów. Istnieją dwie główne strategie tworzenia modeli zwierzęcych, które są wykorzystywane do badania PCOS. Jednym z nich jest leczenie wysokim poziomem androgenów bezpośrednio (egzogenne wstrzyknięcie/insercja androgenu) lub pośrednio (np. blokowanie konwersji androgenów do estrogenów za pomocą inhibitora aromatazy) po urodzeniu13. Innym jest nadmierna ekspozycja płodu na androgeny podczas ciąży14,15 w celu zbadania potomstwa. Na przykład potomstwo płci żeńskiej małpy rezus16,17, owce18 i gryzonie narażone na męski poziom androgenów w okresie wewnątrzmacicznym rozwijają cechy podobne do PCOS w późniejszym życiu. Modele te znacznie poszerzyły naszą wiedzę na temat podwyższonego wpływu androgenów, programowania płodu i wpływu środowiska macicy. Modele te mają jednak swoje ograniczenia: 1) u zwierząt rozwija się otyłość i dlatego trudno jest oddzielić skutki hiperandrogenemii od dysfunkcji rozrodczych i metabolicznych wywołanych otyłością; 2) przed ciążą kobiety z PCOS wykazują już wysoki poziom androgenów, dlatego oocyty były narażone na nadmiar androgenów przed zapłodnieniem; 3) farmakologiczne dawki testosteronu (T) lub dihydrotestosteronu (DHT) stosowane po urodzeniu lub w czasie ciąży mogą nie odzwierciedlać androgenowego środowiska PCOS. Poziomy testosteronu i DHT zostały zmierzone w płynie pęcherzykowym jajnika i/lub surowicy, a poziomy testosteronu i DHT są od 1,5 do 3,9 razy wyższe u kobiet z PCOS5,19,20,21,22,23 w porównaniu z kobietami, które nie są dotknięte chorobą. Stworzyliśmy model dorosłej myszy23,24,25, u którego rozwija się dysfunkcja reprodukcyjna i metaboliczna w ciągu dwóch tygodni od rozpoczęcia przewlekłej ekspozycji na DHT po wprowadzeniu granulki z kryształowym proszkiem DHT o długości 4 mm (całkowita długość granulki wynosi 8 mm). Model ten wytwarza poziomy DHT w surowicy, które są około 2-krotnie wyższe (określane jako 2xDHT) niż u myszy kontrolnych bez leczenia DHT. Myszy 2xDHT nie wykazują zmian w podstawowym surowicy estradiolu, testosteronu, LH i nie rozwijają otyłości, a także wykazują podobną masę jajników, poziom cholesterolu w surowicy, wolne kwasy tłuszczowe, leptynę, TNFα i IL-623,24,25 w stosunku do kontroli nawet do 3,5 miesiąca po wprowadzeniu DHT23,24,25. Dodatkowo, poprzez kojarzenie samic, które już rozwinęły cechy PCOS, możemy badać wpływ hiperandrogenicznego środowiska matki na zdrowie metaboliczne i reprodukcyjne potomstwa15.
Ten nowy paradygmat (istotny dla kryteriów NIH i AE-PCOS Society) modeluje chorobę, wytwarzając względnie podobne poziomy androgenów do tych u kobiet z PCOS, 2- do 3-krotnie wyższy poziom testosteronu lub DHT w porównaniu do kobiet zdrowych. Jednak model ten jest utrzymywany przez ciągły egzogenny DHT, a nie przez zaprogramowany endogenny hiperandrogenizm po odstawieniu DHT. Ogólnym celem tego artykułu jest skupienie się na 1) jak zrobić granulat DHT; 2) jak wygenerować model myszy podobny do lean-PCOS; 3) strategie oceny potomstwa płci żeńskiej z tych matek. Inne pomiary i ocena fenotypów nie są omówione w tym manuskrypcie, ale można je znaleźć w5,15,23,24,25,26.

<table><tbody><tr><td>Krystaliczny proszek 5&alpha;-DHT</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8380-1G</td><td></td></tr><tr><td>Dow Corning Silastic rurki</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-189-15D</td><td>0,04 cala / 1 mm średnica wewnętrzna x0,085 cala / 2,15 mm średnica zewnętrzna</td></tr><tr><td>Klej medyczny silikon</td><td>Czynnik II, InC.</td><td>A-100</td><td></td></tr><tr><td>Gogle, fartuchy laboratoryjne, rękawice i maski.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 &mikro; L końcówki do pipet bez filtra</td><td>USA Scientific 11113700</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Szkiełko mikroskopowe do rozmazu</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-003</td><td></td></tr><tr><td>Diff Quik do barwienia komórek</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9979740</td><td></td></tr><tr><td>Lancet</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9416572</td><td></td></tr> 3 <tr><td>mL Strzykawka</td><td>Becton, Dickinson and Company (BD),</td> <td>30985</td><td></td></tr><tr><td>dołączona igła: 20 G</td><td>BD</td><td>305176</td><td></td></tr><tr><td>Linijka: dowolna długość niż 10 cm ze skalą milimetrową.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise</td><td>NDC13985-704-10</td><td>100 mg/ml</td></tr><tr><td>Chlorowodorek ketaminy</td><td>Hospira, Inc</td><td>NDC 0409-2051-05</td><td>100 mg/ml</td></tr><tr><td>Zszywka chirurgiczna</td><td>AutoClip&reg; System, Fine Science Tool</td><td>12020-00</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka insulinowa</td><td>BD</td><td>329461</td><td>1/2 CC, strzykawka insulinowa o niskiej dawce U-100</td></tr><tr><td>Trokar</td><td>Innowacyjne badania Ameryki Mikroskop</td><td>MP-182</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Carl Zeiss Primo Star</td><td>415500-0010-001</td><td>Niemcy</td></tr><tr><td>Dziurkacz w ucho</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-812-201</td><td></td></tr><tr><td>ELISA testosteronu szczur/mysz zestaw</td><td>IBL</td><td>B79174</td><td></td></tr><tr><td>DHT Zestaw ELISA</td><td>Alpha Diagnostic International</td><td>1940</td><td></td></tr><tr><td>Ultraglukometr jednym dotknięciem</td><td>Life Scan, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ultra paski testowe za jednym dotknięciem</td><td>Life Scan, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rurka Eppendorf</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-402-18</td><td></td></tr><tr><td>Żyletka</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>Clidox</td><td></td><td>Podkładka chirurgiczna Fisher Scientific</td> NC0089321 <td></td></tr><tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>50587953</td><td>Producent: Andwin Scientific 56616018</td></tr><tr><td>Roztwór antyseptyczny Betadine</td><td>Walgreens</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3M Vetbond (cyjanoakrylan n-butylu)</td><td>3M Science. Odnoszące się do życia</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

hiperandrogenny model myszy do badania zespołu policystycznych jajników

A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome

Hiperandrogenemia odgrywa kluczową rolę w funkcjach reprodukcyjnych i metabolicznych u kobiet i jest cechą charakterystyczną zespołu policystycznych jajników. Opracowanie szczupłego modelu myszy podobnego do PCOS, który naśladuje kobiety z PCOS, ma znaczenie kliniczne. W niniejszym protokole opisujemy taki model. Wkładając 4 mm długości krystalicznej granulki proszku DHT (dihydrotestosteron) (całkowita długość granulki wynosi 8 mm) i wymieniając ją co miesiąc, jesteśmy w stanie wyprodukować model myszy podobny do PCOS, z poziomem DHT w surowicy 2 razy wyższym niż myszy bez implantacji DHT (no-DHT). Zaobserwowaliśmy dysfunkcję rozrodczą i metaboliczną bez zmiany masy ciała i składu ciała. Wykazując wysoki stopień niepłodności, niewielka podgrupa tych samic myszy podobnych do PCOS może zajść w ciążę, a ich potomstwo wykazuje opóźnione dojrzewanie i zwiększony poziom testosteronu w wieku dorosłym. Ten podobny do PCOS model szczupłej myszy jest użytecznym narzędziem do badania patofizjologii PCOS i potomstwa z tych matek podobnych do PCOS.

Poziomy DHT w surowicy i test tolerancji glukozy
Poziomy DHT w pobranym surowicy zmierzono za pomocą testu ELISA oraz LC-MS zgodnie z protokołami 1.24–1.25 oraz 2.9, 3.0. Bezwzględne wartości DHT różnią się pomiędzy spektrometrią mas a testem ELISA, jednak względna krotność (około 2-krotna) poziomu DHT w grupie z implantacją DHT względem grupy bez implantacji jest podobna w obu testach oraz we wszystkich eksperymentach<sup class="x...

Opisujemy rozwój szczupłego modelu myszy podobnego do PCOS z granulką dihydrotestosteronu w celu zbadania patofizjologii PCOS i potomstwa z tych matek podobnych do PCOS.

Hiperandrogenny model myszy do badania zespołu policystycznych jajników

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a ...

Ta metoda może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie rozrodu. I endokrynologia. I mają zastosowanie w badaniu zespołu policystycznych jajników lub PCOS i hiperandrogenizmu.Zaletą tej techniki jest to, że ułatwia konsekwentne, równomierne, długotrwałe uwalnianie hormonów w kosztowny i skuteczny sposób. JHU prowadzącym zabieg będzie Ping Xue, technik z mojego laboratorium. Do przygotowania granulatu dihydrotestosteronu lub DHT użyj żyletki, aby wyciąć 15 milimetrowy kawałek silikonowej rurki.I użyj trzymililitrowej strzykawki wyposażonej w igłę o rozmiarze 20, aby wstrzyknąć od dwóch do pięciu milimetrów kleju medycznego silikonu do jednego końca tubki. Pozostaw rurkę do wyschnięcia na noc. I sprawdź, czy na uszczelnionym końcu nie ma pęcherzyków powietrza.Nosząc odpowiednie środki ochrony osobistej, wlej proszek DHT do plastikowej łodzi w kapturze przepływowym. Wciśnij otwarty koniec tubki z klejem w proszek. Za pomocą dużego, wyprostowanego spinacza do papieru ubij proszek w dół do rurki, aż DHT osiągnie odpowiednią głębokość eksperymentalną.Następnie uszczelnij otwartą stronę rurki silikonem na noc. Następnego ranka odetnij każdą zapieczętowaną stronę, aby uzyskać dwumilimetrową długość silikonu po obu stronach DHT i bez granulek kontrolnych DHT. Następnie przechowuj granulki w stożkowej tubie o pojemności 50 mililitrów owiniętej folią w temperaturze pokojowej przez okres do trzech miesięcy.W przypadku generowania modelu myszy PCOS zrównoważ do 20 DHT lub kontroluj granulki w oddzielnych 50-mililitrowych stożkowych probówkach zawierających 30 mililitrów 0,9 procent soli fizjologicznej przez 24 godziny w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Następnego dnia potwierdź brak reakcji na uszczypnięcie palca u znieczulonej dwumiesięcznej samicy myszy i użyj sterylnej gazy, aby podać sekwencyjne peelingi jodonowe i 70-procentowe etylol na obszar operacyjny. Następnie wykonaj pięciomilimetrowe nacięcie przez skórę w pobliżu szyi.I użyj trokara o rozstawie dziesięciu centymetrów, aby zrobić 15-milimetrowy tunel w kierunku rostralnym. Za pomocą trokaru wprowadzić granulkę grzbietowo do tunelu i uszczelnić nacięcie klejem chirurgicznym. Ręcznie przybliż krawędzie rany za pomocą kleszczy i delikatnymi pociągnięciami pędzla nałóż trzy cienkie warstwy płynnego kleju na jeden centymetr z każdej strony przeciwległych krawędzi rany.Następnie umieść samą mysz w klatce na poduszce grzewczej z monitorowaniem aż do pełnego rozłożenia. Wymiana granulki co cztery tygodnie w celu utrzymania stałego poziomu ekspozycji na androgeny. Trzy dni po wprowadzeniu granulek użyj pipety p10, aby wstrzyknąć dziesięć mikrolitrów sterylnego roztworu soli fizjologicznej do jamy pochwy i użyj końcówki pipety, aby natychmiast odzyskać sól fizjologiczną.Rozprowadź próbkę soli fizjologicznej komórek pochwy na oznaczonym szkiełku. I pozostaw sól fizjologiczną do wyschnięcia w temperaturze pokojowej. Umieść wysuszone szkiełka w pojemniku zawierającym 100% etynolu na co najmniej pięć minut.Następnie barwić szkiełka przez jedną minutę w buforze B i buforze C z zestawu do szybkiego barwienia. Pod koniec inkubacji buforu C przemyć szkiełka wodą z kranu przez trzy sekundy i wysuszyć je w temperaturze pokojowej. Aby określić cykliczność rujową, obejrzyj szkiełka pod dziesięciokrotnym obiektywem mikroskopu świetlnego.Policz dni na każdym etapie i podziel je przez łączną liczbę dni, aby obliczyć procent czasu na każdym etapie. Aby przetestować tolerancję glukozy, 20-dniowa insercja DHT, pościć myszy przez noc. Zważ myszy następnego ranka i użyj glukometru i pasków testowych, aby zmierzyć poziom glukozy w krwi w żyłach ogonowych.Wstrzyknij myszom dwa gramy na kilogram masy ciała 20 procent dekstrozy. Następnie zmierz poziom glukozy w próbkach krwi z żyły ogonowej po 15, 30, 60, 90, 120 minutach od podania dekstrozy. Aby uzyskać potomstwo płci żeńskiej od samic z wszczepionymi DHT, przenieś samicę myszy do testowanej w klatce z udowodnionym płodnym samcem w 15 dniu, po wprowadzeniu osadu.Dokumentuj masę ciała kobiety co tydzień, aby ustalić, czy mysz jest w ciąży. W siódmym dniu po porodzie zanurz końcówkę lancetu w paście do tatuażu i oznacz każde szczenię tatuażem na palcu u nogi. Waż oznaczone myszy co siedem dni do 70 dnia życia.Między datą pourodzeniową od 12 do 16 uderz myszy w uszy, aby ponumerować je zgodnie z systemem, jak pokazano na rysunku. Aby odróżnić płeć, zbadaj brzuszną stronę każdej oznaczonej myszy. Samice będą miały widoczne sutki.Aby pobrać próbki krwi do różnych dalszych analiz, użyj lancetu, aby zebrać przybliżoną eksperymentalną objętość krwi między dziewiątą a dziesiątą rano przez krwawienie z żyły podżuchwowej. I odwirować próbki, aby umożliwić pobranie surowicy. Następnie przechowuj próbki surowicy w 1,5-mililitrowych mikroprobówkach wirówkowych w temperaturze minus 80 stopni Celsjusza do czasu ich analizy.Aby ocenić dojrzałość płciową u potomstwa płci żeńskiej DHT, codziennie po odsadzeniu w 21 dniu po urodzeniu należy sprawdzić otwór pochwy za pomocą oględzin. I użyj kalibrów, aby zmierzyć odległość odbytu i narządów płciowych. Chociaż wartości bezwzględne DHT w surowicy różnią się między spektrometrią mas a analizą Elisa, względna ludowa zmiana insercji DHT w porównaniu z brakiem DHT jest podobna zarówno w testach, jak i w różnych eksperymentach.Poziomy DHT są znacznie zwiększone od momentu przed poczęciem do ciąży zarówno u myszy DHT, jak i bez DHT. Jednak poziomy DHT są dwukrotnie wyższe u myszy DHT w porównaniu do myszy bez DHT zarówno w okresie przedkoncepcyjnym, jak i ciążowym. Dorosłe córki DHT wykazują różnice w funkcjach rozrodczych.Na przykład, zakłócona cykliczność rujowa w porównaniu z dorosłymi córkami bez DHT doświadczającymi znacznie dłuższych czasów w metestrus diestrus i krótszych w pro-esterous i esterous. Podczas próby tej procedury ważne jest, aby pamiętać, aby inkubować granulki przez 24 godziny, zanim zostaną użyte do równomiernego uwalniania hormonu. Po tej procedurze można również zbadać reprodukcyjne i metaboliczne konsekwencje ekspozycji na DHT.Po opracowaniu, technika ta utorowała drogę naukowcom zajmującym się endrochronologią i interakcjami matczyno-płodowymi do badania PCOS i wpływu niskiego poziomu hiperandrogenizmu u samic myszy. Nie zapominaj, że praca z DHT może być bardzo niebezpieczna, a środki ostrożności, takie jak noszenie rękawiczek, maski i okularów oraz praca w kapturze bezpieczeństwa biologicznego, powinny być zawsze podejmowane podczas wykonywania tej procedury.

a-hyperandrogenic-mouse-model-to-study-polycystic-ovary-syndrome

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia rozwojowa

Ten artykuł opisuje sposób przygotowania i wstawiania granulek dihydrotestosteronu (DHT) do modelowania zespołu policystycznych jajników (PCOS) u myszy. Przykładowy protokół demonstruje procedurę na myszach wykorzystywanych do badań reprodukcyjnych i metabolicznych.

Leczenie podskórnego dihydrotestosteronu (DHT): mysi model zespołu policystycznych jajników (PCOS)

Wiele modeli endometriozy u gryzoni jest ograniczonych przez techniczną złożoność, powtarzalność i/lub potrzebę stosowania zwierząt z obniżoną odpornością lub specjalnych myszy reporterowych. Przedstawiamy uproszczony system indukcji zmian chorobowych przy użyciu dowolnej myszy eksperymentalnej z niezależnie weryfikowalnym, obiektywnym systemem punktacji i bez konieczności wycinki owariektomii lub operacji przeżycia.

Syngeniczny mysi model endometriozy przy użyciu myszy z naturalną jazdą na rowerze

To badanie opisuje bezpośredni pomiar produkcji glukozy w wątrobie w mysim modelu zespołu policystycznych jajników przy użyciu stabilnego izotopowego znacznika glukozy przez żyłę ogonową zarówno na czczo, jak i w stanie bogatym w glukozę w tandemie.

Ocena produkcji glukozy w wątrobie w mysim modelu zespołu policystycznych jajników

Hormon folikulotropowy (FSH) w różnych tkankach i organach pozagonadalnych jest związany z patogenezą wielu chorób. Mysi model owariektomii i leczony FSH (OVF) może być wykorzystany do zbadania pozagonowego działania FSH.

Badanie niezależnych efektów hormonu folikulotropowego in vivo w modelu mysim

Badanie to wprowadza nowy model mysi zaprojektowany specjalnie do symulacji endometriozy, klinicznie istotnego podtypu endometriozy. Wykorzystując myszy C57BL/6J, model ma na celu wyjaśnienie patofizjologicznych mechanizmów leżących u podstaw niepłodności związanej z endometrioma, oferując wyrafinowane narzędzie do wypełnienia obecnej luki w wiedzy w medycynie reprodukcyjnej.

Stworzenie eksperymentalnego mysiego modelu endometrioma w celu zbadania związanej z nim niepłodności

Ten protokół wprowadza technikę indukowania modeli zespołu policystycznych jajników (PCOS) u myszy poprzez kontrolowane uwalnianie letrozolu za pomocą mini-pomp. W odpowiednim znieczuleniu minipompa została wszczepiona podskórnie, a PCOS został pomyślnie wywołany u myszy po pewnym czasie od uwolnienia minipompy.

Zmodyfikowana technika wywoływania zespołu policystycznych jajników u myszy

Eksperymentalne potwierdzenie aktywności wzmacniacza najlepiej podejść poprzez analizę utraty funkcji. Przedstawiono tutaj skuteczny protokół, który wykorzystuje delecję za pośrednictwem CRISPR/Cas9 do badania specyficznej dla alleli regulacji transkrypcji genów w komórkach F1 ES, które zawierają genom hybrydowy (Mus musculus129 x Mus castaneus).

Generowanie delecji monoallelicznych za pośrednictwem CRISPR/Cas9 w celu zbadania funkcji wzmacniacza w embrionalnych komórkach macierzystych myszy

Ten protokół przedstawia metodę przeprowadzania ilościowej, jednokomórkowej analizy in situ ekspresji białek w celu zbadania specyfikacji linii u mysich zarodków przedimplantacyjnych. Opisano procedury niezbędne do pobierania blastocyst, wykrywania białek metodą immunofluorescencyjną w całości montowanej, obrazowania próbek pod mikroskopem konfokalnym oraz segmentacji jądrowej i analizy obrazu.

Analiza ilościowa ekspresji białek w celu zbadania specyfikacji linii w zarodkach myszy przed implantacją

Ten protokół opisuje izolację, hodowlę i zwapnienie komórek śródmiąższowych zastawki pochodzących od szczurów, wysoce fizjologiczny model in vitro zwapnienia zastawki aortalnej (CAVD). Wykorzystanie tego szczurzego modelu ułatwia badania nad CAVD w badaniu mechanizmów komórkowych i molekularnych, które leżą u podstaw tego złożonego procesu patologicznego.

Izolacja i charakterystyka pierwotnych komórek śródmiąższowych zastawki szczura: nowy model do badania zwapnienia zastawki aortalnej

Tutaj opisujemy metodę obrazowania w całości w całej skórze ucha dorosłej myszy, która pozwala nam na wizualizację rozgałęzionej morfogenezy i wzoru nerwów obwodowych i naczyń krwionośnych, a także rozmieszczenia komórek odpornościowych.

Mikroskopia konfokalna z pełnym mocowaniem dla skóry ucha osoby dorosłej: modelowy system do badania morfogenezy rozgałęzień nerwowo-naczyniowych i dystrybucji komórek odpornościowych

Poznaj hiperandrogenny model myszy do badania zespołu policystycznych jajników z wykorzystaniem pelletów dihydrotestosteronu. Ta metoda pozwala badać wpływ hiperandrogenizmu na potomstwo.

Hiperandrogenny model myszy do badania zespołu policystycznych jajników

Przeglądaj więcej filmów