Name: Protokół warunkowej preferencji miejsca do pomiaru inkubacji łaknienia u szczurów (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 11 s
Description: Poznaj protokół warunkowej preferencji miejsca z morfiną do pomiaru inkubacji łaknienia u szczurów. Ta metoda pozwala badać mechanizmy uzależnienia i pamięć nagrodową w modelu zwierzęcym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ta praca była wspierana przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (NSFC)31741058 (Y.Z.), granty rządowe Shenzhen (JCYJ20170818162613877 i JCYJ20170818163217196) oraz grant China Postdoctoral Science Foundation 2017M622826 (K.Z.).

Procedury eksperymentalne były przeprowadzane zgodnie z wytycznymi dotyczącymi krajowej opieki i wykorzystania zwierząt, a eksperymenty zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Wykorzystania Zwierząt w Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Chińskiej Akademii Nauk.
1. Habituacja zwierząt
<ol>
	<li>Należy pozyskać dorosłe samce szczurów z laboratorium zwierzęcego i utrzymywać je w 12-godzinnym cyklu światło/ciemność (światło od 7:00 do 19:00) z nielimitowanym dostępem do pożywienia i wody.</li>
	<li>Przed rozpoczęciem eksperymentów należy oswoić zwierzęta poprzez zabawę z nimi lub głaskanie dwa razy dziennie przez dwa tygodnie.</li>
	<li>Losowo przydziel zwierzęta do grup otrzymujących sól fizjologiczną lub morfinę.</li>
</ol>
2. Przygotowanie leku
<ol>
	<li>Przygotować chlorowodorek morfiny w stężeniu 10 mg/mL i wstrzyknąć szczurom doprzewnowo (i.p.) w dawce 1 mL/kg.</li>
	<li>W ramach kontroli wstrzyknąć szczurom sól fizjologiczną w dawce 1 mL/kg.</li>
</ol>
3. Aparatura CPP
<ol>
	<li>Zbudować aparat do CPP składający się z trzech komór z różnymi sygnałami dotykowymi (podłogowymi) i zbadać początkowe preferencje szczurów wobec dwóch komór bocznych. Aparat składa się z dwóch dużych czarnych komór bocznych (30 cm × 25 cm × 30 cm, D×S×W) oraz jednej środkowej białej komory (11 cm × 25 cm × 30 cm, D×S×W) z białą gładką podłogą z PVC. Dwie komory boczne mają różne tekstury podłogi jako sygnały somatosensoryczne: jedna z podłogą z kratowej pleksiglasu, druga z chropowatą podłogą z PVC.</li>
	<li>Zmienić kombinację sygnałów dotykowych, aby upewnić się, że aparat jest nieobciążony, ponieważ aparat obciążony może prowadzić do wyników fałszywie dodatnich4. 
	UWAGA: Ważną kwestią metodologiczną w konstrukcji aparatu CPP jest to, czy aparat jest „obciążony” czy „nieobciążony”4. Jeśli grupa niewytrenowanych szczurów nie wykazuje początkowej preferencji jednej komory bocznej nad drugą, aparat uznaje się za „nieobciążony”. W przeciwnym razie uznaje się go za „obciążony”13.</li>
</ol>
4. Procedura CPP
<ol>
	<li>Ustanowienie paradygmatu CPP indukowanego morfiną, głównie w oparciu o poprzednie badania21,22 z modyfikacją punktów czasowych warunkowania, liczby sesji warunkowania, okresu prób warunkowania oraz punktów czasowych testowania20Poniżej znajduje się krótki opis, którego harmonogram doświadczalny przedstawiono w Rycina 1.</li>
	<li>Faza wstępnego warunkowania
	<ol>
		<li>W tej fazie (dni 1–3) należy usunąć zapory typu gilotyna, aby umożliwić swobodny dostęp do całego aparatu, i umieścić zwierzę w środkowej komorze.</li>
		<li>Rejestruj aktywność zwierząt przez 15 min.</li>
		<li>Oblicz czas spędzony w dwóch bocznych komorach w dniu 3. jako wartość bazową i oznacz go jako T0.</li>
		<li>Z eksperymentu należy wykluczyć szczury, które weszły do którejkolwiek z bocznych komór rzadziej niż cztery razy.23 ponieważ szczury te prawdopodobnie będą miały problemy z ogólnym stanem zdrowia (np., zabrudzone futro i obecność guzów). Monitorować stan zdrowia zwierząt przez cały okres trwania eksperymentu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Faza kondycjonowania 
	UWAGA: Faza kondycjonowania obejmuje 6 dni (dzień 4. do 9.).
	<ol>
		<li>W przypadku zwierząt uwarunkowanych morfiną, wykonać iniekcję szczurom domięśniowo morfiną (10 mg/kg) lub solą fizjologiczną (1 ml/kg) naprzemiennie podczas sesji porannych (9:00) i wieczornych (19:00) (w odstępach 10 h).</li>
		<li>Niezwłocznie po każdym wstrzyknięciu zamknąć szczury w komorze powiązanej z lekiem (niepreferowanej) lub powiązanej z solą fizjologiczną (preferowanej) na 45 min (Rysunek 1B).</li>
		<li>Nie wyłączaj systemu nagrywania wideo. 
		UWAGA: Według naszych doświadczeń około 5% szczurów wykazuje depresję oddechową po pierwszej iniekcji morfiny (10 mg/kg). W takim przypadku, aby zwiększyć przeżywalność szczurów z depresją oddechową, należy wyjąć zwierzę z komory kondycjonującej, wysunąć mu język i umieścić je na białym ręczniku papierowym w klatce domowej.</li>
		<li>W przypadku kontroli warunkowanych solą fizjologiczną, szczurom podaje się iniekcje soli fizjologicznej (1 ml/kg) przed ekspozycją na jedną komorę boczną aparatury CPP podczas sesji porannej i na drugą komorę podczas sesji wieczornej przez 45 min/sesję, zgodnie z protokołem dla grupy morfiny (Rycina 1C).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Faza testowania
	<ol>
		<li>W tej fazie należy usunąć gilotynowe drzwi, aby zapewnić swobodny dostęp do całego urządzenia, a następnie umieścić zwierzę w środkowej komorze, pozwalając mu na swobodną eksplorację całego aparatu przez 15 min.</li>
		<li>Rejestruj ich aktywność podczas tych 15 min.</li>
		<li>Przeprowadź trzy testy po kondycjonowaniu, t.j. test 1 (T1), test 2 (T2) i test 3 (T3), odpowiednio 2, 10 i 18 dni po ostatniej sesji warunkowania w stanie braku morfiny (Rycina 1A).</li>
		<li>Zmieniaj punkty czasowe przeprowadzania testów w zależności od różnych celów eksperymentalnych. 
		UWAGA: W celu zminimalizowania liczby potrzebnych szczurów zastosowano schemat wewnątrzobiektowy. Jednakże, aby wykluczyć efekt wygaszenia, wymagany jest schemat międzyobiektowy.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<img alt="Rysunek 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58384/58384fig1.jpg" /> 
Rysunek 1: Procedury eksperymentalne. (A) Procedury eksperymentalne całego procesu CPP. (B) Harmonogram eksperymentalny fazy warunkowania grupy morfiny. (C) Harmonogram eksperymentalny fazy warunkowania grupy soli fizjologicznej. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58384/58384fig1large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
5. Analiza danych
<ol>
	<li>Oblicz wynik CPP w grupie morfiny (sól fizjologiczna) według wzoru: wynik CPP = czas spędzony w komorze powiązanej z lekiem (niepreferowanej) / całkowity czas spędzony w obu komorach warunkujących.</li>
	<li>Przeprowadź analizę danych wyników CPP oraz liczby wejść do komór bocznych z zastosowaniem odpowiednich metod statystycznych w programie SPSS.</li>
	<li>Przedstaw wszystkie dane behawioralne jako średnia ± SEM, gdzie SEM oznacza standardowy błąd średniej. Wartości p&#60;0,05 uznaj za istotne statystycznie i oznacz je gwiazdkami (*) oraz znakami octothorpe (#) na rysunkach.</li>
</ol>

<ol><li>Leshner, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Addiction+is+a+brain+disease%2C+and+it+matters%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Addiction is a brain disease, and it matters.</a> Science. 278 (5335), 45-47 (1997).</li>
<li>Koob, G. F., Volkow, N. D. <a target="_blank" href="https://www.nature.com/articles/npp2009110">Neurocircuitry of Addiction.</a> Neuropsychopharmacology. 35 (1), 217-238 (2010).</li>
<li>Zhu, Y., Wienecke, C. F., Nachtrab, G., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+thalamic+input+to+the+nucleus+accumbens+mediates+opiate+dependence%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A thalamic input to the nucleus accumbens mediates opiate dependence.</a> Nature. 530 (7589), 219-222 (2016).</li>
<li>Tzschentke, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+reward+with+the+conditioned+place+preference+paradigm%3A+a+comprehensive+review+of+drug+effects%2C+recent+progress+and+new+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Measuring reward with the conditioned place preference paradigm: a comprehensive review of drug effects, recent progress and new issues.</a> Progress in Neurobiology. 56 (6), 613-672 (1998).</li>
<li>Tzschentke, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+reward+with+the+conditioned+place+preference+%28CPP%29+paradigm%3A+update+of+the+last+decade%5BTitle%5D)+AND+%22Addiction+Biology%22%5BJournal%5D)">Measuring reward with the conditioned place preference (CPP) paradigm: update of the last decade.</a> Addiction Biology. 12 (3-4), 227-462 (2007).</li>
<li>Mucha, R. F., vander Kooy, D., O'Shaughnessy, M., Bucenieks, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+reinforcement+studied+by+the+use+of+place+conditioning+in+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Drug reinforcement studied by the use of place conditioning in rat.</a> Brain Research. 243 (1), 91-105 (1982).</li>
<li>van Ree, J. M., Gerrits, M. A., Vanderschuren, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opioids%2C+reward+and+addiction%3A+An+encounter+of+biology%2C+psychology%2C+and+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Opioids, reward and addiction: An encounter of biology, psychology, and medicine.</a> Pharmacological Reviews. 51 (2), 341-396 (1999).</li>
<li>Le Merrer, J., Becker, J. A., Befort, K., Kieffer, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reward+processing+by+the+opioid+system+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Reward processing by the opioid system in the brain.</a> Physiological Reviews. 89 (4), 1379-1412 (2009).</li>
<li>Bardo, M. T., Bevins, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioned+place+preference%3A+what+does+it+add+to+our+preclinical+understanding+of+drug+reward%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Conditioned place preference: what does it add to our preclinical understanding of drug reward?</a> Psychopharmacology. 153 (1), 31-43 (2000).</li>
<li>Bardo, M. T., Rowlett, J. K., Harris, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioned+place+preference+using+opiate+and+stimulant+drugs%3A+a+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+%26+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">Conditioned place preference using opiate and stimulant drugs: a meta-analysis.</a> Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 19 (1), 39-51 (1995).</li>
<li>Sun, Y., Pan, Z., Ma, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+entrances+to+side+compartments+indicate+incubation+of+craving+in+morphine-induced+rat+and+tree+shrew+CPP+models%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+Biochemistry+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Increased entrances to side compartments indicate incubation of craving in morphine-induced rat and tree shrew CPP models.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 159, 62-68 (2017).</li>
<li>Sun, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+caudal+part+of+the+posterior+insula+of+rats+participates+in+the+maintenance+but+not+the+acquisition+of+morphine+conditioned+place+preference%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Neuroscience+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">The caudal part of the posterior insula of rats participates in the maintenance but not the acquisition of morphine conditioned place preference.</a> CNS Neuroscience & Therapeutics. , (2018).</li>
<li>Cunningham, C. L., Ferree, N. K., Howard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apparatus+bias+and+place+conditioning+with+ethanol+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Apparatus bias and place conditioning with ethanol in mice.</a> Psychopharmacology. 170 (4), 409-422 (2003).</li>
<li>Carles, S. -S., Rainer, S. <a target="_blank" href="https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/j.1369-1600.2006.00012.x">REVIEW: Behavioural assessment of drug reinforcement and addictive features in rodents: an overview.</a> Addiction Biology. 11 (1), 2-38 (2006).</li>
<li>Grimm, J. W., Hope, B. T., Wise, R. A., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroadaptation.+Incubation+of+cocaine+craving+after+withdrawal%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neuroadaptation. Incubation of cocaine craving after withdrawal.</a> Nature. 412 (6843), 141-142 (2001).</li>
<li>Gawin, F., Kleber, H. <a target="_blank" href="https://www.psych.theclinics.com/article/S0193-953X(18)30614-2/abstract">Pharmacologic treatments of cocaine abuse.</a> Psychiatric Clinics of North America. 9 (3), 573-583 (1986).</li>
<li>Li, Y. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+amygdala+extracellular+signal-regulated+kinase+signaling+pathway+is+critical+to+incubation+of+opiate+craving%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Central amygdala extracellular signal-regulated kinase signaling pathway is critical to incubation of opiate craving.</a> J Neurosci. 28 (49), 13248-13257 (2008).</li>
<li>Lubbers, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Extracellular+Matrix+Protein+Brevican+Limits+Time-Dependent+Enhancement+of+Cocaine+Conditioned+Place+Preference%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">The Extracellular Matrix Protein Brevican Limits Time-Dependent Enhancement of Cocaine Conditioned Place Preference.</a> Neuropsychopharmacology. 41 (7), 1907-1916 (2016).</li>
<li>Bardo, M. T., Miller, J. S., Neisewander, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioned+place+preference+with+morphine%3A+the+effect+of+extinction+training+on+the+reinforcing+CR%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+Biochemistry+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Conditioned place preference with morphine: the effect of extinction training on the reinforcing CR.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 21 (4), 545-549 (1984).</li>
<li>Sun, Y., Zong, W., Zhou, M., Ma, Y., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-conditioned+place+preference+treatment+of+chloral+hydrate+interrupts+the+rewarding+effect+of+morphine%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+Biochemistry+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Pre-conditioned place preference treatment of chloral hydrate interrupts the rewarding effect of morphine.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. , 60-63 (2015).</li>
<li>Lin, X., Wang, Q., Cheng, Y., Ji, J., Yu, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+of+protein+expression+profiles+in+the+amygdala+during+the+process+of+morphine-induced+conditioned+place+preference+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Changes of protein expression profiles in the amygdala during the process of morphine-induced conditioned place preference in rats.</a> Behavioural Brain Research. 221 (1), 197-206 (2011).</li>
<li>Lv, X. -F., Xu, Y., Han, J. -S., Cui, C. -L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+activity-regulated+cytoskeleton-associated+protein+%28Arc%2FArg3.1%29+in+the+nucleus+accumbens+is+critical+for+the+acquisition%2C+expression+and+reinstatement+of+morphine-induced+conditioned+place+preference%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Expression of activity-regulated cytoskeleton-associated protein (Arc/Arg3.1) in the nucleus accumbens is critical for the acquisition, expression and reinstatement of morphine-induced conditioned place preference.</a> Behavioural Brain Research. 223 (1), 182-191 (2011).</li>
<li>Meng, Z., Liu, C., Hu, X., Ma, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Somatosensory+cortices+are+required+for+the+acquisition+of+morphine-induced+conditioned+place+preference%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Somatosensory cortices are required for the acquisition of morphine-induced conditioned place preference.</a> PLoS One. 4 (11), e7742(2009).</li>
<li>Shalev, U., Morales, M., Hope, B., Yap, J., Shaham, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-dependent+changes+in+extinction+behavior+and+stress-induced+reinstatement+of+drug+seeking+following+withdrawal+from+heroin+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Time-dependent changes in extinction behavior and stress-induced reinstatement of drug seeking following withdrawal from heroin in rats.</a> Psychopharmacology. 156 (1), 98-107 (2001).</li>
<li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrolytic+lesions+of+the+bilateral+ventrolateral+orbital+cortex+inhibit+methamphetamine-associated+contextual+memory+formation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Electrolytic lesions of the bilateral ventrolateral orbital cortex inhibit methamphetamine-associated contextual memory formation in rats.</a> Brain Research. , (2015).</li>
<li>Vanderschuren, L. J., Everitt, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+seeking+becomes+compulsive+after+prolonged+cocaine+self-administration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Drug seeking becomes compulsive after prolonged cocaine self-administration.</a> Science. 305 (5686), 1017-1019 (2004).</li>
<li>Deroche-Gamonet, V., Belin, D., Piazza, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+addiction-like+behavior+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Evidence for addiction-like behavior in the rat.</a> Science. 305 (5686), 1014-1017 (2004).</li>
<li>Augier, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecular+mechanism+for+choosing+alcohol+over+an+alternative+reward%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A molecular mechanism for choosing alcohol over an alternative reward.</a> Science. 360 (6395), 1321-1326 (2018).</li>
<li>Sun, Y. M., Yang, J. Z., Sun, H. Y., Ma, Y. Y., Wang, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+tree+shrew+chronic+morphine+dependent+model%5BTitle%5D)+AND+%22Dongwuxue+Yanjiu%22%5BJournal%5D)">Establishment of tree shrew chronic morphine dependent model.</a> Dongwuxue Yanjiu. 33 (1), 14-18 (2012).</li>
<li>Duan, Y., Shen, F., Gu, T., Sui, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Addiction%3A+From+Context-Induced+Hedonia+to+Appetite%2C+Based+on+Transition+of+Micro-behaviors+in+Morphine+Abstinent+Tree+Shrews%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Psychology%22%5BJournal%5D)">Addiction: From Context-Induced Hedonia to Appetite, Based on Transition of Micro-behaviors in Morphine Abstinent Tree Shrews.</a> Frontiers in Psychology. 7, 816(2016).</li>
<li>Wu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphine-induced+conditioned+place+preference+in+rhesus+monkeys%3A+Resistance+to+inactivation+of+insula+and+extinction%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Learning+and+Memory%22%5BJournal%5D)">Morphine-induced conditioned place preference in rhesus monkeys: Resistance to inactivation of insula and extinction.</a> Neurobiology of Learning and Memory. 131, 192-200 (2016).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

W tym miejscu opisano metodę wykorzystującą paradygmat CPP morfiny w celu ustanowienia długotrwałej pamięci nagrody u szczura ze wskazówkami somatosensorycznymi jako kontekstem warunkowym. Aby zbudować taką długotrwałą pamięć nagrody, poprzedni protokół21 ze zrównoważonym aparatem CPP jest modyfikowany, a sesje soli fizjologicznej i morfiny są umieszczane w odstępie co najmniej 10 godzin. Ponadto w fazie warunkowania dodaje się więcej sesji warunkowających, aby wzmocnić uczenie się asocjacyjne. Oprócz wyników CPP, mierzone są wejścia do dwóch komór bocznych, a wzorzec zwiększonych wejść do komór bocznych jest podobny do wzorca zwiększonych aktywnych odpowiedzi w paradygmacie samodzielnego podawania.
Na ustalenie wspomnianego powyżej paradygmatu CPP wpływa kilka czynników. Jednym z kluczowych czynników jest konstrukcja aparatu: szczury na ogół powinny mieć podobne preferencje do obu komór bocznych, aby zapewnić równowagę aparatu. Niezrównoważona aparatura może maskować nabycie CPP ze względu na początkową wysoką preferencję dla jednej bocznej komory13. W związku z tym należy unikać skrajnego preferowania jednej bocznej komory (ponad 90% całkowitego czasu w każdej z dwóch bocznych komór) przy wyborze tekstury podłogi lub innych wskazówek kontekstowych. Dla różnych celów eksperymentalnych eksperymentatorzy mogą zrównoważyć aparat CPP, modyfikując bodźce kontekstowe. W przypadku aparatury zrównoważonej powszechnie stosuje się dwa sposoby projektowania eksperymentalnego4. Jednym z tendencyjnych sposobów jest łączenie leków z niepreferowaną komorą ze wszystkimi badanych; Bezstronnym sposobem jest sparowanie połowy zwierząt z narkotykami w komorze niepreferowanej, a drugiej połowy z preferowaną komorą. Oba sposoby mogą ustalić CPP13, ale badania17,25 z drugim wzorem zawsze wykluczają wielu badanych ze względu na ich silną preferencję dla jednej bocznej komory. Ponieważ istnieje indywidualna podatność na uzależnienie od narkotyków 26,27,28, w tym badaniu wybrano tendencyjny projekt, aby uniknąć wykluczenia zdrowych osób. Jednym z ograniczeń stronniczego projektu jest efekt niekonsekwentnego preferowania komór bocznych. Jak pokazano na rysunku 2, szczury w grupie soli fizjologicznej mają konsekwentnie niskie wyniki CPP dla początkowej komory niepreferowanej. Tak więc możliwość, że niekonsekwentna preferencja dla komór bocznych może wpływać na wyniki CPP w grupie morfiny, jest wykluczona przez ustawienie kontroli soli fizjologicznej. Aby uniknąć efektu sufitu preferowanej komory, używamy początkowej komory niepreferowanej jako komory sparowanej morfiną. Aby uniknąć wpływu nowości i stresu na preferencję linii wyjściowej w stosunku do komór bocznych, wykonuje się trzy sesje kondycjonowania wstępnego, a trzecia sesja jest używana jako linia bazowa. Czwartym czynnikiem jest odstęp między sesjami morfiny i soli fizjologicznej. W naszym paradygmacie wybieramy odstępy co najmniej 10 godzin, aby uniknąć efektu odstawienia w okresie kondycjonowania soli fizjologicznej. Ważnym czynnikiem jest również dawkowanie morfiny. Ekstremalnie niskie dawki morfiny, takie jak 0,01 mg/kgmc.6, nie indukowały preferencji miejsca. Dawka 10 mg/kg wywołała najwyższy wynik CPP17 u szczurów i jest powszechnie stosowana w badaniach CPP morfiny na szczurach 17,21,23. Jednak morfina w dawce 10 mg/kg (i.p.) może wywołać depresję oddechową u około 5% szczurów. Niższe dawki morfiny, takie jak 5 mg/kg, mogą być stosowane w przyszłych badaniach. W przypadku innych gatunków, takich jak ryjówka drzewna, przy tworzeniu paradygmatu CPP należy wziąć pod uwagę tolerancję na leki. Ponieważ ryjówka drzewna szybko rozwija tolerancję na morfinę, w fazie kondycjonowania należy stosować zwiększone dawki morfiny29,30.
Dzięki zmodyfikowanemu protokołowi długotrwała pamięć nagrody jest ustanawiana na co najmniej 18 dni po 6 dniach kondycjonowania11 (ryc. 2). Przyszłe badania powinny zmierzyć, czy CPP może być utrzymany przez dłuższy czas. Powtarzające się nawroty są główną przeszkodą w leczeniu uzależnienia od narkotyków. Stres, sygnały środowiskowe i leki mogą wywołać nawrót choroby. Po wygaśnięciu pamięci CPP, model ten może być wykorzystany do modelowania nawrotu wywołanego stresem lub narkotykami.
Wejścia do komór sparowanych z narkotykami w grupie morfiny zwiększyły się w okresie abstynencji11 (ryc. 3), co jest podobne ze zwiększonymi reakcjami aktywnymi w paradygmacie samodzielnego podawania. Jednak liczba wejść do komory sparowanej solą również wzrosła wraz z paradygmatem CPP zarówno u szczurów, jak i ryjówek drzewnych11, co różni się od nieaktywnych reakcji paradygmatu samodzielnego podawania. Różnica ta może wynikać z różnych zasad leżących u podstaw tych dwóch paradygmatów: jeden to warunkowanie klasyczne, drugi to warunkowanie instrumentalne. Poza tym ryjówki drzewiaste z doświadczeniami z pokarmem CPP nie wykazywały takiego wzorca zwiększonych wejść30. Dlatego uważa się, że zwiększone wejścia do obu bocznych komór u zwierząt doświadczonych z morfiną reprezentują inkubowany głód narkotyków. Chociaż nie można wykluczyć ograniczenia stosowania powtarzających się pomiarów u jednego osobnika, wzorzec zwiększonych wpisów został zachowany u szczurów11, ryjówek drzewnych11,30 i małp31. Niemniej jednak, w przyszłych badaniach zdecydowanie zaleca się projektowanie między obiektami w okresie abstynencji, aby wykluczyć efekt wygaszania powtarzanych pomiarów.
Oprócz zwiększonych wejść, wyniki CPP przy niskich dawkach morfiny (1 mg/kg i 3 mg/kg) zwiększały się stopniowo w okresie abstynencji17. Wyniki te sugerują, że paradygmat CPP może również modelować inkubację zjawiska łaknienia. Jednak zwiększony wynik CPP może również reprezentować zwiększoną pamięć dla bodźca warunkowego. W tym aspekcie wejścia do komór bocznych w aparacie trójkomorowym, które są podobne do reakcji aktywnych w paradygmacie samodzielnego podawania, bardziej przypominają poszukiwanie narkotyków lub nagradzające działanie leków. Interesujące byłoby sprawdzenie tendencji wejść do bocznych komór w okresie abstynencji w szczurzych paradygmatach CPP niższych dawek morfiny. Przyszłe badania z innymi lekami i myszami powinny zostać przeprowadzone, aby zweryfikować, czy zjawisko to jest konserwatywne w przypadku nadużywanych narkotyków/gatunków.

Uzależnienie od narkotyków jest chorobą przewlekłą1 z kilkoma różnymi etapami2: objadanie się/odurzenie, wycofanie/negatywny wpływ i zaabsorbowanie/oczekiwanie. W początkowej fazie upijania się/odurzenia cyklu uzależnienia od narkotyków, badani przyjmują narkotyki ze względu na efekt wzmacniający2. Na etapie wycofania/negatywnego afektu, badani doświadczają negatywnych somatycznych i emocjonalnych stanów odstawienia narkotyków, które promują negatywne mechanizmy wzmocnienia związane z rozwojem uzależnienia3. W fazie zaabsorbowania/przewidywania badani powracają do poszukiwania narkotyków po wyginięciu, co może być wywołane przez sygnały związane z narkotykami lub stresory. W badaniach na zwierzętach nad uzależnieniem od narkotyków, paradygmaty warunkowej preferencji miejsca (CPP) są używane do naśladowania pozytywnego wzmacniającego efektu narkotyków4,5,6, a zatem służy do modelowania początkowego etapu cyklu uzależnienia od narkotyków. Morfina, należąca do rodziny opioidów, wywołuje pozytywny efekt wzmacniający poprzez aktywację receptorów opioidowych w mózgu7,8.
Paradygmat CPP opiera się na zasadzie klasycznego (Pawłowa) warunkowania i jest powszechnie używany do mierzenia nagradzającego efektu nadużywanych narkotyków, takich jak morfina4,5,9,10, ze względu na łatwą dostępność w laboratoriach. Typowy paradygmat CPP składa się z trzech faz: kondycjonowania wstępnego, kondycjonowania i faz testowania. Podczas fazy warunkowania, nagradzające właściwości narkotyku (bodziec bezwarunkowy) są sparowane z jednym lub kilkoma neutralnymi bodźcami kontekstowymi, które uzyskują właściwości nagradzające po kilku parach warunkowania i służą jako bodźce warunkowe. Podczas fazy badania preferencje zwierząt dotyczące kompartmentów sparowanych z narkotykami są mierzone i odzwierciedlane jako ich pamięć nagrody. Z tego powodu paradygmat CPP jest również wykorzystywany do badania mechanizmów uczenia się i pamięci. Aby ustanowić długotrwałą pamięć nagrody morfiny, zmienne wpływające na ustalanie CPP zostały dostosowane i zoptymalizowane za pomocą niżej opisanego protokołu11. Bodźce kontekstowe to połączenie sygnałów wizualnych, dotykowych i zapachowych. Różnice w bodźcach kontekstowych i punktach czasowych testowania są tworzone zgodnie z różnymi celami badawczymi. Na przykład w naszym poprzednim badaniu12, wskazówki somatosensoryczne (różne tekstury podłogi) były głównie używane jako bodźce kontekstowe do zbadania roli ogonowej części kory wyspowej, regionu mózgu z funkcją somatosensoryczną, w nabywaniu i utrzymywaniu długotrwałej pamięci nagrody. Konstrukcja aparatury i przypisanie szczurów do stron preferowanych/nieuprzywilejowanych ma wpływ na ustanowienie CPP. W poniższym protokole zastosowano aparaturę trzykomorową zamiast aparatury dwukomorowej, aby uniknąć wymuszonych wyborów. Równowaga dwóch bocznych komór i początkowe przypisanie do nich zwierząt wpływa na nabycie CPP4,13. W związku z tym w tym protokole zastosowano zrównoważony projekt komór bocznych i tendencyjne przypisywanie zwierząt, aby uzyskać silną preferencję miejsca. Utrzymanie długotrwałej pamięci nagrody wymaga większej liczby prób kondycjonowania w fazie warunkowania. Aby zmniejszyć koszt czasu podczas fazy kondycjonowania, przeprowadza się dwie próby kondycjonowania dziennie, a wstrzyknięcia morfiny/soli fizjologicznej są równoważone, aby uniknąć ostrego efektu odstawienia morfiny w próbach sparowanych solą fizjologiczną4.
Przywrócenie modeli zwierzęcych14 zostały założone w celu modelowania etapu zaabsorbowania/oczekiwania cyklu uzależnienia od narkotyków. CPP jest również wykorzystywane do badania przywracania, które modeluje powrót do zachowań uzależniających5. Nawrót choroby jest jedną z barier w leczeniu uzależnień od narkotyków. Łaknienie jest jedną z przyczyn powtarzających się nawrotów. Głód narkotykowy stale wzrasta w okresie abstynencji, zjawisko to określa się mianem inkubacji głodu15,16. Inkubacja głodu jest szeroko badana w paradygmacie samodzielnego podawania leków, ale nie w paradygmacie CPP. Zastosowanie paradygmatu CPP do odzwierciedlenia inkubacji łaknienia zostało po raz pierwszy zaproponowane przez Li i wsp.17. Ich wyniki17 pokazały, że wyniki CPP niskich dawek morfiny (1 mg/kg i 3 mg/kg), ale nie wysokich dawek (10 mg/kg) wzrastały stopniowo w ciągu pierwszych 14 dni abstynencji. Podobnie, myszy, którym wstrzyknięto niską dawkę kokainy, wykazywały zwiększone wyniki CPP w czasie18. Podwyższone wyniki CPP niskich dawek morfiny wykorzystano do odzwierciedlenia inkubowanego głodu17. Sugeruje się, że zarówno czas przebywania w środowisku, jak i liczba wejść do środowiska związanego z narkotykami odzwierciedlają wzmacniające reakcje warunkowe w paradygmacie CPP19. Większość ostatnich badań wykorzystuje wyniki CPP do bezpośredniego lub pośredniego odzwierciedlenia czasu spędzonego w komorach sparowanych z lekami, podczas gdy liczba wejść do komór bocznych jako parametr jest często zaniedbywana. Z tych powodów zastosowano dawkę morfiny 10 mg/kg, a liczba zgłoszeń została zmierzona w naszym badaniu11. Wyniki pokazują, że wejścia szczurów do bocznych komór znacznie wzrosły w okresie abstynencji11. Wskazuje to, że zarówno wyniki CPP, jak i liczba wpisów są użytecznymi parametrami w ocenie zwiększonego głodu narkotykowego, a paradygmat CPP ma zastosowanie do modelowania zjawiska inkubacji głodu. Jednakże, aby zmniejszyć liczbę wymaganych zwierząt, grupa zwierząt mających doświadczenie z morfiną jest wielokrotnie badana; W związku z tym nie można było wykluczyć efektu wyginięcia przy obecnym nurcie w projektowaniu przedmiotu. Projekt między tematami z tym samym protokołem może przezwyciężyć to ograniczenie.
Poniżej opisano protokół CPP, który ustanowił długotrwałą pamięć nagrody i modelował zwiększone pragnienie. Krótko mówiąc, po trzech dniach kondycjonowania wstępnego szczury przechodzą przez sześć dni kondycjonowania z dwiema próbami kondycjonowania dziennie, a następnie są testowane w różnych punktach czasowych po ostatniej próbie kondycjonowania. W tym paradygmacie CPP konstruowana jest trzykomorowa skrzynka z polichlorku winylu (PVC) używana jako aparat CPP, a podłoga aparatu jest zrównoważona. Aparat składa się z dwóch dużych czarnych komór bocznych (30 cm × 25 cm × 30 cm, dł×szer.×wys.) i jednej środkowej białej komory (11 cm × 25 cm × 30 cm, dł×szer.×wys.) z białą gładką podłogą z PVC. Dwie boczne komory mają różne tekstury podłogi jako wskazówki somatosensoryczne: jedna z podłogą z pleksiglasu siatkowego, druga z szorstką podłogą z PCV.

<table><tbody><tr><td>Morfina</td><td>Shenyang Pierwsza fabryka</td><td></td><td></td>farmaceutyczna</tr><tr><td>Aparatura CPP / Kamera</td><td>Anlai Technology Company</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SPSS</td><td>IBM Inc</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

protokół warunkowej preferencji miejsca do pomiaru inkubacji łaknienia u szczurów

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

Główną przyczyną powtarzających się nawrotów jest głód narkotykowy. Głód narkotykowy wzrasta stopniowo w okresie abstynencji, zjawisko to określa się mianem inkubacji głodu narkotykowego. W tym miejscu opisujemy protokół preferencji miejsca uwarunkowanego morfiną (CPP) do pomiaru inkubacji głodu u szczurów. W tym protokole paradygmat CPP wykorzystujący głównie wskazówki somatosensoryczne jest używany do ustanowienia długotrwałej pamięci nagrody morfiny. Konstruowana jest trzykomorowa skrzynka CPP, która różni się fakturą podłogi komory. Po pierwsze, zwierzęta są badane pod kątem ich preferencji wyjściowej dla dwóch bocznych komór przez trzy kolejne dni. Następnie wstrzykuje się im dootrzewnowo morfinę/sól fizjologiczną i umieszcza w niepreferowanej/preferowanej komorze na 45 minut. Po 6 dniach kondycjonowania ich preferencje dotyczące komór bocznych są testowane przez 15 minut w różnych punktach czasowych po ostatniej sesji kondycjonowania. Przy tym paradygmacie pamięć nagrody morfiny może trwać co najmniej 18 dni. Aby sprawdzić, czy wyżej wymieniony protokół może modelować zwiększone łaknienie, w okresie abstynencji liczy się liczbę wejść do dwóch bocznych komór. Wyniki pokazują, że wejścia wzrosły, co sugeruje, że paradygmat CPP może naśladować inkubację pragnienia. Przyszłe badania mogą wykorzystać ten model do badania mechanizmów neuronalnych leżących u podstaw pamięci długotrwałej i inkubacji łaknienia.

Poniższe reprezentatywne wyniki wykazują, że zgodnie z opisanym powyżej protokołem można skutecznie ustanowić warunkowaną preferencję miejsca (CPP) dla morfiny oraz utrzymać długotrwałą pamięć nagrody związaną z morfiną (Rycina 2). Liczba wejść do komór bocznych, analogiczna do liczby reakcji aktywnych w paradygmacie samopodawania, odzwierciedla właściwości wzmacniające morfiny. W tym paradygmacie CPP dla morfiny zaobserwowano zwiększoną liczbę wejść (Rycina 3), co wskazuje na inkubację głodu narkotykowego.
Pamięć CPP mogła utrzymywać się przez co najmniej 18 dni po ostatniej sesji warunkowania.
Do badania ekspresji długotrwałej pamięci nagrody wykorzystano 21 szczurów w grupie morfiny oraz 10 szczurów w grupie soli fizjologicznej. Analiza mieszana ANOVA wykazała istotne różnice w interakcji między grupą a testem (F (3,87) = 4.973, p = 0.003), w teście (F (3,87) = 18.237, p&#60; 0.001) oraz w grupie (F (1,29) = 11.413, p = 0.002). Jednoczynnikowa analiza ANOVA z pomiarami powtarzanymi wykazała istotne różnice między testami (F (3,60) = 46.628, p &#60; 0.001) w grupie morfiny, ale nie w grupie soli fizjologicznej (F(3,27) = 1.576, p = 0.218). Analiza porównań wielokrotnych z korektą Bonferroniego wykazała istotne różnice między trzema testami a T0 w grupie morfiny. Jak pokazano na Rysunku 2, pamięć nagrody wywołanej morfiną utrzymywała się przez co najmniej 18 dni i malała w trendzie zależnym od czasu. Dane pochodzą z wcześniej opublikowanego badania11.
Liczba wejść do bocznych komór w grupie morfiny zwiększała się stopniowo
Grupa morfiny 
Aby zbadać tendencję wejść, do mieszanej analizy wariancji (ANOVA) przyjęto grupę (parowanie z solą fizjologiczną i parowanie z morfiną) jako czynnik międzyosobniczy oraz test (T0, T1, T2 i T3) jako czynnik wewnątrzosobniczy. Nie stwierdzono istotnych różnic w interakcji między grupą a testem (F (2.311,92.449) = 1.915, p = 0.147) ani w samej grupie (F(1,40) = 0.898, p = 0.349), natomiast odnotowano istotność w teście (F(2.311,92.499)= 24.243, p &#60; 0.001). Analiza porównań wielokrotnych z testem najmniejszej istotnej różnicy (LSD) wykazała istotne różnice między T1 a T0 (p&#60;0.001), T2 a T0 (p &#60; 0.001) oraz T3 a T0 (p &#60; 0.001) w grupie morfiny w przypadku wejść parowanych z morfiną. W odniesieniu do komór parowanych z solą fizjologiczną, istotność statystyczna wystąpiła między T2 a T0 (p = 0.002) oraz T3 a T0 (p = 0.003), ale nie między T1 a T0 (p = 0.246), co jest podobne do wzorca inkubacji głodu heroinowego24. Ogólnie rzecz biorąc, liczba wejść do bocznych komór w grupie morfiny zwiększała się w sposób zależny od czasu.
Szczury częściej wchodziły do przedziału kojarzonego z morfiną niż do przedziału kojarzonego z solą fizjologiczną w punkcie T1 (t(1,21) = -2.833, p = 0.010) oraz T2 (t(1,21) = -4.458, p = 0.0002), ale nie w punkcie T3 (t(1,21) = -0.471, p = 0.642) (dwustronne testy t dla prób zależnych).
Grupa solna 
Podobnie jak w przypadku grupy morfinowej, zastosowano mieszaną analizę wariancji (ANOVA), która nie wykazała istotnych różnic w interakcji między grupą a testem (F(3,54) = 0,345, p = 0,793), testem (F(3,54) = 1,793, p = 0,159) oraz grupą (F(1,18) = 0,151, p = 0,702). Zatem liczba wejść do komór bocznych w grupie solnej była stabilna w czasie.
<img alt="Rysunek 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58384/58384fig2.jpg" /> 
Rysunek 2: Pamięć CPP może utrzymywać się przez co najmniej 18 dni, lecz z czasem słabnie. Utrzymanie pamięci CPP w grupie morfiny (n = 21) oraz w grupie soli fizjologicznej (n = 10) oceniano poprzez pomiar wskaźnika CPP w kilku punktach czasowych po ostatnim warunkowaniu (T1, 2 dni; T2, 10 dni oraz T3, 18 dni). Wszystkie wartości wskaźników CPP przedstawiono jako średnia ± SEM. ### oznacza p&#60;0,001, a ## oznacza p &#60; 0,01 w porównaniu z grupą soli fizjologicznej; *** oznacza p &#60; 0,001 w porównaniu z T0 w grupie morfiny. Rysunek został zmodyfikowany na podstawie pracy Sun et al., 201711. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58384/58384fig2large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Rysunek 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58384/58384fig3.jpg" /> 
Rysunek 3: Liczba wejść do bocznych komór w grupach morfiny i soli fizjologicznej. Liczbę wejść do dwóch bocznych komór w grupie morfiny (n = 21) i grupie soli fizjologicznej (n = 10) oceniano w kilku punktach czasowych po ostatnim warunkowaniu (T1, 2 dni; T2, 10 dni oraz T3, 18 dni) i porównywano z T0. Wszystkie wartości wejść przedstawiono jako średnia ± SEM. W grupie morfiny (A) liczba wejść do komory sparowanej z morfiną wzrosła bardzo istotnie od T1 do T3, podczas gdy liczba wejść do komory sparowanej z solą fizjologiczną wzrosła istotnie dopiero od T2. Testy t dla prób zależnych pomiędzy komorą sparowaną z morfiną a komorą sparowaną z solą fizjologiczną wykazały bardzo istotne wzrosty zarówno w T1, jak i w T2. W grupie soli fizjologicznej (B) nie odnotowano istotnych zmian w liczbie wejść do obu stron. Rysunek zmodyfikowano na podstawie pracy Sun et al., 201711. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58384/58384fig3large.jpg" target="_blank">Prosimy kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>

Tutaj opisany jest protokół preferencji miejsca uwarunkowanego morfiną (CPP) do pomiaru inkubacji głodu u szczurów.

Protokół warunkowej preferencji miejsca do pomiaru inkubacji łaknienia u szczurów

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...

Metoda ta może pomóc w odpowiedzi na niektóre kluczowe pytania w dziedzinie uzależnienia od narkotyków dotyczące głodu narkotykowego i inkubacji reakcji na głód. Mając tylko sześć dni warunkowania morfiną, uwarunkowana reakcja pamięci preferencji miejsca może zostać przedłużona do 18 dni w celu obserwacji zjawisk głodu w modelu szczurzym. Implikacje tego modelu warunkowania morfiny u szczurów rozciągają się w kierunku pogłębienia naszego zrozumienia mechanizmów leżących u podstaw inkubacji głodu.Przed rozpoczęciem zabiegu należy skonstruować trzykomorowy aparat do preferencji miejsca, składający się z dwóch dużych, czarnych komór bocznych o wymiarach 30 na 25 na 30 centymetrów. I jedna biała komora środkowa o wymiarach 11 na 25 na 30 centymetrów, z gładką, białą podłogą z PCV. Następnie dodaj różne wskazówki dotykowe do bocznych komór, aby przetestować początkowe preferencje szczura.W celu wstępnego kondycjonowania zwierząt należy zdjąć drzwiczki gilotyny, aby umożliwić swobodny dostęp do całego aparatu. I umieść szczura w środkowej komorze. Rejestruj aktywność zwierzęcia przez 15 minut, obliczając czas spędzony w dwóch bocznych komorach trzeciego dnia jako punkt odniesienia.W celu kondycjonowania zwierząt, rano wstrzyknąć grupie szczurów kondycjonowanej morfiną jeden mililitr na kilogram 10 miligramów na mililitr chlorowodorku morfiny IP. I z jednym mililitrem soli fizjologicznej na kilogram 10 godzin później, codziennie przez sześć dni. Umieszczając każdego szczura w odpowiedniej komorze z parą leków, niepreferowaną lub sparowaną z solą fizjologiczną, na 45 minut bezpośrednio po każdym wstrzyknięciu.W celu przeprowadzenia testów na zwierzętach kondycjonowanych morfiną, w drugim, dziesiątym i osiemnastym dniu po ostatniej sesji kondycjonowania, należy zdjąć drzwiczki gilotyny, aby umożliwić swobodny dostęp do całego aparatu. I rejestruj aktywność każdego zwierzęcia przez 15 minut po umieszczeniu w środkowej komorze w celu swobodnej eksploracji całego aparatu w stanie wolnym od morfiny. Zachowanie pamięci uwarunkowanej preferencji miejsca w grupach morfiny i soli fizjologicznej ocenia się poprzez pomiar wyniku preferencji miejsca uwarunkowanego w wielu punktach czasowych po ostatniej sesji kondycjonowania.Liczba wejść do komór bocznych jest analogiczna do liczby aktywnych odpowiedzi w paradygmacie samodzielnego podawania, odzwierciedlając wzmacniające właściwości morfiny i zwiększając liczbę wejść wskazujących na inkubację głodu. Jak pokazano, za pomocą tego protokołu można z powodzeniem ustalić preferencję miejsca uwarunkowaną morfiną. Indukowanie długotrwałej pamięci nagrody morfiny przez okres do 18 dni po ostatniej sesji kondycjonowania.Próbując wykonać tę procedurę, należy pamiętać, aby zrównoważyć sygnały dotykowe. Po tej procedurze można wykonać inne środki, takie jak przywrócenie po każdym kondycjonowaniu. Aby odpowiedzieć na dodatkowe pytania o to, czy przywrócenie w ramach inkubacji pragnienia ma podobne mechanizmy leżące u podstaw.Po przywróceniu technika ta utorowała drogę naukowcom zajmującym się dodawaniem leków do zbadania inkubacji głodu w paradygmatach preferencji miejsca uwarunkowanych przez szczury.

a-conditioned-place-preference-protocol-for-measuring-incubation

Research

JoVE Journal

Behavior

Zachowanie

Procedury operacyjnego samopodawania leków oraz uwarunkowanej preferencji miejsca (CPP) są szeroko stosowane w badaniach do modelowania różnych komponentów wzmocnienia narkotykowego, konsumpcji i uzależnienia u ludzi. W niniejszym raporcie połączyliśmy tradycyjne metody CPP i samopodawania jako nowatorskie podejście do badania wzmocnienia i uzależnienia od leków u szczurów.

Nowoczesne urządzenie i metoda wzmacniania działania leku

Reagowanie na sygnały powiązane z pokarmem lub lekiem nasila się w czasie okresu abstynencji, co może wiązać się ze zwiększoną podatnością na zachowania nawrotowe. W niniejszym materiale szczegółowo opisujemy procedurę oceny tej „inkubacji głodu” (ang. incubation of craving) u szczurów, które podawały sobie samodzielnie sacharozę.

Ogólna metoda oceny inkubacji głodu sacharozy u szczurów

Ten artykuł opisuje, jak mikrowstrzykiwać wektory wirusowe do mózgu myszy, a następnie testować w warunkowym paradygmacie preferencji miejsca, który obejmuje fazę przejęcia, wyginięcia i przywrócenia.

Stereotaktyczne mikroiniekcja wektorów wirusowych eksprymujących rekombinazę Cre w celu zbadania roli genów docelowych w preferencjach miejsca uwarunkowanego kokainą

Ten protokół ma na celu umożliwienie badaczom przeprowadzania eksperymentów mających na celu przetestowanie tych aspektów uzależnienia za pomocą testów warunkowej preferencji miejsca i uwrażliwienia lokomotorycznego.

Ocena uczulenia behawioralnego wywołanego kokainą i uwarunkowanej preferencji miejsca u myszy

Reaktywność wskazówek jest rozumiana jako wrażliwość na sygnały związane z doświadczeniami związanymi z zażywaniem narkotyków, które przyczyniają się do głodu i nawrotów u abstynentów. Reaktywność sygnału jest modelowana u szczurów poprzez pomiar orientacji uwagi na sygnały związane z narkotykami, co skutkuje zachowaniem podejścia apetytywnego w teście reaktywności sygnału po samodzielnym podaniu i wymuszonej abstynencji.

Protokół pomiaru reaktywności sygnałów w szczurzym modelu zaburzeń związanych z używaniem kokainy

Ten protokół opisuje Preferencję Miejsca Warunkowego (CPP) jako model nawrotu. Procedura ta pozwala na pomiar nawrotu u zwierząt laboratoryjnych, biorąc pod uwagę wpływ sygnałów środowiskowych związanych z narkotykami, takich jak głód i nawrót u osób uzależnionych od abstynencji, jest obecnie przedmiotem programów leczenia uzależnień.

Przywrócenie poszukiwania narkotyków u myszy przy użyciu paradygmatu warunkowej preferencji miejsca

Opisana jest procedura, która pozwala na demonstrację solidnego wspomagania poszukiwania narkotyków u szczurów z ograniczeniami żywieniowymi. Po szkoleniu w zakresie samodzielnego podawania heroiny, szczury przechodzą przez okres abstynencji w środowisku wolnym od narkotyków, podczas którego są łagodnie ograniczane w jedzeniu. Poszukiwanie narkotyków jest następnie testowane w środowisku związanym z narkotykami.

Procedura mająca na celu zbadanie wpływu długotrwałego ograniczenia pokarmowego na poszukiwanie heroiny u szczurów abstynentów

Zawartość tłuszczu w diecie wpływa zarówno na spożycie energii, jak i skład tkanki tłuszczowej u ssaków. Badając preferencje szczurów do pokarmów o wysokiej zawartości tłuszczu w serii eksperymentów z wyboru, możliwe jest przetestowanie różnic genetycznych i interwencji farmakologicznych dotyczących ich preferencji dla pokarmów o wysokiej zawartości tłuszczu.

Preferencja tłuszczowa: nowy model zachowań żywieniowych u szczurów

Opisano procedurę badania zdolności kontekstu środowiskowego związanego z alkoholem do wywoływania u szczurów wznowienia zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu.

Procedura obserwacji wywołanego kontekstem odnowienia zachowań związanych z poszukiwaniem alkoholu uwarunkowanych przez Pawłowa u szczurów

Hormony gonadalne, takie jak estrogen, modulują tworzenie pamięci w wielu eksperymentalnych paradygmatach, w tym w pamięci wygaszania strachu. Protokół ten opisuje zestaw metod badania wpływu hormonów gonad, szczególnie podczas wymierania u naturalnie zmieniających się na cyklach samic, w tym monitorowanie cyklu rujowego i egzogenne podawanie estrogenów.

Protokół badania wygaszania uwarunkowanego strachu u naturalnie jeżdżących na rowerze samic szczurów

Poznaj protokół warunkowej preferencji miejsca z morfiną do pomiaru inkubacji łaknienia u szczurów. Ta metoda pozwala badać mechanizmy uzależnienia i pamięć nagrodową w modelu zwierzęcym.

Protokół warunkowej preferencji miejsca do pomiaru inkubacji łaknienia u szczurów

Przeglądaj więcej filmów