Name: Budowa wielowarstwowego arkusza mezenchymalnych komórek macierzystych z systemem dynamicznej hodowli 3D (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 44 s
Description: Poznaj metodę budowy wielowarstwowych arkuszy mezenchymalnych komórek macierzystych z dynamicznym systemem perfuzji zapewniającym dopływ składników odżywczych. Technika ta poprawia retencję i funkcję komórek w terapii regeneracyjnej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (grant numer 31771064); Projekt Planowania Nauki i Technologii Prowincji Guangdong (numery grantów 2013B010404030, 2014A010105029 i 2016A020214012); Projekt Planowania Nauki i Technologii w Kantonie (numer grantu 201607010063); oraz Licencjacki Program Szkolenia w zakresie Innowacji i Przedsiębiorczości (numer grantu 201610559028); Narodowa Fundacja Nauki dla Młodych Naukowców Chiny (grant nr 31800819).

Wszystkie procedury eksperymentalne na komórkach macierzystych i zwierzętach zostały przeprowadzone zgodnie z etycznymi wytycznymi Krajowego Przewodnika po Opiece i Wykorzystaniu Zwierząt Laboratoryjnych i zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt Uniwersytetu Jinan (Guangzhou, Chiny).
1. Przygotowanie rusztowania DPP za pomocą metody decelularyzacji PLA214
Uwaga: Zobacz Rysunek 1A dla schematu metody decelularyzacji PLA2.
<ol>
	<li>Przygotować 100 ml 200 U/ml roztworu PLA2. Dodać 0,5 g deoksycholanu sodu i 2 ml PLA2 do 198 ml roztworu buforu węglanowego. Roztwór ten należy zużyć w ciągu 24 godzin od jego przygotowania.</li>
	<li>Pobrać świeże osierdzie świni (FPP) z rzeźni i zwrócić do laboratorium w ciągu 1 godziny 
	UWAGA: FPP należy przechowywać w temperaturze 4 °C podczas transportu. Kroki 1.2 - 1.10 należy przeprowadzać z ciągłym wytrząsaniem w łaźni wodnej sterowanej termostatem.</li>
	<li>Dokładnie przemyć FPP 200 ml roztworu buforu fosforanowego (PBS) zawierającego 1% penicyliny-streptomycyny w zlewce o pojemności 500 ml w temperaturze 10 °C przez 10 minut. Powtórzyć ten krok 2 razy.</li>
	<li>Podziel FPP na dwie warstwy i usuń tkankę tłuszczową za pomocą kleszczy i nożyczek. 
	UWAGA: Utrzymuj FPP w stanie mokrym, dodając 50 ml PBS co 20 minut podczas usuwania tkanki tłuszczowej.</li>
	<li>Uformuj FPP na2 części o wymiarach 10 x 10 cm za pomocą nożyczek. Przemyć FPP 200 ml roztworu buforu węglanowego (CBS) zawierającego 1% penicyliny-streptomycyny w zlewce o pojemności 500 ml w temperaturze 10 °C przez 10 minut. Powtórz ten krok 2 razy.</li>
	<li>Przełóż FPP do czystej wody i moczyć w temperaturze 10°C przez 12 godzin.</li>
	<li>Próbki o wymiarach 10 x 10cm2 namoczyć w 50 ml CBS zawierającym 200 U/ml PLA2 i 0,5% (m/v) roztworu deoksycholanu sodu w temperaturze 37 °C przez 6 godzin.</li>
	<li>Przemyć próbki CBS zawierającym 1% penicyliny-streptomycyny w temperaturze 10 °C przez 10 minut. Powtórzyć ten krok 2 razy.</li>
	<li>Zanurzyć każdą próbkę w 50 ml CBS zawierającym 200 U/ml PLA2 i 0,5% (w/v) roztworu deoksycholanu sodu w temperaturze 37 °C przez 2 godziny.</li>
	<li>Przemyć próbki CBS zawierającym 1% penicyliny-streptomycyny w temperaturze 10 °C przez 2 godziny. Powtórzyć ten krok co najmniej 10 razy. Umieścić próbki na płaskich płytkach i wysuszyć je do stałej masy w piecu o stałej temperaturze 55 °C. 
	UWAGA: Próbka musi być całkowicie wysuszona. Badać próbkę DPP co 10 minut i powtarzać tę czynność 3 razy lub do momentu, gdy masa przestanie się zmieniać.</li>
	<li>Uformuj każdą próbkę DPP w okrąg o średnicy 10,5 mm z trepanacją. Zapakuj każdy DPP w sterylnie zamkniętą torbę.</li>
	<li>Wysterylizować próbki DPP za pomocą promieniowania gamma (25 kGy). Próbki DPP przechowywano w temperaturze 4 °C przed użyciem. 
	UWAGA: Wszystkie próbki mogą być przechowywane przez okres do sześciu miesięcy w temperaturze 4 °C.</li>
</ol>
2. Przygotowania do budowy arkusza komórkowego
<ol>
	<li>Wszystkie narzędzia i elementy nośnika tkanek należy sterylizować w autoklawie w temperaturze 121 °C przez 30 minut, w tym probówki odśrodkowe o pojemności 1,5 ml, kleszcze, kleszcze zębate, nożyczki, czarne zasady (składnik nośnika tkankowego) i białe pierścienie napinające (składnik nośnika tkankowego).</li>
	<li>Przygotuj 20 ml wolnego od zarazków 10% roztworu sacharozy. Odważyć 2 g sacharozy i rozpuścić sacharozę w 18 ml ultraczystej wody. 10% roztwór sacharozy należy sterylizować w autoklawie w temperaturze 121 °C przez 30 minut lub przefiltrować roztwór za pomocą filtra 0,22 μm.</li>
	<li>Urządzenia systemu dynamicznej perfuzji należy sterylizować w autoklawie w temperaturze 121 °C przez 30 minut, w tym urządzenie do wymiany gazowej, szklaną butelkę o pojemności 500 ml, pojemnik do hodowli perfuzyjnej i rurki łączące.</li>
	<li>Przygotować autoklawowane narzędzia i elementy nośnika tkankowego. Umieść czarną część bazową nośnika tkankowego w naczyniu hodowlanym.</li>
	<li>Podnieś wysuszone rusztowanie DPP i umieść je na środku czarnej podstawy. Umieść biały pierścień napinający na rusztowaniu DPP i zamocuj go w nośniku tkanek. 
	UWAGA: Upewnij się, że rusztowanie jest całkowicie zamocowane w nośniku tkanek i nie ma przerwy między czarną podstawą a białym pierścieniem napinającym. Jeśli nie, oddziel nośnik tkanek i ponownie zamocuj rusztowanie.</li>
	<li>Dodać 100 μl pożywki hodowlanej na rusztowanie DPP w celu ponownego nawodnienia. 
	UWAGA: Jeśli rusztowanie nie jest dobrze zamocowane w nośniku tkankowym, pożywka hodowlana przeniknie do szalki hodowlanej.</li>
	<li>Umieścić rusztowanie w inkubatorze o temperaturze 37 °C i pozostawić do namoczenia przez 15 minut.</li>
</ol>
3. Przygotowanie komórek do budowy arkusza komórek
Uwaga: Ten protokół dotyczy hodowli komórkowej przy użyciu szalki o średnicy 100 mm. Zobacz Rysunek 1B dla schematu budowy wielowarstwowej struktury komórki.
<ol>
	<li>Izoluj BMSCs13. 
	UWAGA: Ta metoda jest przeznaczona do konstruowania wielowarstwowego arkusza komórek MSC. W tym protokole używane są szczurze BMSC. BMSC są izolowane metodą przylegania całego szpiku kostnego, a BMSC są namnażane in vitro w celu uzyskania wystarczającej ilości komórek.
	<ol>
		<li>Autoklawuj narzędzia w temperaturze 121 °C przez 30 minut, w tym kleszcze, kleszcze zębate i nożyczki. Przygotuj strzykawkę do wstrzykiwań o pojemności 2 ml i pożywkę hodowlaną BMSC (zmodyfikowana pożywka Eagle's Medium [DMEM] firmy Dulbecco, 10% płodowej surowicy bydlęcej, 1% glutaminy i 1% penicyliny-streptomycyny).</li>
		<li>Poddaj eutanazji trzytygodniowe samce szczurów Sprague-Dawley (SD) przez zwichnięcie kręgów szyjnych. Namocz zwierzę w 100 ml 75% roztworu alkoholu w zlewce na 5 minut.</li>
		<li>Wyjmij zwierzę ze zlewki i połóż je na stole operacyjnym. Naciąć skórę na grzbiecie zwierzęcia nożyczkami i kleszczami. Odizoluj skórę i tkanki mięśniowe, aby odsłonić kości udowe.</li>
		<li>Odizoluj udowo-udowe i umieść je w 30 ml PBS w probówce wirówkowej o pojemności 50 ml. Umieść dwie kości udowe w jednej rurce. Przekręć rurkę wirówkową, aby dokładnie umyć tkankę. Powtórz ten krok 2 razy.</li>
		<li>Odetnij oba końce kości udowych nożyczkami i odsłoń jamę szpiku.</li>
		<li>Odessać 2 ml pożywki hodowlanej BMSC za pomocą strzykawki do wstrzykiwań. Wprowadzić igłę do jamy szpiku kostnego i wypłukać szpik kostny pożywką hodowlaną. Wypłucz co dwie kości udowe do jednego naczynia hodowlanego o średnicy 100 mm.</li>
		<li>Na każde 100 mm naczynie hodowlane dodać 2 ml pożywki do pożywki hodowlanej. Umieścić naczynie do hodowli w inkubatorze o temperaturze 37 °C i hodowli statycznej na 72 godziny.</li>
		<li>Wyjmij naczynie hodowlane z inkubatora. Zastąp supernatant 6 ml świeżej pożywki hodowlanej.</li>
		<li>Obserwuj podstawowe BMSC pod mikroskopem. Następnie przechodź przez BMSC co 5 - 7 dni.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wyjmij komórki z inkubatora. Obserwuj komórki pod mikroskopem i wybierz odpowiednie komórki do budowy arkusza komórek. Gdy BMSC osiągną 80% - 90% konfluencji, komórki można wybrać jako komórki zasiane.</li>
	<li>Usuń pożywkę hodowlaną z naczynia hodowlanego. Delikatnie umyj komórki 2 ml ciepłego PBS. Usuń cały PBS z naczynia hodowlanego i upewnij się, że nie pozostał żaden płyn. Dodać 2 ml 0,25% trypsyny (lub innego roztworu dysocjującego) do naczynia i inkubować w temperaturze 37 °C przez 3 minuty.</li>
	<li>Zatrzymaj działanie trypsyny, dodając 2 ml pożywki hodowlanej i delikatnie umyj komórki z naczynia. Przenieść zawiesinę komórkową do nowej probówki wirówkowej o pojemności 15 ml. Odwirować komórki przy 225 x g przez 5 min.</li>
	<li>Usunąć supernatant. Ponownie zawiesić komórki w 3 ml 10% (w/v) roztworu sacharozy. 
	UWAGA: 10% (w/v) roztwór sacharozy służy do przemywania komórek w celu uzyskania jednolitej mieszaniny komórkowo-hydrożelowej w kolejnych etapach.</li>
	<li>Odessać 10 μl zawiesiny komórek i policzyć liczbę komórek za pomocą hemocytometru. Oblicz objętość potrzebną do następnego kroku. Na jeden arkusz komórek używane są trzy miliony BMSC.</li>
	<li>Wyodrębnij trzy miliony komórek i przenieś je do nowej probówki wirówkowej o pojemności 15 ml. Odwirować komórki przy 225 x g przez 5 minut.</li>
	<li>Usunąć supernatant. Ponownie zawiesić komórki w 1 ml 10% (w/v) roztworu sacharozy. Przenieść zawiesinę komórek do probówki wirówkowej o pojemności 1,5 ml. 
	UWAGA: Użycie rurki odśrodkowej o pojemności 1,5 ml jest korzystne do przygotowania mieszaniny komórkowo-hydrożelowej.</li>
	<li>Odwirować komórki przy 260 xg przez 5 minut. Całkowicie usunąć supernatant i uzyskać osad komórkowy.</li>
</ol>
4. Przygotowanie BMSC i mieszaniny peptydów hydrożelowych RAD16-I
Uwaga: Zobacz Rysunek 1B dla schematu budowy wielowarstwowej struktury komórki.
<ol>
	<li>Dodać 20 μl 10% (w/v) roztworu sacharozy do probówki odśrodkowej o pojemności 1,5 ml. Delikatnie zawiesić BMSC i uzyskać jednolitą zawiesinę. 
	UWAGA: Podczas ponownego zawieszania nie należy wytwarzać pęcherzyków powietrza.</li>
	<li>Dodać 20 μl hydrożelu peptydowego RAD16-I na wierzch zawiesiny. Delikatnie wymieszaj peptyd RAD16-I i zawiesinę komórkową za pomocą końcówki pipety. Po zmieszaniu zawiesiny komórkowej i hydrożelu delikatnie odpipetuj mieszaninę kilka razy.</li>
	<li>Wyjąć rusztowanie DPP z nośnika tkanek i delikatnie zassać pożywkę hodowlaną końcówką pipety. 
	UWAGA: Upewnij się, że rusztowanie DPP jest w pełni nawodnione przed dodaniem mieszaniny komórkowo-hydrożelowej.</li>
	<li>Odessać mieszaninę i równomiernie dodać ją do rusztowania DPP. 
	UWAGA: Całkowita objętość mieszaniny wynosiłaby około 40 - 50 μL. Zaleca się dodawanie mieszaniny po 10 μl jednorazowo od środka na zewnątrz rusztowania.</li>
	<li>Dodać 1 ml pożywki hodowlanej na dno nośnika tkankowego. Umieścić arkusz komórek w inkubatorze o temperaturze 37 °C na 5 minut.</li>
	<li>Wyjmij arkusz komórek z inkubatora. Delikatnie dodaj 4 ml pożywki hodowlanej do naczynia hodowlanego i zanurz arkusz komórek. Umieścić arkusz komórek w inkubatorze w temperaturze 37 °C na 2 godziny hodowli statycznej.</li>
</ol>
5. Hodowla in vitro wielowarstwowego arkusza komórkowego 3D przy użyciu dynamicznego systemu hodowli
UWAGA: Zobacz Rysunek 1C dla schematu dynamicznego systemu 3D.
<ol>
	<li>Przygotuj dynamiczny system perfuzyjny, w tym pompę perystaltyczną, sprzęt do wymiany gazowej, szklaną butelkę o pojemności 500 ml, pojemnik do hodowli perfuzyjnej i rurki łączące. Zmontuj dynamiczny system perfuzyjny, jak pokazano na Rysunek 2.</li>
	<li>Dodać 200 ml pożywki hodowlanej do sterylnej szklanej butelki. Włóż arkusz komórek do komory pojemnika na hodowlę. 
	UWAGA: Zwróć uwagę na kierunek górnej powierzchni arkusza komórek.</li>
	<li>Dodać 3 ml pożywki hodowlanej do pojemnika na chusteczki i zamknąć pojemnik. Umieść dynamiczny system perfuzyjny w inkubatorze i uruchom pompę. Ustawić natężenie przepływu pompy perystaltycznej na 8 ml/min. Hodować arkusz komórek w systemie dynamicznej perfuzji przez 48 godzin.</li>
</ol>
6. Uzyskiwanie wielowarstwowego arkusza komórek MSC
<ol>
	<li>Autoklawować narzędzia i elementy nośnika tkanek w temperaturze 121 °C przez 30 minut, w tym probówki odśrodkowe o pojemności 1,5 ml, kleszcze i kleszcze zębate.</li>
	<li>Wyciągnij kanał wejściowy ze szklanej butelki, aby zatrzymać dopływ pożywki hodowlanej do pojemnika. 
	UWAGA: Zatrzymaj pompę perystaltyczną, gdy pojemnik na kulturę jest pusty.</li>
	<li>Wyjmij arkusz komórek z pojemnika na hodowlę i umieść go w naczyniu hodowlanym.</li>
	<li>Użyj jednego kleszczyka, aby unieruchomić nośnik tkanki, a drugiego kleszczyka zębatego, aby oddzielić biały pierścień napinający od czarnej podstawy. Na koniec uzyskaj wielowarstwowy arkusz komórek BMSC.</li>
	<li>W celu krótkiej konserwacji każdy arkusz komórek można przenieść do probówki odśrodkowej o pojemności 1,5 ml za pomocą kleszczyków. Rusztowanie DPP powinno być przymocowane do wewnętrznej ścianki rurki odśrodkowej, a arkusz komórek powinien rozchodzić się jak najbardziej w probówce wirówkowej.</li>
	<li>Delikatnie dodaj 1 ml pożywki hodowlanej do probówki odśrodkowej, aby zanurzyć arkusz komórek. Zamknąć nakrętkę rurki odśrodkowej i przechowywać arkusz komórek w temperaturze 4 °C. 
	UWAGA: Arkusz komórek powinien zostać przeszczepiony lub przeanalizowany tak szybko, jak to możliwe. Zaleca się zużyć arkusz komórek w ciągu 4 godzin.</li>
</ol>

<ol><li>Miyahara, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monolayered+mesenchymal+stem+cells+repair+scarred+myocardium+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Monolayered mesenchymal stem cells repair scarred myocardium after myocardial infarction.</a> Nature Medicine. 12 (4), 459-465 (2006).</li>
<li>Narita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+cell-sheet+technique+eliminates+arrhythmogenicity+of+skeletal+myoblast-based+therapy+to+the+heart+with+enhanced+therapeutic+effects%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">The use of cell-sheet technique eliminates arrhythmogenicity of skeletal myoblast-based therapy to the heart with enhanced therapeutic effects.</a> International Journal of Cardiology. 168 (1), 261-269 (2013).</li>
<li>Narita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Use+of+Scaffold-free+Cell+Sheet+Technique+to+Refine+Mesenchymal+Stromal+Cell-based+Therapy+for+Heart+Failure%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">The Use of Scaffold-free Cell Sheet Technique to Refine Mesenchymal Stromal Cell-based Therapy for Heart Failure.</a> Molecular Therapy. 21 (4), 860-867 (2013).</li>
<li>Matsuo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficiently+Piled-Up+Cardiac+Tissue-Like+Sheets+With+Pluripotent+Stem+Cell-Derived+Cells+Robustly+Promotes+Cell+Engraftment+and+Ameliorates+Cardiac+Dysfunction+After+Myocardial+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Efficiently Piled-Up Cardiac Tissue-Like Sheets With Pluripotent Stem Cell-Derived Cells Robustly Promotes Cell Engraftment and Ameliorates Cardiac Dysfunction After Myocardial Infarction.</a> Circulation. 128 (22), (2013).</li>
<li>Alshammary, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+cardiac+stem+cell+sheet+transplantation+on+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery+Today%22%5BJournal%5D)">Impact of cardiac stem cell sheet transplantation on myocardial infarction.</a> Surgery Today. 43 (9), 970-976 (2013).</li>
<li>Chen, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+a+novel+PLGA+fiber%2Fcollagen+composite+web+as+a+scaffold+for+engineering+of+articular+cartilage+tissue+with+adjustable+thickness%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research+Part+A%22%5BJournal%5D)">The use of a novel PLGA fiber/collagen composite web as a scaffold for engineering of articular cartilage tissue with adjustable thickness.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 67a (4), 1170-1180 (2003).</li>
<li>Cerqueira, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Adipose+Stem+Cells+Cell+Sheet+Constructs+Impact+Epidermal+Morphogenesis+in+Full-Thickness+Excisional+Wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Human Adipose Stem Cells Cell Sheet Constructs Impact Epidermal Morphogenesis in Full-Thickness Excisional Wounds.</a> Biomacromolecules. 14 (11), 3997-4008 (2013).</li>
<li>Sasagawa, T., Shimizu, T., Sekiya, S., Yamato, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+angiogenic+potential+between+prevascular+and+non-prevascular+layered+adipose-derived+stem+cell-sheets+in+early+post-transplanted+period%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research+Part+A%22%5BJournal%5D)">Comparison of angiogenic potential between prevascular and non-prevascular layered adipose-derived stem cell-sheets in early post-transplanted period.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 102 (2), 358-365 (2014).</li>
<li>Ishii, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multilayered+adipose-derived+regenerative+cell+sheets+created+by+a+novel+magnetite+tissue+engineering+method+for+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Multilayered adipose-derived regenerative cell sheets created by a novel magnetite tissue engineering method for myocardial infarction.</a> International Journal of Cardiology. 175 (3), 545-553 (2014).</li>
<li>Godier-Furnemont, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composite+scaffold+provides+a+cell+delivery+platform+for+cardiovascular+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Composite scaffold provides a cell delivery platform for cardiovascular repair.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (19), 7974-7979 (2011).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrospun+nanofibrous+sheets+of+collagen%2Felastin%2Fpolycaprolactone+improve+cardiac+repair+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Electrospun nanofibrous sheets of collagen/elastin/polycaprolactone improve cardiac repair after myocardial infarction.</a> American Journal of Translational Research. 8 (4), 1678-1694 (2016).</li>
<li>Arana, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epicardial+delivery+of+collagen+patches+with+adipose-derived+stem+cells+in+rat+and+minipig+models+of+chronic+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Epicardial delivery of collagen patches with adipose-derived stem cells in rat and minipig models of chronic myocardial infarction.</a> Biomaterials. 35 (1), 143-151 (2014).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+high+bioactivity+multilayered+bone-marrow+mesenchymal+stem+cell+sheets+for+myocardial+infarction+using+a+3D-dynamic+system%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Preparation of high bioactivity multilayered bone-marrow mesenchymal stem cell sheets for myocardial infarction using a 3D-dynamic system.</a> Acta Biomaterialia. 72, 182-195 (2018).</li>
<li>Wu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+phospholipase+A%282%29+to+prepare+acellular+porcine+corneal+stroma+as+a+tissue+engineering+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The use of phospholipase A(2) to prepare acellular porcine corneal stroma as a tissue engineering scaffold.</a> Biomaterials. 30 (21), 3513-3522 (2009).</li>
<li>Degano, I. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+self-assembling+peptide+nanofiber+scaffolds+on+mouse+embryonic+fibroblast+implantation+and+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The effect of self-assembling peptide nanofiber scaffolds on mouse embryonic fibroblast implantation and proliferation.</a> Biomaterials. 30 (6), 1156-1165 (2009).</li>
<li>Lampe, K. J., Heilshorn, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Building+stem+cell+niches+from+the+molecule+up+through+engineered+peptide+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Building stem cell niches from the molecule up through engineered peptide materials.</a> Neuroscience Letters. 519 (2), 138-146 (2012).</li>
<li>Cui, X. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+Mesenchymal+Stem+Cells+with+Self-Assembling+Polypeptide+Scaffolds+Is+Conducive+to+Treating+Myocardial+Infarction+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Tohoku+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Transplantation of Mesenchymal Stem Cells with Self-Assembling Polypeptide Scaffolds Is Conducive to Treating Myocardial Infarction in Rats.</a> Tohoku Journal of Experimental Medicine. 222 (4), 281-289 (2010).</li>
<li>Jun, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatially+Assembled+Bilayer+Cell+Sheets+of+Stem+Cells+and+Endothelial+Cells+Using+Thermosensitive+Hydrogels+for+Therapeutic+Angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Healthcare+Materials%22%5BJournal%5D)">Spatially Assembled Bilayer Cell Sheets of Stem Cells and Endothelial Cells Using Thermosensitive Hydrogels for Therapeutic Angiogenesis.</a> Advanced Healthcare Materials. 6 (9), (2017).</li>
<li>Chen, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porous+tissue+grafts+sandwiched+with+multilayered+mesenchymal+stromal+cell+sheets+induce+tissue+regeneration+for+cardiac+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Porous tissue grafts sandwiched with multilayered mesenchymal stromal cell sheets induce tissue regeneration for cardiac repair.</a> Cardiovascular Research. 80 (1), 88-95 (2008).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Niniejszy protokół informuje o skutecznej metodzie konstruowania wielowarstwowego arkusza MSC. Ten arkusz komórek wykazuje optymalną wytrzymałość mechaniczną, wysoką gęstość wysiewu komórek i korzystną bioaktywność komórek macierzystych. Na przykładzie BMSC struktura komórki 3D jest szybko konstruowana za pomocą hydrożelu peptydowego RAD16-I. Po wyhodowaniu w systemie dynamicznej perfuzji, wielowarstwowy arkusz BMSC zostaje pomyślnie uzyskany, a BMSC utrzymują wysoką ekspresję markerów komórek macierzystych.
<p class...

Terapia komórkami macierzystymi została uznana za skuteczną metodę leczenia wielu chorób; jednak niska retencja komórek i słaba przeżywalność w strefie docelowej pozostają krytycznymi problemami po tradycyjnym wstrzyknięciu komórek macierzystych. Aby rozwiązać ten problem, naukowcy zajmujący się inżynierią tkankową opracowali technikę arkusza komórkowego. Jednowarstwowy arkusz komórek z nienaruszoną macierzą zewnątrzkomórkową został najpierw przygotowany przy użyciu naczynia do hodowli temperaturowo-reakcji1, a jego dalsze badania wykazały znaczącą poprawę retencji komórek macierzystych i przeżywalności w obszarze zawału2,3. Wśród metod, konstruowanie wielowarstwowego arkusza komórkowego zostało zgłoszone jako skuteczna strategia poprawy przeżywalności komórek i efektu terapeutycznego arkusza komórkowego3,4. Od tego czasu naukowcy pracowali nad opracowaniem różnych metod budowy arkuszy komórkowych w celu zwiększenia liczby komórek, właściwości komórek macierzystych i właściwości mechanicznych arkuszy komórek. Do tej pory skonstruowano i przebadano pewne typy arkuszy komórkowych w leczeniu zawału mięśnia sercowego5, chrząstki6 i skóry wound7.
Bioaktywność komórek macierzystych przed przeszczepem wykazywała pojawiający się wpływ na regenerację uszkodzonych tkanek, a różne strategie budowy arkuszy komórkowych mają różny wpływ na komórki macierzyste. Z jednej strony, zlewające się arkusze komórek składały się tylko z komórek macierzystych o dużej gęstości, a naturalne matryce zewnątrzkomórkowe można było uzyskać, układając w stosy jednowarstwowe arkusze komórek8 lub stosując techniki inżynierii tkanek magnetycznych9. Z drugiej strony, naukowcy opracowali różne rusztowania, aby zapewnić odpowiednią wytrzymałość mechaniczną i wspomóc wzrost komórek10,11,12, co pozwoliło na niską gęstość wysiewu komórek macierzystych, aby zapewnić zaopatrzenie w składniki odżywcze. Jednak pomimo tych podejść, niskie efektywne zaopatrzenie w składniki odżywcze w wielowarstwowej strukturze arkusza komórkowego pozostaje poważnym problemem podczas budowy in vitro. Dlatego pilnie potrzebny jest wydajny i wykonalny system budowy arkuszy komórek.
Ten protokół opisuje kroki do przygotowania wielowarstwowego arkusza komórek mezenchymalnych komórek macierzystych (MSC). W tym systemie konstrukcyjnym wytrzymałość mechaniczna arkusza ogniw jest zapewniona przez DPP. W oparciu o to rusztowanie, strukturę komórkową 3D można szybko zbudować za pomocą hydrożelu peptydowego RAD16-I, a dynamiczny system perfuzyjny jest używany do hodowli wielowarstwowego arkusza komórkowego, w celu ustabilizowania struktury arkusza komórkowego 3D i zapewnienia wystarczającego zaopatrzenia komórek w składniki odżywcze. Korzystając z tego systemu, z powodzeniem przygotowano wielowarstwowy arkusz BMSC, który wykazał optymalny efekt terapeutyczny na model zawału mięśnia sercowego u szczurów13.

<table><tbody><tr><td>Fosfolipaza A2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6534</td><td></td></tr><tr><td>Deoksycholan sodu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6750-100G</td><td></td></tr><tr><td>Bufor fosforanowy</td><td>Gibco BRL</td><td>89033</td><td></td></tr><tr><td>Penicylina streptomycyna / amfoterycyna&nbsp;</td><td>Gibco BRL</td><td>15640055</td><td></td></tr><tr><td>Bufor wodorowęglan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3041</td><td></td></tr><tr><td>Koncentrator stołowy</td><td>Changzhou Aohua Instrument Co.</td><td></td><td></td>KT20183</tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td><td>Corning Cellgro</td><td>10-014-CVR</td><td></td></tr><tr><td>Południowoamerykańska płodowa surowica bydlęca&nbsp;</td><td>Gibco BRL</td><td>10270-106/P30-3302</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamina</td><td>Corning Cellgro</td><td>25-005-CI</td><td></td></tr><tr><td>0,25% trypsyny/2,21 mM EDTA</td><td>Corning Cellgro</td><td>25-053-CI</td><td></td></tr><tr><td>Szafa bezpieczeństwa biologicznego</td><td>Esco,Singapur</td><td>AC2-2S1</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator o stałej temperaturze&nbsp;</td><td>Esco,Singapur</td><td>CLS-170B-8</td><td></td></tr><tr><td>Probówka wirówkowa&nbsp;</td><td>Corning</td><td>430790</td><td></td></tr><tr><td>Rura EP</td><td>Axygen</td><td>31617934</td><td></td></tr><tr><td>Maszyna odśrodkowa</td><td>TOMOS</td><td>1-16R&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sacharoza</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9378-500G</td><td></td></tr><tr><td>Pura Matrix&nbsp;</td><td>BD</td><td>354250</td><td></td></tr><tr><td>Dynamiczny system hodowli perfuzyjnej</td><td>Minucells i Minutissue</td><td>D-93077</td><td></td></tr><tr><td>Pompa perystaltyczna</td><td>Ismatec</td><td>IPC N8</td><td></td></tr><tr><td>Rurka pompy</td><td>Ismatec</td><td>Nr.1306</td><td></td></tr><tr><td>MINUSHEET 1300&nbsp;</td>Elementy nośnika tkanek <td>z Ratyzbony</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr>System dynamicznej <td>perfuzji MINUSHEET</td><td>Regensburg</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>MINUSHEET 0006</td><td>Urządzenia do wymiany gazowej</td> <td>w Ratyzbonie</td><td></td>&nbsp;</tr><tr><td>MINUSHEET 0002</td><td>Regensburg</td><td></td><td>Butelka szklana 500 ml&nbsp;</td></tr><tr><td>MINUSHEET 1301</td><td></td><td></td><td>pojemnik do hodowli perfuzyjnej&nbsp;</td></tr></tbody></table>

budowa wielowarstwowego arkusza mezenchymalnych komórek macierzystych z systemem dynamicznej hodowli 3d

Construction of a Multilayered Mesenchymal Stem Cell Sheet with a 3D Dynamic Culture System

Terapia komórkami macierzystymi ma obiecującą przyszłość w regeneracji uszkodzonych organów i tkanek, a technika arkuszy komórkowych została opracowana w celu poprawy niskiej retencji komórek i słabej przeżywalności w strefie docelowej. Jednak podczas procesu budowy in vitro pilnie potrzebne jest rozwiązanie pozwalające utrzymać bioaktywność komórek macierzystych i zwiększyć ich ilość w arkuszu komórek. W tym przypadku protokół ten przedstawia metodę konstruowania wielowarstwowego arkusza komórek o korzystnej bioaktywności komórek macierzystych i optymalnej operatywności. Zdecelularyzowana osierdzie świni (DPP) jest wytwarzana metodą decelularyzacji fosfolipazy A2 (PLA2) jako rusztowanie arkusza komórkowego, a mezenchymalne komórki macierzyste szpiku kostnego szczura (BMSC) są izolowane i namnażane jako komórki nasienne. Tymczasowa wielowarstwowa struktura arkusza komórkowego jest zbudowana przy użyciu hydrożelu peptydowego RAD16-I. Na koniec arkusz komórek jest hodowany za pomocą dynamicznego systemu perfuzyjnego w celu ustabilizowania struktury trójwymiarowej (3D), a arkusz komórek można uzyskać po 48-godzinnej hodowli in vitro. Protokół ten zapewnia wydajną i wykonalną metodę konstruowania wielowarstwowego arkusza komórek macierzystych, a arkusz komórek może zostać opracowany jako korzystny produkt terapii komórkami macierzystymi w przyszłości.

Schemat konstrukcji wielowarstwowego arkusza komórek macierzystych przedstawiono na Rysunku 1. Pierwszym krokiem jest przygotowanie rusztowania z arkusza komórkowego metodą decelularyzacji PLA2. Na bazie rusztowania tworzona jest tymczasowa struktura komórkowa 3D poprzez zmieszanie komórek macierzystych z hydrożelem peptydowym RAD16-1. Aby uzyskać wielowarstwowy arkusz komórkowy o korzystnej bioaktywności komórek macierzystych i optymalnej wytrzyma...

Ten artykuł dostarcza efektywnej i wykonalnej metody tworzenia wielowarstwowych arkuszy komórek macierzystych o korzystnych właściwościach komórek macierzystych.

Budowa wielowarstwowego arkusza mezenchymalnych komórek macierzystych z systemem dynamicznej hodowli 3D

Stem cell therapy shows a promising future in regenerating injured organ and tissues, and the cell sheet technique has been developed to improve the low ...

Terapia komórkami macierzystymi jest powszechnie opisywana jako obiecująca metoda leczenia wielu chorób. Techniki arkuszy komórkowych zostały opracowane w celu poprawy retencji komórek i przeżywalności w obrębie celów. Podczas budowy arkuszy komórkowych niewystarczające zaopatrzenie w składniki odżywcze pozostaje kluczowym problemem utraty funkcji komórek macierzystych i jest niezadowalającą właściwością komórek macierzystych, która ostatecznie wpłynęłaby na efekty terapeutyczne in vivo.Naszym celem, aby przygotować dostępny wielowarstwowy arkusz komórek macierzystych, nasz zespół opracował komórkowe rusztowanie o rozmiarach biegunów, osierdzia i arkusza komórkowego. Opierając się na rusztowaniu, wielowarstwowy starter komórek zostanie szybko zbudowany z wodoru bez apeptydu, a system perfuzji dynamicznej jest używany w celu zapewnienia zaopatrzenia komórek macierzystych w składniki odżywcze in vitro. Wyjmij wysuszone rusztowanie DBP i umieść je na środku czarnej podstawy.Umieść biały pierścień napinający na rusztowaniu DBP i przymocuj go do nośnika tkankowego. Upewnij się, że rusztowanie DBP jest całkowicie zamocowane w nośniku tkankowym. Dodaj 100 mikrolitrów pożywek hodowlanych na rusztowaniu DBP.Umieść rusztowanie w inkubatorze o temperaturze 37 stopni Celsjusza i pozwól mu moczyć się przez 15 minut. Wyjmij komórki z inkubatora, wyjmij pożywki hodowlane z naczynia hodowlanego, delikatnie umyj komórki dwoma mililitrami ciepłego PBS. Usuń cały PBS z naczynia hodowlanego i upewnij się, że nie pozostał żaden płyn.Dodaj dwa mililitry do 1,25% roztworu trypsyny do naczynia i inkubuj komórki przez trzy minuty. Zatrzymaj działanie trypsyny, dodając dwa mililitry pożywki hodowlanej. Delikatnie umyj komórki z naczynia.Przenieś zawiesiny komórek do nowej 15-mililitrowej rurki odśrodkowej. Odwiruj komórki pod 220-krotnością grawitacji przez pięć minut i uzyskaj osady komórkowe. Usuń supernatant i zetrzyj osad komórkowy.Ponownie zawiesić komórki za pomocą trzech mililitrów 10% roztworu sacharozy. Odessaj zawiesinę komórkową o pojemności 10 mikrolitrów, a numer komórki zawartości odczytuje hemocytometr, wyodrębnij trzy miliony komórek i przenieś do nowej 1,5-mililitrowej rurki odśrodkowej. Odwirować komórki w pierwiastku 220 razy kwadratowym przez pięć minut, całkowicie usunąć supernatanty i uzyskać osad komórek.Przygotuj 20 mikrolitrów 10% roztworu sacharozy. Delikatnie ponownie zawiesić komórki i uzyskać jednolitą zawiesinę. Dodaj 20 mikrolitrów peptydowego hydrożelu na górze zawiesiny, delikatnie wymieszaj peptydowy hydrożel i zawiesinę komórek z T, wyjmij rusztowanie DBP, pozostawiając nośnik tkankowy, a następnie delikatnie odessaj medianę kamienia za pomocą T. Odessać mieszaninę mieszaniny i równomiernie dodać do rusztowania DBP.Dodaj jeden mililitr edetynianu wapnia na dno nośnika tkankowego. Delikatnie dodaj cztery mililitry pożywki hodowlanej do naczynia hodowlanego, a następnie wyjdź z arkusza komórek. Umieść komórki w inkubatorze na dwie godziny, pozwól im się wyhodować.System dynamicznej perfuzji składa się z pojemnika do hodowli perfuzyjnej, rekulacji wymieniającej gaz i szklanej butelki. Zespoły są dynamicznymi systemami perfuzyjnymi, jak pokazano na rysunku. Dodaj dwie hydromililitry mediany hodowli do szklanej butelki.Włóż arkusz komórek do komory pojemnika do hodowli, dodaj trzy mililitry mediany hodowli do pojemnika, umieść dynamiczne systemy perfuzyjne w inkubatorach i rozpocznij pompowanie. Otwórz pojemnik na kulturę w leżącym bipozytywie. Wyjmij arkusz komórek z pojemnika na kulturę i umieść go w naczyniu hodowlanym.Użyj jednego kleszczyka, aby unieruchomić nośnik tkanki i użyj kolejnych dwóch kleszczy, aby oddzielić biały pierścień napinający od czarnej podstawy. Na koniec uzyskaj wielowarstwowy arkusz komórek. Rusztowanie DBP jest przezroczyste.Odsprzedaż SEM pokazuje, że uczelnie przejęte, a komponenty są całkowicie zarezerwowane. Arkusze komórek można uzyskać i przytrzymać za pomocą kleszczy w celu krótkiej konserwacji. Te arkusze komórek można przenieść do cylindrycznej rurki o średnicy 1,5 mililitra.Jako model, na przykład, zaczynając od wykazania w komórkach BMFC, wysoce dodatniego markera komórek macierzystych CD 9O i CD 29. Po zbudowaniu ogniwa, BMFC opuszczając arkusz ogniw, pozostaje wysoki poziom rozszerzalności CD 90 i CD 29. Skonstruowanie wielowarstwowej struktury komórkowej jest krytycznym krokiem protokołu.Czas patelni wymaga czterech hydrożeli, gdy wartość pH zmienia się z SA na neutralną, dlatego ważne jest, aby umyć komórkę roztworem sacharozy, aby usunąć jony powierzchniowe. Również stosunek objętościowy zawiesiny komórkowej i pantihydrożelu nie jest dobrym przyjacielem do budowy tymczasowej struktury wielowarstwowej. Po utworzeniu struktury komórek macierzystych 3D zobaczysz, że dynamiczny system perfuzji jest ważny dla stabilizacji wielowarstwowej struktury, a także utrzymania żywotności komórek macierzystych.Dynamiczna infiltracja mediany hodowli może ułatwić komórkom macierzystym namnażanie się i ekstrapolację kontekstu komórkowego w strukturze wielowarstwowej, a termometry do hodowli dynamicznych powinny być dostosowane do różnych typów komórek macierzystych.

construction-multilayered-mesenchymal-stem-cell-sheet-with-3d-dynamic

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioinżynieria

W niniejszym protokole prezentujemy proces wytwarzania macierzy mikroaktuatorów z pionowo przesuniętymi słupkami, na której opiera się ta technologia, oraz sposób, w jaki technologia bazowa ta może zostać zmodyfikowana w celu prowadzenia wysokoprzepustowych dynamicznych mechanicznie hodweli komórkowych w dwu- i trójwymiarowych paradygmatach hodowli.

Mikrofabrykowane platformy do mechanicznie dynamicznej hodowli komórek

Ten film pokazuje rozwój i różnicowanie ludzkich nerwowych komórek macierzystych w trójwymiarowym rusztowaniu. Powłoka lamininowa na rusztowaniu sprzyja przyczepianiu się komórek, podczas gdy pożywka nerwowa wolna od czynnika wzrostu indukuje różnicowanie komórek w neuronalne komórki progenitorowe, które rozszerzają swoje procesy w porowatej architekturze w wielu kierunkach, tworząc trójwymiarową...

Różnicowanie ludzkich neuronalnych komórek macierzystych w kulturę 3D za pomocą porowatego rusztowania

Aby stworzyć wysoce zorganizowane struktury złożonej tkanki, należy złożyć wiele typów materiałów i komórek w zintegrowany kompozyt.  Ten kombinatoryczny projekt obejmuje warstwowe arkusze komórek specyficzne dla narządów z dwoma odrębnymi materiałami pochodzenia biologicznego, zawierającymi silną włóknistą podstawę macierzy oraz komórki śródbłonka w celu usprawnienia tworzenia nowych naczyń.

Inżynieria tkankowa: budowa wielokomórkowego rusztowania 3D do dostarczania warstwowych arkuszy komórkowych

Opisujemy wytwarzanie arkuszy hydrożelowych z mikrowzorzystymi elementami za pomocą prostego procesu, który może być składany i manipulowany w formie wolnostojącej. Korzystając z tych modułowych arkuszy hydrożelowych, można wygenerować prosty system hodowli komórkowych 3D w skali makro z kontrolowanym mikrośrodowiskiem komórkowym.

Budowa modułowych arkuszy hydrożelowych dla mikrowzorzystej architektury komórkowej 3D w skali makro

Inżynieria i analiza tkanek nośnych z heterogenicznymi populacjami komórek nadal stanowią wyzwanie. W tym miejscu opisujemy metodę tworzenia dwuwarstwowych krążków hydrożelu alginianowego jako platformy do wspólnej hodowli różnych populacji komórek w ramach jednego konstruktu.

Warstwowe konstrukty alginianowe: platforma do wspólnej hodowli heterogenicznych populacji komórek

Chondrogeneza z komórek macierzystych wymaga precyzyjnego dostrojenia warunków hodowli. W tym miejscu przedstawiamy magnetyczne podejście do kondensacji komórek, które jest niezbędnym krokiem do zainicjowania chondrogenezy. Ponadto wykazaliśmy, że dynamiczne dojrzewanie w bioreaktorze stosuje mechaniczną stymulację konstruktów komórkowych i zwiększa produkcję chrzęstnej macierzy zewnątrzkomórkowej.

Agregacja magnetycznych komórek macierzystych 3D i dojrzewanie bioreaktora w celu regeneracji chrząstki

Tutaj prezentujemy protokół uzyskiwania systemów hodowli 3D w samoorganizujących się rusztowaniach peptydowych, aby promować różnicowanie odróżnicowanych ludzkich chondrocytów stawowych w tkankę podobną do chrząstki.

Hodowla komórek ssaków w trójwymiarowych rusztowaniach peptydowych

Opisujemy metodę konstruowania urządzeń do hodowli 3D i eksperymentowania z komórkami i organoidami wielokomórkowymi. Urządzenie to umożliwia analizę odpowiedzi komórkowych na sygnały rozpuszczalne w mikrośrodowiskach 3D ze zdefiniowanymi gradientami chemoatraktantu. Organoidy są lepsze niż pojedyncze komórki w wykrywaniu słabych hałaśliwych sygnałów.

Analiza 3D wielokomórkowych odpowiedzi na gradienty chemoatraktantu

Tutaj demonstrujemy trzyetapowy model organoidów (dwuwymiarowa ekspansja [2D], stymulacja 2D, trójwymiarowe dojrzewanie [3D]), oferujący obiecujące narzędzie do podstawowych badań nad ścięgnami i potencjalną metodę inżynierii tkanek ścięgien bez rusztowań.

Demonstracja samoorganizującej się hodowli arkuszy komórkowych i ręcznego generowania organoidu 3D przypominającego ścięgno/więzadło przy użyciu ludzkich fibroblastów skórnych

Tutaj pokazujemy, jak komórki nabłonkowe hodowane z fibroblastami w dwuwarstwowym systemie opartym na błonie nanowłóknistej mogą stabilnie przylegać do błony i rosnąć na niej.

Stworzenie trójwymiarowego modułu kokultury komórek nabłonkowych z wykorzystaniem błon nanowłóknistych

Poznaj metodę budowy wielowarstwowych arkuszy mezenchymalnych komórek macierzystych z dynamicznym systemem perfuzji zapewniającym dopływ składników odżywczych. Technika ta poprawia retencję i funkcję komórek w terapii regeneracyjnej.

Budowa wielowarstwowego arkusza mezenchymalnych komórek macierzystych z systemem dynamicznej hodowli 3D

Przeglądaj więcej filmów