Wykorzystanie systemów robotycznych do przetwarzania i osadzania próbek myszy okrężnicy do analiz histologicznych

Ten zautomatyzowany protokół umożliwia przygotowanie histopatologiczne tkanek mysich za pomocą systemów robotycznych rutynowo stosowanych do przetwarzania i osadzania próbek ludzkich, co znacznie zwiększa jakość próbek. Głównymi zaletami tej techniki jest to, że zmniejsza liczbę zmiennych metodologicznych i poprawia standaryzację kroków proceduralnych. Procedurę zademonstruje Francesca Boggio.

Francesca Boggio jest patologiem pracującym w moim laboratorium. Zacznij od użycia małej pęsety, aby przenieść utrwalone próbki tkanki mysiej okrężnicy z neutralnej buforowanej formaliny na płytkę roboczą do cięcia na szalce Petriego. Użyj sterylnego skalpela, aby pociąć okrężnicę na fragmenty o długości od 0,2 do 0,3 centymetra, a następnie za pomocą pęsety umieść jeden segment w każdej z trzech nieprzylegających do siebie plastikowych końcówek zorientowanej kasety z parafiną.

Ostrożnie popchnij cztery krawędzie, aby zamknąć kasetę i włóż siatkę do plastikowej ramy nośnej. Następnie oznacz ramę nośną, aby zidentyfikować próbkę i przenieś kasetę do siatki. Na godzinę przed przetwarzaniem obróć automatyczny procesor.

Gdy przyrząd wskaże, że parafina się stopiła, ręcznie włóż metalowy kosz do automatycznego procesora. Po włożeniu wszystkich kaset zamknij kosz i otwórz pokrywę retorty. Włóż kosz do dedykowanej obudowy procesora i zamknij pokrywę retorty.

Za pomocą ekranu dotykowego na komputerze przyrządu zdefiniuj protokół roboczy, wybierając sekwencję roztworów, czas i temperaturę, które mają być wdrożone zgodnie ze schematem podanym w tabeli. Kliknij w ikonę dedykowanego komputera, aby przypisać protokół do retorty zawierającej koszyk kasety, a następnie kliknij przycisk start. Gdy przyrząd potwierdzi koniec protokołu dedykowaną ikoną i sygnałem alarmowym, otwórz pokrywę retorty i wyjmij kosz z procesora.

Na godzinę przed zatopieniem tkanki włącz automatyczną zatapiaczkę i poczekaj, aż parafina całkowicie się rozpuści, zgodnie ze wskazaniami termometru do kąpieli parafinowej na urządzeniu. Ręcznie przenieś do 32 przetworzonych kaset z kosza procesora do stojaka do zatapiania i otwórz główną pokrywę zatapiacza. Użyj ekranu dotykowego, aby zasygnalizować systemowi robota, że stojak jest wkładany i otwórz pokrywę obudowy wlotu.

Włóż do czterech stojaków do obudowy wlotu i zamknij pokrywę obudowy wlotu. Następnie użyj ekranu dotykowego, aby rozpocząć procedurę osadzania, jak wskazano w tabeli. Gdy przyrząd potwierdzi koniec protokołu za pomocą dedykowanej ikony, wyjmij stojak wylotowy i zamknij główną pokrywę osadzacza.

Następnie przenieś osadzone bloki z regału do pudełka do przechowywania. Skracanie jelita grubego i ekspresja genów prozapalnych w okrężnicy są szeroko stosowanymi parametrami do oceny obecności siarczanu sodu dekstranu lub stanu zapalnego wywołanego przez DSS. Naciekanie komórek zapalnych do blaszki właściwej jelita jest również znacznie wzmocnione przez leczenie DSS.

Barwienie H&E nieleczonych próbek przetworzonych przez automatyzację, jak wykazano, ujawnia mniej naciekających komórek zapalnych, zmian nabłonkowych i zmian w architekturze błony śluzowej w porównaniu z próbkami od zwierząt leczonych DSS. Jakość przygotowania i zatapiania tkanek mysich wykonywanych przez zautomatyzowane instrumenty może być dodatkowo potwierdzona przez barwienie immunohistochemiczne dla CD20 i barwienie trichromowe Mallory'ego. Warto zauważyć, że zautomatyzowane przetwarzanie próbek konsekwentnie pozwala na ocenę większej części parametrów histologicznych niż w przypadku próbek przetwarzanych metodą ręczną.

Należy pamiętać, aby prawidłowo włożyć tkankę do siatki, aby poczekać, aż automatyczny procesor będzie gotowy i poczekać, aż parafina całkowicie się rozpuści. Metoda ta może być stosowana do przeprowadzania analizy histologicznej dowolnej tkanki mysjej, z jakością ludzkich próbek histologicznych, które zostaną wykorzystane w mysich modelach patologów człowieka. Technika ta okazała się już sukcesem w badaniu zapalenia tkanek zapalnych i będzie przydatna do badania modeli mysiego raka jelita grubego.

Ponieważ niektóre odczynniki używane w tym protokole są niebezpieczne, należy pamiętać, aby podczas wykonywania tej procedury zawsze nosić rękawice ochronne, okulary ochronne i fartuch laboratoryjny.