Name: Ekstrakcja i analiza tajwańskiego zielonego propolisu (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: Poznaj protokół ekstrakcji tajwańskiego zielonego propolisu etanolem i analizę jego właściwości przeciwbakteryjnych. Ta niezawodna metoda umożliwia dokładną ocenę jakości naturalnego produktu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ten rękopis został zredagowany przez Wallace Academic Editing.

1. Przygotowanie związków ekstrahowanych etanolem
<ol>
	<li>Zważ 10 g mrożonego tajwańskiego zielonego propolisu, który został zebrany z uli na Tajwanie od maja do lipca, i zmiel go za pomocą młynka do przypraw. Upewnij się, że całe kawałki tajwańskiego zielonego propolisu są zmielone na drobny proszek bez dużych cząstek.</li>
	<li>Dodaj 100 ml etanolu o różnych stężeniach (60%, 70%, 80%, 95% i 99,5%) i wodę do oddzielnych kolb i wymieszaj każde stężenie z 10 g zmielonego propolisu.</li>
	<li>Inkubować w temperaturze 25 °C i wytrząsać kolbę z prędkością 250 obr./min przez 48 godzin.</li>
	<li>Przefiltrować ekstrakty etanolu przez bibułę filtracyjną o porach o wielkości porów 25 μm.</li>
	<li>Rozpuścić filtraty do ich pierwotnej objętości (100 ml) w 95% etanolu przy użyciu kolby miarowej.</li>
	<li>Przechowywać ekstrakty etanolu w temperaturze -20 °C. 
	UWAGA: W tym miejscu protokół można wstrzymać.</li>
</ol>
2. Przygotowanie ekstraktów etanolowych do HPLC
<ol>
	<li>Zagęścić 10 ml ekstraktów etanolowych przez odparowanie próżniowe w temperaturze 40 °C przez 15 minut.</li>
	<li>Suchą masę piec w temperaturze 45 °C przez 24 godziny.</li>
	<li>Rozpuść suchą masę w 10 ml 95% etanolu.</li>
	<li>Przefiltrować 1 ml ekstraktów etanolowych za pomocą sterylnego filtra strzykawkowego o wielkości porów 0,45 μm.</li>
	<li>Ponownie przefiltruj ekstrakty etanolowe za pomocą sterylnego filtra strzykawkowego o wielkości porów 0,22 μm. Przesącz jest zbierany i może być bezpośrednio analizowany za pomocą HPLC.</li>
</ol>
3. Analiza zawartości Propolin za pomocą HPLC
<ol>
	<li>Wyznaczanie krzywych standardowych propoliny
	<ol>
		<li>Przygotować 1 l fazy ruchomej roztworu metanol:woda o proporcji 88,8:11,2 (v/v).</li>
		<li>Przygotować seryjne rozcieńczenia standardowych stężeń propoliny (C, D, F i G) (odpowiednio 15,625 mg/ml, 31,25 mg/mL, 62,5 mg/ml i 125 mg/ml) przy użyciu roztworu fazy ruchomej jako rozpuszczalnika.</li>
		<li>Wstrzyknąć 20 μl wzorcowych stężeń propoliny do kolumny z odwróconymi fazami, kolejno od niskiego stężenia do wysokiego stężenia.</li>
		<li>Ustawić kolumnę HPLC na 30 °C i natężenie przepływu na 1 ml/min.</li>
		<li>Ustaw długość fali detektora UV na 280 nm, a czas rejestratora na 20 min.</li>
		<li>Przeanalizuj standardy co najmniej 3 razy.</li>
		<li>Wykreśl odpowiedź pomiaru (oś y) w stosunku do stężenia (oś x) za pomocą oprogramowania arkusza obliczeniowego i utwórz krzywą standardową z równaniem i wartością R-kwadrat.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Analiza ekstraktu etanolowego s
	<ol>
		<li>Wstrzyknąć 20 μl ekstraktów etanolowych otrzymanych w kroku 2.5 do kolumny z odwróconymi fazami.</li>
		<li>Ustawić kolumnę HPLC na 30 °C i natężenie przepływu na 1 ml/min.</li>
		<li>Ustaw długość fali detektora UV na 280 nm, a czas rejestratora na 20 min.</li>
		<li>Przeanalizuj standardy co najmniej 3 razy.</li>
		<li>Obliczyć stężenie propoliny w ekstrakcie etanolu, korzystając z równania dla krzywej wzorcowej otrzymanej z kroku 3.1.7, w którym wykorzystuje się powierzchnię piku dla każdej propoliny.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Analiza minimalnego stężenia hamującego i minimalnego stężenia bakteriobójczego
UWAGA: Metoda mikrorozcieńczenia służy do oceny skuteczności przeciwbakteryjnej propoliny ekstrahowanej etanolem z tajwańskiego zielonego propolisu.
<ol>
	<li>Przygotowanie organizmów badanych
	<ol>
		<li>Rozmrozić szczepy bakterii, Staphylococcus aureus i Escherichia coli, a następnie wyhodować je odpowiednio w bulionie sojowym tryptycznym i bulionie odżywczym w temperaturze 37 °C przez 24 godziny.</li>
		<li>Przejść S. aureus za pomocą tryptycznego bulionu sojowego i E. coli za pomocą bulionu odżywczego przez dwa pokolenia, a następnie obliczyć jednostki tworzące kolonie, licząc poszczególne kolonie na płytce agarowej.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przygotowanie ekstraktów etanolowych do badania aktywności przeciwbakteryjnej
	<ol>
		<li>Zagęścić ekstrakty etanolowe otrzymane z etapu 1.5 przez odparowanie próżniowe w temperaturze 40 °C przez 15 minut.</li>
		<li>Rozpuścić suchą masę za pomocą dimetylosulfotlenku (DMSO) i dostosować stężenie ekstraktu do 12,8 mg/ml.</li>
		<li>Wykonać seryjne rozcieńczanie (stężenia: 5, 10, 20, 40, 80, 160, 320 i 640 μg/ml) ekstraktów etanolowych za pomocą bulionu.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Badania minimalnego stężenia hamującego
	<ol>
		<li>Dodać 10 μl rozcieńczonych ekstraktów etanolowych w zakresie od 0,156 do 640,0 μg/ml do płytki 96-dołkowej.</li>
		<li>Używając bulionu, dostosuj objętość do 100 μl i utrzymuj 5% DMSO we wszystkich rozcieńczeniach.</li>
		<li>Zaszczepić 100 μl kultury bakteryjnej (1 x 106/ml) do płytki 96-dołkowej.</li>
		<li>Inokulum hodowlane zawierające ekstrakty etanolowe o różnych stężeniach w temperaturze 37 °C przez 48 godzin.</li>
		<li>Przeanalizować wzrost bakterii pod kątem zmętnienia i przy użyciu gęstości optycznej (czytnik mikropłytek) przy 590 nm w celu określenia minimalnego stężenia hamującego (MIC).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Badania minimalnych stężeń bakteriobójczych 
	<ol>
		<li>Zaszczepić 10 μl płynnej kultury z każdej studzienki testu MIC, która nie wykazywała wzrostu, na płytce agarowej.</li>
		<li>Inkubować w temperaturze 37 °C przez 24 godziny.</li>
		<li>Określ aktywność bakteriobójczą, identyfikując najniższe stężenie, które nie wykazało widocznego wzrostu bakterii. Stężenie, które całkowicie eliminuje wzrost komórek, jest uważane za minimalne stężenie bakterii (MBC).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Zabaiou, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+properties+of+propolis+extracts%3A+Something+new+from+an+ancient+product%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+and+Physics+of+Lipids%22%5BJournal%5D)">Biological properties of propolis extracts: Something new from an ancient product.</a> Chemistry and Physics of Lipids. 207 (Pt B), 214-222 (2017).</li>
<li>Bankova, V. B., De Castro, S. L., Marcucci, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis%3A+Recent+advances+in+chemistry+and+plant+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Propolis: Recent advances in chemistry and plant origin.</a> Apidologie. 31 (1), 3-15 (2000).</li>
<li>Park, Y. K., Alencar, S. M., Aguiar, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Botanical+origin+and+chemical+composition+of+Brazilian+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Botanical origin and chemical composition of Brazilian propolis.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (9), 2502-2506 (2002).</li>
<li>Chen, C. N., Wu, C. L., Shy, H. S., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+prenylflavanones+from+Taiwanese+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis.</a> Journal of Natural Products. 66 (4), 503-506 (2003).</li>
<li>Chen, C. N., Weng, M. S., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+radical+scavenging+activity%2C+cytotoxic+effects+and+apoptosis+induction+in+human+melanoma+cells+by+Taiwanese+propolis+from+different+sources%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative%22%5BJournal%5D)">Comparison of radical scavenging activity, cytotoxic effects and apoptosis induction in human melanoma cells by Taiwanese propolis from different sources.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative. 1 (2), 175-185 (2004).</li>
<li>Chen, C. N., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+of+human+melanoma+cells+induced+by+the+novel+compounds+propolin+A+and+propolin+B+from+Taiwanese+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Apoptosis of human melanoma cells induced by the novel compounds propolin A and propolin B from Taiwanese propolis.</a> Cancer Letters. 24 (1-2), 218-231 (2007).</li>
<li>Huang, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolin+G%2C+a+prenylflavanone%2C+isolated+from+Taiwanese+propolis%2C+induces+caspase-dependent+apoptosis+in+brain+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Propolin G, a prenylflavanone, isolated from Taiwanese propolis, induces caspase-dependent apoptosis in brain cancer cells.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (18), 7366-7376 (2007).</li>
<li>Chen, Y. W., Ye, S. R., Ting, C., Yu, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+activity+of+propolins+from+Taiwanese+green+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+and+Drug+Analysis%22%5BJournal%5D)">Antibacterial activity of propolins from Taiwanese green propolis.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 26 (2), 761-768 (2018).</li>
<li>Hegazi, A. G., Abd El Hady, F. K., Abd Allah, F. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+antimicrobial+activity+of+European+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Zeitschrift+f%C3%BCr+Naturforschung%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and antimicrobial activity of European propolis.</a> Zeitschrift für Naturforschung. 55 (1-2), 70-75 (2000).</li>
<li>Sforcin, J. M., Fernandes, A., Lopes, C. A. M., Bankova, V., Funari, S. R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+effect+on+Brazilian+propolis+antibacterial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity.</a> Journal of Ethnopharmacology. 73 (1-2), 243-249 (2000).</li>
<li>Chen, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Taiwanese+propolis+collected+from+different+locations+and+seasons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Science+of+Food+and+Agriculture%22%5BJournal%5D)">Characterization of Taiwanese propolis collected from different locations and seasons.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 88 (3), 412-419 (2008).</li>
<li>Grange, J. M., Davey, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+properties+of+propolis+%28bee+glue%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antibacterial properties of propolis (bee glue).</a> Journal of the Royal Society of Medicine. 83 (3), 159-160 (1990).</li>
<li>Kujumgiev, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial%2C+antifungal+and+antiviral+activity+of+propolis+from+different+geographic+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Antibacterial, antifungal and antiviral activity of propolis from different geographic origins.</a> Journal of Ethnopharmacology. 64 (3), 235-240 (1999).</li>
<li>Krol, W., Scheller, S., Shani, J., Pietsz, G., Czuba, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+effect+of+ethanol+extract+of+propolis+and+antibiotics+in+the+growth+of+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Research%22%5BJournal%5D)">Synergistic effect of ethanol extract of propolis and antibiotics in the growth of Staphylococcus aureus.</a> Drug Research. 43 (5), 607-609 (1993).</li>
<li>Lu, L. C., Chen, Y. W., Chou, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+and+DPPH+free+radical-scavenging+activities+of+the+ethanol+extract+of+propolis+collected+in+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+and+Drug+Analysis%22%5BJournal%5D)">Antibacterial and DPPH free radical-scavenging activities of the ethanol extract of propolis collected in Taiwan.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 11 (4), 277-282 (2003).</li>
<li>Tosi, B., Donini, A., Romagnoli, C., Bruni, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+activity+of+some+commercial+extracts+of+propolis+prepared+with+different+solvents%5BTitle%5D)+AND+%22Phytotherapy+Research%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial activity of some commercial extracts of propolis prepared with different solvents.</a> Phytotherapy Research. 10 (4), 335-336 (1996).</li>
<li>Cunha, I. B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+that+influence+the+yield+and+composition+of+Brazilian+propolis+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Brazilian+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Factors that influence the yield and composition of Brazilian propolis extracts.</a> Journal of the Brazilian Chemical Society. 15 (6), 964-970 (2004).</li>
<li>Woo, S. O., Hong, I. P., Han, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+properties+of+propolis+with+ethanol+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Apicultural+Research%22%5BJournal%5D)">Extraction properties of propolis with ethanol concentration.</a> Journal of Apicultural Research. 30 (3), 211-216 (2015).</li>
<li>Park, Y. K., Ikegaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+water+and+ethanolic+extracts+of+propolis+and+evaluation+of+the+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Bioscience%2C+Biotechnology%2C+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Preparation of water and ethanolic extracts of propolis and evaluation of the preparations.</a> Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62 (11), 2230-2232 (1998).</li>
<li>Ramanauskienė, K., Inkėnienė, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis+oil+extract%3A+quality+analysis+and+evaluation+of+its+antimicrobial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Research%22%5BJournal%5D)">Propolis oil extract: quality analysis and evaluation of its antimicrobial activity.</a> Natural Product Research. 25 (15), 1463-1468 (2011).</li>
<li>Machado, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+biological+activity+of+extracts+obtained+by+supercritical+extraction+and+ethanolic+extraction+of+brown%2C+green+and+red+propolis+derived+from+different+geographic+regions+in+brazil%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and biological activity of extracts obtained by supercritical extraction and ethanolic extraction of brown, green and red propolis derived from different geographic regions in brazil.</a> PLoS One. 11 (1), e0145954(2016).</li>
<li>Monroy, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brazilian+green+propolis+extracts+obtained+by+conventional+processes+and+by+processes+at+high+pressure+with+supercritical+carbon+dioxide%2C+ethanol+and+water%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Supercritical+Fluids%22%5BJournal%5D)">Brazilian green propolis extracts obtained by conventional processes and by processes at high pressure with supercritical carbon dioxide, ethanol and water.</a> The Journal of Supercritical Fluids. 130, 189-197 (2017).</li>
<li>Popova, M., Chen, C. N., Chen, P. Y., Huang, C. Y., Bankova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+spectrophotometric+method+for+quantification+of+prenylated+flavanones+in+pacific+propolis+from+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemical+Analysis%22%5BJournal%5D)">A validated spectrophotometric method for quantification of prenylated flavanones in pacific propolis from Taiwan.</a> Phytochemical Analysis. 21 (2), 186-191 (2010).</li>
<li>Chen, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taiwanese+green+propolis+ethanol+extract+delays+the+progression+of+type+2+diabetes+mellitus+in+rats+treated+with+streptozotocin%2Fhigh-fat+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Taiwanese green propolis ethanol extract delays the progression of type 2 diabetes mellitus in rats treated with streptozotocin/high-fat diet.</a> Nutrients. 10 (4), e503(2018).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do zadeklarowania.

Badanie wykazało, że maceracja przy użyciu różnych stężeń etanolu może być stosowana do ekstrakcji brazylijskiego propolisu17; Proces ten był jednak czasochłonny17. Ekstrakcja związków bioaktywnych, takich jak zawartość fenoli, z brazylijskiego propolisu17 zajęła co najmniej 10 dni. Alternatywnie, ekstrakcja etanolem w połączeniu z ogrzewaniem w temperaturze 37 °C, 50 °C lub 70 °C przez 30 minut została zaproponowana do ekstrakcji brazylijskiego prop...

Propolis to naturalna mieszanka żywiczna wytwarzana przez gatunek pszczół Apis mellifera. Propolis jest szeroko stosowany od czasów starożytnych w medycynie ludowej. Badanie wykazało niedawno, że propolis jest korzystny w zapobieganiu infekcjom bakteryjnym i stanom zapalnym1. Liczne badania wykazały, że głównymi związkami bioaktywnymi w propolisie są flawonoidy, estry kwasu fenolowego, prenylowane kwasy p-kumarowe i kwasy diterpenowe2,3. Do tej pory za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC) zidentyfikowano 10 prenylowanych pochodnych flawanonu z tajwańskiego zielonego propolisu 4,5,6,7. Najliczniejszymi z nich są propoliny C, D, F i G5,7. Znaczące efekty biologiczne tajwańskiego zielonego propolisu są skorelowane z jego wysoką zawartością propolin8.
Stężenia związków bioaktywnych w propolisie różnią się znacznie w zależności od pory roku i lokalizacji geograficznej, z której propolis jest pozyskiwany. Europejski propolis zawiera głównie flawonoid, aglikon i kwasy fenolowe9. Głównymi związkami bioaktywnymi w propolisie z Brazylii są prenylowane kwasy p-kumarowe, takie jak artepillin C10. Badanie wykazało, że pora roku jest krytycznym czynnikiem określającym całkowitą zawartość propoliny w tajwańskim zielonym propolisie11. Zawartość propoliny w tajwańskim zielonym propolisie jest najwyższa latem (maj - lipiec), a najniższa zimą11. Właściwości przeciwbakteryjne propolisu są powszechnie uważane za wskaźnik aktywności biologicznej. Ogólnie rzecz biorąc, próbki propolisu pobrane z różnych regionów wykazywały podobne właściwości przeciwbakteryjne; Na przykład jest ogólnie skuteczny przeciwko prawie wszystkim bakteriom Gram-dodatnim i wykazuje ograniczone działanie przeciwbakteryjne przeciwko bakteriom Gram-ujemnym<klasa SUP = "xref" >10,< klasa SUP = "xref">12,< klasa SUP = "Xref">13. Wykazano, że synergiczne interakcje między flawonoidami w propolisie mają działanie przeciwbakteryjne14. Podobnie, doniesiono, że tajwański zielony propolis ma działanie przeciwdrobnoustrojowe przeciwko bakteriom Gram-dodatnim15. Co więcej, w jednym z badań zidentyfikowano również działanie przeciwdrobnoustrojowe wynikające z interakcji propoliny w tajwańskim zielonym propolisie8.
Charakterystyka związków bioaktywnych w propolisie jest trudna, ponieważ jego skład chemiczny może się różnić w zależności od źródła pochodzenia. Dlatego konieczne jest ustalenie wykonalnej i powtarzalnej metody określania jakości tajwańskiego zielonego propolisu. Nie ustalono jednak standardowej procedury ekstrakcji tajwańskiego zielonego propolisu i późniejszej analizy funkcjonalnej. Zaproponowano kilka metod, które w różny sposób stosują rozpuszczalniki organiczne i nieorganiczne do ekstrakcji propolisu16,17,18,19,20. Ponieważ propolis jest mieszaniną lipofilową, badania wykazały, że ekstrakcja organiczna jest lepsza niż ekstrakcja nieorganiczna8,18,19. Całkowite stężenie propoliny w tajwańskim zielonym propolisie i jego właściwości przeciwbakteryjne są kluczowymi wskaźnikami jakości tajwańskiego zielonego propolisu. W związku z tym celem niniejszego badania jest przedstawienie protokołu stosowania etanolu jako rozpuszczalnika do ekstrakcji i scharakteryzowania właściwości przeciwbakteryjnych tajwańskiego zielonego propolisu.

<table><tbody><tr><td>etanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>Whatman nr 4 bibuła filtracyjna</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>WHA1004125</td><td></td></tr><tr><td>metanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>34860</td><td></td></tr><tr><td>kolumna odwróconej fazy RP-18</td><td>Phenomenex Inc.</td><td>00G-0234-E0</td><td></td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus</td><td>ATCC</td><td>BCRC 10780</td><td></td></tr><tr><td>Escherichia coli</td><td>ATCC</td><td>BCRC 10675</td><td></td></tr><tr><td>tryptyczny bulion sojowy</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>22092</td><td></td></tr><tr><td>pożywny bulion</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70122</td><td></td></tr><tr><td>dimetylosulfotlenek</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>młynek</td> <td>do przyprawWaring</td><td>WSG60K</td><td></td></tr><tr><td>Czytnik mikropłytek</td><td>Urządzenia molekularne</td><td>System EMAX PLUS</td><td></td></tr><tr><td>HPLC</td><td>Agilent</td><td>1200 Series</td><td></td></tr><tr><td>odparowywanie próżniowe</td><td>B&Uuml; CHI</td><td>Rotavapor R-215</td><td></td></tr></tbody></table>

ekstrakcja i analiza tajwańskiego zielonego propolisu

Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis

Tajwański zielony propolis jest bogaty w prenylowane flawonoidy i wykazuje szeroki zakres aktywności biologicznej, takiej jak przeciwutleniające, przeciwbakteryjne i przeciwnowotworowe. Związkami bioaktywnymi tajwańskiego zielonego propolisu są propoliny, a mianowicie C, D, F i G. Stężenie propoliny w tajwańskim zielonym propolisie różni się w zależności od pory roku i położenia geograficznego. Dlatego tak ważne jest ustalenie standardowej i powtarzalnej procedury określania jakości tajwańskiego zielonego propolisu. W tym miejscu przedstawiamy protokół, który wykorzystuje ekstrakcję na bazie etanolu, wysokowydajną chromatografię cieczową i analizę aktywności przeciwbakteryjnej w celu scharakteryzowania jakości tajwańskiego zielonego propolisu. Metoda ta wskazuje, że ekstrakcje etanolem w 95% i 99,5% osiągają maksymalny uzysk suchej masy z zielonego propolisu tajwańskiego, uzyskując tym samym najwyższe stężenia propolinów, które mają właściwości przeciwbakteryjne. Zgodnie z tymi ustaleniami, obecny protokół jest uważany za wiarygodny i powtarzalny w określaniu jakości tajwańskiego zielonego propolisu.

Przykładowe wyniki pozytywne dla ekstrakcji etanolem przedstawiono w Tabeli 1. Uzysk suchej masy z zielonego propolisu z Tajwanu był powiązany dodatnio z stężeniem etanolu. Ekstrakty etanolem o stężeniu 95% i 99,5% charakteryzowały się najwyższym uzyskiem suchej masy z zielonego propolisu z Tajwanu. Najniższy uzysk suchej masy z zielonego propolisu z Tajwanu uzyskano, gdy jako rozpuszczalnik ekstrakcyjny użyto wody. Wyniki te wskazują, że rozpuszczalnik organiczny, taki j...

Przedstawiamy protokół użycia etanolu jako rozpuszczalnika do ekstrakcji i charakteryzowania tajwańskiego zielonego propolisu, który wykazuje działanie przeciwbakteryjne.

Ekstrakcja i analiza tajwańskiego zielonego propolisu

Taiwanese green propolis is rich in prenylated flavonoids and exhibits a broad range of biological activities, such as antioxidant, antibacterial, and ...

W tym miejscu przedstawiamy protokół stosowania etanolu jako rozpuszczalnika do ekstrakcji i charakterystyki tajwańskiego zielonego propolisu, który hamuje aktywność przeciwbakteryjną. Protokół ten jest wiarygodną i powtarzalną metodą określania jakości tajwańskiego zielonego propolisu. Procedurę zademonstrują Chun'Ting Chen i Yi'Hsuan Chien, doktoranci z mojego laboratorium.Na początek odważ 100 gramów tajwańskiego zielonego propolisu. Za pomocą młynka do przypraw zmiel propolis, upewniając się, że kawałki są zmielone na drobny proszek bez dużych cząstek. Ustaw pięć kolb i dodaj do każdej 100 mililitrów etanolu o różnych stężeniach w wodzie.Wymieszać 10 gramów zmielonego propolisu z roztworem etanolu w każdej kolbie i inkubować w temperaturze 25 stopni Celsjusza, wytrząsając z prędkością 250 obr./min przez 48 godzin. Następnie użyj bibuły filtracyjnej o wielkości porów 25 mikrometrów, aby przefiltrować ekstrakty etanolu. Za pomocą kolby miarowej rozpuść filtraty do ich pierwotnej objętości 100 mililitrów w 95% etanolu.Odtworzone ekstrakty należy przechowywać w temperaturze minus 20 stopni Celsjusza do momentu użycia. Gdy będziesz gotowy do przygotowania ekstraktów do HPLC, użyj odparowania próżniowego, aby zagęścić 10 mililitrów każdego ekstraktu w temperaturze 40 stopni Celsjusza przez 10 minut. Suchą masę pieczemy w temperaturze 45 stopni Celsjusza przez 24 godziny.Następnie rozpuść każdą próbkę suchej masy w 10 mililitrach 95% etanolu. Używając filtra strzykawkowego o wielkości porów 0,22 mikrometra, ponownie przefiltruj każdy ekstrakt i zbierz filtrat do bezpośredniej analizy za pomocą HPLC. Aby rozpocząć ustalanie krzywej wzorcowej, należy przygotować jeden litr roztworu metanolu z fazą ruchomą do wody w stosunku 88,8 do 11,2.Używając roztworu fazy ruchomej jako rozpuszczalnika, należy przygotować seryjne rozcieńczenia wzorcowych stężeń propoliny, zgodnie z opisem w protokole tekstowym. Wstrzyknąć 20 mikrolitrów każdego wzorcowego stężenia do kolumn z odwróconymi fazami kolejno od najniższego stężenia do najwyższego. Następnie ustaw kolumnę HPLC na 30 stopni Celsjusza, ustaw długość odstępu detektora UV na 280 nanometrów, a natężenie przepływu na jeden mililitr na minutę, a czas rejestratora na 20 minut.Przeanalizuj standardy co najmniej trzy razy. Następnie użyj oprogramowania arkusza obliczeniowego, aby połączyć odpowiedź pomiaru ze stężeniem, co spowoduje uzyskanie krzywej standardowej z ustalonym równaniem i wartością R-kwadrat. Aby rozpocząć analizę ekstraktów, wstrzyknij 20 mikrolitrów każdego ekstraktu do kolumny z odwróconą fazą.Ustaw kolumnę HPLC na temperaturę 30 stopni Celsjusza i natężenie przepływu jednego mililitra na minutę. Ustaw długość odstępu detektora UV na 280 nanometrów, a czas rejestratora na 20 minut. Przeanalizuj ekstrakty co najmniej trzy razy.Następnie użyj krzywej standardowej, aby określić stężenie propoliny w każdym ekstrakcie etanolowym. Po przygotowaniu organizmów testowych i ekstraktów etanolowych dodać 10 mikrolitrów rozcieńczonego ekstraktu etanolowego, w zakresie od 0,156 do 640 mikrogramów na mililitr, do studzienek płytki 96-dołkowej. Użyj bulionu, aby dostosować objętość w każdym dołku do 100 mikrolitrów, upewniając się, że utrzymujesz 5% DMSO we wszystkich rozcieńczeniach.Następnie zaszczepij 100 mikrolitrów kultury bakteryjnej do każdego dołka na 96-dołkowej płytce. Kultura w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 48 godzin. Użyj czytnika mikropłytek o długości 590 nanometrów, aby przeanalizować wzrost bakterii w zależności od zmętnienia i określić minimalne stężenie hamujące.Następnie zaszczepij 10 mikrolitrów płynnej kultury z każdej studzienki, która wykazywała wzrost, na płytkę agarową. Inkubować w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 24 godziny. Zidentyfikuj najniższe stężenie, które wykazało brak widocznego wzrostu bakterii, aby określić aktywność bakteryjną.Stężenie, które całkowicie wyeliminowało wzrost komórek, jest uważane za minimalne stężenie bakterii. W tym badaniu tajwański zielony propolis jest ekstrahowany etanolem. Wydaje się, że uzysk suchej masy jest najwyższy, gdy stosuje się wysokie stężenie etanolu, a najniższy, gdy stosuje się wodę.Wyniki te wskazują, że rozpuszczalnik organiczny działa najlepiej podczas tej ekstrakcji, a wydajność jest pozytywnie związana ze stężeniem etanolu. Podobnie, stężenie propoliny wydaje się być pozytywnie związane ze stężeniem etanolu podczas ekstrakcji, przy czym najwyższą wydajność propoliny uzyskuje się w ekstraktach etanolowych 95% i 99,5%. Następnie badane jest działanie przeciwbakteryjne ekstraktów etanolowych na S. aureus i E. coli.Wydaje się, że średnie minimalne stężenie hamujące dla S aureus wynosi od 10 do 20 mikrogramów na mililitr, a średnie stężenie bakterii wynosi 20 mikrogramów na mililitr. Ekstrakty wodne nie miały jednak żadnego działania przeciwbakteryjnego przeciwko S. aureus. Nie obserwuje się działania przeciwbakteryjnego w przypadku E. coli przy użyciu ekstraktów wodnych lub etanolowych.Jedną z kluczowych procedur eksperymentalnych jest unikanie jednorodności tajwańskiego zielonego propolisu podczas mielenia.

extraction-and-analysis-of-taiwanese-green-propolis

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemia

Biomasa roślinna stanowi źródło odnawialne dla wielu produktów, w tym paliwa, paszy, żywności i różnych materiałów. W artykule badamy właściwości drzewa tytoniowego (Nicotiana glauca) i topoli jako odpowiednich źródeł dla rurociągu biorafineryjnego.

Profilowanie transkryptu i metabolitów w celu oceny drzewa tytoniowego i topoli jako surowca dla przemysłu biotechnologicznego

Konsorcja mikrobiologiczne w ulach trzmieli wzbogacają i zachowują pyłek dla larw pszczół. Wykorzystując sekwencjonowanie nowej generacji, wraz z eksperymentami laboratoryjnymi i terenowymi, manuskrypt ten opisuje protokoły stosowane do testowania hipotezy, że pozostałości fungicydów zmieniają mikrobiom pyłku i demografię kolonii, ostatecznie prowadząc do utraty kolonii.

Techniki empiryczne, metagenomiczne i obliczeniowe rzucają światło na mechanizmy, za pomocą których fungicydy zagrażają zdrowiu pszczół

Przejściowa heterologiczna ekspresja enzymów biosyntetycznych w liściach Nicotiana benthamiana może przekierować endogenne dostawy 2,3-oksydoskwalenu na produkcję nowych produktów triterpenowych o wysokiej wartości. W niniejszym dokumencie opisano szczegółowy protokół szybkiej (5 dni) produkcji triterpenów i analogów na skalę preparatywną z wykorzystaniem tej potężnej platformy roślinnej.

Przejściowa ekspresja w liściach Nicotiana benthamiana do produkcji triterpenów w skali preparatywnej

Tutaj stosujemy metodę ekstrakcji gorącą wodą pod ciśnieniem (PHWE), która wykorzystuje niezmodyfikowany domowy ekspres do kawy do zapoznania studentów z chemią produktów naturalnych w laboratorium. Przedstawiono dwa doświadczenia: PHWE eugenolu i acetyleugenolu z goździków oraz PHWE seseliny i (+)-epoksysuberozyny z australijskiej rośliny Correa reflexa.

Wykorzystanie ekstrakcji gorącą wodą pod ciśnieniem (PHWE) do badania chemii produktów naturalnych w laboratorium licencjackim

Obecny protokół opisuje zanieczyszczenie alkaloidów pirolizydynowych (PA) w próbkach herbaty pochodzących z chwastów wytwarzających PA w ogrodach herbacianych.

Źródło i droga zanieczyszczenia alkaloidami pirolizydyny w próbkach herbaty

Niniejszy protokół opisuje użycie technologii kodów kreskowych DNA do uwierzytelniania materiałów leczniczych pochodzenia roślinnego, oraz rośliny leczniczej Angelica sinensis (Oliv.) Jako przykład wskazano Diels.

Zastosowanie barkodowania DNA do identyfikacji roślin leczniczych

W badaniu tym porównano zawartość polisacharydów w Hippophae rhamnoides subsp. sinensis Rousi i Hippophae gyantsensis (Rousi) Y. S. Lian, uzyskanych przez ekstrakcję gorącą wodą i oznaczonych ilościowo za pomocą kolorymetrii kwasu fenolowo-siarkowego. Zbadaliśmy również aktywność przeciwutleniającą in vitro polisacharydów z tych dwóch gatunków Hippophae za pomocą eksperymentów wymiatania wolnych rodników 2,2-difenylo-1-pikrylohydrazylu.

Badanie porównawcze zawartości polisacharydów i aktywności przeciwutleniającej Hippophae rhamnoides subsp. sinensis i Hippophae gyantsensis

Ten manuskrypt opisuje, jak przeprowadzić badania przesiewowe pod kątem mutacji termostabilizujących, oczyścić ludzki transporter serotoniny, wygenerować przeciwciała o wysokim powinowactwie i skrystalizować kompleks transporter-przeciwciało serotoniny związany z lekiem przeciwdepresyjnym S-citalopram. Protokół ten można dostosować do badania innych trudnych transporterów błonowych, receptorów i kanałów.

Termostabilizacja, ekspresja, oczyszczanie i krystalizacja ludzkiego transportera serotoniny związanego z S-citalopramem

Przedstawiono protokół kompleksowej ekstrakcji lipidów, metabolitów i białek z tkanek biologicznych przy użyciu jednej próbki.

Prosta metoda ekstrakcji frakcjonowanej do kompleksowej analizy metabolitów, lipidów i białek z pojedynczej próbki

Ten protokół opisuje efektywną metodologię ekstrakcji i kwantyfikacji kofeiny w zawiesinach komórkowych C. arabica L. oraz eksperymentalny proces oceny aktywności enzymatycznej syntazy kofeiny z poziomem ekspresji genu kodującego ten enzym.

Ekstrakcja kofeiny, aktywność enzymatyczna i ekspresja genów syntazy kofeiny z zawiesin komórek roślinnych

Poznaj protokół ekstrakcji tajwańskiego zielonego propolisu etanolem i analizę jego właściwości przeciwbakteryjnych. Ta niezawodna metoda umożliwia dokładną ocenę jakości naturalnego produktu.

Ekstrakcja i analiza tajwańskiego zielonego propolisu

Przeglądaj więcej filmów