Name: Izolacja pierwotnych mysich komórek śródbłonka mikronaczyniowego mięśni szkieletowych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-06T13:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 57 s
Description: Poznaj metodę izolacji pierwotnych mysich komórek śródbłonka mikronaczyniowego z mięśni szkieletowych przy użyciu rozdziału immunomagnetycznego. Technika ta umożliwia badanie interakcji między mięśniami a komórkami śródbłonka w chorobach autoimmunologicznych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez "Else Kröner-Fresenius-Stiftung" (2018_A03 do TR), "Innovative Medizinische Forschung (IMF) Münster" (I-RU211811 do TR) oraz Niemiecką Fundację Badawczą (DFG, INST 2105/27-1, ME 3283/5-1 i ME 3283/6-1 do SGM). Ilustrowane zdjęcia udostępnione przez Heike Blum.

<ol><li>Rodrigues, S. F., Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+cells+and+endothelial+barrier+function%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Barriers%22%5BJournal%5D)">Blood cells and endothelial barrier function.</a> Tissue Barriers. 3 (1-2), e978720(2015).</li>
<li>Michiels, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell functions.</a> Journal of Cellular Physiology. 196 (3), 430-443 (2003).</li>
<li>Pierce, R. W., Giuliano, J. S. Jr, Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+function+and+dysfunction+in+critically+ill+children%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell function and dysfunction in critically ill children.</a> Pediatrics. 140 (1), Epub 2017 Jun 1 (2017).</li>
<li>Nasdala, I., Wolburg-Buchholz, K., Wolburg, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transmembrane+tight+junction+protein+selectively+expressed+on+endothelial+cells+and+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">A transmembrane tight junction protein selectively expressed on endothelial cells and platelets.</a> Journal of Biological Chemistry. 277 (18), 16294-16303 (2002).</li>
<li>Sano, H., Sano, Y., Ishiguchi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+new+conditionally+immortalized+human+skeletal+muscle+microvascular+endothelial+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Establishment of a new conditionally immortalized human skeletal muscle microvascular endothelial cell line.</a> Journal of Cellular Physiology. 232 (12), 3286-3295 (2017).</li>
<li>Kappos, L., Bates, D., Edan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natalizumab+treatment+for+multiple+sclerosis%3A+Updated+recommendations+for+patient+selection+and+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Natalizumab treatment for multiple sclerosis: Updated recommendations for patient selection and monitoring.</a> Lancet Neurology. 10 (8), 745-758 (2011).</li>
<li>Birbrair, A., Zhang, T., Wang, Z. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+pericyte+subtypes+differ+in+their+differentiation+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle pericyte subtypes differ in their differentiation potential.</a> Stem Cell Research. 10 (1), 67-84 (2013).</li>
<li>Ruck, T., Bittner, S., Epping, L., Herrmann, A. M., Meuth, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+primary+murine+brain+microvascular+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation of primary murine brain microvascular endothelial cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (93), e52204(2014).</li>
<li>Hwang, I., An, B. S., Yang, H., Kang, H. S., Jung, E. M., Jeung, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+expression+of+occludin%2C+zona+occludens-1%2C+and+junction+adhesion+molecule+A+in+the+duodenum%2C+ileum%2C+colon%2C+kidney%2C+liver%2C+lung%2C+brain%2C+and+skeletal+muscle+of+C57BL+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific expression of occludin, zona occludens-1, and junction adhesion molecule A in the duodenum, ileum, colon, kidney, liver, lung, brain, and skeletal muscle of C57BL mice.</a> Journal of Physiology and Pharmacology. 64 (1), 11-18 (2013).</li>
<li>Frye, C. A., Patrick, C. W. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+rat+microvascular+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Developmental+Biology+-+Animal%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of rat microvascular endothelial cells.</a> In Vitro Cellular & Developmental Biology - Animal. 38 (4), 208-212 (2002).</li>
<li>Le, G. Y., Essackjee, H. C., Ballard, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+adenosine+formation+and+release+by+freshly-isolated+vascular+endothelial+cells+from+rat+skeletal+muscle%3A+Effects+of+hypoxia+and%2For+acidosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Intracellular adenosine formation and release by freshly-isolated vascular endothelial cells from rat skeletal muscle: Effects of hypoxia and/or acidosis.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 450 (1), 93-98 (2014).</li>
<li>Cheung, K. C., Marelli-Berg, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+microvascular+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-protocol%22%5BJournal%5D)">Isolation of microvascular endothelial cells.</a> Bio-protocol. 8 (12), (2018).</li>
<li>Ieronimakis, N., Balasundaram, G., Reyes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+isolation%2C+culture+and+transplant+of+mouse+skeletal+muscle+derived+endothelial+cells+with+angiogenic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Direct isolation, culture and transplant of mouse skeletal muscle derived endothelial cells with angiogenic potential.</a> PLoS One. 3 (3), e0001753(2008).</li>
<li>Pham, M. T., Pollock, K. M., Rose, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+human+vascularized+brain+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Generation of human vascularized brain organoids.</a> Neuroreport. 29 (7), 588-593 (2018).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak sprzecznych interesów finansowych.

Komórki śródbłonka mikronaczyniowego pełnią funkcje barierowe we wszystkich tkankach, a ich dysfunkcja prowadzi do chorób powiązanych narządów 3. Co więcej, specyficzne dla narządów badania nad mikronaczyniową EC mogą utorować drogę dla nowych strategii terapeutycznych. Dlatego głębsze zrozumienie funkcji mikrokrążenia EC w warunkach fizjologicznych i patofizjologicznych jest bardzo interesujące dla naukowców. Modulacja interakcji leukocytów/śródbłonka jest z powodzeniem stosowana w leczeniu pacje...

Poprzez krwiobieg, komórki i organy są zaopatrywane w tlen, substraty i inne niezbędne cząsteczki. Ta wymiana odbywa się w naczyniach włosowatych, najmniejszych naczyniach. Naczynia włosowate są tworzone przez wewnętrzną warstwę komórek śródbłonka (EC), której integralność pozostaje warunkiem wstępnym skutecznej regulacji homeostazy mięśni między przestrzenią wewnątrznaczyniową a śródmiąższową. Aby zapewnić selektywne przejście rozpuszczalnych czynników i komórek, EC stanowią monowarstwę połączoną ścisłymi i przylegającymi połączeniami 1. Oprócz swojej roli jako bariery dla składników odżywczych lub produktów przemiany materii, EC reguluje rekrutację leukocytów w procesach zapalnych. Stan zapalny lub uszkodzenie tkanki prowadzi do regulacji w górę cząsteczek adhezyjnych na powierzchni EC i produkcji chemokin ułatwiających przyłączanie leukocytów i transmigrację do tkanki docelowej 2. W związku z tym EC są krytycznie zaangażowane w regulację procesów zapalnych, takich jak obrona przed patogenami lub naprawa tkanek.
Dysfunkcja EC jest bezpośrednio związana z chorobami naczyniowymi, przewlekłą niewydolnością nerek, zakrzepicą żylną, ciężkimi infekcjami patogenów. Co więcej, EC są praktycznie zawsze zaangażowane w autoimmunizację specyficzną dla narządów, taką jak cukrzyca lub stwardnienie rozsiane 3. Funkcja bariery między krwiobiegiem a narządami jest zatem kontrolowana przez skoordynowane współdziałanie różnych typów komórek. W komórkach śródbłonka mikronaczyniowego mięśni szkieletowych (MMEC) wraz z komórkami mięśniowymi fibroblasty i perycyty tworzą jednostkę funkcjonalną, "jednostkę mięśniowo-naczyniową" (MVU). Dlatego dysfunkcja MVU może odgrywać kluczową rolę w patofizjologii miopatii. Jednak nadal brakuje głębszego zrozumienia tych mechanizmów regulacyjnych i obecnie uniemożliwia to identyfikację nowych, pilnie potrzebnych celów terapeutycznych w miopatiach.
Do badania złożonych mechanizmów fizjologicznych i patofizjologicznych powszechnie używa się modeli zwierzęcych. Modele in vitro mają jednak tę zaletę, że koncentrują się na interesującym nas temacie, wykluczając różne czynniki zakłócające. Aby zbadać procesy in vitro, konieczne jest wyizolowanie czystych i żywotnych komórek pierwotnych. W przeciwieństwie do linii komórkowych, komórki pierwotne wyizolowane od zwierząt transgenicznych umożliwiają badanie konsekwencji modyfikacji genetycznych in vitro.
Tutaj opisano metodę izolowania pierwotnego mysiego MMEC za pomocą mechanicznej i enzymatycznej dysocjacji, a następnie technik magnetycznego sortowania komórek aktywowanych magnetycznie (MCS) w celu oczyszczenia. W tym celu stosuje się koraliki magnetyczne do określonych znaczników powierzchniowych. Cząsteczka adhezyjna komórek śródbłonka płytek krwi-1 (PECAM1, CD31) ulega głównie ekspresji na EC i może być stosowana do wzbogacania tego typu komórek. Aby zagwarantować wysoką czystość komórek, komórki pochodzenia krwiotwórczego są wykluczane przez negatywną selekcję dla receptora białkowej fosfatazy tyrozynowej typu C (PTPRC, CD45). Ponadto przedstawiono kontrole jakości, hodowlę pierwotnego mysiego MMEC, potencjalne zastosowania i ograniczenia, a także specjalne względy.

<table><tbody><tr><td>0,25% Trypsyna-EDTA</td><td>Thermo Fisher</td><td>25200-056</td><td>gotowy do użycia</td></tr><tr><td>bufor</td><td></td><td></td> ACK <td>150 mM NH4Cl, 10 mM KHCO3, 0,1 mM EDTA w wodzie o pH 7,3</td></tr><tr><td>Anti-mysz CD31-FITC (klon MEC13.3)</td><td>Biolegend</td><td>102506</td><td>Kontrola izotypu: FITC Rat IgG2a, &kappa; Isotype Ctrl</td></tr><tr><td>Anti-Mouse CD45-PE (klon 30-F11)</td><td>Biolegend</td><td>103106</td><td>Kontrola izotypu: PE Rat IgG2b, &kappa; Isotype</td></tr><tr><td>Ctrl bFGF</td><td>Peprotech</td><td>100-18B</td><td>Podstawowy czynnik wzrostu fibroblastów</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A4503</td><td></td></tr><tr><td>CD31 MicroBeads mysz</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-097-418</td><td></td></tr><tr><td>CD45 MicroBeads mysz</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-052-301</td><td></td></tr><tr><td>Kolagenaza-Dispase</td><td>Roche</td><td>10269638001</td><td>Kolagenaza z V. alginolyticus, Dyspaza z B. polymyxa</td></tr><tr><td>Corning Costar Wielofazowe płytki 6-dołkowe traktowane TC</td><td>Corning</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>Cy3-sprzężone przeciwciało anty-szczurze IgG</td><td>Dianova</td><td>712-166-153</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (odczynnik przeciwblaknięcia ProLong Gold z DAPI)</td><td>Thermo Fisher</td><td>P36935</td><td></td></tr><tr><td>Dezoksyrybonukleaza</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4513</td><td>Deoksyrybonukleaza I z trzustki bydlęcej Woda</td></tr><tr><td>uzdatniona dwupirowęglanem</td><td>Thermo Fisher</td><td>AM9916</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, zawierająca suplement glutaminy i pirogronian</td><td>Thermo Fisher</td><td>31966-021</td><td>rozgrzać do 37 &stopni; C przed użyciem</td></tr><tr><td>dNTP Mix (10 mM)</td><td>Thermo Fisher</td><td>R0192</td><td>1 ml</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td>Probówki FACS</td><td>Sarstedt</td><td>551,579</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 70 &mu; m Sitko komórkowe</td><td>Corning</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>Bufor</td><td></td><td></td> FC <td>0,1% BSA, 0,2% NaN3, 2 mM EDTA</td></tr><tr><td>Płodowa surowica cielęca</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F6178</td><td>Płodowa surowica cielęca</td></tr><tr><td>Fixable Viability Dye eFluor780</td><td>Thermo Fisher</td><td>65-0865-14</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze (ząbkowane, proste, 12 cm)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11002-12</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze (ząbkowane, proste, 12 cm)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11009-13</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka insulinowa 100 Solo 1 ml (Omnifix)</td>Duże kolumny magnetyczne <td>Braun</td><td>9161708V</td><td></td></tr><tr><td>(kolumny LS)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>do CD45-MACS-step</td></tr><tr><td>Bufor</td><td></td><td></td> MCS <td>0,5% BSA, 2 mM EDTA w PBS przy pH 7,2</td></tr><tr><td>Średnia kolumna magnetyczna (kolumna MS)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td>for CD31-MACS-step</td></tr><tr><td>Woda wolna od nukleaz</td><td>Thermo Fisher</td><td>R0581</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td>Sól fizjologiczna buforowana fosforanem, gotowa do użycia</td></tr><tr><td>Bufor PCR (5x)</td><td>Thermo Fisher</td><td>EP0742</td><td>w zestawie z odwrotną transkryptazą</td></tr><tr><td>Pecam1 szczur &alpha;-mysz</td><td>SantaCruz</td><td>Sc-52713</td><td>100 &micro; g / ml</td></tr><tr><td>Penicylina-Streptomycyna</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>pierwotne mysie komórki mięśniowe</td><td>celprogen</td><td>66066-01</td><td></td></tr><tr><td>Podkład Cdh15 (M-Kadheryna)</td><td>Thermo Fisher</td><td>Mm00483191_m1</td><td>FAM oznaczony</td></tr><tr><td>Podkład Cldn5 (claudin-5)</td><td>Thermo Fisher</td><td>Mm00727012_s1</td><td>FAM oznaczony</td></tr><tr><td>Podkład Ocln (okludyna)</td><td>Thermo Fisher</td><td>Mm00500912_m1</td><td>Podkład oznaczony FAM</td></tr><tr><td>Pax-7</td><td>Thermo Fisher</td><td>Mm01354484_m1</td><td>Podkład oznaczony FAM</td></tr><tr><td>Tjp-1 (Zonula occludens 1)</td><td>Thermo Fisher</td><td>Mm00493699_m1</td><td>FAM oznaczony</td></tr><tr><td>Podkład 18s rRNA (eukariotyczna kontrola endogenna)</td><td>Thermo Fisher</td><td>4310893E</td><td></td></tr><tr><td>Bufor qPCR oznaczony VIC (Maxima Probe/ROX qPCR Master Mix (2X)</td><td>Thermo Fisher</td><td>K0231</td><td>2 x 1,25 ml; dla 200 reakcji każda</td></tr><tr><td>Losowa mieszanina jednoniciowego startera</td><td>Thermo Fisher</td><td>SO142</td> Losowa odwrotna transkryptaza <td>startera heksamerowego</td></tr><tr><td>(200 U/&mu; L) + Bufor PCR (5x)</td> Inhibitor rnazy <td>Thermo Fisher</td><td>EP0742</td><td></td></tr><tr><td>(40 U/&mu; L)</td><td>Thermo Fisher</td><td>EO0381</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki (krawędź tnąca 23 mm, ostre/ostre)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14088-10</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki (krawędź tnąca 42 mm, ostre/)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14001-13</td><td></td></tr><tr><td>Szybkie rozwiązanie do powlekania</td><td>PeloBiotech</td><td>PB-LU-000-0002-00</td><td></td></tr></tbody></table>

izolacja pierwotnych mysich komórek śródbłonka mikronaczyniowego mięśni szkieletowych

Isolation of Primary Murine Skeletal Muscle Microvascular Endothelial Cells

Komórki śródbłonka naczyń włosowatych mięśni szkieletowych (komórki mikronaczyniowe mięśni, MMEC) budują barierę między krwiobiegiem a mięśniami szkieletowymi, regulując wymianę płynów i składników odżywczych, a także odpowiedź immunologiczną na czynniki zakaźne, kontrolując migrację komórek odpornościowych. Dla tych funkcji MMEC tworzy funkcjonalną "jednostkę mięśniowo-naczyniową" (MVU), z innymi typami komórek, takimi jak fibroblasty, perycyty i komórki mięśni szkieletowych. W związku z tym dysfunkcja MMEC, a tym samym MVU, przyczynia się do powstania wielu różnych miopatii. Jednak mechanizmy regulacyjne MMEC w zdrowiu i chorobie pozostają niewystarczająco poznane, a ich wyjaśnienie poprzedza bardziej szczegółowe leczenie miopatii. Wyodrębnienie i dogłębne zbadanie podstawowych funkcji MMEC w kontekście MVU może ułatwić lepsze zrozumienie tych procesów.
Ten artykuł zawiera protokół do izolacji pierwotnego mysiego MMEC mięśnia szkieletowego poprzez mechaniczną i enzymatyczną dysocjację, w tym etapy oczyszczania i konserwacji hodowli.

Jeden dzień po izolacji pierwotne mysie MMEC oraz pozostałe komórki tworzą konglomeraty i przylegają do dna naczyń hodowlanych (Rysunek 1A dzień 1). Od 7. dnia można zaobserwować komórki płaskie i wydłużone. Jednak nadal widoczne jest zanieczyszczenie innymi, głównie sferoidalnymi komórkami (Rysunek 1A dzień 7). W związku z tym wymagany jest kolejny cykl selekcji pozytywnej CD31 via MCS. Następnie pierwotne mysie MMEC pr...

Mikronaczyniowe komórki śródbłonka mięśni szkieletowych (MMEC) kształtują wewnętrzną ścianę naczyń włosowatych mięśni i regulują zarówno wymianę płynów/molekuł, jak i migrację komórek (immunologicznych) między tkanką mięśniową a krwią. Opisana tutaj izolacja pierwotnego mysiego MMEC umożliwia kompleksowe badania in vitro "jednostki mięśniowo-naczyniowej".

Izolacja pierwotnych mysich komórek śródbłonka mikronaczyniowego mięśni szkieletowych

The endothelial cells of skeletal muscle capillaries (muscle microvascular endothelial cells, MMEC) build up the barrier between blood stream and skeletal ...

Protokół ten opisuje technikę platformy do izolowania komórek śródbłonka mikronaczyniowego z mięśni szkieletowych. Komórki te można wykorzystać na przykład do uzyskania dalszych informacji na temat funkcji bariery mięśniowej krwi. Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącymi metodami jest to, że możliwe jest wyizolowanie pierwotnych komórek śródbłonka mikronaczyniowego o wysokiej czystości.Technika ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie chorób mięśni o podłożu immunologicznym, takich jak interakcja między komórkami mięśniowymi i śródbłonka w zdrowiu i chorobie. Najpierw przygotuj wszystkie potrzebne roztwory i płytki sześciodołkowe zgodnie z opisem w protokole. Aby rozpocząć praktyczną procedurę, zaopatrz się w parę ostrych/nożyczek chirurgicznych, parę ostrych/ostrych nożyczek chirurgicznych oraz proste i zakrzywione kleszcze.Zdezynfekuj wszystkie narzędzia chirurgiczne 70% etanolem. Umieść uśpionego dorosłego samca myszy na grzbiecie i zwilż nogi 70% etanolem. Za pomocą ostrych/nożyczek chirurgicznych odetnij każdą nogę, przecinając staw biodrowy.Umieść kończyny w naczyniu do hodowli komórek zamkniętych. Przenieś naczynie do sterylnego okapu z przep

isolation-primary-murine-skeletal-muscle-microvascular-endothelial

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

W niniejszej pracy opisujemy protokół izolacji i hodowli mysich komórek śródbłonka płuc. Metoda ta obejmuje mechaniczną i enzymatyczną dysocjację tkanki płucnej oraz dwuetapowy proces oczyszczania z wykorzystaniem przeciwciał anty-PECAM-1 oraz anty-ICAM-2 sprzężonych z kuleczkami magnetycznymi, co pozwala na uzyskanie czystej populacji komórek śródbłonka pochodzenia głównie naczyniowego mikroskopowego.

Izolacja i hodowla komórek śródbłonka płuc noworodków myszy

Prezentujemy preparat do wizualizacji i manipulowania sygnalizacją wapniową w natywnym, nienaruszonym śródbłonku mikronaczyniowym. Śródbłonek świeżo wyizolowany z tętnic oporowych myszy zaopatrujących mięśnie szkieletowe zachowują morfologię in vivo i dynamiczną sygnalizację w sąsiednich komórkach i między nimi. Rurki śródbłonka można przygotować z mikronaczyń innych tkanek i narządów.

Izolacja śródbłonka mikronaczyniowego z tętnic oporowych myszy

Izolacja i hodowla czystej populacji spokojnych komórek satelitarnych, populacji komórek macierzystych mięśni, jest niezbędna do zrozumienia biologii i regeneracji komórek macierzystych mięśni, a także przeszczepu komórek macierzystych do terapii dystrofii mięśniowej i innych chorób zwyrodnieniowych.

Izolacja, hodowla i przeszczep satelitarnych komórek mięśniowych

Naczynia krwionośne w ludzkich mięśniach szkieletowych zawierają kilka wieloliniowych populacji prekursorów, które są idealne do zastosowań regeneracyjnych. Ta metoda izolacji pozwala na jednoczesne oczyszczanie trzech multipotencjalnych populacji komórek prekursorowych odpowiednio z trzech warstw strukturalnych naczyń krwionośnych: miogennych komórek śródbłonka z błony wewnętrznej, perycytów z pożywki i komórek przybyszowych z przydanki.

Izolacja multipotencjalnych prekursorów pochodzących z naczyń krwionośnych z ludzkich mięśni szkieletowych

Zdolność do izolowania komórek śródbłonka zastawki serca (VEC) jest kluczowa dla zrozumienia mechanizmów rozwoju, utrzymania i choroby zastawki.  W tym miejscu opisujemy izolację VEC od embrionalnych i dorosłych myszy Tie2-GFP za pomocą FACS, co pozwoli na badania określające udział VEC w procesach rozwojowych i chorobowych.

Izolacja komórek śródbłonka mysiej zastawki

Komórki śródbłonka mikronaczyniowego mózgu (BMEC) są połączone specyficznymi białkami połączeniowymi, tworząc wysoce regulowaną barierę oddzielającą krew od ośrodkowego układu nerwowego (OUN), tak zwaną barierę krew-mózg (BBB). Izolacja pierwotnych mysich komórek śródbłonka mikronaczyniowego mózgu, jak omówiono w tym protokole, umożliwia szczegółowe badania in vitro bariery krew-mózg.

Izolacja pierwotnych mysich komórek śródbłonka mikronaczyniowego mózgu

Komórki śródbłonka naczyniowego odgrywają znaczącą rolę w wielu ważnych zaburzeniach sercowo-naczyniowych. W tym artykule opisano prostą metodę izolowania i rozszerzania komórek śródbłonka z aorty myszy bez użycia specjalnego sprzętu. Nasz protokół zapewnia skuteczny sposób identyfikacji mechanizmów w fizjopatologii komórek śródbłonka.

Izolacja i pierwotna hodowla komórek śródbłonka aorty myszy

Celem tego protokołu jest zademonstrowanie technik izolacji i hodowli mysich pierwotnych komórek mięśni gładkich naczyń krwionośnych (VSMC) z krążenia wieńcowego. Po wyizolowaniu VSMC można je stosować w wielu standardowych technikach hodowli.

Izolacja mysich komórek mięśni gładkich naczyń wieńcowych

Ta praca opisuje protokół oparty na FACS, który pozwala na łatwą i jednoczesną izolację perycytów typu I i II od mięśni szkieletowych.

Izolacja perycytów typu I i typu II z mięśni szkieletowych myszy

W tym artykule, pierwotne komórki śródbłonka płuc zostały wyizolowane i wyhodowane od nowonarodzonych myszy.

Izolacja pierwotnych komórek śródbłonka płuc myszy

Protokół ten zapewnia ustandaryzowaną metodę izolowania i wzbogacania pierwotnych mioblastów z mięśni szkieletowych dorosłych i noworodków myszy poprzez dysocjację tkanek, filtrację sekwencyjną, wstępne nakładanie oraz określone warunki hodowlane, umożliwiając tworzenie i utrzymanie hodowli mioblastów pochodzących z komórek satelitarnych do dalszych zastosowań eksperymentalnych.

Izolacja komórek satelitarnych mięśni szkieletowych do badań in vitro miogenezy

Poznaj metodę izolacji pierwotnych mysich komórek śródbłonka mikronaczyniowego z mięśni szkieletowych przy użyciu rozdziału immunomagnetycznego. Technika ta umożliwia badanie interakcji między mięśniami a komórkami śródbłonka w chorobach autoimmunologicznych.

Izolacja pierwotnych mysich komórek śródbłonka mikronaczyniowego mięśni szkieletowych

Przeglądaj więcej filmów