Indukcja i ocena choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi w ksenogenicznym mysim modelu i kwantyfikacja ludzkich limfocytów T w tkankach myszy przy użyciu cyfrowego PCR

Protokół ten określa, w jaki sposób wywołać chorobę ksenoprzeszczep przeciwko gospodarzowi lub xenoGVHD oraz jak zaślepić i ustandaryzować ocenę kliniczną, aby zapewnić spójne wyniki. Model xenoGVHD zapewnia metodę in vivo do testowania terapii immunosupresyjnych przeciwko ludzkim, a nie mysim limfocytom T, poprawiając przełożenie tych badań na praktykę kliniczną. Procedurę zademonstruje Amara Seng, doktorantka z mojego laboratorium.

Na dzień przed wstrzyknięciem umieść od 8 do 12 tygodni, nieotyłych myszy z cukrzycą scid gamma lub NSG w wysterylizowanej klatce do ciasta i napromieniuj myszy w źródle cezu-137 całkowitą dawką 150 centygrajów, z powolną rotacją, aby zapewnić równomierne napromieniowanie. Następnie umieść myszy w czystych klatkach w sterylnej komorze bezpieczeństwa biologicznego na noc. Następnego ranka zbierz wystarczającą ilość zdrowej krwi ludzkiej, aby wyizolować 1,1 razy 10 do siedmiu komórek jednojądrzastych krwi obwodowej lub PBMC na mysz i rozcieńczyć heparynizowaną krew w równej objętości 2% płodowej surowicy bydlęcej lub FBS w PBS.