Indukcja niewydolności prawej komory przez zwężenie tętnicy płucnej i ocena funkcji prawej komory u myszy

Metoda ta stanowi przydatną technikę badania mechanizmów niewydolności prawej komory. Głównymi zaletami tej techniki jest oszczędność czasu i zwiększenie wskaźnika powodzenia operacji. Ta technika może pomóc nam naśladować przerost i niewydolność prawego serca u ludzi poprzez zwężenie tętnicy płucnej w celu wytworzenia przeciążenia ciśnieniem płucnym.

Metoda ta może być stosowana do techniki poprzecznego zwężenia aorty i może zapewnić wgląd w powikłania po przeszczepie serca oraz badania nad wrodzonymi wadami serca. Procedura zostanie zademonstrowana przez Xiaoxia Huang, technika z mojego laboratorium. Przed rozpoczęciem zabiegu przełóż kawałek plecionego jedwabnego szwu 6-0 przez igłę o rozmiarze 25 zdemontowaną z jednomililitrowej strzykawki.

Użyj kleszczy hemostatycznych, aby zgiąć igłę pod kątem 90 stopni. Następnie zegnij igłę o rozmiarze 22 o 120 stopni. Po potwierdzeniu braku reakcji na szczypanie palców u stóp, umieść znieczuloną mysz w pozycji leżącej na poduszce grzewczej o temperaturze 37 stopni Celsjusza i zabezpiecz siekacze szwem.

Przymocuj kończyny taśmą i użyj kremu do depilacji, aby usunąć włosy z szyi do wyrostka mieczykowatego. Zdezynfekuj odsłoniętą skórę sekwencyjnymi chusteczkami z jodem i 75% etanolem i użyj spiczastych szczypiec, aby lekko usunąć język. Podnieś żuchwę za pomocą specjalnie wykonanej szpatułki, aby odsłonić głośnię, i użyj zimnego źródła światła, aby skierować ostrożne wprowadzenie wykonanej na zamówienie kaniuli tchawicy przez głośnię.

Dostosuj parametry mini respiratora i ustaw częstość oddechów na 150 oddechów na minutę i objętość oddechową 300 mikrolitrów. Następnie podłącz rurkę i respirator, aby potwierdzić, że kaniula została prawidłowo włożona przed zamocowaniem kaniuli taśmą. Aby otworzyć klatkę piersiową, wykonaj około 10-milimetrowe nacięcie skóry równolegle do drugiego żebra.

Użyj nożyczek i pęsety łokciowej, aby oddzielić mięśnie piersiowe większe i mniejsze powyżej drugiej przestrzeni międzyżebrowej. Policz żebra od kąta mostka, aby zidentyfikować drugą przestrzeń międzyżebrową i użyj nożyczek, aby otworzyć tę przestrzeń. Następnie tępo oddziel miąższ i grasicę, aż będzie widoczny pień płucny.

Aby zwęzić tętnicę płucną, użyj pęsety łokciowej, aby tępo oddzielić pień płucny i aortę wstępującą. Użyj igły zatrzaskowej 90 stopni, aby przeciągnąć szew przez tkankę łączną między pniem płucnym a aortą wstępującą. Umieść igłę wyściełającą pod kątem 120 stopni na pniu płucnym.

Użyj plecionego jedwabnego szwu 6-0, aby podwiązać igłę wyściełającą do pnia płucnego, usuwając igłę wyściełającą natychmiast po zaobserwowaniu wypełnienia stożka płucnego. Przeciąć oba końce szwów i kontynuować obserwację wypełnienia stożka płucnego, aby ocenić, czy występuje zwężenie. Następnie ponownie oceń odruch pedałowania zwierzęcia, aby upewnić się, że podwiązanie zakończyło się sukcesem i zamknij klatkę piersiową i skórę nylonowym szwem 5-0.

Co najmniej trzy dni po zabiegu należy nałożyć żel ultradźwiękowy na klatkę piersiową zwierzęcia ze zwężoną tętnicą płucną. Umieść sondę 30 megaherców na klatce piersiowej pod kątem 30 stopni w kierunku przeciwnym do ruchu wskazówek zegara względem lewej linii przymostkowej, jednocześnie ustawiając wcięcie w kierunku ogonowym. Reguluj osie Y i X w trybie B, aż zastawka mitralna, aorta i komora lewej komory będą wyraźnie widoczne.

Obróć sondę o 30 do 40 stopni na osi Y w kierunku klatki piersiowej. Wyreguluj osie Y i X, aż stożek płucny będzie wyraźnie widoczny i umieść kursor na końcówce płatków zastawki płucnej, aby zmierzyć szczytową prędkość przepływu. Wybierz kolor i PW i umieść linię przerywaną falą pulsacyjną równolegle do kierunku przepływu krwi.

Wyreguluj lewą stronę podkładki tak, aby była wyższa niż prawa strona, utrzymując sondę skierowaną pod kątem 30 stopni do horyzontu wzdłuż prawej wewnętrznej linii pachowej, z wycięciem skierowanym w kierunku ogonowym. Reguluj osie X i Y, aż prawa komora będzie wyraźnie widoczna. Następnie kliknij dwa razy w tryb M, aby wyświetlić linię wskaźnika.

Osiem tygodni po operacji zaintubuj mysz, jak pokazano, i wykonaj 1,5-centymetrowe obustronne nacięcie poniżej wyrostka mieczykowatego przez przeponę, aby otworzyć jamę klatki piersiowej. Przeciąć żebra, aby odsłonić serce, i użyj igły o rozmiarze 23, aby przebić prawą ścianę wolną od komory. Delikatnie dociśnij punkt nakłucia bawełnianym wacikiem, aby zatrzymać krwawienie, a następnie użyj końcówki cewnika, aby przebić komorę przez ranę.

Gdy krzywa jest stabilna, wyreguluj końcówkę cewnika w kierunku drogi odpływu prawej komory. Kliknij wybierz i przeanalizuj, aby zarejestrować skurczowe i rozkurczowe ciśnienie krwi prawej komory, maksymalne tempo wzrostu, wykładniczą stałą czasową relaksacji i tętno przez 10 minut. Następnie przenieś cewnik z serca do pojemnika z solą fizjologiczną.

W porównaniu z grupą Sham, wyższą prędkość szczytową, większy gradient ciśnienia i większą grubość ściany prawej komory uzyskuje się z widoku długiej osi przymostkowej po ośmiu tygodniach od operacji w grupie zwężenia tętnicy płucnej. Dodatkowo funkcja skurczowa prawej komory jest znacznie zmniejszona w grupie zwężenia tętnicy płucnej w porównaniu z grupą Sham, osiem tygodni po operacji. Grupa zwężenia tętnicy płucnej ma wyższe ciśnienie w prawej komorze w skurczu i rozkurczu, a wskaźnik kurczliwości jest zmniejszony w porównaniu z grupą Sham.

Tau prawej komory i maksymalne tempo wzrostu są również większe w grupie zwężenia tętnicy płucnej niż w grupie pozorowanej. Wykazanie, że dysfunkcja prawej komory jest indukowana u myszy po ośmiu tygodniach opaski tętnicy płucnej. Inwazyjne badania hemodynamiczne w prawej komorze wykazują, że częstość akcji serca pozostaje stabilna przed i po monitorowaniu cewnika.

W porównaniu z grupą Sham wymiary prawej komory są znacznie powiększone, a masa prawej komory jest wyższa. Ponadto badanie histologiczne wykazuje, że zwłóknienie serca w obszarze objętym kardiomiocytami jest większe w grupie zwężenia tętnicy płucnej niż w grupie pozorowanej. Najważniejszą częścią zabiegu jest upewnienie się, że tętnica płucna jest prawidłowo i całkowicie oddzielona.

Aby uniknąć nieprawidłowego oddzielenia, punkt separacji powinien znajdować się w pobliżu odgałęzienia tętnicy płucnej, gdzie tkanka łączna między tętnicami będzie luźniejsza. Dzięki tej metodzie zapewniliśmy wygodniejsze i skuteczniejsze podejście do wywoływania przerostu prawej komory. Ogólnie rzecz biorąc, zabieg chirurgiczny i metody oceny są bardzo bezpieczne.