Protokół przewlekłego stresu unieruchamiającego w celu wywołania zachowań podobnych do depresji u myszy

Zacznij od ustawienia oświetlenia pomieszczenia na 200 luksów za pomocą cyfrowego luksomierza. Umieść mysz w oddzielnej klatce co najmniej tydzień przed badaniem i umieść ją w pomieszczeniu testowym na co najmniej 30 minut przed eksperymentem. Delikatnie przytrzymaj ogonek myszy, aby uniknąć napinania myszy, a następnie ostrożnie umieść go na szorstkiej powierzchni.

Przykryj ogranicznik małym białym ręcznikiem, a następnie delikatnie umieść mysz w otworze ogranicznika, tak aby mysz dobrowolnie weszła do ogranicznika. Następnie umieść zamknięcie, aby jak najmocniej przytrzymać mysz, uważając, aby uniknąć uszkodzenia ciała, takiego jak ogon, stopy i jądra. Na koniec, podczas ekspozycji na ogranicznik, mierz masę ciała i spożycie pokarmu co 48 godzin.

Przed badaniem przyzwyczaj myszy do obecności dwóch butelek do picia, jednej zawierającej 0,1 molową sacharozy, a drugiej zawierającej zwykłą wodę przez 48 godzin. Zamień pozycje dwóch butelek po 24 godzinach, aby zmniejszyć wszelkie zakłócenia spowodowane odchyleniem bocznym. Trzeciego dnia pozbawić myszy wody na 24 godziny.

Następnie, w dniu eksperymentu, wystawiaj myszy na działanie dwóch butelek do picia przez sześć godzin. Po trzech godzinach zmień położenie butelek z wodą. Zapisz objętość w mililitrach zużytego roztworu sacharozy i wody, a następnie oblicz powinowactwo zwierzęcia do sacharozy.

Na koniec oblicz preferencję sacharozy jako procent objętości spożycia sacharozy w stosunku do całkowitego spożycia płynu podczas testu. Rozpocznij od wprowadzenia myszy wywołanych przewlekłym stresem unieruchamiającym do pomieszczenia testowego co najmniej 30 minut przed rozpoczęciem testu zawieszenia ogona. Ustaw światło w pomieszczeniu tak, aby przyciemniło je na 50 luksów.

Następnie umieść kamerę w odległości około 40 centymetrów od myszy. Zawieś mysz mocno na poziomym pasku za pomocą taśmy klejącej. Po umieszczeniu myszy na środku pudełka zawieszenia rozpocznij nagrywanie i obserwuj zmiany w zachowaniu nieprzerwanie przez sześć minut.

Jeśli mysz próbuje wspiąć się na ogon, użyj drążka lub ogranicznika wspinaczki, aby jej to uniemożliwić. Pod koniec eksperymentu przenieś mysz do jej domowej klatki i ostrożnie usuń taśmę z jej ogona. Na koniec użyj oprogramowania do śledzenia wideo, aby przeanalizować skumulowany czas okresów nieruchomości.

Wyniki wskazują na zmniejszenie masy ciała w grupie CIS i znacznie mniejsze spożycie pokarmu w czwartym dniu. W porównaniu z grupą kontrolną wykazano zmniejszenie preferencji sacharozy w grupie CIS, podczas gdy nastąpiło znaczne wydłużenie czasu bezruchu i kortykosteronu. Co więcej, dieta uzupełniona glutaminą łagodzi zachowania podobne do depresji, jak pokazano w przypadku masy ciała, spożycia pokarmu, preferencji sacharozy, unieruchomienia i kortykosteronu.