Techniki sekcji zwłok wścieklizny u dużych i małych zwierząt

Pobieranie tkanek do badania wścieklizny wiąże się zarówno z oczywistymi, jak i nieoczywistymi zagrożeniami. Technik musi stosować najbezpieczniejsze dostępne metody i nosić odpowiednie środki ochrony osobistej. Protokoły te zapewniają bezpieczne techniki sekcji zwłok bez użycia elektronarzędzi lub pił, minimalizując produkcję aerozoli.

Protokół dużych zwierząt można również przeprowadzić w terenie. Zastosowanie metody pobierania dużych próbek zwierzęcych w terenie eliminuje wyzwanie związane z transportem głowy zwierzęcia o wadze powyżej 45 kilogramów do laboratorium. Metoda na dużych zwierzętach jest podobna do europejskiego protokołu pobierania próbek z pasażowalnej encefalopatii gąbczastej i może być stosowana do wszelkich badań z wykorzystaniem pnia mózgu i móżdżku.

Aby odzyskać móżdżek i pień mózgu metodą brzuszną, należy ustawić próbkę brzuszną stroną do góry z nosem skierowanym dystalnie w kierunku tylnej części komory bezpieczeństwa biologicznego. Trzymając młotek ortopedyczny w dominującej ręce i dłuto radnego w drugiej ręce, ustaw dłuto pod kątem 45 stopni, tak aby róg był skierowany do dłuta w otworze w kształcie litery V między prawą stroną kości skroniowej i potylicznej. Uderzaj młotkiem w górną część dłuta, aż obie kości się rozdzielą.

I wykonaj cięcie przylegające do kości podstawowo-fenoidalnej. Oddziel kości skroniowe i potyliczne po lewej stronie próbki, jak pokazano poniżej. I użyj dłuta, aby zgiąć obszar V czaszki w dół, aby odsłonić cały obszar rombencefalonowy mózgu.

Następnie użyj nożyczek i kleszczy, aby zgarnąć pień mózgu i móżdżek, usuwając w razie potrzeby wszelkie pozostałe fragmenty tkanki z czaszki. Jeżeli próbka nie pozwala na brzuszne pobranie, należy umieścić próbkę grzbietowo, z nosem skierowanym dystalnie w kierunku tyłu komory bezpieczeństwa biologicznego. I użyj tenaculi guza, aby chwycić lewy mięsień skroniowy zębami tenacula.

Ściśnij rączkę, aby zablokować zęby wokół tkanki i użyj ostrego noża do rzeźbienia, aby przeciąć mięsień skroniowy aż do kości. Obróć próbkę o 180 stopni za pomocą tenaculi i noża i powtórz nacięcie na przeciwległym mięśniu skroniowym, aby odsłonić czaszkę. Przywróć głowę do pierwotnej orientacji i umieść dłuto pod kątem 45 stopni, tak aby róg dłuta znajdował się na środku czaszki na styku kości ciemieniowej i śródciemieniowej.

I uderzaj młotkiem w górną część dłuta, aż w górnej połowie czaszki przy kości ciemieniowej powstanie poziomy otwór. Obróć próbkę o 180 stopni i zrób otwór po przeciwnej stronie czaszki, jak właśnie pokazano. Ustaw głowę zgodnie z potrzebami, aby włożyć czubek dłuta na koniec pierwszego cięcia pod kątem 90 stopni do poziomego otworu i uderzaj dłutem, aż otwór dotrze do kości potylicznej.

W ten sam sposób obrócić próbkę, aby zrobić otwór na przeciwległej kości potylicznej. Otwory w czaszce powinny przypominać odwrócony U. Włóż zęby tenaculi do czaszki na dole u i pociągnij kość do tyłu, aby odsłonić ogonowy koniec mózgu i móżdżku. Następnie użyj nożyczek jako szufelki, aby podważyć cały móżdżek z wnętrza jamy.

I użyj kleszczy tkankowych, aby usunąć pień mózgu z otworu. W przypadku pobierania móżdżku i pnia mózgu u dużych zwierząt należy ustawić próbkę tak, aby grzbietowa część czaszki stykała się z powierzchnią sekcji zwłok. Z ogonową częścią czaszki i otworem wielkim skierowanym w stronę przodu szafy bezpieczeństwa biologicznego.

Chwyć pień mózgu kleszczami. Włóż zmodyfikowany nóż szpilkowy do otworu wielkiego między rdzeniem kręgowym a oponami mózgowymi tak daleko, jak to możliwe, i przeszukaj rdzeń kręgowy, aby oddzielić móżdżek i pień mózgu od opon mózgowo-rdzeniowych. Następnie wyciągnij łodygę z otworu za pomocą kleszczy.

Kiedy nóż zostanie włożony przez otwór wielki, delikatnie ustaw ostrze pod kątem, aby podążać wzdłuż czaszki tak bardzo, jak to możliwe i włóż metalową szpatułkę lub nóż z wystarczająco długą rękojeścią, aby sięgnąć pod mózg do przestrzeni między tkanką nerwową a oponami rdzeniowymi. Sonduj wokół móżdżku, aby upewnić się, że połączenia z oponami rdzeniowymi zostały przerwane. Kiedy opony mózgowe zostaną całkowicie odcięte, przesuń szpatułkę rostralnie i grzbietowo, aby zgarnąć móżdżek.

Następnie zgarnij móżdżek szpatułką. Wszystkie próbki naziemne pobrane z czaszkami w okresie od 31 stycznia 2019 r. do 28 lutego 2019 r. zawierały informacje o obecności szyi i pobranej metodzie sekcji zwłok. W tym czasie przeprowadzono sekcję zwłok 170 głów, w których reprezentowanych było 18 gatunków.

52% zostało prawidłowo pozbawionych głów. Pozostałe miały przyczepione co najmniej jeden kręg, w tym trzy próbki całego ciała. Metodę brzuszną stosowano w 75% przypadków.

Spośród nich szyje były obecne na 49. Zgłoszono trzy duże zwierzęta, a w dwóch przypadkach zastosowano protokół dotyczący dużych zwierząt. Jedna wiewiórka została zgłoszona ze zmiażdżoną czaszką i po prostu odcięcie skóry odsłoniło tkankę mózgową, więc żadna z zademonstrowanych metod nie została użyta.

Tkanki używane do produkcji szkiełek mikroskopowych i/lub ekstrahowane metodami molekularnymi podczas przetwarzania wielu zwierząt pozwalają uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego dzięki zastosowaniu nowych rękawiczek, narzędzi i czystego obszaru roboczego. Zachowaj ostrożność podczas wykonywania tych protokołów, ponieważ próbki mogą być zakażone wirusem wścieklizny lub innymi chorobami odzwierzęcymi. Należy pamiętać, że w próbkach mogą być również obecne ostre przedmioty.