Name: Fizjologiczne sferoidy 3D pochodzące od pacjenta do badań przesiewowych leków przeciwnowotworowych w celu ukierunkowania na rakowe komórki macierzyste (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-05T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 3 s
Description: Odkryj metodę generowania sferoidów 3D pochodzących od pacjenta do badań przesiewowych leków przeciwnowotworowych. Technika ta umożliwia precyzyjną medycynę poprzez identyfikację spersonalizowanych terapii dla chorych na raka jajnika.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca jest wspierana głównie przez DOD OCRP Early Career Investigator Award W81XWH-13-1-0134(GM), DOD Pilot Award W81XWH-16-1-0426 (GM), DOD Investigator Initiated award W81XWH-17-OCRP-IIRA (GM), Rivkin Center for Ovarian Cancer i Michigan Ovarian Cancer Alliance. Badania opisane w tej publikacji były wspierane przez National Cancer Institute of the National Institutes of Health w ramach nagrody numer P30CA046592. CMN jest wspierany przez National Science Foundation Graduate Research Fellowship w ramach grantu nr 1256260. MEB jest wspierany przez stypendium Departamentu Edukacji Graduate Assistance in Areas of National Need (GAANN).

<ol><li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22All+cancers+Source%3A+Globocan%22">All cancers Source: Globocan</a>. , Globocan. http://gco.iarc.fr/today/data/factsheets/cancers/39-All-cancers-fact-sheet.pdf (2018).</li>
<li>Prasad, V., Mailankody, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+and+Development+Spending+to+Bring+a+Single+Cancer+Drug+to+Market+and+Revenues+After+Approval%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Research and Development Spending to Bring a Single Cancer Drug to Market and Revenues After Approval.</a> JAMA Internal Medicine. 177, 1569-1575 (2017).</li>
<li>Raghavan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalized+Medicine+Based+Approach+to+Model+Patterns+of+Chemoresistance+and+Tumor+Recurrence+Using+Ovarian+Cancer+Stem+Cell+Spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Personalized Medicine Based Approach to Model Patterns of Chemoresistance and Tumor Recurrence Using Ovarian Cancer Stem Cell Spheroids.</a> Clinical Cancer Research. 23 (22), 6934-6945 (2017).</li>
<li>Jordan, C. T., Guzman, M. L., Noble, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cancer Stem Cells.</a> New England Journal of Medicine. 355, 1253-1261 (2006).</li>
<li>Ishiguro, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+Characterization+of+an+In+Vitro+Model+of+Ovarian+Cancer+Stem-like+Cells+with+an+Enhanced+Proliferative+Capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Establishment and Characterization of an In Vitro Model of Ovarian Cancer Stem-like Cells with an Enhanced Proliferative Capacity.</a> Cancer Research. 76, 150-160 (2016).</li>
<li>Páez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+Dormancy%3A+A+Model+of+Early+Dissemination+and+Late+Cancer+Recurrence%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cancer Dormancy: A Model of Early Dissemination and Late Cancer Recurrence.</a> Clinical Cancer Research. 18, 645-653 (2012).</li>
<li>Ahmed, N., Stenvers, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Getting+to+Know+Ovarian+Cancer+Ascites%3A+Opportunities+for+Targeted+Therapy-Based+Translational+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Oncology%22%5BJournal%5D)">Getting to Know Ovarian Cancer Ascites: Opportunities for Targeted Therapy-Based Translational Research.</a> Frontiers in Oncology. 3, (2013).</li>
<li>Pradhan, S., Clary, J. M., Seliktar, D., Lipke, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+three-dimensional+spheroidal+cancer+model+based+on+PEG-fibrinogen+hydrogel+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A three-dimensional spheroidal cancer model based on PEG-fibrinogen hydrogel microspheres.</a> Biomaterials. 115, 141-154 (2017).</li>
<li>Varna, M., Bertheau, P., Legrès, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+Microenvironment+in+Human+Tumor+Xenografted+Mouse+Models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Analytical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Tumor Microenvironment in Human Tumor Xenografted Mouse Models.</a> Journal of Analytical Oncology. 3, 159-166 (2014).</li>
<li>Huang, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+integrated+microfluidic+cell+culture+system+for+high-throughput+perfusion+three-dimensional+cell+culture-based+assays%3A+Effect+of+cell+culture+model+on+the+results+of+chemosensitivity+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">An integrated microfluidic cell culture system for high-throughput perfusion three-dimensional cell culture-based assays: Effect of cell culture model on the results of chemosensitivity assays.</a> Lab on a Chip. 13, 1133-1143 (2013).</li>
<li>Zang, R., Li, D., Tang, I. C., Wang, J., Yang, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-Based+Assays+in+High-Throughput+Screening+for+Drug+Discovery%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biotechnology+for+Wellness+Industries%22%5BJournal%5D)">Cell-Based Assays in High-Throughput Screening for Drug Discovery.</a> International Journal of Biotechnology for Wellness Industries. , (2012).</li>
<li>Murphy, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+alternative+in+vivo+drug+screening+methodology%3A+a+single+mouse+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Evaluation of alternative in vivo drug screening methodology: a single mouse analysis.</a> Cancer Research. 76, 5798-5809 (2016).</li>
<li>Hidalgo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+Xenograft+models%3A+An+emerging+platform+for+translational+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Patient-derived Xenograft models: An emerging platform for translational cancer research.</a> Cancer Discovery. 4, 998-1013 (2014).</li>
<li>Damiati, S., Kompella, U. B., Damiati, S. A., Kodzius, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+devices+for+drug+delivery+systems+and+drug+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Microfluidic devices for drug delivery systems and drug screening.</a> Genes. 9, (2018).</li>
<li>Caliari, S. R., Burdick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Practical+Guide+to+Hydrogels+for+Cell+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">A Practical Guide to Hydrogels for Cell Culture.</a> Nature Methods. 14, 69-81 (2016).</li>
<li>Mehta, G., Hsiao, A. Y., Ingram, M., Luker, G. D., Takayama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opportunities+and+challenges+for+use+of+tumor+spheroids+as+models+to+test+drug+delivery+and+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Opportunities and challenges for use of tumor spheroids as models to test drug delivery and efficacy.</a> Journal of Control Release. , (2012).</li>
<li>Mehta, P., Novak, C., Raghavan, S., Ward, M., Mehta, G. Self-Renewal and CSCs In Vitro Enrichment: Growth as Floating Spheres. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMehta%2C+P+%22Cancer+Stem+Cells%3A+Methods+and+Protocols%22">Cancer Stem Cells: Methods and Protocols</a>. Papaccio, G., Desiderio, V. , Springer. New York. 61-75 (2018).</li>
<li>Raghavan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+stable+small+cell+number+three-dimensional+ovarian+cancer+spheroids+using+hanging+drop+arrays+for+preclinical+drug+sensitivity+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecologic+Oncology%22%5BJournal%5D)">Formation of stable small cell number three-dimensional ovarian cancer spheroids using hanging drop arrays for preclinical drug sensitivity assays.</a> Gynecologic Oncology. 138, 181-189 (2015).</li>
<li>Raghavan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+tumor+spheroid+generation+techniques+for+differential+in+vitro+drug+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of tumor spheroid generation techniques for differential in vitro drug toxicity.</a> Oncotarget. 7, 16948-16961 (2016).</li>
<li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+Tumor+Evolution+via+Genomic+Profiling+of+Individual+Tumor+Spheroids+in+a+Malignant+Ascites%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Evaluating Tumor Evolution via Genomic Profiling of Individual Tumor Spheroids in a Malignant Ascites.</a> Scientific Reports. 8, 1-11 (2018).</li>
<li>Silva, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aldehyde+dehydrogenase+in+combination+with+CD133+defines+angiogenic+ovarian+cancer+stem+cells+that+portend+poor+patient+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Aldehyde dehydrogenase in combination with CD133 defines angiogenic ovarian cancer stem cells that portend poor patient survival.</a> Cancer Research. 71, 3991-4001 (2011).</li>
<li>Pulaski, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+alemtuzumab+as+an+anti-myeloid+cell+antiangiogenic+therapy+for+the+treatment+of+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Identifying alemtuzumab as an anti-myeloid cell antiangiogenic therapy for the treatment of ovarian cancer.</a> Journal of Translational Medicine. 7, 49(2009).</li>
<li>Jager, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+enzymatic+and+mechanical+methods+of+dissociation+on+neural+progenitor+cells+derived+from+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Effect of enzymatic and mechanical methods of dissociation on neural progenitor cells derived from induced pluripotent stem cells.</a> Advances in Medical Sciences. 61, 78-84 (2016).</li>
<li>Ivanov, D. P., Grabowska, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spheroid+arrays+for+high-throughput+single-cell+analysis+of+spatial+patterns+and+biomarker+expression+in+3D%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Spheroid arrays for high-throughput single-cell analysis of spatial patterns and biomarker expression in 3D.</a> Scientific Reports. 7, 41160(2017).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

384-dołkowa platforma do zawieszania płytek opadowych do tworzenia sferoid 3D jest łatwym do wdrożenia narzędziem dla każdego laboratorium biologii komórki lub biologii raka. Ta platforma fizjologiczna umożliwia badanie linii komórkowych, a także pierwotnych próbek pacjentów w fizjologicznie istotnych kulturach 3D, umożliwiając jednocześnie wysokoprzepustowe badania przesiewowe leków. Platforma zapewnia również, że warunki hodowli są wysoce przestrajalne, umożliwiając ścisłą kontrolę nad gęstością posiewu, proporcjami ko...

Światowa śmiertelność związana z rakiem osiągnęła liczbę 9,8 miliona zgonów w 2018 roku1, podkreślając potrzebę rozwoju ulepszonych metod terapeutycznych. Niestety, koszty opracowania leków przeciwnowotworowych rosną, a opracowanie pojedynczego leku kosztuje około 650 milionów USD2 wskazuje na potrzebę poprawy strategii opracowywania nowych leków przeciwnowotworowych. Rakowe komórki macierzyste (CSC), które charakteryzują się zwiększoną odpornością na chemoodporność3, zdolnością do samoodnawiania się i zdolnością do zasiewania nowych nowotworów4 są uważane za odpowiedzialne za nawroty nowotworu4, metastasis5, oraz chemoresistance4,6, które przyczyniają się do złośliwości guza, a tym samym do wysokiej liczby zgonów. W raku jajnika komórki te znajdują się wzbogacone w złośliwy płyn wodobrzuszny w jamie otrzewnej, co jest stanem związanym ze złymi wynikami klinicznymi1. Ze względu na złośliwe zdolności CSC do stosowania nowych leków ukierunkowanych na CSC do stosowania w połączeniu z tradycyjnymi chemioterapiami. Istnieje kilka wyzwań, które towarzyszą rozwojowi CSC ukierunkowanych na leki, w tym: 1) trudności w rozszerzaniu i utrzymywaniu CSC in vitro; 2) niedobór próbek pobranych od pacjentów; 3) fizjologiczne znaczenie platformy hodowlanej; oraz 4) niejednorodność wrażliwości na leki między pacjentami. Protokół ten przedstawia implementację platformy hodowli 3D o wysokiej przepustowości, która może przezwyciężyć każde z tych wyzwań. W szczególności system ten pozwala na szybkie badania przesiewowe leków przy użyciu niewielkiej liczby CSC jajników pochodzących od pacjentki i jest wysoce podatny na dalsze techniki analizy. Chociaż nasza platforma jest idealna do badania raka jajnika i CSC, jest również cenna w badaniu innych nowotworów i zróżnicowanych typów komórek w złożonych środowiskach 3D.
Złożone modele trójwymiarowe (3D) są kluczowe w badaniu mikrośrodowiska guza (TME), które jest niszą 3D składającą się z komórek rakowych, nienowotworowych komórek podporowych i białek macierzy zewnątrzkomórkowej (ECM)4. To środowisko 3D skutkuje unikalną morfologią komórki, interakcjami komórka-komórka i komórka-macierz, różnicowaniem komórek, migracją komórek, gęstością komórek i gradientami dyfuzji w porównaniu z tradycyjną hodowlą komórkową 2D in vitro4. Wszystkie te czynniki prowadzą do zróżnicowanej odpowiedzi na lek w obrębie kultur 3D, wykazując zwiększoną oporność na leki i znaczenie fizjologiczne7,8. Ze względu na rolę 3D TME w różnicowaniu CSC i chemooporności, konieczne jest przeprowadzenie badań przesiewowych w kierunku CSC ukierunkowanych na leki w mikrośrodowiskach fizjologicznych. Poprawa fizjologicznego znaczenia platform do badań przesiewowych leków CSC może poprawić badania przesiewowe leków specyficzne dla pacjenta, opracowywanie leków, formułowanie strategii leczenia i ostatecznie wyniki kliniczne. Równie ważne jest, aby platforma wykorzystywana do badań przesiewowych leków była wysokoprzepustowa i kompatybilna z dalszymi metodami analizy, aby zminimalizować koszty, czas i czas tłumaczenia klinicznego obiecujących leków9.
Obecnie, kompleks TME jest najlepiej utrzymany do zastosowań w badaniach przesiewowych leków poprzez modele in vivo, takie jak mysie modele guzów syngenicznych, ksenografty pochodzące z linii komórkowych i modele ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów (PDX)12, ponieważ zapewniają one warunki fizjologiczne. Jednak niska przepustowość tych modeli, a także koszt, czas i umiejętności techniczne, których wymagają, ograniczają ich użyteczność w szybkich, wysokoprzepustowych aplikacjach przesiewowych leków13. Jako alternatywę dla tych modeli in vivo, wiele modeli 3D in vitro wykorzystujących hydrożele8, hodowlę w urządzeniach mikroprzepływowych lub urządzeniach "organ-on-a-chip"10,14 oraz kultury nieprzylegające3,8, ze względu na ich niską barierę wejścia pod względem kosztów, czasu i wymaganego zestawu umiejętności.
Platformy do hodowli hydrożelu są korzystne w precyzyjnej kontroli nad składem matrycy, właściwościami mechanicznymi i strukturą matrycy15; jednak mogą hamować hodowlę komórek o dużej gęstości14. Dodatkowo, pobieranie komórek z hydrożeli może komplikować dalszą analizę, ze względu na potencjalnie szkodliwe skutki metod zbierania15. Z drugiej strony urządzenia mikroprzepływowe to urządzenia w mikroskali, które pozwalają na wykrywanie danych wyjściowych w tym samym urządzeniu i hodowlę komórek w fizjologicznie odpowiednich skalach przy minimalnym zużyciu odczynników, skróconym czasie reakcji, zminimalizowanym marnotrawstwie i szybkiej dyfuzji14. Te cechy sprawiają, że są to obiecujące platformy do badania toksyczności, skuteczności i farmakokinetyki leków. Jednak wyzwania związane z wydajną, wymierną, powtarzalną i przyjazną dla użytkownika hodowlą komórek 3D, a także nieporęcznymi i kosztownymi systemami pompowania ograniczyły zastosowania mikroprzepływowe w badaniach o wysokiej przepustowości10. Wydajne konfiguracje detekcji i potencjalnie trudna implementacja w różnych dziedzinach utrudniły również powszechne przyjęcie systemów mikroprzepływowych10.
Przeciwnie, sferoidy generowane w warunkach nieprzylegających w mieszalnikach wirujących (nutatorach), bardzo niskich płytkach mocujących i wiszących kroplach nie zawierają zdefiniowanych przez użytkownika komponentów matrycy. Metodologie te są szczególnie istotne dla badania raka jajnika, ponieważ warunki nieprzylegające są reprezentatywne dla warunków, w których sferoidy rosną w jamie otrzewnej5. W ramach tych nieprzylegających metod hodowli wykazano, że nutatory i sferoidy wiszących kropli wykazują wyższe zagęszczenie, przebudowę i chemoodporność w porównaniu ze sferoidami generowanymi na bardzo niskich płytkach mocujących, co sugeruje zwiększone znaczenie fizjologiczne16,17,18,19. Ze względu na zwiększoną zdolność do wysokoprzepustowych badań przesiewowych z mniejszych rozmiarów studni i minimalną wymaganą liczbę komórek, generowanie sferoid w wiszących płytkach kroplowych jest idealną platformą do badań przesiewowych leków. Tutaj prezentujemy przestrajalną platformę fizjologiczną 3D w 384-dołkowych wiszących płytkach kroplowych, która jest łatwa do wdrożenia i wysoce podatna na dalszą analizę, dzięki czemu idealnie nadaje się do wysokoprzepustowych badań przesiewowych leków w kierunku raka jajnika i CSC jajników.
Nasza platforma fizjologiczna 3D zapewnia wszystkie zalety hodowli 3D, w tym fizjologiczne kontakty komórka-komórka, gradienty dyfuzji, gęstości komórek i naturalnie wytwarzane białka ECM, które mogą przyczynić się do realistycznych odpowiedzi na leki16,17,18,19. Dodatkowo, generując te sferoidy z CSC pochodzącymi od pacjenta, jesteśmy w stanie określić specyficzne dla pacjenta reakcje na leki1 z wieloma technicznymi powtórzeniami jednocześnie, aby przezwyciężyć niejednorodność, którą można znaleźć w próbkach guza pacjenta20. Ponadto wykazano, że hodowla 3D poprawia utrzymanie populacji CSC3,16, a zatem jest reprezentatywna dla wzbogaconych populacji CSC w ascites7. To, w połączeniu z łatwą analizą dalszą, w tym analizą żywotności i proporcji CSC za pomocą cytometrii przepływowej, pozwala na optymalną ocenę CSC pod kątem skuteczności leku. Wreszcie, ta platforma fizjologiczna jest kompatybilna z obrazowaniem w wielu punktach czasowych podczas eksperymentu, oceną śmierci i proliferacji komórek, organizacją i morfologią komórek za pomocą immunohistochemii, rozpuszczalną sygnalizacją za pomocą ELISA na kondycjonowanej pożywce, fenotypami komórek z cytometrią przepływową i ekspresją genów po PCR.

<table><tbody><tr><td>0,25% trypsyna-EDTA</td><td>Gibco</td><td>ILT25200056</td><td></td></tr><tr><td>10 ml pipeta serologiczna</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11E</td><td></td></tr><tr><td>10 000 cSt Olej Si</td><td>Millipore Sigma</td><td>63148-62-9</td><td>Służy do powlekania formy szyku sferoidalnego w celu ułatwienia usuwania żeli do przetwarzania tkanek, takich jak Histogel, z formy.</td></tr><tr><td>Naczynie do hodowli tkankowych 100 mm</td><td>Thermo Scientific 130182</td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 ml rurka stożkowa</td><td>Celltreat</td><td>FL4021</td><td></td></tr><tr><td>1x DMEM do podłoża wolnego od surowicy</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>1x F12 do podłoża wolnego od surowicy</td><td>Gibco</td><td>11765-054</td><td></td></tr><tr><td>1x sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS)</td><td>Gibco</td><td>ILT10010023</td><td></td></tr><tr><td>4',6- diamidino-2-fenyloindol (DAPI)</td><td>Thermo Fisher</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>40 &mikro; m filtr</td><td>Fisher Scientific</td><td>22363547</td><td></td></tr><tr><td>6-dołkowa płytka</td><td>Fisher Scientific</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Innovative Cell Technologies Inc.</td><td>1449</td><td>Delikatny enzym odrywający komórki złożony z enzymów proteolitycznych i kolagenolitycznych.</td></tr><tr><td>ACK Lysing Buffer</td><td>Thermo Scientific</td><td>A1049201</td><td></td></tr><tr><td>alamarBlue</td><td>Invitrogen</td><td>DAL1025</td><td>barwnik Resazurin stosowany do pomiaru żywotności i proliferacji komórek na podstawie ich zdolności do redukcji resazuryny do rezorufiny, która jest wysoce fluorescencyjna.</td></tr><tr><td>Zestaw do oznaczania ALDEFLUOR</td><td>Stem Cell Tech</td><td>1700</td><td>Kit do identyfikacji komórek macierzystych i progenitorowych, które wyrażają wysoki poziom dehydrogenazy aldehydowej , wskaźnika rakowych komórek macierzystych. Zestaw składa się z odczynnika ALDEFLUOR, DEAB, kwasu solnego, dimetylosulfotlenku i buforu do oznaczania ALDEFLUOR.</td></tr><tr><td>ALDEFLUOR Dietyloaminobenzaldehyd (DEAB)</td><td>Stem Cell Tech</td><td>1705</td><td>Dietyloaminobenzaldehyd (DEAB) jest inhibitorem izoenzymów ALDH, stosowanym do określania nieswoistego barwienia ALDH.</td></tr><tr><td>Kamera CCD Andor iXon x3</td><td>Oxford</td> <td>Instruments-Antybiotyki</td><td></td></tr> <tr><td>i leki przeciwgrzybicze</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>Izotyp APC IgG2b</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-092-217</td><td>Kontrola izotypu w celu ilościowego określenia niespecyficznego barwienia przeciwciał IgG2b.</td></tr><tr><td>B27 Suplement</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr>podstawowe <td>technologie komórek macierzystych</td><td>czynnika wzrostu fibroblastów</td><td>78003.1</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawki do insuliny BD Lo-Dose U-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-79</td><td></td></tr><tr><td>Czytnik mikropłytek BioTek Synergy HT</td><td>BioTek</td><td>7091000</td><td></td></tr><tr><td>CD133-APC</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-113-184</td><td>Przeciwciało fluorescencyjne skierowane przeciwko CD133, markerowi rakowych komórek macierzystych.</td></tr><tr><td>cellSens Dimension Software</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cisplatin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4394</td><td>Środek chemioterapeutyczny na bazie platyny, który działa jako środek alkilujący, który zaburza DNA.</td></tr><tr><td>DAPI (4',6-diamidino-2-fenyloindol, dichlorowodorek)</td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>Naskórkowy czynnik wzrostu</td><td>Gibco</td><td>PHG0311</td><td></td></tr><tr><td>EVOS XL System obrazowania komórek rdzeniowych</td> Life <td>Technologies</td><td>AME3300</td><td></td></tr><tr><td>Surowica bydlęca płodu - premium (FBS)</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll 400</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4375</td><td></td></tr><tr><td>Hemacytometr</td><td>Hausser Scientific</td><td>1490</td><td></td></tr><tr><td>Histogel</td><td>Thermo Scientific</td><td>HG-4000-012</td><td>Żel do przetwarzania tkanek, który może przenikać i utrzymywać próbkę w żelu, jednocześnie zapobiegając przebarwieniom wokół próbki po barwieniu.</td></tr><tr><td>Mezenchymalne komórki macierzyste pochodzące z ludzkiej tkanki tłuszczowej</td><td>Lonza</td><td>PT-5006</td><td></td></tr><tr><td>Ludzkie komórki śródbłonka mikronaczyniowego</td><td>Lonza</td><td>CC2543</td><td></td></tr><tr><td>Suplement insuliny-transferyny-selenu</td><td>Gibco</td><td>51500-056</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw żywotności żywej/martwej</td><td>Zestaw Invitrogen</td><td>L3224</td><td>do fluorescencyjnego wykrywania żywych (kalceina-AM) i martwych komórek (Ethidium Homodimer-1).</td></tr><tr><td>MEM Aminokwasy endogenne</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>Oprogramowanie MetaMorph 7.8</td><td>Urządzenia molekularne-Olympus</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>IX81 Odwrócony mikroskop konfokalny</td><td>Olympus-Olympus</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>IX83 Odwrócony mikroskop badawczy</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Thomas Scientific</td><td>7315D35</td><td>Paski z polimeru termoplastycznego, które służą do ograniczania parowania kropel w wiszących płytkach kroplowych, jednocześnie umożliwiając wymianę gazową.</td></tr><tr><td>Perfecta 3D 384 Dobrze wiszące płytki kroplowe</td><td>3D Biomatrix</td><td>HDP1384-8</td><td>Dostępne przez Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>falloidin AlexaFluor488</td><td>Invitrogen</td><td>A12379</td><td>Phalloidin to peptyd do fluorescencyjnego znakowania F-aktyny w utrwalonych komórkach.</td></tr><tr><td>ProJet 3500 HD Max</td><td>3D</td> <td>Systems-Drukarka</td> <td>3D</td></tr><tr><td>Sterylna woda DI</td><td>Fisher Scientific</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td>Barwnik azowy używany do rozróżniania żywych i martwych komórek na podstawie jego zdolności do przechodzenia przez uszkodzoną błonę martwych komórek, ale nie przez nienaruszoną błonę żywych komórek.</td></tr><tr><td>VisiJet M3 Crystal</td><td>3D</td><td></td> <td>Systems-Biokompatybilny materiał polimerowy do druku 3D.</td></tr><tr><td>Skaner konfokalny Yokogawa CSU-X1</td><td>Yokogawa</td><td>-</td><td></td></tr></tbody></table>

fizjologiczne sferoidy 3d pochodzące od pacjenta do badań przesiewowych leków przeciwnowotworowych w celu ukierunkowania na rakowe komórki macierzyste

Physiologic Patient Derived 3D Spheroids for Anti-neoplastic Drug Screening to Target Cancer Stem Cells

W tym protokole opisujemy procedurę generowania sferoid guza w 384-dołkowych wiszących kropelkach, aby umożliwić wysokoprzepustowe badania przesiewowe leków przeciwnowotworowych w fizjologicznie reprezentatywnym mikrośrodowisku. Przedstawiamy tworzenie się sferoid komórek macierzystych raka pochodzących od pacjenta, a także manipulację tymi sferoidami w celu dokładnej analizy po leczeniu farmakologicznym. W szczególności opisujemy zbiór danych dotyczących morfologii sferoidów, proliferacji, żywotności, toksyczności leków, fenotypu komórek i lokalizacji komórek. Protokół ten koncentruje się w dużej mierze na technikach analizy, które można łatwo wdrożyć za pomocą 384-dołkowej platformy wiszącej kropli, dzięki czemu idealnie nadaje się do wysokoprzepustowych badań przesiewowych leków. Chociaż podkreślamy znaczenie tego modelu w badaniach nad rakiem jajnika i badaniami nad rakowymi komórkami macierzystymi, platforma 384-well jest otwarta na badania nad innymi typami nowotworów i modelami chorób, rozszerzając użyteczność platformy na wiele dziedzin. Przewiduje się, że dzięki poprawie szybkości spersonalizowanych badań przesiewowych leków i jakości wyników badań przesiewowych dzięki łatwym do wdrożenia fizjologicznie reprezentatywnym kulturom 3D, platforma ta pomoże w opracowaniu nowych terapii i strategii leczenia specyficznych dla pacjenta, a tym samym będzie miała szeroki wpływ kliniczny.

Sferoidy utworzone z linii komórkowych lub CSC wywodzących się od pacjentów mogą być formowane z różnej liczby komórek w kropelkach zwisających (Rysunek 2A). Sferoidy tworzą się niezawodnie przy użyciu nawet 10 komórek na studzienkę, co pozwala na oszczędne wykorzystanie rzadkich próbek pacjentów. Komórki w tych sferoidach są otoczone innymi komórkami w trzech wymiarach, tak jak ma to miejsce in vivo, co umożliwia fizjologiczne kontakty międzykomórkowe i fizjologiczne tempo dyfuzji. Komórki ...

Ten protokół opisuje generowanie sferoid pochodzących od pacjentów oraz dalszą analizę, w tym kwantyfikację proliferacji, testy cytotoksyczności, cytometrię przepływową, barwienie immunofluorescencyjne i obrazowanie konfokalne, w celu oceny potencjału kandydatów na leki jako terapii przeciwnowotworowych. Protokół ten wspiera medycynę precyzyjną w identyfikacji specyficznych leków dla każdego pacjenta i stadium choroby.

Fizjologiczne sferoidy 3D pochodzące od pacjenta do badań przesiewowych leków przeciwnowotworowych w celu ukierunkowania na rakowe komórki macierzyste

In this protocol, we outline the procedure for generation of tumor spheroids within 384-well hanging droplets to allow for high-throughput screening of ...

Nasz protokół zapewnia prostą metodę hodowli komórek 3D i jest wysoce podatny na dalszą analizę. Ułatwia to ocenę niejednorodnych próbek pobranych od pacjentów i ich specyficznych reakcji na leki. Zaletą tej techniki jest to, że sferoidy mogą być tworzone z małej liczby komórek, co pozwala zarówno na zachowanie rzadkich próbek pierwotnych, jak i na wysokoprzepustowe badania przesiewowe w celu uzyskania specyficznych dla pacjenta odpowiedzi na leki.Model wiszącej kropli tworzy środowisko fizjologiczne z dyfuzją leków 3D i odpowiada za stadium nowotworu. Pozwala to na opracowanie terapii celowanych i terapii dostosowanych do potrzeb pacjenta. Metoda ta jest idealna do badania raka jajnika, heterogeniczności i rozwoju oporności na chemioterapię.Jednak może być również wykorzystywany do badania innych nowotworów i populacji komórek opornych na leki. Podczas galwanizacji sferoid ważne jest, aby pipetować precyzyjne objętości. Zapewnia to spójność między sferoidami.Sferoidy i odpowiadające im kropelki są z natury kruche i łatwo je zgubić bez odpowiedniej obsługi, dlatego pokażemy, jak prawidłowo platerować, konserwować i analizować wiszącą płytkę. Procedurę tę zademonstruje Michael Bregenzer, doktorant z naszego laboratorium. Zacznij od napełnienia każdej studzienki sześciodołkowej płytki czterema do pięciu mililitrami dejonizowanej wody w autoklawie i umieszczeniu wiszącej płytki kroplowej między pokrywką a dnem płytki.Dodaj od 800 do 1000 mikrolitrów wody wokół krawędzi wiszącej płytki, aby zapewnić wilgotne środowisko i zminimalizować parowanie. Następnie zbierz komórki wyhodowane w 2D, odłączając je trypsyną, a następnie dodając sześć lub osiem mililitrów pożywki zawierającej FBS. Odessać komórki za pomocą pipety serologicznej o pojemności 10 mililitrów i umieścić je w stożkowej probówce o pojemności 15 mililitrów.Użyj hemocytometru, aby policzyć komórki. Przygotować zawiesinę komórek zgodnie z instrukcjami zawartymi w manuskrypcie i delikatnie wymieszać pipetą, aby zapewnić jednorodne rozprowadzenie. Umieść końcówkę pipety w studzience pod kątem 45 stopni i odpipetuj 20 mikrolitrów zawiesiny do każdej wiszącej kropli.Umieść z powrotem pokrywkę płytki sześciodołkowej i użyj rozciągliwego paska z tworzywa termoplastycznego, aby uszczelnić krawędzie. Inkubować w standardowym inkubatorze nawilżanym dwutlenkiem węgla i podawać wiszące krople co dwa do trzech dni, dodając od dwóch do trzech mikrolitrów pożywki do hodowli komórkowej do każdej studzienki zawierającej sferoidę. Aby określić ilościowo proliferację i żywotność komórek, dodaj dwa mikrolitry przefiltrowanego roztworu na bazie rezazuryny do studzienek przeznaczonych do analizy proliferacji i inkubuj zgodnie z instrukcjami manuskryptu.Po okresie inkubacji otwórz wiszącą kanapkę z kroplami w komorze bezpieczeństwa biologicznego i przynieś płytkę 384-dołkową z nadal założoną pokrywką do czytnika płytek. Umieść go w czytniku płytek i odczytaj tabliczkę. Zapisz eksperyment w wyskakującym okienku i wyeksportuj dane do arkusza kalkulacyjnego.Umieść płytkę z powrotem w sześciodołkowej podstawie i umieść ją w inkubatorze. Po odczytaniu wszystkich punktów czasowych na dany dzień, przed inkubacją ponownie zamknąć płytkę. Aby przygotować sferoidy do analizy cytometrii przepływowej, użyj pipety o pojemności 1000 mikrolitrów, aby zebrać je z każdej studzienki i umieścić w stożkowej probówce o pojemności 15 mililitrów w celu dezagregacji.Podwielokrotną zawiesinę komórek do pięciu mikroprobówek wirówkowych tak, aby każda probówka zawierała co najmniej 50 000 komórek. Odwirować probówki o stężeniu 400 razy G przez pięć minut w mikrowirówce, następnie odessać supernatant i ponownie zawiesić granulki w 100 mikrolitrach buforu aldefluorowego. Oznacz probówki zgodnie ze wskazówkami rękopisu.Dodać 0,5 mikrolitra przeciwciała izotypu APC do probówki APC ISO i jeden mikrolitr przeciwciała CD133 do probówki ALDH CD133. Następnie dodaj pięć mikrolitrów odczynnika DEAB i 0,5 mikrolitra ALDH do probówki DEAB i jeden mikrolitr ALDH do probówki ALDH CD133. Wiruj wszystkie probówki przez kilka sekund i inkubuj je w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 45 minut.Po inkubacji ponownie zwirować wszystkie probówki i odwirować je w temperaturze 400 razy G przez pięć minut. Oznacz probówki FACS zgodnie ze wskazówkami manuskryptu i napełnij izolowany pojemnik z pianki lodem. Odessać supernatant z probówek do mikrowirówek.Następnie ponownie zawiesić niezabarwioną kontrolę w 400 mikrolitrach buforu FACS, a resztę komórek w 400 mikrolitrach buforu FACS DAPI. Umieść probówki na lodzie, aż będzie można je przeanalizować za pomocą cytometru przepływowego. Użyj FlowJo do analizy danych z cytometru przepływowego.Kliknij dwukrotnie niezabarwiony plik i ustaw oś Y na wysokość rozrzutu bocznego lub SSCH, a oś X na wysokość rozproszenia do przodu lub FSCH. Kliknij przycisk T obok każdej osi, aby dostosować skalę i zmaksymalizować separację między różnymi populacjami komórek. Następnie kliknij przycisk Bramkowanie wielokątów, narysuj bramę wielokątną wokół populacji komórek i oznacz populację Komórki.Kliknij dwukrotnie zaludnienie komórki w przestrzeni roboczej, a następnie zmień oś FSC na szerokość FSC, a oś SSC na wysokość FSC. Wybierz bramkę prostokątną, aby narysować prostokąt tylko wokół gęstej populacji komórek po lewej stronie, obejmujący całą oś Y. Oznacz tę bramkę jako pojedyncze komórki.Następnie kliknij prawym przyciskiem myszy i skopiuj te komórki do zagnieżdżonej bramy pojedynczych komórek i wklej je pod każdą próbką w obszarze roboczym. Kliknij dwukrotnie bramkę pojedynczych komórek zagnieżdżoną pod próbką DAPI, aby wyświetlić populację pojedynczych komórek z tej probówki z próbką. Zmień kanał osi FSC na kanał obszaru DAPI i zmień kanał osi SSC na histogram.Kliknij przycisk T obok osi DAPI i kliknij Dostosuj oś, aby dostosować skalę i zmaksymalizować separację między dodatnimi i ujemnymi pikami DAPI. Kliknij Zastosuj w wyskakującym okienku i wybierz przycisk Bramka zasięgu. Rozprowadź go na ujemnym piku DAPI i oznacz tę bramkę Live Cells.Skopiuj bramkę Live Cells i wklej ją pod bramką Single Cells, pod probówkami APC ISO DEAB i ALDH CD133, aby wybrać tę samą część żywych komórek w każdej probówce. Następnie kliknij dwukrotnie populację aktywnych komórek zagnieżdżoną w przykładowym pliku ISO APC i przełącz oś X na obszar ALDH, a oś Y na obszar APC. Zastosuj bramę kwadrantową i dostosuj przecięcie bramy tak, aby około 0,5% populacji leżało w lewym górnym rogu okna działki.Następnie nazwij kwadranty zgodnie z potrzebami, a następnie skopiuj i wklej bramki kwadrantowe do populacji żywych komórek zagnieżdżonej w pliku DEAB i dostosuj linię pionową tak, aby około 0,15% populacji komórek leżało w dodatnim kwadrancie ALDH. Na koniec skopiuj i wklej bramki kwadrantowe do plików ALDH CD133 Populacja żywych komórek i ocena proporcji komórek macierzystych raka w oparciu o proporcje ALDH i CD133. Protokół ten może być stosowany do wysokoprzepustowej analizy nowotworowych komórek macierzystych pochodzących od pacjentów.Zaledwie 10 komórek na studzienkę może tworzyć niezawodne sferoidy, a wraz z proliferacją komórek sferoidy powiększają się. Zdolność proliferacji można łatwo określić ilościowo za pomocą testu florescencji na bazie resazuryny. Wpływ leków na morfologię sferoidów można zobrazować za pomocą obrazowania z kontrastem fazowym i określić ilościowo, porównując kwiatostan resazuryny w komórkach nieleczonych i leczonych.Śmierć komórki można potwierdzić poprzez dodanie Calceiny-AM i homodimeru etydyny I do sferoidów, a następnie obrazowanie pod mikroskopem konfokalnym. Wreszcie, sferoidy mogą być zbierane i dyspergowane w zawiesinie pojedynczych komórek w celu analizy za pomocą cytometrii przepływowej, co umożliwia określenie skuteczności różnych terapii lekowych na określonych populacjach komórek. Aby uniknąć utraty kropel, parowania pożywki i zmian wielkości sferoidów, ważne jest, aby ostrożnie obchodzić się z płytkami, pipetować z precyzją i całkowicie uszczelnić wiszące płytki.Aby ocenić zmiany w ekspresji genów i rozpuszczalnej sygnalizacji spowodowane leczeniem farmakologicznym, sekwencjonowanie RNA pojedynczej komórki i testy immunoenzymatyczne mogą być wykorzystane w celu ułatwienia rozwoju terapii. Technika ta pozwala badaniom w dziedzinie onkologii, medycyny precyzyjnej i opracowywania leków badać heterogeniczność wewnątrz i między pacjentami, a także oporność na chemioterapię dzięki wysokoprzepustowym badaniom przesiewowym leków w małych biopsjach. Podczas wykonywania tego protokołu należy pamiętać o noszeniu wszystkich standardowych środków ochrony osobistej.W tym rękawice, okulary ochronne, fartuchy laboratoryjne, spodnie i buty z zakrytymi palcami.

physiologic-patient-derived-3d-spheroids-for-anti-neoplastic-drug

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Badania nad rakiem

Przedstawiono protokół do zrobotyzowanego drukowania sferoid komórek rakowych na wysokoprzepustowej 96-dołkowej płytce przy użyciu wodnego systemu dwufazowego.

Zrobotyzowana produkcja sferoid komórek rakowych z wodnym dwufazowym systemem do testowania leków

Identyfikacja nowych celów leków, które przechodzą od testów przedklinicznych do badań na ludziach, jest priorytetem naukowym. W tym celu opisujemy tutaj podejście genomiki funkcjonalnej do badania wpływu wyczerpania genów na sferoidy linii komórek nowotworowych, które bardziej odpowiednio modelują nowotwory u ludzi in vivo.

Wykorzystanie badań przesiewowych genomiki funkcjonalnej do identyfikacji potencjalnie nowych celów leków w hodowlach sferoidalnych komórek nowotworowych

Opisujemy ewolucję trójwymiarowego modelu in vitro opartego na sferoidach, który umożliwia nam przetestowanie obecnego standardu eksperymentalnych schematów terapii raka płaskonabłonkowego głowy i szyi na liniach komórkowych, mając na celu ocenę podatności i odporności na terapię na pierwotnych komórkach z próbek ludzkich w przyszłości.

Testowanie terapii w sferoidalnym modelu hodowli komórkowej 3D raka płaskonabłonkowego głowy i szyi

W szerokim zakresie wskazań chorobowych, bardziej fizjologicznie istotne modele są opracowywane i wdrażane do programów odkrywania leków. Opisany tutaj nowy system modelowy pokazuje, w jaki sposób trójwymiarowe sferoidy nowotworowe mogą być hodowane i badane przesiewowo w wysokowydajnym systemie opartym na płytkach 1536-dołkowych w celu poszukiwania nowych leków onkologicznych.

Generowanie wysokoprzepustowych trójwymiarowych sferoid nowotworowych do badań przesiewowych leków

Ten protokół jest przeznaczony do oceny immunoterapeutycznej cytotoksyczności przekierowanych komórek T (komórek CAR T) przeciwko komórkom rakowym (sferoidom) o strukturze 3D w czasie rzeczywistym.

Test zabijania sferoidów za pomocą limfocytów CAR T

Optyczna tomografia koherentna (OCT), technologia obrazowania trójwymiarowego, została wykorzystana do monitorowania i charakteryzowania kinetyki wzrostu sferoid wielokomórkowych guzów. Wykazano precyzyjną wolumetryczną kwantyfikację sferoid guza przy użyciu metody liczenia wokseli oraz bezznacznikowe wykrywanie martwych tkanek w sferoidach w oparciu o wewnętrzny kontrast tłumienia optycznego.

Podłużne monitorowanie morfologiczne i fizjologiczne trójwymiarowych sferoid nowotworowych za pomocą optycznej koherentnej tomografii

Powstaje nowy trójwymiarowy model sferoidalny oparty na heterotypowym oddziaływaniu komórek nowotworowych i fibroblastów zrębu. Tutaj prezentujemy kokulturę komórek nowotworowych i fibroblastów zrębu, obrazowanie poklatkowe i mikroskopię konfokalną w celu wizualizacji powstawania sferoid. Ten trójwymiarowy model stanowi istotną platformę do badania interakcji między guzem a zrębem i testowania terapii przeciwnowotworowych.

Nowatorski, modulowany fibroblastami zrębu model sferoidalny 3D guza do badania interakcji guz-zręb i odkrywania leków

Ten protokół przedstawia nowatorski, solidny i powtarzalny system hodowli do generowania i hodowania trójwymiarowych sferoidów z komórek gruczolakoraka jelita grubego Caco2. Wyniki stanowią pierwszy dowód na słuszność koncepcji tego podejścia do badania biologii nowotworowych komórek macierzystych, w tym odpowiedzi na chemioterapię.

Trójwymiarowy model sferoid do badania komórek macierzystych raka jelita grubego

Obecny protokół opisuje generowanie modeli hodowli 3D guzów z pierwotnych komórek nowotworowych i ocenę ich wrażliwości na leki za pomocą testów żywotności komórek i badań mikroskopowych.

Ustalanie trójwymiarowych sferoid na podstawie próbek guza pochodzących od pacjentów i ocena ich wrażliwości na leki

Ten artykuł demonstruje ustandaryzowaną metodę konstruowania trójwymiarowych sferoid nowotworowych. Opisano również strategię obserwacji sferoidy i analizy głębokiego uczenia opartego na obrazach przy użyciu zautomatyzowanego systemu obrazowania.

Generowanie sferoid 3D guza do badań oceny leków

Tutaj prezentujemy metodę identyfikacji związków, które modulują mechanizm ADCC, ważny mechanizm zabijania komórek nowotworowych przez przeciwciała przeciwnowotworowe. Działanie cytotoksyczne komórek NK mierzy się w sferoidach komórek raka piersi w obecności trastuzumabu. Analiza obrazu identyfikuje żywe i martwe komórki zabójcze i docelowe w sferoidach.

Kwantyfikacja cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał w modelu sferoidalnym guza: zastosowanie do odkrywania leków

Odkryj metodę generowania sferoidów 3D pochodzących od pacjenta do badań przesiewowych leków przeciwnowotworowych. Technika ta umożliwia precyzyjną medycynę poprzez identyfikację spersonalizowanych terapii dla chorych na raka jajnika.

Fizjologiczne sferoidy 3D pochodzące od pacjenta do badań przesiewowych leków przeciwnowotworowych w celu ukierunkowania na rakowe komórki macierzyste (Wideo) | JoVE Journal

Fizjologiczne sferoidy 3D pochodzące od pacjenta do badań przesiewowych leków przeciwnowotworowych w celu ukierunkowania na rakowe komórki macierzyste

Przeglądaj więcej filmów