Name: Wykonanie stolika mikroskopowego do obserwacji pionowej z funkcją kontroli temperatury (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 21 s
Description: Naucz się budowy stolika mikroskopowego z kontrolą temperatury do obserwacji pionowej próbek biologicznych. Ta metoda umożliwia badanie dynamiki organizmów pod wpływem grawitacji i zmian temperatury.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy nie mają żadnych podziękowań.

<ol><li>Drum, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+Microscope+Observations+of+Diatos%5BTitle%5D)+AND+%22Osterreichische+Botanische+Zeitschrift%22%5BJournal%5D)">Electron Microscope Observations of Diatos.</a> Osterreichische Botanische Zeitschrift. 116, 321(1969).</li>
<li>McBride, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparing+Random+Distributions+of+Datom+Values+on+Microscope+Slides%5BTitle%5D)+AND+%22Limnology+and+Oceangraphy%22%5BJournal%5D)">Preparing Random Distributions of Datom Values on Microscope Slides.</a> Limnology and Oceangraphy. 33, 1627-1629 (1988).</li>
<li>Liu, X. Y., Lu, Z., Sun, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orientation+Control+of+Biological+Cells+Under+Inverted+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE-ASME+Transactions+on+Mechatronics%22%5BJournal%5D)">Orientation Control of Biological Cells Under Inverted Microscopy.</a> IEEE-ASME Transactions on Mechatronics. 16, 918-924 (2011).</li>
<li>Kahle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+a+Compact%2C+Easy-to-Use+Inverted+Fluorescence+Microscope%5BTitle%5D)+AND+%22American+Laboratory%22%5BJournal%5D)">Applications of a Compact, Easy-to-Use Inverted Fluorescence Microscope.</a> American Laboratory. 43, 11-14 (2011).</li>
<li>Prunet, N., Jack, T. P., Meyerowitz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+confocal+imaging+of+Arabidopsis+flower+buds%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Live confocal imaging of Arabidopsis flower buds.</a> Developmental Biology. , 114-120 (2016).</li>
<li>Nimchuk, Z. L., Perdue, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+Imaging+of+Shoot+Meristems+on+an+Inverted+Confocal+Microscope+Using+an+Objective+Lens+Inverter+Attachment%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Live Imaging of Shoot Meristems on an Inverted Confocal Microscope Using an Objective Lens Inverter Attachment.</a> Frontiers in Plant Science. 8, 10(2017).</li>
<li>Hedde, P. N., Malacrida, L., Ahrar, S., Siryaporn, A., Gratton, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((sideSPIM+-+selective+plane+illumination+based+on+a+conventional+inverted+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">sideSPIM - selective plane illumination based on a conventional inverted microscope.</a> Biomedical Optics Express. 8, 3918-3937 (2017).</li>
<li>Crowe, W. E., Wills, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+Method+for+Monitoring+Changes+in+Cell+Height+using+Fluorescent+Microbeads+and+an+Ussing-type+Chamber+for+the+Inverted+Microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Archiv-Europian+journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">A simple Method for Monitoring Changes in Cell Height using Fluorescent Microbeads and an Ussing-type Chamber for the Inverted Microscope.</a> Pflugers Archiv-Europian journal of Physiology. , 349-357 (1991).</li>
<li>Bavister, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Minichamber+Device+for+Maintaining+a+Constant+Carbon-Dioxide+in+Air+Atmosphere+during+Prolonged+Culture+of+Cells+on+the+Stage+of+an+Inverted+Microscope%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">A Minichamber Device for Maintaining a Constant Carbon-Dioxide in Air Atmosphere during Prolonged Culture of Cells on the Stage of an Inverted Microscope.</a> In Vitro Cellular & Developmental Biology. 24, 759-763 (1988).</li>
<li>Makler, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+New+version+of+the+10-MU-M+Chamber+and+its+use+for+Semen+Analysis+with+Inverted+Microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Andrology%22%5BJournal%5D)">A New version of the 10-MU-M Chamber and its use for Semen Analysis with Inverted Microscope.</a> Archives of Andrology. 13, 195-197 (1984).</li>
<li>Xu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flexible+microassembly+methods+for+micro%2Fnanofluidic+chips+with+an+inverted+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Microelectronic+Engineering%22%5BJournal%5D)">Flexible microassembly methods for micro/nanofluidic chips with an inverted microscope.</a> Microelectronic Engineering. 97, 1-7 (2012).</li>
<li>Datyner, N. B., Gintant, G. A., Cohen, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Versatile+Temperature+Controlled+Tissue+Bath+for+Studies+of+Isolated+Cells+using+an+Inverted+Microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Archive-+Europian+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Versatile Temperature Controlled Tissue Bath for Studies of Isolated Cells using an Inverted Microscope.</a> Pflugers Archive- Europian Journal of Physiology. 403, 318-323 (1985).</li>
<li>Claudet, C., Bednar, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magneto-optical+tweezers+built+around+an+inverted+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Optics%22%5BJournal%5D)">Magneto-optical tweezers built around an inverted microscope.</a> Applied Optics. 44, 3454-3457 (2005).</li>
<li>Yamaoka, N., Suetomo, Y., Yoshihisa, T., Sonobe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motion+analysis+and+ultrastructural+study+of+a+colonial+diatom%2C+Bacillaria+paxillifer%5BTitle%5D)+AND+%22Microscopy%22%5BJournal%5D)">Motion analysis and ultrastructural study of a colonial diatom, Bacillaria paxillifer.</a> Microscopy. 65, 211-221 (2016).</li>
<li>Apoya-Horton, M. D., Yin, L., Underwood, G. J. C., Gretz, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Movement+modalities+and+responses+to+environmental+changes+of+the+mudflat+diatom+Cylindrotheca+closterium+%28Bacillariophyceae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Phycology%22%5BJournal%5D)">Movement modalities and responses to environmental changes of the mudflat diatom Cylindrotheca closterium (Bacillariophyceae).</a> Journal of Phycology. 42, 379-390 (2006).</li>
<li>Bannon, C. C., Campbell, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sinking+towards+destiny%3A+High+throughput+measurement+of+phytoplankton+sinking+rates+through+time-resolved+fluorescence+plate+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Sinking towards destiny: High throughput measurement of phytoplankton sinking rates through time-resolved fluorescence plate spectroscopy.</a> PLoS One. 12, 16(2017).</li>
<li>Clarkson, N., Davies, M. S., Dixey, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diatom+motility+and+low+frequency+electromagnetic+fields+-+A+new+technique+in+the+search+for+independent+replication+of+results%5BTitle%5D)+AND+%22Bioelectromagnetics%22%5BJournal%5D)">Diatom motility and low frequency electromagnetic fields - A new technique in the search for independent replication of results.</a> Bioelectromagnetics. 20, 94-100 (1999).</li>
<li>Iwasa, K., Shimizu, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motility+of+Diatom%2C+Phaeodactylum-Tricornutum%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Motility of Diatom, Phaeodactylum-Tricornutum.</a> Experimental Cell Research. 74, (1972).</li>
<li>Edgar, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucilage+Secretions+of+Moving+Diatoms%5BTitle%5D)+AND+%22Protoplasma%22%5BJournal%5D)">Mucilage Secretions of Moving Diatoms.</a> Protoplasma. 118, 44-48 (1983).</li>
<li>Edgar, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diatom+Locomotion%5BTitle%5D)+AND+%22Computer-Assisted+Analysis+of+Cine+Film+British+Phycological+Journal%22%5BJournal%5D)">Diatom Locomotion.</a> Computer-Assisted Analysis of Cine Film British Phycological Journal. 14, 83-101 (1979).</li>
<li>Iversen, M. H., Ploug, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+effects+on+carbon-specific+respiration+rate+and+sinking+velocity+of+diatom+aggregates+-+potential+implications+for+deep+ocean+export+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Biogeosciences%22%5BJournal%5D)">Temperature effects on carbon-specific respiration rate and sinking velocity of diatom aggregates - potential implications for deep ocean export processes.</a> Biogeosciences. 10, 4073-4085 (2013).</li>
<li>Riebesell, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Sinking+and+Sedimentation-Rate+Measurements+in+a+Diatom+Winter+Spring+Bloom%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Ecology+Progress+Series%22%5BJournal%5D)">Comparison of Sinking and Sedimentation-Rate Measurements in a Diatom Winter Spring Bloom.</a> Marine Ecology Progress Series. 54, 109-119 (1989).</li>
<li>Drum, R. W., Hopkins, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diatom+Locomotion+-+An+Explanation%5BTitle%5D)+AND+%22Protoplasma%22%5BJournal%5D)">Diatom Locomotion - An Explanation.</a> Protoplasma. 62, (1966).</li>
</ol>

Autorzy nie mają żadnych konfliktów do ujawnienia.

Analiza trajektorii poruszających się komórek okrzemek jest użytecznym podejściem do oceny ruchliwości okrzemek. Jednakże, podczas gdy normalny mikroskop odwrócony obserwuje próbki w poziomie, nie nadaje się do obserwacji wpływu grawitacji lub ruchu unoszącego się w kierunku pionowym. Opracowany i opisany tutaj jest pionowy stolik mikroskopowy z regulacją temperatury i przymocowany do odwróconego mikroskopu, który został obrócony o 90°. Ten stolik mikroskopowy z regulacją temperatury umożliwia obserwację zależnego od tem...

Mikroskopia optyczna to technika stosowana do zwiększania obserwowalnych szczegółów poprzez powiększanie próbki za pomocą soczewek i światła widzialnego. W mikroskopii optycznej światło jest kierowane na próbkę, a następnie światło przechodzące, odbite lub fluorescencyjne jest przechwytywane przez soczewki powiększające w celu obserwacji. Dostępne są różne typy mikroskopów, które różnią się konstrukcją, aby dostosować się do różnych zastosowań i metod obserwacji. Różne konstrukcje obejmują mikroskop pionowy, który jest skonstruowany tak, aby oświetlać próbkę od dołu w celu obserwacji z góry, oraz mikroskop odwrócony, który oświetla próbkę od góry w celu obserwacji od dołu. Mikroskopy pionowe są najbardziej powszechną i szeroko stosowaną konstrukcją. Mikroskopy odwrócone są często używane do obserwacji próbek, które nie mogą pozwolić na zbliżenie soczewki do bliska od góry, takich jak hodowane komórki przylegające do dna pojemnika. Wiele grup badawczych zgłosiło obserwacje w szerokim zakresie dziedzin przy użyciu mikroskopów odwróconych1,2,3,4,5,6,7. Opracowano również wiele dodatkowych urządzeń, które wykorzystują funkcje mikroskopów odwróconych8,9,10,11,12,13.
Obecnie, we wszystkich konwencjonalnych konstrukcjach mikroskopów, stolik mikroskopu jest poziomy i dlatego nie nadaje się do obserwacji próbek wytwarzających ruch w płaszczyźnie pionowej (ze względu na grawitację, wyporność, ruch itp.). Aby te obserwacje były możliwe, stolik mikroskopu i ścieżka światła muszą być obrócone do pionu. Stolik pionowy jest wymagany do pionowego montażu szkiełek lub pojemników na próbki, takich jak szalki Petriego, do stolika. Aby temu zaradzić, opracowano już odwrócony na boki mikroskop nachylony o 90°. Jednak mocowanie próbek za pomocą taśmy lub innych klejów nie zapewnia niezbędnego długotrwałego unieruchomienia. Opisane tutaj jest urządzenie, które może osiągnąć niezbędną stabilność. Urządzenie to umożliwia obserwację w czasie ruchu próbki w płaszczyźnie pionowej. Zamontowanie grzałki z kauczuku silikonowego umożliwiło również obserwację wpływu zmian temperatury na zachowanie próbki. Dane dotyczące temperatury są przesyłane na serwer internetowy przez Wi-Fi, a ustawieniami temperatury i monitorowaniem dziennika można sterować zdalnie z komputera lub smartfona. O ile nam wiadomo, stolik przymocowany do mikroskopu nachylonego na bok nachylonego o 90° nie został jeszcze opisany w poprzednich badaniach.
Stolik mikroskopu składa się z trzech aluminiowych płytek. Środkowa płyta aluminiowa jest zamontowana do dolnej płyty aluminiowej, która mocuje się do sceny. Guma silikonowa zawierająca czujnik temperatury jest przymocowana między środkową i górną aluminiową płytą. Do mocowania próbki stosuje się gumki. Pazury są przymocowane w lewym i prawym czterech punktach górnej aluminiowej płyty, aby zabezpieczyć gumki. Obwód sterujący regulatora temperatury odbiera sygnał z czujnika temperatury osadzonego w gumie silikonowej i moduluje moc elektryczną metodą modulacji szerokości impulsu (PWM). Temperaturę można stopniowo zwiększać do 50 °C w krokach co 1 °C. To urządzenie jest przydatne w zastosowaniach, w których pionowe ruchy próbki mogą być zależne od temperatury.
Ten raport zawiera przykłady wpływu temperatury na zjawisko pływania okrzemek. Jako przykłady badań obserwacji okrzemek podano pomiary prędkości sedymentacji klastrów komórkowych, analizy ruchu, badania ultradrobnych struktur itp.14,15,16,17,18,19,20,21, 22,23. Ciężar właściwy okrzemek unoszących się w wodzie z organizmami fotosyntetyzującymi jest nieco wyższy niż wody, więc mają one tendencję do tonięcia; Jednak wzrosną, jeśli wystąpi nawet niewielka konwekcja. Aby zbadać to zjawisko, szklane szkiełko jest umieszczane pionowo na stoliku mikroskopu i obserwuje się wpływ wzrostu temperatury na pionowy ruch okrzemek.

<table><tbody><tr><td>Zasilacz sieciowy 12V2A</td><td>Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd.</td><td>AD-D120P200</td><td>Tokio, Japonia</td></tr><tr><td>ADS1015 Podłoże</td><td>Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd.</td><td>adafruit ID produktu: 1083</td><td>Tokio, Japonia</td></tr><tr><td>Talerz aluminiowy (tylna płyta boczna)</td><td>Inoval Co., Ltd.</td><td>W 150mm i razy; L 200?&razy; T 1,5 mm</td><td>Gifu, japońska</td></tr><tr><td>płyta aluminiowa (płyta czołowa)</td><td>Inoval Co., Ltd.</td><td>W 150mm i razy; L 200?&razy; T 2mm</td><td>Gifu, japońska</td></tr><tr><td>płyta aluminiowa (środkowa dolna płyta)</td> <td>Inoval Co., Ltd.</td><td>W 150mm i razy; L 200?&razy; T 4mm</td><td>Gifu, japońska</td></tr><tr><td>płyta aluminiowa (środkowa górna płyta)</td> <td>Inoval Co., Ltd.</td><td>W 150mm i razy; L 200?&razy; T 5mm</td><td>Gifu, japoński</td></tr><tr><td>aluminiowy cokół (dolna płyta)</td> <td>Inoval Co., Ltd.</td><td>D 100mm i razy; T 3mm (30&Phi;)</td><td>Gifu, Japonia</td></tr><tr><td>Aluminiowy cokół (płyta górna)</td> <td>Inoval Co., Ltd.</td><td>D 100mm i razy; T 3mm (30&Phi;)</td><td>Gifu, Japonia</td></tr><tr><td>Bold Modified Basal Słodkowodna pożywka</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC</td><td>B5282-500ML</td><td>St. Louis, USA</td></tr><tr><td>Przypadek kontrolera</td><td>Marutsu Elec Co., Ltd.</td><td>pff-13-3-9</td><td>Tokio, Japonia</td></tr><tr><td>Procesor</td><td>Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd.</td><td>ESP-WROOM-02D</td><td>Tokio, Japonia</td></tr><tr><td>Mikroskop odwrócony</td><td>Olympus Corporation</td><td>CKX 53</td><td>Tokio, Japonia</td></tr><tr><td>Klej na bazie żywicy epoksydowej utwardzany w niskiej temperaturze</td><td>ThreeBond Co., Ltd.</td><td>TB2086M</td><td>Tokio, Japonia</td></tr><tr><td>Wieloobrotowy półstały wolumen Typ pionowy 500 &Omega;</td><td>Akizuki Denshi Tsusho Co., Sp. z o.o.</td><td>3296W-1-501LF</td><td>Tokio, Japonia</td></tr><tr><td>Moduł OLED</td><td>Akihabara Inc.</td><td>M096P4W</td><td>Tokio, Japonia</td></tr><tr><td>Prasowany korek (do elektrody nośnej)</td> <td>Tera Co., Ltd.</td><td>W 42mmi razy; L 30?;</td><td>Ishikawa, Japonia</td></tr><tr><td>Tłoczony korek (dolny dysk)</td><td>Tera Co., Ltd.</td><td>D 100mm i razy; T 0,5 mm (20&Phi;)</td><td>Ishikawa, Japonia</td></tr><tr><td>Tłoczony korek (górny dysk)</td><td>Tera Co., Ltd.</td><td>D 100mm i razy; T 2,5 mm (20&Phi;)</td><td>Ishikawa, Japonia</td></tr><tr><td>Enkoder obrotowy z przełącznikiem z 2-kolorową diodą LED</td><td>Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd.</td><td>P-05772</td><td>Tokio, Japonia</td></tr><tr><td>Grzejnik z gumy silikonowej</td><td>Three High Co., Ltd.</td><td>D 100mm i razy; T 2,5 mm (20&Phi;)</td><td>Kanagawa, Japonia</td></tr><tr><td>Podłoże</td><td>Seeed Technology Co., Ltd.</td><td>mh5.0</td><td>Shenzhen, Chiny</td></tr><tr><td>Czujnik temperatury</td><td>Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd.</td><td>NXFT15XH103FA2B050</td><td>Tokio, Japonia</td></tr><tr><td>Trzyzaciskowy regulator DC/DC 3,3 V</td><td>Marutsu Elec Co., Ltd.</td><td>BR301</td><td>Tokio, Japonia</td></tr><tr><td>Uniwersalne elastyczne ramię</td><td>Banggood Technology Co., Ltd.</td><td>YP-003-2</td><td>Hongkong, Chiny</td></tr><tr><td>USB USB-A - MicroUSB</td><td>Akizuki Denshi Tsusho Co., Ltd.</td><td>USB A-MICROB</td><td>Tokio, Japonia</td></tr><tr><td>Video Canera</td><td>Sony Corporation</td><td>HDR-CX590</td><td>Tokio, Japonia</td></tr></tbody></table>

wykonanie stolika mikroskopowego do obserwacji pionowej z funkcją kontroli temperatury

Fabrication of Microscope Stage for Vertical Observation with Temperature Control Function

Próbki są zazwyczaj umieszczane na poziomym stoliku mikroskopu do obserwacji mikroskopowej. Jednak, aby zaobserwować wpływ grawitacji na próbkę lub zbadać zachowanie na powierzchni, konieczne jest ustawienie stolika mikroskopu w pionie. W tym celu opracowano odwrócony mikroskop nachylony na boki pod kątem 90°. Aby obserwować próbki za pomocą tego mikroskopu, pojemniki na próbki, takie jak szalki Petriego lub szkiełka podstawowe, muszą być przymocowane do stolika pionowo. Opracowano urządzenie, które może zabezpieczyć pojemniki na próbki na miejscu na pionowym stoliku mikroskopu, które opisano tutaj. Przymocowanie tego urządzenia do stolika pozwala na obserwację dynamiki próbki w płaszczyźnie pionowej. Możliwość regulacji temperatury za pomocą grzałki z gumy silikonowej pozwala również na obserwację zachowań próbek w zależności od temperatury. Ponadto dane dotyczące temperatury są przesyłane na serwer internetowy. Ustawienia temperatury i monitorowanie dziennika można kontrolować zdalnie z komputera lub smartfona.

Rysunek 2 przedstawia rozkład temperatury grzałki gumowej. Temperatura powierzchni grzałki gumowej była jednorodna dla każdej z temperatur. Rysunek 3 pokazuje reakcję zmierzonej temperatury na zmiany temperatury zadanej. Pomarańczowa linia przedstawia temperaturę zadaną, a niebieska linia obrazuje zmianę temperatury próbki. Przebieg wartości zmierzonej względem zmiany ustawienia wykazuje niewielki przeregulowanie, a śledzenie par...

Prezentowany tutaj jest protokół wykorzystujący stolik mikroskopowy o kontrolowanej temperaturze, który pozwala na zamontowanie pojemnika na próbkę na mikroskopie pionowym.

Wykonanie stolika mikroskopowego do obserwacji pionowej z funkcją kontroli temperatury

Samples are usually placed onto a horizontal microscope stage for microscopic observation. However, to observe the influence of gravity on a sample or ...

To urządzenie może być używane do mocowania próbki do pionowego stolika mikroskopowego, aby umożliwić obserwację wpływu grawitacji i pracę na interesującej próbce. Przymocowanie tego urządzenia do stolika pozwala na obserwację dynamiki próbki w pionowej ramie i pozwala na obserwację zachowań próbki w zależności od temperatury. Aby wyprodukować płyty aluminiowe, użyj maszyny do obróbki laserowej, aby wyciąć 101-milimetrowy otwór w środku aluminiowej płyty o wymiarach 150 na 200 na dwa milimetry, która będzie używana jako płyta czołowa.Wykonaj pazury w ośmiu punktach na zewnątrz płytki, aby umożliwić przymocowanie dwóch gumek na całej długości lub szerokości płytki. Następnie wytnij 130-milimetrowy otwór w środku aluminiowej płyty o wymiarach 150 na 200 na pięć milimetrów, która ma być używana jako środkowa górna płyta, i wykonaj osiem nacięć, aby umożliwić umieszczenie dwóch gumek na całej długości lub szerokości płyty. Następnie wytnij otwór o średnicy 130 milimetrów w środku aluminiowej płyty o wymiarach 150 na 200 na cztery milimetry, która ma być używana jako środkowa dolna płyta, i wytnij 30-milimetrowy otwór w środku aluminiowej płyty o wymiarach 150 na 200 na 1,5 milimetra, który będzie używany jako płyta podstawy.Aby wyprodukować cokoły, wytnij 30-milimetrowy otwór w środku aluminiowej płyty o średnicy 100 milimetrów i grubości trzech milimetrów i wykonaj nacięcie o szerokości 42 milimetrów i głębokości 30 milimetrów po jednej stronie płyty. Następnie wytnij 30-milimetrowy otwór w środku aluminiowej płyty o średnicy 100 milimetrów i grubości czterech milimetrów i wywierć trzy trzymilimetrowe otwory w odległości 25 milimetrów od środka płyty i w odległości 120 stopni od siebie. Do produkcji tłoczonych krążków korkowych użyj maszyny do cięcia strumieniem wody, aby wyciąć 20-milimetrowy otwór w środku sprasowanego krążka korkowego o średnicy 100 milimetrów i grubości dwóch milimetrów i wykonaj jedno nacięcie o szerokości 42 milimetrów i głębokości 30 milimetrów oraz jedno nacięcie o szerokości czterech milimetrów i głębokości pięciu milimetrów po każdej stronie dysku.Następnie wytnij 20-milimetrowy otwór w środku prasowanego krążka korkowego o średnicy 100 milimetrów i grubości jednego milimetra i wykonaj jedno nacięcie o szerokości 42 milimetrów i głębokości 30 milimetrów oraz jedno nacięcie o szerokości 4 milimetrów i głębokości 40 milimetrów po każdej stronie dysku. Następnie wytnij sprasowaną płytkę korkową o szerokości 42 milimetrów i głębokości 30 milimetrów z krążka o średnicy 100 milimetrów. Aby wyprodukować grzejnik z gumy silikonowej, wytnij 20-milimetrowy otwór w środku dysku z gumy silikonowej o średnicy 100 milimetrów i grubości 2,5 milimetra z wbudowanym drutem nichromowym.Następnie ułóż wyprodukowane części w stos, jak pokazano, mocując odpowiednie elementy za pomocą lub kleju w razie potrzeby. Użyj dedykowanego, aby podłączyć gumową grzałkę i grzałkę obudowy sterownika, aby podłączyć stolik mikroskopu do systemu, a następnie użyj sterownika, aby wyposażyć w sygnał Wi-Fi i kontrolować prąd gumowej grzałki. Po zbudowaniu układu podłącz przewód termistora do zacisku czujnika na obudowie sterownika i odbierz sygnał temperatury zmierzony przez termistor.Użyj pokrętła na sterowniku, aby zmienić ustawioną temperaturę. Następnie przesyłaj informacje o zmierzonej temperaturze, ustawionej temperaturze i czasie pomiaru ze sterownika do serwera przez Internet. Aby przeanalizować próbkę, umieść próbkę na stoliku mikroskopu prostopadle do powierzchni gruntu i użyj czterech podłużnych pazurów, aby zabezpieczyć próbkę za pomocą dwóch gumowych taśm.Za pomocą sterownika ustaw temperaturę na 40 stopni Celsjusza i sprawdź temperaturę na wyświetlaczu. Następnie naciśnij pokrętło, aby rozpocząć kontrolę temperatury. Zaświeci się niebieska dioda LED, sygnalizując rozpoczęcie dostarczania ciepła.Na tych rysunkach pokazano reprezentatywne rozkłady temperatur grzałki gumowej. Temperatura powierzchni grzałki gumowej była jednolita w każdej temperaturze. W tym miejscu pokazano przykład reakcji mierzonej temperatury na ustawienie zmian temperatury.Pomarańczowa linia wskazuje ustawioną temperaturę, a niebieska linia pokazuje zmianę temperatury próbki. Jeśli sprzęt jest prawidłowo zmontowany, przeregulowanie zmierzonej wartości w stosunku do zmiany ustawień jest zwykle niewielkie, a śledzenie jest szybkie. W tym eksperymencie udało się zarejestrować zależny od temperatury pionowy ruch okrzemek, co pozwoliło na wykrycie miejsca pionowego ruchu okrzemek.Wpływ konwekcji termicznej na zjawisko pionowego pływania komórek okrzemek można następnie uwidocznić poprzez bezpośrednią obserwację. Po odłączeniu czujnika od próbki lub jeśli mikrokontroler nie działa prawidłowo, sprawdź, czy prąd do grzałki nie został odcięty od mikrokontrolera. Za pomocą tej metody można zaobserwować wpływ zmian temperatury na pionowy ruch organizmu w wodzie.Ponieważ struktura części stolika, która jest przymocowana do mikroskopu, jest skomplikowana, przyszłe badania będą dotyczyły uproszczenia tej struktury. Schłodzenie próbek do temperatury niższej niż pokojowa wymaga skomplikowanego urządzenia chłodzącego, które jest również brane pod uwagę przy przyszłych pracach.

fabrication-microscope-stage-for-vertical-observation-with

Research

JoVE Journal

Engineering

Inżynieria

Prezentujemy wykonanie niskokosztowego stopnia kriogenicznego, zaprojektowanego tak, aby pasował do większości mikroskopów światła odbitego. Ten zbudowany w laboratorium stopień kriogeniczny umożliwia efektywne i niezawodne obrazowanie korelacyjne pomiędzy kriomikroskopią świetlną a kriomikroskopią elektronową.

Budowa niskokosztowego stolika do kriomikroskopii świetlnej na potrzeby skorelowanej mikroskopii świetlnej i elektronowej

Prezentujemy kompaktowy cyfrowy system holograficzny (CDHM) do inspekcji i charakteryzacji urządzeń MEMS. Zademonstrowano konstrukcję bez soczewek wykorzystującą rozbieżną falę wejściową zapewniającą naturalne powiększenie geometryczne. Prezentowane są zarówno badania statyczne, jak i dynamiczne.

Kompaktowy cyfrowy mikroskop holograficzny bez soczewek do kontroli i charakteryzacji MEMS

Opisujemy proces produkcji i testowania termometrów fotonicznych.

Produkcja i testowanie termometrów fotonicznych

Szczegółowa instrukcja jest opisana, jak zbudować mikroskop HIST (o dużym nachyleniu) i jego zastosowanie do obrazowania pojedynczych molekuł.

Przewodnik po budowie mikroskopu z dużymi nachylonymi płytkami do obrazowania pojedynczych cząsteczek w rozszerzonym polu widzenia

W tym manuskrypcie opisana jest implementacja mikroskopu z wymuszonym rozpraszaniem Ramana (SRS), uzyskanego przez integrację eksperymentalnego zestawu SRS z laserowym mikroskopem skaningowym. Mikroskop SRS oparty jest na dwóch femtosekundowych (fs) źródłach laserowych, Ti-Sapphire (Ti:Sa) i zsynchronizowanym optycznym oscylatorze parametrycznym (OPO).

Wdrożenie mikroskopu nieliniowego opartego na wymuszonym rozpraszaniu Ramana

W tej pracy opisujemy technikę, która jest używana do tworzenia nowych kryształów (heterostruktur van der Waalsa) poprzez układanie ultracienkich warstw materiałów 2D z precyzyjną kontrolą pozycji i względnej orientacji.

Wytwarzanie heterostruktur van der Waalsa z precyzyjnym wyrównaniem obrotowym

Celem tego protokołu jest wykorzystanie temperatury do kontrolowania prędkości przepływu trójwymiarowych płynów aktywnych. Zaletą tej metody jest nie tylko regulacja prędkości przepływu in situ, ale także dynamiczna kontrola, taka jak okresowe dostrajanie prędkości przepływu w górę i w dół.

Sterowanie prędkościami przepływu aktywnych płynów 3D na bazie mikrotubul za pomocą temperatury

Informujemy o zastosowaniu wysokiej jakości, elastycznej komory środowiskowej do obrazowania poklatkowego żywych komórek za pomocą pionowej, stymulowanej mikroskopii rozpraszania Ramana z detekcją przesyłanego sygnału. Kropelki lipidów obrazowano w komórkach SKOV3 traktowanych kwasem oleinowym przez okres do 24 godzin w odstępie 3 minut.

Elastyczna komora do poklatkowego obrazowania żywych komórek z mikroskopią wymuszonego rozpraszania Ramana

Ten protokół opisuje budowę taniego, dyskretnego, sprzężonego światłowodami i z przestrzenią powietrzną etalonowego Fabry'ego-Perota z różnymi zastosowaniami, takimi jak spektroskopia gazów śladowych. Produkcja jest możliwa w każdym obiekcie, w którym dostępny jest standardowy optyczny sprzęt laboratoryjny.

Wytwarzanie taniego, sprzężonego z włóknami i rozmieszczonego powietrznie etalonu Fabry-Pérot

Ten artykuł opisuje protokoły budowy i obsługi etapu chłodzenia w celu masowego unieruchomienia C. elegans na ich oryginalnych płytach uprawowych.

Montaż i eksploatacja etapu chłodzącego w celu unieruchomienia C. elegans na ich płytkach hodowlanych

Ten protokół opisuje szczegółowo, jak zbudować jednoobiektywowy, światło-arkuszowy mikroskop fluorescencyjny i jego zastosowanie do wizualizacji sieci cytoszkieletów.

Zaprojektowanie i zbudowanie konfigurowalnego, jednoobiektywowego, arkuszowego mikroskopu fluorescencyjnego do wizualizacji sieci cytoszkieletów

Naucz się budowy stolika mikroskopowego z kontrolą temperatury do obserwacji pionowej próbek biologicznych. Ta metoda umożliwia badanie dynamiki organizmów pod wpływem grawitacji i zmian temperatury.

Wykonanie stolika mikroskopowego do obserwacji pionowej z funkcją kontroli temperatury

Przeglądaj więcej filmów