Model kriouszkodzeń do badania zawału mięśnia sercowego u myszy

Metoda ta jest niezawodna w badaniu powstawania zawału mięśnia sercowego i stanowi doskonałą platformę do badania rekonwalescencji serca po, na przykład, przeszczepie komórek macierzystych. Główną zaletą tej procedury jest to, że można ją wykorzystać do generowania jednolitych rozmiarów zawału w szybki, łatwy i powtarzalny sposób. W tym modelu można testować nowatorskie interwencje eksperymentalne, takie jak farmakologiczne lub strategie oparte na inżynierii tkankowej.

I z powodzeniem przetestować, że opcje można dalej potwierdzić na dużych modelach zwierzęcych. Po potwierdzeniu braku reakcji na odruch bólowy u znieczulonej 27-gramowej, 14-tygodniowej myszy, użyj trymera do włosów, aby usunąć sierść z klatki piersiowej i szyi zwierzęcia i umieść mysz w pozycji leżącej na podgrzewanej podkładce. Zaklej taśmą tylne i przednie kończyny w pozycji rozłożonego orła i użyj sekwencyjnych peelingów z powidonem i 80% etanolem do dezynfekcji odsłoniętej skóry.

Wykonaj nacięcie skóry w linii środkowej od dolnej jednej trzeciej mostka do podbródka i użyj zakrzywionych kleszczy, aby ostrożnie oddzielić mięśnie wokół szyi, aby odsłonić tchawicę. Użyj mikronożyczek, aby wykonać tracheotomię między drugim a trzecim pierścieniem chrząstki. I ustaw wentylator na częstotliwość wentylacji 110 na minutę przy objętości oddechowej 0,5 mililitra.

Następnie włóż do tchawicy plastikową kaniulę o rozmiarze 20 podłączoną do respiratora. Następnie użyj kauteryzacji, aby odłączyć prawy mięsień piersiowy od jego mostka między trzecim a siódmym żebrem. I użyj bocznych skośnych nożyczek sprężynowych, aby przyciąć czwarte do sześciu żeber jak najbliżej mostka.

Wypreparuj leżącą pod spodem tkankę łączną, aby uzyskać wyraźny widok do jamy klatki piersiowej, kauteryzując tętnicę sutkową, aby w razie potrzeby zatamować krwawienie. Włóż mini retraktor plam ze złota, aby rozłożyć żebra i utrzymać otwartą jamę klatki piersiowej. I użyj kleszczy, aby otworzyć osierdzie, aby odsłonić serce.

Użyj pręta, aby podnieść serce z jamy piersiowej i zmniejszyć napięcie retraktora, aby zmniejszyć otwór klatki piersiowej i zapobiec cofaniu się serca do jamy brzusznej. Wstępnie schłodzić kriosondę o średnicy trzech milimetrów przez 10 sekund i nałożyć kriosondę na wewnętrzną ścianę lewej komory na 10 sekund, aby wytworzyć zawał kriourazowy lewej komory. Odłącz kriosondę od lewej ściany komory z irygacją solą fizjologiczną w temperaturze pokojowej i ponownie powiększ otwór klatki piersiowej za pomocą retraktora.

Użyj pręta, aby delikatnie przywrócić serce do jamy klatki piersiowej i wyjmij retraktor. Użyj szwu 6-0, aby połączyć sternotomię pojedynczym węzłem. I użyj biegnącego szwu 6-0, aby zamknąć jamę klatki piersiowej.

Użyj 10-mililitrowej strzykawki, aby usunąć resztki powietrza z klatki piersiowej przed zawiązaniem węzła i dostosuj skórę na krawędzi ogona przed użyciem szewu 5-0, aby zamknąć tkankę do punktu ujścia tchawicy. Po zmniejszeniu dawki izofluranu i uzyskaniu przez zwierzę spontanicznego oddechu należy usunąć cewnik dotchawiczy i zamknąć nacięcie tchawicy jednym 8-0 szew. Przywróć brzuszne mięśnie szyi z powrotem do ich anatomicznej pozycji nad tchawicą i zakończ szew skóry.

Następnie dodaj metamizol do wody pitnej w celu znieczulenia bólu przez trzy dni z codziennym monitorowaniem zwierząt przez osiem tygodni. W przypadku kriouszkodzonych serc echokardiografia ujawnia znacznie zmniejszoną frakcję wyrzutową i zmianę obszaru frakcyjnego, z upośledzeniem funkcjonalnym obserwowanym od siódmego dnia po operacji do eksperymentalnego punktu końcowego po 56 dniach. Jak oceniono za pomocą analizy pętli ciśnienie-objętość, krioinfrakcja prowadzi do upośledzenia funkcji lewej komory, co znajduje odzwierciedlenie w zmniejszeniu objętości wyrzutowej, pracy udarowej, rzutu serca i mocy maksymalnej dostosowanej do obciążenia wstępnego.

Mapowanie optyczne ex-vivo fluorescencyjnych, wrażliwych na napięcie barwionych serc wykazuje zablokowanie przewodzenia elektrycznego na granicy urazu, co wskazuje na lokalne rozprzęgnięcie elektryczne. Barwienie histologiczne trichromem Massona ujawnia tworzenie się przezściennej tkanki zwłóknieniowej w miejscu urazu. Rozmiar zawału można obliczyć, mierząc obszar blizny po zawale lub długość blizny w linii środkowej.

Ponadto barwienie immunofluorescencyjne markerem kardiomiocytów i kolagenu-I potwierdza obecność przebudowy zwłóknienia i utraty kardiomiocytów w miejscu urazu. Ważne jest, aby utrzymać ten sam czas kontaktu krioproblemu dla każdego zwierzęcia, ponieważ różny czas trwania może prowadzić do niezgodnych rozmiarów zawału. Po opanowaniu tej techniki można ją wykonać w ciągu 20 minut, jeśli jest wykonywana prawidłowo.

Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak wykonać model kriouszkodzenia. Powodzenia w eksperymentach.