Name: Dwuosiowy ton podstawowy i bierne badanie mysiego układu rozrodczego za pomocą miografu ciśnieniowego (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 59 s
Description: Poznaj dwuosiowe badanie mechaniczne szyjki macicy i pochwy myszy przy użyciu miografu ciśnieniowego. Ta metoda pozwala ocenić rolę komórek mięśni gładkich i macierzy pozakomórkowej w fizjologicznych warunkach.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Praca została sfinansowana z grantu NSF CAREER award #1751050.

Protokół przedstawiony w tym artykule przedstawia metodę określania właściwości mechanicznych mysiej pochwy i szyjki macicy. Właściwości mechaniczne analizowane w tym protokole obejmują zarówno stan tonu biernego, jak i podstawowego narządów. Stany tonu biernego i podstawowego są indukowane przez zmianę środowiska biochemicznego, w którym narząd jest zanurzony. W przypadku tego protokołu pożywki biorące udział w testach podstawowych zawierają wapń. Badanie tonu podstawowego pozwala na wyizolowanie mechanicznego wkładu ko...

Ściana pochwy składa się z czterech warstw: nabłonka, blaszki właściwej, muscularis i przydanki. Nabłonek składa się głównie z komórek nabłonkowych. Blaszka właściwa posiada dużą ilość elastycznych i fibrylarnych włókien kolagenowych. Mięśnie również składają się z włókien elastyny i kolagenu, ale mają zwiększoną ilość komórek mięśni gładkich. Przydanka składa się z elastyny, kolagenu i fibroblastów, choć w zmniejszonych stężeniach w porównaniu z poprzednimi warstwami. Komórki mięśni gładkich są przedmiotem zainteresowania grup badawczych motywowanych biomechanicznie, ponieważ odgrywają rolę w kurczliwości narządów. W związku z tym ilościowe określenie frakcji i organizacji komórek mięśni gładkich jest kluczem do zrozumienia funkcji mechanicznej. Wcześniejsze badania sugerują, że zawartość mięśni gładkich w ścianie pochwy jest przede wszystkim zorganizowana w osi obwodowej i podłużnej. Analiza histologiczna sugeruje, że frakcja obszaru mięśni gładkich wynosi około 35% zarówno dla bliższego, jak i dalszego odcinka ściany1.
Szyjka macicy to wysoce kolagenowa struktura, która do niedawna uważano, że ma minimalną zawartość komórek mięśni gładkich2,3. Ostatnie badania sugerują jednak, że komórki mięśni gładkich mogą odgrywać większą obfitość i rolę w szyjce macicy4,5. Szyjka macicy wykazuje gradient komórek mięśni gładkich. Wewnętrzny system operacyjny zawiera 50-60% komórek mięśni gładkich, podczas gdy zewnętrzny system operacyjny zawiera tylko 10%. Badania na myszach wskazują jednak, że szyjka macicy składa się w 10-15% z komórek mięśni gładkich i w 85-90% z włóknistej tkanki łącznej, bez wzmianki o różnicach regionalnych6,7,8. Biorąc pod uwagę, że model mysi różni się od często zgłaszanego modelu ludzkiego, potrzebne są dalsze badania dotyczące szyjki macicy myszy.
Celem tego protokołu było wyjaśnienie właściwości mechanicznych mysiej pochwy i szyjki macicy. Udało się to osiągnąć dzięki zastosowaniu miografu ciśnieniowego, który umożliwia jednoczesną ocenę właściwości mechanicznych w kierunku obwodowym i osiowym, przy jednoczesnym zachowaniu natywnych interakcji komórka-matryca i geometrii narządów. Narządy zostały osadzone na dwóch niestandardowych kaniulach i zabezpieczone jedwabnymi szwami 6-0. Testy ciśnienia i średnicy przeprowadzono wokół szacowanego fizjologicznego rozciągnięcia osiowego w celu określenia podatności i modułów stycznych9. Przeprowadzono testy siły i długości, aby potwierdzić szacowane rozciągnięcie osiowe i upewnić się, że właściwości mechaniczne zostały określone ilościowo w zakresie fizjologicznym. Protokół eksperymentalny przeprowadzono na nieciężarnej mysiej pochwie i szyjce macicy w wieku 4-6 miesięcy w rui.
Protokół jest podzielony na dwie główne sekcje testów mechanicznych: podstawowe tony i pasywne testy. Ton podstawowy definiuje się jako podstawowe częściowe zwężenie komórek mięśni gładkich, nawet przy braku zewnętrznej stymulacji miejscowej, hormonalnej i nerwowej10. Ta podstawowa kurczliwość pochwy i szyjki macicy powoduje charakterystyczne zachowania mechaniczne, które są następnie mierzone przez system miografu ciśnieniowego. Właściwości pasywne ocenia się poprzez usunięcie międzykomórkowego wapnia, który utrzymuje wyjściowy stan skurczu, co powoduje rozluźnienie komórek mięśni gładkich. W stanie pasywnym włókna kolagenu i elastyny zapewniają dominujący wkład w charakterystykę mechaniczną narządów.
Model mysi jest szeroko stosowany do badania patologii w zdrowiu reprodukcyjnym kobiet. Mysz oferuje kilka korzyści w ilościowym określaniu zmieniających się relacji między ECM a właściwościami mechanicznymi w układzie rozrodczym11,12,13,14. Do tych zalet należą krótkie i dobrze scharakteryzowane cykle rujowe, stosunkowo niski koszt, łatwość obsługi i stosunkowo krótki czas ciąży15. Ponadto genom myszy laboratoryjnych jest dobrze zmapowany, a genetycznie zmodyfikowane myszy są cennymi narzędziami do testowania hipotez mechanistycznych16,17,18.
Komercyjnie dostępne systemy miografu ciśnieniowego są szeroko stosowane do ilościowego określania reakcji mechanicznych różnych tkanek i organów. Niektóre godne uwagi struktury analizowane w systemie miografu ciśnieniowego obejmują elastyczne tętnice19,20,21,22, żyły i przeszczepy naczyniowe inżynierii tkankowej23,24, esophagus25, and the large intestines26. Technologia miografu ciśnieniowego pozwala na jednoczesną ocenę właściwości w kierunku osiowym i obwodowym przy zachowaniu natywnych oddziaływań komórka-ECM i geometrii in vivo. Pomimo szerokiego zastosowania systemów miografowych w mechanice tkanek miękkich i narządów, protokół wykorzystujący technologię miografu ciśnieniowego nie został wcześniej opracowany dla pochwy i szyjki macicy. Wcześniejsze badania właściwości mechanicznych pochwy i szyjki macicy zostały ocenione jednoosiowo27,28. Narządy te doświadczają jednak obciążenia wieloosiowego w obrębie ciała29,30, dlatego ważne jest ilościowe określenie ich dwuosiowej odpowiedzi mechanicznej.
Ponadto, ostatnie badania sugerują, że komórki mięśni gładkich mogą odgrywać potencjalną rolę w patologiach tkanek miękkich5,28,31,32. Stanowi to kolejną atrakcję wynikającą z wykorzystania technologii miografu ciśnieniowego, ponieważ zachowuje ona natywne interakcje komórka-macierz, umożliwiając w ten sposób określenie wkładu, jaki komórki mięśni gładkich odgrywają w stanach fizjologicznych i patofizjologicznych. W niniejszym artykule proponujemy protokół ilościowego określenia wieloosiowych właściwości mechanicznych pochwy i szyjki macicy zarówno w warunkach tonu podstawowego, jak i biernego.

<table><tbody><tr><td>Cewnik 2F</td><td>Cewnik Millar</td><td>SPR-320</td><td>do pomiaru ciśnienia szyjki macicy</td></tr><tr><td>6-0 Szew</td><td>Fine Science Tools</td><td>18020-60</td><td>większe wiązania szwów</td></tr><tr><td>CaCl2 (bezwodny)</td><td>VWR</td><td>97062-590</td><td>HBSS stężenie: 140 mg / ml</td></tr><tr><td>CaCl2-2H20</td><td>Fischer chemiczny</td><td>BDH9224-1KG</td><<td>br/> Stężenie KRB: 3,68 g/L</td></tr><tr><td>Dekstroza (D-glukoza)</td> <td>VWR</td><td>101172-434</td><td>HBSS stężenie: 1000 mg/mL Stężenie KRB: 19,8 g/L</td></tr><tr><td>Kleszcze Dumont #5/45</td><td>Narzędzia do nauki pięknej</td><td>11251-35</td><td>Kleszcze zakrzywione</td></tr><tr><td>Dumont SS Narzędzia</td><td>do nauki o nauce</td><td>11203-25</td><td>kleszcze proste</td></tr><tr><td>Mikroskop Eclipse</td><td>Nikon</td><td>E200</td><td>używany do obrazowania</td></tr><tr><td>Przepływomierz</td><td>Duński MyoTechnologies</td>Przepływomierz <td>161FM</td><td>w aparacie badawczym</td></tr><tr><td>Przetwornik siły - 110P</td><td>Duński przetwornik siły MyoTechnologies</td><td>100079</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>SciJava</td><td>ImageJ1</td><td>służy do pomiaru objętości</td></tr><tr><td>Futerały na instrumenty</td><td>Fine Science Tools</td><td>20830-00</td><td>Obudowa do mocowania narzędzi preparacyjnych</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Chemical</td><td>97061-566</td><td>Stężenie HBSS: 400 mg/ ml Stężenie KRB: 3,5 g/L</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>G-Biosciences</td><td>71003-454</td><td>HBSS stężenie: 60 mg/ ml</td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>VWR</td><td>97064-150</td><td> Stężenie KRB: 1,14 g/L</td></tr><tr><td>MgCl2-6H2O</td><td>VWR</td><td>BDH9244-500G</td><td>HBSS stężenie: 100 mg/ ml</td></tr><tr><td>MgSO4-7H20</td><td>VWR</td><td>97062-134</td><td>HBSS stężenie: 48 mg/ ml</td></tr><tr><td>Mircosoft excel</td><td>Program Microsoft</td><td>6278402</td><td>używany do arkusza kalkulacyjnego</td></tr><tr><td>Na2HPO4 (dwuzasadowy bezwodny)</td><td>VWR</td><td>97061-588</td><td>Stężenie HBSS: 48 mg/mL Stężenie KRB: 1,44 g/L</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>VWR</td><td>97061-274</td><td>HBSS stężenie: 8000 mg/mL KRB koncentracja: 70,1 g/L</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>VWR</td><td>97062-460</td><td>Stężenie HBSS: 350 mg / ml Stężenie KRB: 21,0 g/L</td></tr><tr><td>Systemy miografów ciśnieniowych</td> Duński system miograficzny <td>MyoTechnologies</td><td>110P i 120CP</td><td>: program , urządzenie do kaniulacji, i jednostka sterująca</td></tr><tr><td>Przetwornik ciśnienia</td><td>Duński przetwornik ciśnienia MyoTechnologies</td><td>100106</td><td></td></tr><tr><td>Student Dumont #5 Kleszcze</td><td>Narzędzia do nauki o naukach</td><td>91150-20</td><td>kleszcze proste</td></tr><tr><td>Nożyczki sprężynowe Student Vannas</td><td>Narzędzia do nauki o naprawie</td><td>91500-09</td><td>mikronożyczki</td></tr><tr><td>Barwnik tkankowy</td><td>Bradley Products</td><td>1101-3</td><td>Tusz do pomiaru rozciągliwości in vivo</td></tr><tr><td>Przetwornik ultradźwiękowy</td> Zastosowano przetwornik ultradźwiękowy <td>FujiFilm Visual Sonics</td><td>LZ-550</td><td>; 256 elementów, częstotliwość środkowa 40 MHz</td></tr><tr><td>VEVO2100</td><td>FujiFilm Visual Sonics</td><td>VS-20035</td><td>ultradźwięki używane do obrazowania</td></tr><tr><td>Nożyczki Wagnera</td><td>Fine Science Tools</td><td>14069-12</td><td>większe nożyczki</td></tr></tbody></table>

dwuosiowy ton podstawowy i bierne badanie mysiego układu rozrodczego za pomocą miografu ciśnieniowego

Biaxial Basal Tone and Passive Testing of the Murine Reproductive System Using a Pressure Myograph

Żeńskie narządy rozrodcze, w szczególności pochwa i szyjka macicy, składają się z różnych składników komórkowych i unikalnej macierzy zewnątrzkomórkowej (ECM). Komórki mięśni gładkich wykazują funkcję skurczową w obrębie ścian pochwy i szyjki macicy. W zależności od środowiska biochemicznego i mechanicznego rozdęcia ścian narządów, komórki mięśni gładkich zmieniają warunki skurczu. Udział komórek mięśni gładkich w wyjściowych warunkach fizjologicznych jest klasyfikowany jako ton podstawowy. Mówiąc dokładniej, ton podstawowy to podstawowe częściowe zwężenie komórek mięśni gładkich przy braku stymulacji hormonalnej i nerwowej. Co więcej, ECM zapewnia wsparcie strukturalne dla ścian narządów i działa jako rezerwuar dla sygnałów biochemicznych. Te sygnały biochemiczne są niezbędne dla różnych funkcji narządów, takich jak pobudzanie wzrostu i utrzymywanie homeostazy. ECM każdego narządu składa się głównie z włókien kolagenowych (głównie kolagenu typu I, III i V), włókien elastycznych i glikozaminoglikanów/proteoglikanów. Skład i organizacja ECM dyktują właściwości mechaniczne każdego narządu. Zmiana składu ECM może prowadzić do rozwoju patologii rozrodczych, takich jak wypadanie narządów miednicy mniejszej lub przedwczesna przebudowa szyjki macicy. Ponadto zmiany w mikrostrukturze i sztywności ECM mogą zmieniać aktywność i fenotyp komórek mięśni gładkich, powodując w ten sposób utratę siły skurczu.
W tej pracy, zgłoszone protokoły są używane do oceny podstawowego tonu i pasywnych właściwości mechanicznych nieciężarnej mysiej pochwy i szyjki macicy w wieku 4-6 miesięcy w rui. Narządy zamontowano w dostępnym na rynku miografie ciśnieniowym i przeprowadzono testy zarówno ciśnienie-średnica, jak i siła-długość. Uwzględniono przykładowe dane i techniki analizy danych do mechanicznej charakterystyki narządów rozrodczych. Takie informacje mogą być przydatne do konstruowania modeli matematycznych i racjonalnego projektowania interwencji terapeutycznych w przypadku patologii zdrowia kobiet.

Pomyślna analiza właściwości mechanicznych żeńskich narządów rozrodczych zależy od odpowiedniej dyssekcji, kaniulacji i testowania narządów. Niezbędne jest wypreparowanie rogów macicy wraz z pochwą bez żadnych uszkodzeń (Rysunek 1). W zależności od rodzaju narządu rozmiar kaniuli będzie się różnić (Rysunek 2). Kaniulacja musi być przeprowadzona w taki sposób, aby narząd nie przemieszczał się podczas eksperymentu, a jednocześnie aby nie uszkodzić jego ściany podczas proce...

Ten protokół wykorzystywał dostępny na rynku system miografu ciśnieniowego do wykonywania testów miografu ciśnieniowego na mysiej pochwie i szyjce macicy. Wykorzystując pożywki z wapniem i bez niego, wyizolowano wkład komórek mięśni gładkich (SMC) w ton podstawowy i pasywną macierz zewnątrzkomórkową (ECM) dla narządów w szacowanych warunkach fizjologicznych.

Dwuosiowy ton podstawowy i bierne badanie mysiego układu rozrodczego za pomocą miografu ciśnieniowego

The female reproductive organs, specifically the vagina and cervix, are composed of various cellular components and a unique extracellular matrix (ECM). ...

Protokół ten bada dwuosiowe właściwości mechaniczne narządów rozrodczych, wyjaśniając wkład komórek mięśni gładkich i macierzy biernej. Technika ta utrzymuje geometrię narządu i natywne interakcje między komórkami mięśni gładkich a macierzą, umożliwiając poddanie narządu fizjologicznemu zakresowi nacisków i rozszerzeń osiowych. Badanie funkcji dwuosiowej narządów pod fizjologicznie istotnymi obciążeniami może pomóc w lepszym zrozumieniu etiologii patologii rozrodczości.Dwuosiowe badanie szyjki macicy i pochwy zapewnia wgląd w dziedziny zdrowia i biomechaniki kobiet. Podobne metody stosuje się do badania naczyń krwionośnych, przełyku i jelita grubego. Podczas pracy z nowym narządem może minąć trochę czasu, aby sfinalizować szczegóły techniczne, takie jak najlepszy sposób zszycia tkanki lub sposób określenia długości bez obciążenia.Aby pobrać układ rozrodczy od zwierzęcia doświadczalnego, umieść mysz na podkładce chłonnej pod mikroskopem preparacyjnym i użyj kątowej pęsety i nożyczek, aby podnieść skórę wokół brzucha. Wykonaj początkowe nacięcie u podstawy brzucha powyżej kości łonowej na tyle płytkie, aby nie przebić ściany mięśni brzucha i kontynuuj nacięcie wyżej w kierunku klatki piersiowej i głęboko przez mięśnie brzucha. Po usunięciu powierzchownej tkanki tłuszczowej i ostrożnym przecięciu spojenia łonowego, użyj prostej pęsety, aby chwycić pęcherz, aby wytworzyć napięcie i użyj sekcji, aby oddzielić otaczającą tkankę od pochwy.Następnie przetnij podstawę układu rozrodczego, aby usunąć tkanki z jamy ciała. Po ustaleniu odpowiedniego rozmiaru kaniuli dla pobranego systemu, zamontuj stronę szyjną na części przetwornika siły urządzenia do kaniulacji i zamontuj przeciwległy koniec narządu na części mikrometrycznej urządzenia. Następnie zaciśnij oba końce szwami.Aby znaleźć nieobciążoną długość zamontowanej tkanki, najpierw rozciągnij narząd tak, aby ściana nie była napięta. W przypadku pochwy obserwuj rowki na ścianie pochwy. W przypadku szyjki macicy wytnij bezpośrednio pod kropkami atramentu znajdującymi się powyżej i poniżej środkowego znaku szyjki macicy.Użyj suwmiarki, aby zmierzyć długość systemu od szwu do szwu i zwiększ ciśnienie systemu miografu od zera do 10 milimetrów słupa rtęci w przyrostach rtęci o jeden milimetr. Ciśnienie, w którym narząd nie jest już zapadnięty, można określić jako największy skok średnicy zewnętrznej przy danym ciśnieniu. Po zarejestrowaniu ciśnienia i średnicy zewnętrznej zanotuj te dane jako pierwszy punkt, w którym narząd nie jest zapadnięty i wyzeruj siłę.Aby znaleźć eksperymentalne rozciąganie in vivo, dostosuj narząd do szacowanej długości in vivo przy ciśnieniu bez obciążenia i kliknij start, aby ocenić wartości ciśnienia w stosunku do siły dla wartości ciśnienia w zakresie od ciśnienia nieobciążonego do ciśnienia maksymalnego. Następnie kliknij przycisk Zatrzymaj i zapisz plik. W przypadku wstępnego kondycjonowania średnicy ciśnienia ustaw ciśnienie na zero milimetrów słupa rtęci, długość na długość eksperymentalną in vivo, a gradient na 1,5 milimetra słupa rtęci na sekundę.Uruchom sekwencję, która przyjmuje ciśnienie od zera milimetrów słupa rtęci do ciśnienia maksymalnego plus ciśnienie bez obciążenia, przytrzymaj przez 30 sekund i powróć do zera milimetrów słupa rtęci z dodatkowym 30-sekundowym okresem utrzymywania. Po powtórzeniu tej sekwencji przez łącznie pięć cykli kliknij przycisk stop i zapisz plik. W celu wstępnego kondycjonowania długości siły wprowadź 1/3 maksymalnego ciśnienia plus ciśnienie bez obciążenia zarówno dla ciśnienia wlotowego, jak i wylotowego i wyreguluj narząd na minus 2% długości in vivo.Kliknij start i dostosuj długość do plus 2% długości in vivo i z powrotem do minus 2% z szybkością 10 mikrometrów na sekundę. Powtórz przedłużenie osiowe przez łącznie pięć cykli przed kliknięciem stop i zapisaniem pliku. Aby przetestować średnicę ciśnienia na długości in vivo, kliknij start i dostosuj narząd do długości in vivo, ustaw ciśnienie na zero milimetrów słupa rtęci i ustaw gradient na 1,5 milimetra słupa rtęci na sekundę.Zwiększ ciśnienie od zera milimetrów słupa rtęci do maksymalnego ciśnienia, a następnie obniż ciśnienie z powrotem do zera milimetrów słupa rtęci z 20-sekundowym okresem podtrzymania. Następnie powtórz test przez pięć cykli przed zatrzymaniem systemu i zapisaniem danych. W przypadku badania długości siły wynoszącej 1/3 ciśnienia maksymalnego plus ciśnienie nieobciążone, ustaw ciśnienie na 1/3 ciśnienia maksymalnego plus ciśnienie nieobciążone i dostosuj narząd do minus 2% długości in vivo.Po kliknięciu przycisku start rozciągnij narząd do plus 2% długości in vivo i z powrotem do minus 2% długości in vivo z prędkością 10 mikrometrów na sekundę. Następnie powtórz test w sumie przez trzy cykle przed zatrzymaniem systemu i zapisaniem danych. Po ostatnim badaniu należy wyjąć pożywkę testową KRB i umyć narząd pożywką KRB bez wapnia.Po przemyciu należy inkubować narząd ze świeżym roztworem KRB bez wapnia uzupełnionym dwumilimolowym EGTA przez 30 minut, a następnie zastąpić roztwór do leczenia świeżym KRB bez wapnia. Po zakończeniu badania tonu podstawowego, w celu wstępnego kondycjonowania średnicy ciśnienia, kliknij start i ustaw ciśnienie na zero milimetrów słupa rtęci, długość jako szacowaną długość in vivo, a gradient na 1,5 milimetra słupa rtęci na sekundę. Rozpocznij sekwencję, która przenosi ciśnienie od zera milimetrów rtęci do ciśnienia maksymalnego i z powrotem do zera milimetrów słupa rtęci.Powtórz ten proces w pięciu cyklach z 30-sekundowym czasem podtrzymania. W celu wstępnego kondycjonowania długości siły, dostosuj narząd do długości in vivo i ręcznie wprowadź ciśnienie bez obciążenia dla obu ciśnień. Kliknij start i ustaw gradient na 1,5 milimetra słupa rtęci, a ciśnienie na 1/3 maksimum.Rozciągnij narząd do plus 2% i z powrotem w dół do minus 2%rozciągnij się z prędkością 10 mikrometrów na sekundę i powtórz cykl w sumie pięć razy. W przypadku badania średnicy ciśnienia, gdy narząd znajduje się na poziomie minus 2% eksperymentalnie wyznaczonej długości in vivo, a ciśnienie wynosi zero milimetrów słupa rtęci, kliknij start i zwiększ ciśnienie z zera milimetrów słupa rtęci do maksymalnego ciśnienia i z powrotem do zera milimetrów słupa rtęci. Przytrzymaj krok zero milimetrów słupa rtęci przez 20 sekund i powtórz cykl pięć razy.W przypadku badania długości siły należy ustawić ciśnienie na ciśnienie nominalne i wyregulować narząd na minus 2% długości in vivo. Rozciągnij narząd do plus 2% długości in vivo i z powrotem do minus 2% długości in vivo z szybkością 10 mikrometrów na sekundę. Po łącznie trzech cyklach zapisz dane i powtórz test długości siły dla 1/3 maksymalnego ciśnienia, 2/3 maksymalnego ciśnienia i przy maksymalnym ciśnieniu.Aby pomyślnie przeprowadzić analizę właściwości mechanicznych żeńskich narządów rozrodczych, konieczne jest usunięcie rogów macicy do pochwy bez żadnych wad. W zależności od typu narządu rozmiar kaniuli będzie się różnił. Kaniulacja musi być wykonana w taki sposób, aby narząd nie mógł się poruszać podczas eksperymentu, ale bez uszkodzenia ściany narządu podczas zabiegu.System miografu ciśnieniowego może być używany do monitorowania różnych aspektów narządu podczas jego badań mechanicznych, a system ultrasonograficzny może być używany do pomiaru grubości narządów w stanie nieobciążonym z tonem podstawowym i bez niego. Po przeprowadzeniu badań mechanicznych moduły styczne można obliczyć dla kierunku obwodowego i osiowego. Zarówno badanie tonu podstawowego, jak i badanie pasywne pozwalają uzyskać kluczowe właściwości mechaniczne układu rozrodczego z udziałem kurczliwości komórek mięśni gładkich i bez niej.Skalowanie między narządami wymaga kilku korekt protokołów, ponieważ szyjka macicy i pochwa doświadczają różnych obciążeń in vivo. Kluczowe jest szybkie przeprowadzenie sekcji, aby utrzymać żywotność komórek mięśni gładkich, ale ostrożnie, aby nie nakłuwać pożądanego narządu. Eksperymenty z kątem otwarcia, które mierzą szczątkowe odkształcenie narządu, mogą być przeprowadzane po procedurach badań mechanicznych, jak również po różnych testach histologicznych i biochemicznych.Po opracowaniu i zbadaniu podstawnego wkładu komórek mięśni gładkich, technika ta pozwala również na ocenę maksymalnej odpowiedzi kurczliwej mięśni gładkich układu rozrodczego pod fizjologicznie istotnymi obciążeniami.

biaxial-basal-tone-passive-testing-murine-reproductive-system-using

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioinżynieria

Infekcja prostaty może być czynnikiem przyczyniającym się do pośredniczenia w bólu miednicy w przewlekłym zapaleniu gruczołu krokowego. Opisujemy procedurę przygotowania standaryzowanego inokulum bakteryjnego, wkraplania bakterii do cewki moczowej samców myszy oraz metodologii pomiaru allodynii dotykowej u myszy w czasie.

Pomiar dotykowej allodynii w mysim modelu bakteryjnego zapalenia gruczołu krokowego

W miografii ciśnieniowej, nienaruszony mały fragment naczynia jest montowany na dwóch małych kaniulach i podbudowywany do odpowiedniego ciśnienia świetlnego. Tutaj opisujemy metodę pomiaru odpowiedzi wazorelaksacyjnej myszy tętnic krezkowych 3. rzędu u myszy c57 i sGCα1-/- myszy za pomocą miografii ciśnieniowej.

Ocena funkcji tętnicy oporowej myszy za pomocą miografii ciśnieniowej

Około 3-8 milionów ludzi w Stanach Zjednoczonych cierpi na śródmiąższowe zapalenie pęcherza moczowego/zespół bólu pęcherza moczowego (IC/BPS), wyniszczający stan charakteryzujący się częściowo bólem miednicy. W celu zbadania udziału układu nerwowego w tym stanie, stosuje się fizjologiczny model bólu pęcherza moczowego u myszy i szczurów.

Wzdęcie pęcherza moczowego wywołało reakcje trzewnomotoryczne jako model bólu pęcherza moczowego u myszy

Ten manuskrypt zawiera protokół wszczepiania telemetrów myszom w celu pomiaru ciśnienia wewnątrzmacicznego podczas ciąży.

Telemetria wewnątrzmaciczna do pomiaru ciśnienia skurczowego myszy in vivo

Mierzymy obwodowo-płciową wrażliwość mechaniczną i aktywację komórek tucznych u samców myszy C57BL/6, które przeszły paradygmat stresu we wczesnym okresie życia - separację noworodków od matek, w celu wywołania przedklinicznego modelu przewlekłego zapalenia gruczołu krokowego/przewlekłego bólu miednicy.

Ocena wrażliwości okołopłciowej i aktywacji komórek tucznych gruczołu krokowego w mysim modelu separacji noworodków od matek

To badanie opisuje procedury chirurgiczne i techniki eksperymentalne do wykonywania cystometrii na jawie u swobodnie poruszającej się myszy. Ponadto dostarcza dowodów eksperymentalnych wspierających jego optymalizację i standaryzację.

Ocena procedury wykonywania cystometrii w stanie czuwania w modelu mysim

Ten manuskrypt opisuje użyteczność ultradźwięków wykonywanych na samicach szczurów do projektowania eksperymentalnych modeli do badań reprodukcyjnych i ginekologicznych. Pokazane jest wyjaśnienie krok po kroku, jak przeprowadzić ocenę ultrasonograficzną.

Ultrasonografia w eksperymentalnych badaniach reprodukcyjnych na szczurach

Ten protokół obejmuje charakterystykę płatków zastawki przedsionkowo-komorowej z kontrolowanymi siłą, przemieszczeniami i relaksacją naprężeń dwuosiowymi procedurami mechanicznymi. Wyniki uzyskane za pomocą tego protokołu mogą być wykorzystane do opracowania modelu konstytutywnego w celu symulacji mechanicznego zachowania działających zaworów w ramach symulacji elementów skończonych.

Dwuosiowa charakterystyka mechaniczna przedsionkowo-komorowych zastawek serca

Skurcze macicy są ważne dla dobrego samopoczucia kobiet. Jednak patologicznie zwiększona kurczliwość może powodować bolesne miesiączkowanie, szczególnie u młodszych kobiet. W tym miejscu opisujemy prosty preparat ex vivo, pozwalający na szybką ocenę skuteczności leków zwiotczających mięśnie gładkie, które mogą być stosowane w leczeniu bolesnego miesiączkowania.

Metoda ex vivo do oceny spontanicznej ruchliwości układu rozrodczego myszy oraz algorytm śledzenia ruchu macicy oparty na MATLAB do analizy danych

Protokół opisuje skuteczne i powtarzalne metody testowania biomechanicznego rozciągania ścięgien mysich za pomocą specjalnie dopasowanych uchwytów drukowanych w 3D.

Badania biomechaniczne ścięgien myszy

Aby opracować nowatorskie interwencje terapeutyczne w celu zapobiegania i leczenia bólu pleców, potrzebne są modele zwierzęce, które zbadają mechanizmy i skuteczność tych terapii z perspektywy translacyjnej. Niniejszy protokół opisuje test BMS, znormalizowaną metodę oceny wrażliwości mechanicznej pleców u szczura.

Ocena wrażliwości mechanicznej pleców u szczura do mechanistycznego badania przewlekłego bólu pleców

Poznaj dwuosiowe badanie mechaniczne szyjki macicy i pochwy myszy przy użyciu miografu ciśnieniowego. Ta metoda pozwala ocenić rolę komórek mięśni gładkich i macierzy pozakomórkowej w fizjologicznych warunkach.

Dwuosiowy ton podstawowy i bierne badanie mysiego układu rozrodczego za pomocą miografu ciśnieniowego

Przeglądaj więcej filmów