Zachowanie związane z budowaniem gniazda jako wczesny wskaźnik deficytów behawioralnych u myszy

Zachowania gniazdowe są użytecznym sposobem oceny codziennych czynności życia u myszy dzikich i transgenicznych. Jest to szczególnie przydatne w dokumentowaniu spadku funkcji poznawczych w neurodegeneracji przez całe życie. Ta technika to ekonomiczna, prosta i elegancka ocena codziennych czynności życiowych myszy.

Można go również wykonać w krótkim czasie przy minimalnym treningu. W naszym laboratorium zalecamy rozdrobniony papier, ponieważ papier daje bardziej spójne wyniki. Można jednak przeprowadzić badania pilotażowe, aby określić, który materiał najlepiej odpowiada Twoim celom i budżetowi.

W oddzielnym pomieszczeniu testowym ustaw warunki środowiskowe tak, aby były spójne we wszystkich próbach i były identyczne z pomieszczeniem w pomieszczeniach inwentarskich, a także zapewnij pożywienie i wodę do klatki. Przypisz każdej myszy losowy numer identyfikacyjny lub literę. Zapisz oryginalny identyfikator zwierzęcia i inne niezbędne dane identyfikacyjne w rejestrze kolonii, aby upewnić się, że asystenci i personel zajmujący się hodowlą zwierząt pozostaną ślepi na warunki.

Losowo uporządkuj rozmieszczenie klatek w pomieszczeniu testowym, tak aby myszy typu dzikiego i transgenicznego nie zostały niewłaściwie oddzielone. I przykryj dno każdej klatki 100 gramami suchej masy ściółki z kolb kukurydzy do prób kwadratowych, skręconych i rozdrobnionych papierów. I 100 gramów miękkiej ściółki z kolb do prób z miękkimi kolbami.

Następnie, tuż przed wprowadzeniem myszy do klatki, umieść pojedynczy sprasowany bawełniany kwadrat, pojedynczy skręt papieru, bez dodawania dodatkowego materiału do miękkiej ściółki z kolb lub 2,5 grama czystego, rozdrobnionego białego papieru do drukarki pociętego na paski o długości od pięciu do siedmiu centymetrów. O tej samej porze dnia, na początku cyklu świetlnego, przynieś klatkę domową zawierającą myszy do pomieszczenia testowego. I przenieś każdą mysz do przypisanej jej klatki gniazdowej z materiałem już znajdującym się w klatce.

Kiedy wszystkie myszy zostaną umieszczone, zwróć klatki domowe do pomieszczenia i pozwól myszom ukończyć próbę przez 24 godziny, bez zakłóceń. Pod koniec próby ostrożnie zdejmij pokrywę każdej klatki. A kiedy każda mysz opuści gniazdo, sfotografuj każde gniazdo, rejestrując przypisany identyfikator na zdjęciu i minimalizując pojawianie się wszelkich materiałów na zewnątrz klatki.

Po sfotografowaniu każdego gniazda delikatnie przenieś każdą mysz do indywidualnych tymczasowych klatek. I eskortuj ściółkę i wszelkie materiały do gniazdowania z każdej klatki. Następnie wymień ściółkę, podaj następny materiał do zagnieżdżania w sekwencji.

I wróć mysz do klatki lęgowej. Po zakończeniu wszystkich prób należy umieścić myszy z powrotem w ich domowych klatkach i obserwować myszy pod kątem potencjalnego agresywnego zachowania. Aby zachować wiarygodność między relaterami, należy dostarczyć obrazy bazowe dla każdego materiału gniazdowego dla co najmniej dwóch osób niewidomych na badanie.

I zapewnij serię gniazd próbek, aby zapoznać oceniających z każdym rodzajem materiału. Podczas oceniania gniazd należy przyznać jeden punkt, gdy rozdrobniony papier lub małe kwadraty pozostają rozrzucone po całej klatce lub bawełniany kwadrat lub skręt pozostają nietknięte. Wynik dwa jest przyznawany, gdy część materiału jest skonstruowana w gnieździe, ale ponad 50% materiału nie zostało wykorzystane do budowy gniazda.

Wynik trzy jest przyznawany, gdy budowane jest zauważalne gniazdo, ale kilka elementów jest nadal rozrzuconych. Wynik cztery jest przyznawany, gdy prawie cały materiał jest używany do budowy gniazda, ale kilka kawałków materiału pozostaje rozrzuconych lub znajduje się w pobliżu gniazda. Punktacja pięć jest przyznawana, gdy prawie cały materiał jest używany do budowy niemożliwego do zidentyfikowania gniazda.

Poproś osobę oceniającą o zrobienie przerwy i ponowne przejrzenie zdjęć wyjściowych, aby uniknąć zmęczenia i stronniczości podczas procedury oceniania, jeśli to konieczne. Po oznaczeniu wszystkich klatek, wprowadź wyniki i sformatuj plik danych tak, aby był w długim formacie, tak aby wyniki zwierząt znajdowały się w oddzielnych kolumnach. W tej reprezentatywnej analizie we wszystkich czterech dostarczonych materiałach myszy typu dzikiego uzyskały wyższe wyniki w zakresie jakości gniazda w porównaniu z myszami APOE e4.

Z rozdrobnionym papierem ocenianym jako znacznie wyższej jakości niż kwadrat, pościel lub materiały skręcane. Nie zaobserwowano żadnych różnic między materiałami kwadratowymi, pościelowymi i skręcanymi. Ponadto, w tym eksperymencie z myszami htau, 5,5-miesięczne zmutowane zwierzęta budują gniazda z rozdrobnionego papieru, które były znacznie gorsze niż te zbudowane przez ich odpowiedniki w tym samym wieku.

Wyniki powinny pozostać ślepe na warunki eksperymentalne i dokonać przeglądu kryteriów punktacji. Mając na uwadze, że wnioski są rzetelne i miarodajne, należy również ocenić wiarygodność między oceniającymi i wewnątrz oceniających. Zakopywanie się w ziemi i bieganie w kołach okołodobowych to dwa inne powszechne sposoby oceny czynności życia codziennego.

I mogą służyć jako uzupełnienie zachowań gniazdowych. Zagnieżdżanie może być wykorzystywane jako ocena pomocnicza do przewidywania możliwego spadku funkcji poznawczych, poszerzając oddech ocen behawioralnych w połączeniu z labiryntem wodnym Morrisa i bieganiem kołem dobowym.