Przedkliniczny model szczurzy do badania uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego w mikrochirurgii rekonstrukcyjnej

Uraz niedokrwienno-reperfuzyjny jest główną przyczyną niewydolności płata w mikrochirurgii rekonstrukcyjnej. Ten film opisuje przedkliniczny model zwierzęcy do badania tej patofizjologii. Ten model wolnego płata skóry oparty na powierzchownych naczyniach nadbrzusza ogonowego u szczura może pozwolić na ocenę różnych terapii i związków w celu przeciwdziałania uszkodzeniom związanym z uszkodzeniem niedokrwienno-reperfuzyjnym.

Rekonstrukcje mikrochirurgiczne są idealne dla szerokiej gamy defektów. Procedury te zapewniają jednak obowiązkowy okres niedokrwienia, po którym następuje reperfuzja. Okres ten jest zwykle dobrze tolerowany, a wskaźnik powodzenia zabiegów mikrochirurgicznych przekracza 90%Jednak tylko 73,7% płatów wymagających rewizji chirurgicznej może być całkowicie bezpiecznych.

Ponadto, w przypadku replantacji urazów awulsji palców, wskaźnik sukcesu wynosi około 60%, a w przypadku ponownego przeszczepu tkanki kompozytowej, odsetek projekcji urazów niedokrwienno-reperfuzyjnych jest zwiększony, ponieważ uraz aktywuje odporność wrodzoną. Dlatego interesujące jest badanie tego patofizjologicznego zjawiska. Aby rozpocząć tę procedurę, użyj markera chirurgicznego, aby narysować płat o wymiarach trzy centymetry na sześć centymetrów, upewniając się, że jeden z sześciu centymetrów boków pasuje do linii środkowej brzucha.

Następnie wykonaj sześciocentymetrowe nacięcie skóry na linii środkowej brzucha, dwa prostopadłe trzycentymetrowe nacięcia, a także jedno z sześciu centymetrów równolegle do pierwszego nacięcia. Aby rozpocząć preparowanie wyznaczonego płata skóry, użyj nożyczek i kleszczy Adsona, aby podnieść płat. Delikatnie pociągnij klapkę od obszaru czaszki w kierunku okolicy ogonowej.

Rozetnij szypułkę klapy, nie dotykając jej lub chwytając przydankę tak rzadko, jak to możliwe, aby uniknąć uszkodzenia ścianki naczynia. Użyj 8-0 Nylonowe szwy do okluzji przez ligatury naczyń odpiszczelowych, bocznych obwodowych naczyń udowych i bliższych ogonowych naczyń udowych. Zaciśnij szypułkę naczyniową, a następnie przetnij ją, aby rozpocząć ośmiogodzinny okres niedokrwienia.

Użyj heparynizowanego roztworu soli fizjologicznej, aby perfuzji płatka, a następnie usuń zastój krwi z mikrokrążenia. Do wykonania zespoleń mikrochirurgicznych należy użyć nici nylonowych 10-0. Po ośmiu godzinach niedokrwienia należy ponownie wykonać fuzję płatka, usuwając zaciski mikronaczyniowe i sprawdzić drożność naczyń.

Najpierw oceń przepływ krwi za pomocą przepływomierza ultradźwiękowego w czasie tranzytu i sond mikrochirurgicznych. Umieść naczynie docelowe w ultradźwiękowym okienku czujnika sondy przepływu, aby określić ilościowo objętość przepływu. Gdy zostanie osiągnięte dobre sprzężenie i naczynie zostanie umieszczone w oknie akustycznym bez żadnego napięcia, kliknij przycisk nagrywania na wyświetlaczu, aby zapisać dane.

Następnie użyj wchłanialnych szwów 4-0, aby zamknąć skórę. Aby ocenić mikrokrążenie płatka, należy zastosować laserową analizę kontrastu plamkowego. Wykonaj nowe nagranie dla każdej próbki i dla każdego badania kontrolnego, klikając plik, nowe nagranie.

Otworzy się nowe okno, w którym wyświetlany jest panel konfiguracji. W tym miejscu edytuj informacje dotyczące nazwy projektu, tematu, operatora i nazwy nagrania. Dostosuj odległość roboczą, przesuwając laser w stosunku do tkanki.

Przybliż głowicę lasera do wewnątrz lub na zewnątrz w kierunku tkanki będącej przedmiotem zainteresowania. W ustawieniach obrazu ustandaryzuj obszar pomiaru, wprowadzając żądaną szerokość i wysokość. Ustaw gęstość punktów na wysoką.

W ustawieniach przechwytywania obrazu wybierz liczbę klatek na sekundę i czas trwania nagrania. Następnie kliknij przycisk nagrywania, aby rozpocząć nagrywanie. Panel ustawień zostanie zastąpiony panelem nagrywania, a dane zostaną zapisane automatycznie.

Wykonaj migawki podczas procedury, aby umożliwić dalsze porównanie. Następnie użyj oprogramowania ImageJ, aby zmierzyć obszary przeżycia i martwicy, najpierw umieszczając linijkę w miejscu klapy i wykonując zdjęcia kontrolne do pomiaru makroskopowego. W przyborniku ImageJ wybierz linię prostą i narysuj linię nad jednym centymetrem linijki.

Kliknij na analizuj, ustaw skalę, a w polu tekstowym dla znanej odległości wprowadź wartość jednego centymetra. Kliknij narzędzie do zaznaczania wielokątów i narysuj linie wielokątów nad klapą, aby obliczyć realny obszar. Kliknij analizuj, zmierz, aby uzyskać wartość powierzchni.

Następnie przed umieszczeniem w pomieszczeniu należy założyć zwierzęciu opatrunek pooperacyjny, aby zapobiec samookaleczeniu. Siedem dni po operacji należy sfotografować obszar operacyjny, aby umożliwić makroskopowe pomiary obszarów przeżycia płata i martwicy. Korzystając z wcześniej opisanej techniki laserowej analizy kontrastu plamkowego, zwizualizuj i określ ilościowo różnice perfuzji, aby ocenić mikrokrążenie płatka.

Po analizie makroskopowej usuń szwy 4-0, podnieś płat i użyj ultradźwięków w czasie tranzytu, aby ponownie ocenić przepływ krwi w szypułce naczyniowej. Pobieranie próbek tkanek należy przeprowadzić, dzieląc podłużnie płat na dwie części o wymiarach 1,5 centymetra na sześć centymetrów. Bezpośrednio po wykonaniu zespoleń mikrochirurgicznych uzyskano wyższe wartości przepływu krwi niż zalecane w piśmiennictwie przepływy minimalne.

Tak więc wszystkie zespolenia mikrochirurgiczne zostały opatentowane tydzień po operacji. Obserwacja mikrokrążenia deprawacji przepływu krwi w czasie uszkodzenia niedokrwiennego była możliwa dzięki technice laserowej analizy kontrastu plamkowego. Obejmuje to natychmiastową hiperperfuzję podczas reperfuzji płata i okołooperacyjnie, różne obszary z mniejszą perfuzją miały większe ryzyko pooperacyjnej martwicy płatów, które rzeczywiście uległy nekrotyzacji siedem dni po zakończeniu badania.

Obszar przeżycia płata po ośmiu godzinach niedokrwienia i jego późniejszej reperfuzji wynosił około 40%Wcześniej opublikowane wyniki pokazują statystycznie istotne różnice, gdy porówna się ten model z płatami, w których nie dochodzi do uszkodzenia niedokrwiennego. Należy pamiętać, aby wypreparować szypułkę płata bez dotykania jej lub chwytając przydankę w jak najmniejszym stopniu, aby uniknąć uszkodzenia ściany naczynia, a także wykonać odpowiednie zespolenia mikrochirurgiczne, aby uniknąć powikłań związanych z techniką operacyjną. Śródoperacyjnie, technologia ultrasonograficzna w czasie tranzytu pozwala nam określić ilościowo przepływ krwi w zespoleniach mikrochirurgicznych, a tym samym przewidzieć perfuzję płata.

Po operacji laserowa analiza kontrastu plamkowego pozwala na częściową ciągłość mapowania przepływu w czasie rzeczywistym w obrębie wolnych płatów. Jest to obiecująca technika, jednak potrzebne są dalsze badania. W tym filmie opisano protokół odpowiedniego modelu do oceny środków terapeutycznych przeciwdziałających uszkodzeniu niedokrwienno-reperfuzyjnemu w dziedzinie mikrochirurgii rekonstrukcyjnej.