In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System

Manu Prasad; Sankar Jagadeeshan; Maurizio Scaltriti; Irit Allon; Moshe Elkabets

doi:10.3791/60410

Ustanowienie in vitro genetycznie zmodyfikowanej linii komórkowej mysiego raka głowy i szyi przy ...

JoVE Journal
Cancer Research

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Cancer Research

In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System

Ustanowienie in vitro genetycznie zmodyfikowanej linii komórkowej mysiego raka głowy i szyi przy użyciu systemu Cas9 związanego z adenowirusem

Full Text

8,417 Views

05:45 min

January 9, 2020

DOI: 10.3791/60410-v

Manu Prasad*^1,2, Sankar Jagadeeshan*^1,2, Maurizio Scaltriti³, Irit Allon^2,4, Moshe Elkabets^1,2

¹The Shraga Segal Department of Microbiology, Immunology and Genetics,Ben-Gurion University of the Negev, ²Faculty of Health Sciences,Ben-Gurion University of the Negev, ³Human Oncology & Pathogenesis Program (HOPP),Memorial Sloan Kettering Cancer Center, ⁴Institute of Pathology,Barzilai University Medical Center

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Rozwój modeli mysich z specyficznymi genami zmutowanymi u pacjentów z rakiem głowy i szyi jest niezbędny do zrozumienia nowotworów. W tym miejscu przedstawiamy protokół transformacji in vitro pierwotnych komórek języka myszy przy użyciu systemu Cas9 związanego z adenowirusem do generowania mysich linii komórkowych HNC ze specyficznymi zmianami genomowymi.

Protokół ten umożliwił opracowanie modeli raka głowy i szyi ze specyficzną operacją genomiczną, znacząco wpływając na nasze zrozumienie roli określonych mutacji genów w procesie nowotworu. Główną zaletą tej techniki jest łatwość, z jaką linia komórkowa może zostać opracowana z praktycznie każdego narządu. Procedurę zademonstruje Manu Prasad, doktorant z mojego laboratorium.

Zacznij od użycia nożyczek chirurgicznych, aby pobrać język od sześciotygodniowego samca lub samicy transgenicznej myszy B6. Użyj skalpela, aby zmielić tkankę na bardzo małe fragmenty i zbierz kawałki do 15-mililitrowej probówki zawierającej 4,5 mililitra zwykłego podłoża RPMI bez surowicy. Dodaj 200 mikrolitrów potrójnej mieszanki enzymów do probówki i inkubuj próbkę w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 30 minut, stukając w probówkę co 10 minut, aby zwiększyć dysocjację enzymatyczną tkanki.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos

Explore More Videos

In Vitro Genetycznie Modyfikowane Mysie Rak Głowy I Szyi Linia Komórkowa Wirus Związany Z Adeno System Cas9 Nowotwor Nożyczki Chirurgiczne Mysz Transgeniczna B6 Dysocjacja Enzymatyczna Pożywka RPMI Zawiesina Komórkowa Zanieczyszczenie Fibroblastami Trypsyna EDTA Transdukcja Genom Wirusowy Hodowla Komórkowa