Name: Wykrywanie ustalenia wspólnego dopływu krwi u myszy parabiotycznych przez wstrzyknięcie glukozy do żyły ogonowej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 27 s
Description: Poznaj metodę wykrywania chimerizmu krwi u myszy parabiotycznych poprzez wstrzyknięcie glukozy do żyły ogonowej. Ta nieinwazyjna technika umożliwia bezpieczne i niezawodne potwierdzenie wspólnego krążenia krwi.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Narodową Fundację Nauk o Przyrodzie Chin (81570399 i 81773735), Narodowy Kluczowy Program Badawczo-Rozwojowy Chin - Projekt Badawczy Modernizacji Tradycyjnej Medycyny Chińskiej (2017YFC1702003) oraz Hei Long Jiang Outstanding Youth Science Fund (JC2017020).

Wszystkie procedury dotyczące zwierząt i opieki nad nimi zostały zatwierdzone przez Instytucjonalną Komisję ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt Uniwersytetu Medycznego w Harbinie.
UWAGA: Narzędzia i sprzęt wymagane do tej metody są wymienione w Tabeli Materiałów.
1. Przygotowanie materiałów i zwierząt
<ol>
	<li>Zamów samce myszy C57BL/6 o wadze od 20 g do 25 g od standardowego dostawcy zwierząt laboratoryjnych.</li>
	<li>Trzymaj myszy w cyklu 12 godzin światła: 12 godzin ciemności w temperaturze 24−26 °C z dostępem ad libitum do wody i pożywienia.</li>
</ol>
2. Parabioza
<ol>
	<li>Znieczulenie myszy należy podać dootrzewnowo 2,2,2-tribromoetanol o stężeniu 0,1 ml/10 g. Potwierdzić prawidłowe znieczulenie zgodnie z objawami rozluźnienia mięśni, powolnego i stałego oddechu, utraty odruchu stymulacji skóry i zaniku odruchu rogówkowego.</li>
	<li>Nałóż maść okulistyczną z patyczkiem higienicznym, aby zapobiec suchości oczu.</li>
	<li>Wykonaj procedurę parabiozy zgodnie z wcześniejszym opisem5.
	<ol>
		<li>Ułóż myszy w pozycji leżącej. Dokładnie ogol lewą stronę jednej myszy i prawą stronę drugiej myszy, zaczynając od około 1 cm powyżej łokcia do 1 cm poniżej kolana za pomocą golarki elektrycznej. Użyj kremu do depilacji, aby całkowicie usunąć sierść na ogolonej skórze.</li>
		<li>Przetrzyj ogolone obszary jodoforem. Umieść myszy na podgrzewanej podkładce pokrytej sterylną podkładką.</li>
		<li>Wykonaj podłużne nacięcia skóry, zaczynając od 0,5 cm powyżej łokcia do 0,5 cm poniżej stawu kolanowego, używając ostrych nożyczek po ogolonej stronie każdego zwierzęcia.</li>
		<li>Delikatnie odłącz skórę od powięzi podskórnej po nacięciu.</li>
		<li>Połącz łokć i kolano parabiontu za pomocą szwu 3-0.</li>
		<li>Zszyj ogoloną skórę ciągłym szwem 5-0.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wstrzyknij 0,5 ml 0,9% NaCl podskórnie każdej myszy, aby zapobiec odwodnieniu.</li>
	<li>Wstrzyknąć tramadol (10 mg/25 g/dobę) domięśniowo każdej myszy w celu złagodzenia bólu.</li>
</ol>
3. Walidacja chimeryzmu cyrkulacji
<ol>
	<li>Metoda fluktuacji glukozy 
	UWAGA: Zweryfikuj pomyślne zbudowanie chimeryzmu krążenia między parabiontami metodą fluktuacji glukozy (bez postu) w 10 dobie po operacji parabiozy.
	<ol>
		<li>Znieczulić parabionty przez dootrzewnowe wstrzyknięcie 2,2,2-tribromoetanolu 20 g/l każdej myszy w stężeniu 0,1 ml/10 g.</li>
		<li>Zamocuj myszy dawcy w żylnym stabilizatorze ogona myszy wizualnej.</li>
		<li>Przetrzyj żyły ogonowe na boku jednego z ogonów parabionta wacikiem nasączonym 70−75% alkoholem, aby oczyścić ogon i rozszerzyć naczynia krwionośne.</li>
		<li>Trzymać w prawej ręce strzykawkę o pojemności 1,0 ml zawierającą glukozę i trzymać igłę równolegle do żyły (w odległości mniejszej niż 15°).</li>
		<li>Włóż igłę w miejscu około 2−4 cm od końcówki ogona.</li>
		<li>Wstrzyknąć dawcy 100 μl glukozy (1,2 g/kg) w ciągu 10 s. 
		UWAGA: Termin dawca odnosi się do parabiontu, który otrzymuje zastrzyk glukozy przez żyłę ogonową. Biorcą jest drugi parabiont, który nie otrzymuje glukozy bezpośrednio.</li>
		<li>Oczyść palce u nóg jodoforem. Odetnij palce myszy dawcy i biorcy nożyczkami i zbierz kroplę krwi w różnych punktach czasowych po wstrzyknięciu glukozy (1 min, 5 minut, 10 min, 15 min, 20 min, 30 min, 40 min, 50 min i 60 min). Usuń skrzep krwi w każdym punkcie czasowym pobrania, aby uniknąć większych uszkodzeń. 
		UWAGA: Objętość pobranej krwi wynosiła 10-25 ul dla jednego testu, a łącznie 90-225 ul.</li>
		<li>Wlej krew do środka pasków testowych glukometru w celu wykrycia poziomu glukozy.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Użyj niebieskiego Counterstaina Evana jako kontroli pozytywnej3.
	<ol>
		<li>Wstrzyknąć dootrzewnowo 200 μl 0,5% niebieskiego barwnika Evana Counterstain.</li>
		<li>2 godziny później poddać parabionty eutanazji przez dootrzewnowe wstrzyknięcie 20 g/l 2,2,2-tribromoetanolu każdej myszy w stężeniu 0,2 ml/10 g i pobrać krew z obu parabiontów przez nakłucie serca.</li>
		<li>Odwirować próbki krwi o masie 916 x g przez 15 minut.</li>
		<li>Zbierz surowicę z supernatantu.</li>
		<li>Rozcieńczyć serum 0,9% NaCl w stosunku 1:50.</li>
		<li>Zmierzyć absorbancję rozcieńczonych próbek surowicy przy długości fali 620 nm za pomocą spektrofotometru.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Baruch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging-induced+type+I+interferon+response+at+the+choroid+plexus+negatively+affects+brain+function%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Aging-induced type I interferon response at the choroid plexus negatively affects brain function.</a> Science. 346 (6205), 89-93 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positional+cloning+of+the+mouse+obese+gene+and+its+human+homologue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Positional cloning of the mouse obese gene and its human homologue.</a> Nature. 372 (6505), 425-432 (1994).</li>
<li>Torres, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parabiotic+model+for+differentiating+local+and+systemic+effects+of+continuous+and+intermittent+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology+%281985%29%22%5BJournal%5D)">Parabiotic model for differentiating local and systemic effects of continuous and intermittent hypoxia.</a> Journal of Applied Physiology (1985). 118 (1), 42-47 (2015).</li>
<li>Loffredo, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+differentiation+factor+11+is+a+circulating+factor+that+reverses+age-related+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Growth differentiation factor 11 is a circulating factor that reverses age-related cardiac hypertrophy.</a> Cell. 153 (4), 828-839 (2013).</li>
<li>Kamran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parabiosis+in+mice%3A+a+detailed+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Parabiosis in mice: a detailed protocol.</a> Journal of Visualized Experiments. (80), e50556(2013).</li>
<li>Conboy, M. J., Conboy, I. M., Rando, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterochronic+parabiosis%3A+historical+perspective+and+methodological+considerations+for+studies+of+aging+and+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Heterochronic parabiosis: historical perspective and methodological considerations for studies of aging and longevity.</a> Aging Cell. 12 (3), 525-530 (2013).</li>
<li>Eggel, A., Wyss-Coray, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+revival+of+parabiosis+in+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Swiss+Medical+Weekly%22%5BJournal%5D)">A revival of parabiosis in biomedical research.</a> Swiss Medical Weekly. 144, w13914(2014).</li>
<li>Brack, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ageing+of+the+heart+reversed+by+youthful+systemic+factors%21%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Ageing of the heart reversed by youthful systemic factors!</a> EMBO Journal. 32 (16), 2189-2190 (2013).</li>
<li>Wu, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+cells+contribute+to+cardiomyocyte+regeneration+after+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Circulating cells contribute to cardiomyocyte regeneration after injury.</a> Circulation Research. 116 (4), 633-641 (2015).</li>
<li>Kaiser, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27Rejuvenation+factor%27+in+blood+turns+back+the+clock+in+old+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">'Rejuvenation factor' in blood turns back the clock in old mice.</a> Science. 344 (6184), 570-571 (2014).</li>
<li>Rando, T. A., Finkel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+aging+and+rejuvenation--a+sense+of+humors%3F%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cardiac aging and rejuvenation--a sense of humors?</a> New England Journal of Medicine. 369 (6), 575-576 (2013).</li>
<li>Heidt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+contribution+of+monocytes+to+heart+macrophages+in+steady-state+and+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Differential contribution of monocytes to heart macrophages in steady-state and after myocardial infarction.</a> Circulation Research. 115 (2), 284-295 (2014).</li>
<li>McPherron, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Through+thick+and+thin%3A+a+circulating+growth+factor+inhibits+age-related+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Through thick and thin: a circulating growth factor inhibits age-related cardiac hypertrophy.</a> Circulation Research. 113 (5), 487-491 (2013).</li>
<li>Villeda, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Young+blood+reverses+age-related+impairments+in+cognitive+function+and+synaptic+plasticity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Young blood reverses age-related impairments in cognitive function and synaptic plasticity in mice.</a> Nature Medicine. 20 (6), 659-663 (2014).</li>
<li>Katsimpardi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+and+neurogenic+rejuvenation+of+the+aging+mouse+brain+by+young+systemic+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Vascular and neurogenic rejuvenation of the aging mouse brain by young systemic factors.</a> Science. 344 (6184), 630-634 (2014).</li>
<li>Starzl, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lost+chord%3A+microchimerism+and+allograft+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+Today%22%5BJournal%5D)">The lost chord: microchimerism and allograft survival.</a> Immunology Today. 17 (12), 577-584 (1996).</li>
<li>Coleman, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+historical+perspective+on+leptin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">A historical perspective on leptin.</a> Nature Medicine. 16 (10), 1097-1099 (2010).</li>
<li>Salpeter, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+regulation+of+the+age-related+decline+of+pancreatic+beta-cell+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Systemic regulation of the age-related decline of pancreatic beta-cell replication.</a> Diabetes. 62 (8), 2843-2848 (2013).</li>
<li>Sheldon, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gestational+exercise+protects+adult+male+offspring+from+high-fat+diet-induced+hepatic+steatosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Gestational exercise protects adult male offspring from high-fat diet-induced hepatic steatosis.</a> Journal of Hepatology. 64 (1), 171-178 (2016).</li>
<li>Martineau, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+metabolic+profile+of+intrahepatic+cholestasis+of+pregnancy+is+associated+with+impaired+glucose+tolerance%2C+dyslipidemia%2C+and+increased+fetal+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">The metabolic profile of intrahepatic cholestasis of pregnancy is associated with impaired glucose tolerance, dyslipidemia, and increased fetal growth.</a> Diabetes Care. 38 (2), 243-248 (2015).</li>
<li>Wang, F., Liu, Y., Yuan, J., Yang, W., Mo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compound+C+Protects+Mice+from+HFD-Induced+Obesity+and+Nonalcoholic+Fatty+Liver+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Compound C Protects Mice from HFD-Induced Obesity and Nonalcoholic Fatty Liver Disease.</a> International Journal of Endocrinology. 2019, 3206587(2019).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Parabioza odnosi się do techniki chirurgicznej polegającej na połączeniu dwóch żywych zwierząt w celu ustanowienia wspólnego układu naczyniowegoza pomocą środków eksperymentalnych 6,7,8. Zaletą tego modelu jest to, że substancje wytwarzane przez jednego osobnika mogą działać na oba zwierzęta w tym samym czasie. W ten sposób model parabiozy może być wykorzystany do zbadania roli substancji lub czynnika w powiązanej chorobie, prow...

Parabioza to metoda modelowania, w której dwa żywe organizmy są łączone ze sobą chirurgicznie i rozwijają się jako jeden system fizjologiczny ze wspólnym układem krążenia1. Takie modele są szeroko stosowane do badania fizjologii ze względu na zaletę, że substancje wytwarzane przez jednego osobnika mogą działać na oba zwierzęta w tym samym czasie za pośrednictwem wspólnego układu krążenia. Od połowy XIX wieku, kiedy eksperymenty parabiotyczne zostały zapoczątkowane przez Paula2, metody konstruowania modeli parabiotycznych stały się ustandaryzowane. Brakowało jednak prostej i wygodnej metody weryfikacji pomyślnego ustalenia chimeryzmu krwi. Doniesiono, że krążenie krzyżowe można z powodzeniem ocenić poprzez dootrzewnowe wstrzyknięcie 0,5% niebieskiego barwnika Evansa do jednego z parabiontów, a następnie pomiar absorbancji błękitu Evansa we krwi obu parabiontów za pomocą czytnika mikropłytek3. Inna metoda wymaga specyficznej rasy myszy, która zawiera monocyty znakowane CD45.1+ i CD45.2+ w każdym parabiontie. Cytometria komórkowa jest następnie wykorzystywana do określenia chimeryzmu krwi poprzez pomiar częstości występowania dwóch markerów w monocytach ze śledziony lub krwi4. Jednak metody te są często śmiertelne lub kłopotliwe dla zwierząt, a bezpieczna i prosta metoda szybkiej i wiarygodnej weryfikacji modeli parabiotycznych jest wysoce pożądana. W tym celu opracowaliśmy nową metodę, która została zwalidowana w mysim modelu parabiozy. Stężenie glukozy w próbkach krwi pobranych z żyły ogonowej mierzy się za pomocą glukometru, a wzorzec zmian poziomu glukozy u myszy dawców i biorców jest uważany za wskaźnik chimeryzmu krążenia. Nazwaliśmy tę metodę "metodą fluktuacji glukozy". Zastosowanie tej metody walidacji nie ogranicza się do myszy, ale może zostać rozszerzone na różne modele patologiczne, z wyjątkiem tych, które mają poważne rozregulowanie metabolizmu glukozy. Procedura jest prosta, oszczędza czas i jest bezpieczna.

<table><tbody><tr><td>zakrzywione kleszcze</td><td>Instrumenty chirurgiczne JZ, Chiny</td> Cienkie nożyczki <td>J31340</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Instrumenty chirurgiczne JZ, Chiny</td> Kleszcz igłowy <td>WA1030</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Instrumenty chirurgiczne JZ, Chiny</td><td>60017961</td><td></td></tr><tr><td>strzykawki 2,5 ml</td><td>Agilent, USA</td><td>5182-9642</td><td></td></tr><tr><td>Tribromoethano</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>T48402-5G</td><td></td></tr><tr><td>penicylina</td><td>Solarbio, Chiny</td><td>IP0150</td><td></td></tr><tr><td>tramadol</td><td>Yijishiye, Chiny</td><td>YJT712520</td><td></td></tr><tr><td>glukometr</td><td>Roche Diabetes Care, Indiana</td><td>Paski testowe Accu-Chek Active Niebieski</td><td></td></tr><tr><td>Counterstain Evan's</td><td>Solarbio, Chiny</td> Krem do depilacji <td>G1810</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Nair, USA</td><td>LL9161</td><td></td></tr><tr><td>Koc rozgrzewający ( Poduszka grzewcza)</td> <td>Kent Scientific Corp, USA</td><td>TP-22G</td><td></td></tr><tr><td>Golarka elektryczna</td><td>Codos, Chiny</td><td>CP-5000</td><td></td></tr><tr><td>3-0,5-0 szew chirurgiczny</td><td>Fabryka igieł do szwów medycznych w Szanghaju, Chiny</td><td>SYZ 3-0 #, SYZ 5-0 #</td><td></td></tr></tbody></table>

wykrywanie ustalenia wspólnego dopływu krwi u myszy parabiotycznych przez wstrzyknięcie glukozy do żyły ogonowej

Detecting Establishment of Shared Blood Supply in Parabiotic Mice by Caudal Vein Glucose Injection

Parabioza to eksperymentalna metoda chirurgicznego łączenia dwóch równoległych zwierząt wzdłuż osi podłużnej ciała. Przedstawiamy protokół wykrywania pomyślnego ustalenia chimeryzmu krwi u parabiontów poprzez wstrzyknięcie glukozy do żyły ogonowej. Skonstruowano myszy parabiotyczne. Glukozę wstrzyknięto mysz-dawcy przez żyłę ogonową, a wahania poziomu glukozy we krwi mierzono u obu myszy za pomocą glukometru krwi w różnych punktach czasowych. Nasze wyniki wykazały, że po wstrzyknięciu glukozy poziom glukozy we krwi u myszy dawców gwałtownie wzrósł po 1 minucie, a następnie powoli spadał. Tymczasem poziom glukozy we krwi myszy biorców osiągnął szczyt 15 minut po wstrzyknięciu. Podobne wyniki uzyskano w przypadku błękitu Evansa, stosowanego jako kontrola pozytywna dla glukozy. Synchroniczne wahania poziomu glukozy we krwi wskazują, że przepływ krwi między dwiema myszami został pomyślnie ustalony.

U sześciu myszy dawców poziom glukozy we krwi gwałtownie wzrósł do 26,5 µmol/L (wzrost o 173%) średnio 1 min po wstrzyknięciu 100 µL glukozy (1,2 g/kg) do żyły ogonowej, a następnie stopniowo spadał do 13,3 µmol/L w 60 min. U myszy biorców poziom glukozy we krwi rósł powoli po wstrzyknięciu i osiągnął pierwszy poziom szczytowy w 15 min (wzrost o 47%, 12,2 µmol/L). Na podstawie powyższych wyników standard chimeryzmu krążenia ustalono następująco: 1) gwałtowny wzrost poziomu glukozy we krwi...

Tutaj opisujemy nową metodę wykrywania udanego ustanowienia wspólnego krążenia krwi dwóch parabiontów poprzez wstrzyknięcie glukozy do żyły ogonowej, która powoduje minimalne szkody i nie jest śmiertelna dla parabiontów.

Wykrywanie ustalenia wspólnego dopływu krwi u myszy parabiotycznych przez wstrzyknięcie glukozy do żyły ogonowej

Parabiosis is an experimental method for surgically combining two parallel animals along the longitudinal axis of the body. We present a protocol for ...

Nasz protokół zapewnia ulepszoną metodę weryfikacji chimeryzmu krążenia oraz metodę udanego tworzenia modelu parabiozy dla badań biomedycznych. W porównaniu z istniejącymi metodami wykrywania chimeryzmu krwi w parabiozie, które często są śmiertelne lub uciążliwe, nasz protokół jest bezpieczny i prosty, umożliwiając szybką i wiarygodną weryfikację. Chociaż metoda ta jest specyficzna dla wykrywania chimeryzmu krwi w modelach parabiozy, może być stosowana do wszelkich badań biomedycznych obejmujących procedury parabiotyczne.Najtrudniejszym krokiem jest wstrzyknięcie glukozy. Dlatego przed wykonaniem procedury eksperymentalnej należy przećwiczyć wstrzykiwanie żyły ogonowej lub użyć żylnego wizualnego stabilizatora ogona myszy. Po potwierdzeniu braku reakcji na odruch pedałowania, umieść dwie 20 do 25-gramowe, znieczulone C57 czarne 6 myszy w pozycji leżącej na plecach i użyj golarki elektrycznej, aby dokładnie ogolić lewą stronę jednej myszy i prawą stronę drugiej myszy od około jednego centymetra powyżej łokcia do jednego centymetra poniżej kolana.Usuń wszelkie pozostałe włosy kremem do depilacji przed wykonaniem podłużnych nacięć skóry w oczyszczonej skórze każdego zwierzęcia, zaczyn

detecting-establishment-shared-blood-supply-parabiotic-mice-caudal

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Parabiotyczne połączenie dwóch organizmów prowadzi do rozwoju wspólnego układu krążenia. W tym protokole opisujemy kroki chirurgiczne mające na celu utworzenie parabiotycznego połączenia między myszą typu dzikiego a myszą konstytutywną z ekspresją GFP.

Parabioza u myszy: szczegółowy protokół

Wywołane insuliną rozszerzenie naczyń krwionośnych reguluje perfuzję mięśni i zwiększa powierzchnię mikrokrążenia (rekrutację mikronaczyniową) dostępną do wymiany substancji rozpuszczonej między krwią a śródmiąższem tkankowym. Przedstawiono połączoną mikroskopię przyżyciową i ultrasonografię ze wzmocnieniem kontrastowym w celu jednoczesnej oceny działania insuliny na większe naczynia i mikrokrążenie in vivo.

Połączona mikroskopia przyżyciowa i ultrasonografia tylna myszy ze wzmocnieniem kontrastowym w celu zbadania rozszerzenia naczyń krwionośnych i perfuzji mięśni wywołanego insuliną

Obecny artykuł opisuje generację i charakterystykę metaboliczną myszy karmionych dietą wysokotłuszczową jako model insulinooporności i otyłości wywołanej dietą. Ponadto zawiera szczegółowe protokoły do wykonywania doustnego testu tolerancji glukozy i testu tolerancji insuliny, monitorując zmiany metabolizmu glukozy w całym organizmie in vivo.

Badanie metabolizmu glukozy in vivo u myszy karmionych dietą wysokotłuszczową przy użyciu doustnego testu tolerancji glukozy (OGTT) i testu tolerancji insuliny (ITT)

To badanie opisuje bezpośredni pomiar produkcji glukozy w wątrobie w mysim modelu zespołu policystycznych jajników przy użyciu stabilnego izotopowego znacznika glukozy przez żyłę ogonową zarówno na czczo, jak i w stanie bogatym w glukozę w tandemie.

Ocena produkcji glukozy w wątrobie w mysim modelu zespołu policystycznych jajników

Tutaj opisujemy prostą metodę wszczepienia myszom komercyjnego ciągłego monitora glikemii przeznaczonego dla pacjentów i dostarczamy skrypty do analizy wyników.

Proste, ciągłe monitorowanie glikemii u swobodnie poruszających się myszy

Ten protokół opisuje prostą i minimalnie inwazyjną metodę przeszczepiania i obrazowania komórek NIT-1 u myszy z nieotyłym cukrzycą (NOD) z ciężkim niedoborem odporności, którym podano splenocyty oczyszczone z myszy NOD z spontaniczną cukrzycą.

Bioluminescencyjne monitorowanie przeżywalności przeszczepu w adoptywnym modelu transferowym cukrzycy autoimmunologicznej u myszy

Zacisk hiperglikemiczny służy do pomiaru uwalniania insuliny przy utrzymującym się wyższym stężeniu glukozy we krwi. Zacisk hipoglikemiczny służy do pomiaru produkcji glukozy indukowanej reakcjami przeciwregulacyjnymi. Obie metody wykorzystują tę samą procedurę chirurgiczną. W tym miejscu przedstawiamy technikę zaciskową do oceny ogólnoustrojowego metabolizmu glukozy.

Zacisk hiperglikemiczny i zacisk hipoglikemiczny u świadomych myszy

W tym protokole przedstawiono metody istotne dla metabolomiki tętniczo-żylnej zoptymalizowanej pod kątem BAT przy użyciu GC-MS w modelu mysim. Metody te pozwalają na uzyskanie cennych informacji na temat wymiany metabolitów na poziomie organizmu, w której pośredniczy BAT.

Metabolomika tętniczo-żylna do pomiaru wymiany metabolitów in vivo w brunatnej tkance tłuszczowej

Tutaj prezentujemy protokół do ustanowienia mysiego modelu docytoplazmatycznego wstrzykiwania plemnika (ICSI) i transferu zarodków (ET), co pozwala nam obserwować związane z wiekiem zmiany w metabolizmie glukozy, które mogą być przypisane ICSI, dostarczając wglądu w jego potencjalny długoterminowy wpływ na rozwój człowieka.

Monitorowanie stężenia glukozy we krwi u potomstwa myszy po docytoplazmatycznym wstrzyknięciu plemnika

Protokół demonstruje metodę sekwencyjnego pobierania krwi z żył wrotnych i żyły głównej dolnej od myszy w celu oceny produkcji i absorpcji metabolitów mikrobiologicznych jelit.

Sekwencyjne pobieranie krwi z żyły głównej dolnej, a następnie żyły wrotnej w celu oceny metabolitów drobnoustrojów jelitowych u myszy

W tym miejscu podajemy szczegółowe informacje na temat stymulowanego glukozą wydzielania insuliny (GSIS) poprzez perfuzję przez naczynia krwionośne myszy z nienaruszoną trzustką jako dodatkową technikę oceny funkcji endokrynnej trzustki z redukcją możliwych czynników zakłócających.

Stymulowane glukozą wydzielanie insuliny poprzez perfuzję przez naczynia krwionośne myszy z nienaruszoną trzustką

Poznaj metodę wykrywania chimerizmu krwi u myszy parabiotycznych poprzez wstrzyknięcie glukozy do żyły ogonowej. Ta nieinwazyjna technika umożliwia bezpieczne i niezawodne potwierdzenie wspólnego krążenia krwi.

Wykrywanie ustalenia wspólnego dopływu krwi u myszy parabiotycznych przez wstrzyknięcie glukozy do żyły ogonowej

Przeglądaj więcej filmów