Name: Analiza przemieszczenia mechanicznej deformacji mięśnia sercowego (DIAMOND) ujawnia segmentalną heterogeniczność funkcji serca u embrionalnego danio pręgowanego (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 15 s
Description: Odkryj metodę DIAMOND do analizy segmentowej funkcji serca embrionalnego danio pręgowanego z mikrometrową rozdzielczością. Ta technika umożliwia ilościową ocenę lokalnej mechaniki serca w przestrzeni 3D.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Obecna praca została sfinansowana przez granty American Heart Association 16SDG30910007 i 18CDA34110338 oraz przez granty National Institutes of Health HL083015, HL111437, HL118650 i HL129727.

Wszystkie opisane tutaj metody zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Wykorzystania Zwierząt (IACUC) Uniwersytetu Kalifornijskiego w Los Angeles (UCLA), a eksperymenty przeprowadzono zgodnie z protokołami zatwierdzonymi przez Biuro Badań nad Zwierzętami UCLA.
1. Hodowla rybek danio Tg(cmlc2:mCherry) i pobieranie zarodków
<ol>
	<li>Postępuj zgodnie z procedurami utrzymania, rozrodu i zbierania embrionów opisanymi w wcześniej ustalonych praktykach hodowlanych i rozpłodowych. Szczegóły znajdują się w pracy Messerschmidta i wsp.9.</li>
	<li>18 h po zapłodnieniu potraktuj zebrane embriony roztworem 0,003% 1-fenylo-2-tiomocznika (PTU) w medium E3, aby zachować przezroczystość embrionów do obrazowania LSFM.</li>
</ol>
2. Leczenie doksorubicyną w celu wywołania uszkodzenia serca
<ol>
	<li>W 3. dniu po zapłodnieniu (dpf), potraktować zarodki doksorubicyną w stężeniu 10 μM w podłożu wodnym E3 dla ryb. Po 24 h inkubacji (do 4. dpf), zastąpić podłoże z doksorubicyną świeżym podłożem E3. 
	OSTRZEŻENIE: Doksorubicyna jest lekiem stosowanym w chemioterapii. Wymagane jest stosowanie odpowiednich środków ochrony indywidualnej (PPE), a odpady należy utylizować w pojemnikach na odpady biologiczne.</li>
</ol>
3. Modulacja szlaku Notch
<ol>
	<li>Zarodki ryb zebrafish poddano działaniu inhibitora szlaku Notch, (2S)-N-[(3,5-difluorophenyl)acetyl]-L-alanyl-2-phenyl]glycine 1,1-dimethylethyl ester (DAPT), w stężeniu 10 μM w podłożu E3 w dniach 3–6 dpf.</li>
	<li>Do zarodków zebrafish w stadium 1 komórki wstrzyknięto mikroiniekcyjnie mRNA efektorów dolnego szczebla szlaku Notch: Notch intracellular domain (NICD) oraz Neuregulin-1 (Nrg-1) w stężeniach odpowiednio 10 pg/nL i 5 pg/nL8,10. 
	UWAGA: Mikroiniekcję wykonuje się pod mikroskopem z wykorzystaniem pompy powietrznej w celu dokładnego kontrolowania objętości wstrzykiwanego roztworu. Mikroiniekcję mRNA do komórki przeprowadza się, gdy zapłodnione jajo znajduje się w stadium pierwszej komórki. Szczegóły dotyczące przygotowania i sekwencji mRNA znajdują się w pracy Chen et al.8. Szczegóły dotyczące mikroiniekcji oraz przygotowania igieł do iniekcji znajdują się w pracy Rosen et al.10.</li>
</ol>
4. Obrazowanie LSFM i synchronizacja po obrazowaniu
<ol>
	<li>W kwestii technik obrazowania LSFM oraz algorytmu synchronizacji po obrazowaniu, szczegóły znajdują się w poprzednich publikacjach9,11. 
	UWAGA: W skrócie, nasz system wykorzystuje laser ciągły jako źródło oświetlenia do obrazowania wszystkich transgenicznych linii zebrafish. Moduł detekcji składa się z dwóch naukowych kamer CMOS (sCMOS) oraz dwóch zestawów filtrów do obrazowania dwukanałowego. Moduł detekcji jest zainstalowany prostopadle do płaszczyzny oświetlenia. Każda klatka LSFM jest pozyskiwana przy czasie ekspozycji 20 msec, podczas gdy rozdzielczość w przekroju wynosi ~0,65 μm, a wielkość kroku między kolejnymi klatkami to ~2 μm. Do wzbudzenia sygnałów fluorescencyjnych mCherry użyto lasera o długości fali 589 nm.</li>
</ol>
5. Rekonstrukcja 3D serca w fazie skurczowej i rozkurczowej
<ol>
	<li>Otwórz folder utworzony przez algorytm postsynchronizacji, a następnie otwórz folder „Output”. Wybierz płaszczyznę środkową serca i wczytaj cały folder do programu ImageJ. Zlokalizuj pierwszą fazę rozkurczową oraz skurczową i zapisz numery odpowiednich klatek.</li>
	<li>Otwórz folder „Output/By State” i znajdź foldery o numerach odpowiadających przed chwilą zapisanym numerom klatek. Konwertuj obrazy w folderach do plików 3D TIFF (tagged image file format) i nazwij je odpowiednio „diastole.tif” oraz „systole.tif”.</li>
</ol>
6. Segmentacja komory
<ol>
	<li>Otwórz oprogramowanie do analizy obrazu (patrz Tabela materiałów). Kliknij File | Open data i wczytaj pliki „diastole.tif” oraz „systole.tif”. Wprowadź rozmiar woksela zgodnie z ustawieniami obrazowania. 
	UWAGA: W przypadku użytego systemu LSFM typowy rozmiar woksela wynosi 0,65 µm x 0,65 µm x 2 µm.</li>
	<li>Kliknij panel „SEGMENTATION” i ręcznie wysegmentuj część komory serca. Proces ten można ułatwić za pomocą wbudowanego narzędzia „Threshold”, które pozwala zaznaczyć wszystkie obszary powyżej określonej intensywności. Komora jest grubszą jamą o silniejszej fluorescencji. 
	UWAGA: Należy upewnić się, że z wysegmentowanej komory usunięto kanał przedsionkowo-komorowy oraz trakt odpływowy, ponieważ wpływa to na analizę przemieszczeń.</li>
	<li>Po zakończeniu segmentacji kliknij panel „Project”. Kliknij prawym przyciskiem myszy zakładki „diastole.Labels.tif” oraz „systole.Labels.tif” w konsoli i wybierz „Export Data as”, aby zapisać dane jako pliki 3D TIFF.</li>
</ol>
7. Tworzenie prostopadłościanów do rejestracji obrazów
<ol>
	<li>Uruchomienie &#34;prepImage_1.m&#34; w środowisku programistycznym (patrz Tabela materiałów). Otwórz &#34;prepImage_1.m&#34;, &#34;ImPath&#34; w linii 5, aby folder zawierał oryginalne i posegmentowane pliki TIFF, a następnie zmień &#34;przekrój&#34; w linii 4 do liczby przekrojów plików 3D tif.</li>
	<li>Po uruchomieniu kodu zostaną wygenerowane pięć nowych plików TIFF 3D (&#34;test.tif&#34;, &#34;diastole_200.tif&#34;, &#34;systole_200.tif&#34;, &#34;diaLabel.tif&#34;i &#34;sysLabel200.tif&#34;) oraz dwa nowe foldery (&#34;resample_dia&#34; i &#34;ponowne próbkowanie systemu&#34;).</li>
</ol>
8. Ponowne próbkowanie 3D serc w skurczu i rozkurczu wzdłuż płaszczyzny krótkiej osi
<ol>
	<li>Zaimportuj wszystkie pięć plików 3D TIFF do oprogramowania do analizy obrazów (patrz Tabela materiałów). 
	UWAGA: Rozmiar woksela pozostaje bez zmian.</li>
	<li>Przejdź do panelu MULTIPLANAR. Wybierz plik „diastole_200.tif” jako główne dane. Dopasuj oś X (zielona linia w płaszczyźnie XY) do pionowej długiej osi komory, a oś Z (czerwona linia w płaszczyźnie YZ) do poziomej długiej osi komory. 
	UWAGA: Pionową długą oś wyznacza się poprzez znalezienie najdłuższej osi łączącej wierzchołek z odpływem w płaszczyźnie XY, a poziomą długą oś poprzez znalezienie najdłuższej osi łączącej wierzchołek z odpływem w płaszczyźnie YZ. Obracaj oś, umieszczając kursor na jej końcu.</li>
	<li>Wybierz trzy losowe punkty z skośnej płaszczyzny YZ (płaszczyzny krótkiej osi) w kierunku przeciwnym do ruchu wskazówek zegara i zapisz współrzędne ich pozycji 3D. 
	UWAGA: Upewnij się, że punkty zostały wybrane w kierunku przeciwnym do ruchu wskazówek zegara.</li>
	<li>Powtórz kroki 8.2 i 8.3 dla pliku „systole_200.tif”.</li>
	<li>Kliknij panel „PROJECT”. Utwórz obiekt „Slice” (przekrój) dla pliku „diastole_200.tif”, klikając prawym przyciskiem myszy na „diastole_200.tif” i wyszukując obiekt „Slice”. Kliknij lewym przyciskiem myszy nowo utworzony obiekt Slice, a w panelu Properties panel | Options zaznacz „Set Plane” i wybierz trzy punkty w sekcji „Plane Definition”. Wprowadź współrzędne trzech punktów z kroku 7.3.</li>
	<li>Powtórz krok 8.5 dla pliku „systole_200.tif”. 
	UWAGA: Utworzony obiekt przekroju powinien nosić nazwę „Slice 2”.</li>
	<li>Kliknij prawym przyciskiem myszy plik „diastole_200.tif”, wyszukaj opcję „Resample Transformed Image” i utwórz obiekt. W panelu Properties wybierz „Slice” jako „Reference” (referencję) i kliknij Apply. Powinien zostać wygenerowany obiekt o nazwie „diastole_200.transformed”.</li>
	<li>Kliknij prawym przyciskiem myszy plik „diastole_200.transformed”, wyszukaj opcję „Resample” i utwórz obiekt. Wybierz „Voxel Size” jako „Mode” i w panelu Properties zmień „Voxel Size” na x = 1, y = 1 oraz z = 1.</li>
	<li>Kliknij „Apply”. Powinien zostać wygenerowany obiekt o nazwie „diastole_200.resampled”. Kliknij prawym przyciskiem myszy plik „diastole_200.resampled” i zapisz go jako plik 3D TIFF.</li>
	<li>Powtórz ten sam krok dla plików „diaLabel.tif” i „test.tif”. Zapisz pliki „diaLabel.resampled” i „test.resampled” jako pliki 3D TIFF. Powtórz ten sam krok dla plików „systole_200.tif”, „sysLabel.tif” i „test.tif”, używając „Slice 2” jako referencji, a następnie zapisz pliki „systole_200.resampled”, „sysLable.resampled” i „test2.resampled” jako pliki 3D TIFF. 
	UWAGA: Upewnij się, że w tym kroku zapisano łącznie sześć plików TIFF.</li>
</ol>
9. Podział pobranego serca
<ol>
	<li>Zaimportuj do programu ImageJ wszystkie sześć plików zreproblowanych z kroku 8. Wybierz przekrój z pliku „systole_200.resampled”, w którym kanał przedsionkowo-komorowy jest wyraźnie widoczny. Zapisz numer tego przekroju.
	<ol>
		<li>Użyj funkcji „Image | Transform | Rotate” w programie ImageJ, aby ustawić kanał przedsionkowo-komorowy w pionie. Zastosuj ten sam obrót do wszystkich plików. Zamknij wszystkie okna i zapisz wszystkie zmiany.</li>
		<li>Przenieś pliki „diastole_200.resampled”, „diaLabel.resampled” oraz „test.resampled” do folderu „resample_dia”, a pliki „systole_200.resampled”, „sysLable.resampled” oraz „test2.resampled” do folderu „resample_sys”.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Otwórz plik „divider_2_8_pieces.m”. Zmień wartość „ImPath” w linii 5 oraz „ImPath” w linii 395 na ścieżkę do katalogu z obrazami. Zmień zmienną „Middle” w linii 22 i linii 411 na numery przekrojów, w których kanał przedsionkowo-komorowy jest wyraźnie widoczny w plikach „systole_200.resampled” i „diastole_200.resampled”.</li>
	<li>Uruchom kod i w wyświetlonych oknach kliknij raz w centrum komory, a następnie raz w centrum kanału przedsionkowo-komorowego. Czynność tę należy powtórzyć dla obrazów skurczu (systole) oraz rozkurczu (diastole).</li>
</ol>
10. Rejestracja macierzy obrazów skurczowych i rozkurczowych
<ol>
	<li>Otwórz plik &#34;register_3.m&#34; i zmień wartość &#34;ImPath&#34; w linii 4 na ścieżkę do folderu z obrazami. Uruchomienie tego kodu może zająć od 5 do 20 min, w zależności od mocy obliczeniowej systemu. 
	UWAGA: Sztucznie utworzone prostopadłościanami w kroku 7 służą do sztywnej rejestracji 3D, która zachowuje odległość między dwoma punktami oraz kąty wyznaczone przez trzy punkty. Gdy prostopadłościan z końca rozkurczu (czerwony) zostanie zarejestrowany do prostopadłościanu z końca skurczu (zielony), wynikająca z tego rozbieżność lokalizacji 3D umożliwia wyprowadzenie unikalnej macierzy sztywnej transformacji, składającej się z rotacji i translacji, od macierzy końca rozkurczu do macierzy końca skurczu (Rycina 1H). Przeprowadzamy rejestrację i zregularizowaną minimalizację energii w celu odszumienia macierzy po transformacji, korzystając z zestawu narzędzi do przetwarzania obrazów (patrz Tabela materiałów). Szczegółowy opis matematyczny znajduje się w pracy Chen et al.8.</li>
</ol>
11. Wynik wektorów przemieszczenia
<ol>
	<li>Otwórz plik „displacement_4.m” i zmień wartość „ImPath” w linii 4 na ścieżkę do folderu z obrazami.</li>
	<li>Uruchom plik „displacement_4.m”, który wygeneruje plik „vector8.txt” w folderze „vectors”. Po otwarciu pliku „vector8.txt” pojawi się macierz o wymiarach 8 x 4. Każdy wiersz macierzy zawiera cztery liczby, które reprezentują wartości składowej X, składowej Y, składowej Z oraz całkowitą wartość wektora przemieszczenia dla konkretnego segmentu komory. 
	UWAGA: Wektor przemieszczenia uzyskuje się poprzez obliczenie przemieszczenia środka masy każdego segmentu w przestrzeni 3D. Obliczamy współrzędne 3D środka masy (PS i PD) <img alt="Równanie CK" src="/files/ftp_upload/60547/60547eqck.jpg" /> (gdzie k oznacza odpowiednio współrzędną X, Y lub Z) każdego segmentu (I-VI) w zbiorze danych segmentacji od skurczu do rozkurczu (Rysunek 1J). Środek masy <img alt="Równanie CK" src="/files/ftp_upload/60547/60547eqck.jpg" /> w przestrzeni 3D definiujemy następująco: 
	<img alt="Równanie 1" src="/files/ftp_upload/60547/60547eq1.jpg" /> 
	gdzie Cx = X, Cy = Y i Cz = Z, Mi = masa każdego segmentu (I ≤ i ≤ VI), m = liczba wokseli każdego segmentu, a ρ = funkcja gęstości, w której obszar segmentowany przyjmuje wartość 1, a pozostałe 0. W trakcie cyklu pracy serca oblicza się normę L2 wektorów przemieszczeń cząstkowych wzdłuż osi X, Y i Z oraz całkowity wektor przemieszczenia. Macierz zawiera łącznie osiem wierszy. Pierwszy i ósmy wiersz dotyczą kanału przedsionkowo-komorowego i są zatem pomijane w naszej analizie. Segmenty od I do VI są reprezentowane przez wiersze od drugiego do siódmego.</li>
</ol>

<ol><li>Ewer, M. S., Ewer, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiotoxicity+of+anticancer+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Cardiotoxicity of anticancer treatments.</a> Nature Reviews Cardiology. 12 (9), 547-558 (2015).</li>
<li>Thavendiranathan, P., Wintersperger Bernd, J., Scott, F. D., Thomas D, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+MRI+in+the+Assessment+of+Cardiac+Injury+and+Toxicity+From+Cancer+Chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%3A+Cardiovascular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Cardiac MRI in the Assessment of Cardiac Injury and Toxicity From Cancer Chemotherapy.</a> Circulation: Cardiovascular Imaging. 6 (6), 1080-1091 (2013).</li>
<li>Mickoleit, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+reconstruction+of+the+beating+zebrafish+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">High-resolution reconstruction of the beating zebrafish heart.</a> Nature Methods. 11 (9), 919-922 (2014).</li>
<li>Thavendiranathan, P., et al. Use of Myocardial Strain Imaging by Echocardiography for the Early Detection of Cardiotoxicity in Patients During and After Cancer Chemotherapy. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aThavendiranathan%2C+P+%22A+Systematic+Review%22">A Systematic Review</a>. 63 (25), Part A 2751-2768 (2014).</li>
<li>Collier, P., Phelan, D., Klein, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Test+in+Context%3A+Myocardial+Strain+Measured+by+Speckle-Tracking+Echocardiography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">A Test in Context: Myocardial Strain Measured by Speckle-Tracking Echocardiography.</a> Journal of the American College of Cardiology. 69 (8), 1043-1056 (2017).</li>
<li>Hanekom, L., Cho, G. Y., Leano, R., Jeffriess, L., Marwick, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+two-dimensional+speckle+and+tissue+Doppler+strain+measurement+during+dobutamine+stress+echocardiography%3A+an+angiographic+correlation%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Comparison of two-dimensional speckle and tissue Doppler strain measurement during dobutamine stress echocardiography: an angiographic correlation.</a> European Heart Journal. 28 (14), 1765-1772 (2007).</li>
<li>Poss, K. D., Wilson, L. G., Keating, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+regeneration+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Heart regeneration in zebrafish.</a> Science. 298 (5601), 2188-2190 (2002).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Displacement+analysis+of+myocardial+mechanical+deformation+%28DIAMOND%29+reveals+segmental+susceptibility+to+doxorubicin-induced+injury+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Displacement analysis of myocardial mechanical deformation (DIAMOND) reveals segmental susceptibility to doxorubicin-induced injury and regeneration.</a> JCI Insight. 4 (8), e125362(2019).</li>
<li>Messerschmidt, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light-sheet+Fluorescence+Microscopy+to+Capture+4-Dimensional+Images+of+the+Effects+of+Modulating+Shear+Stress+on+the+Developing+Zebrafish+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Light-sheet Fluorescence Microscopy to Capture 4-Dimensional Images of the Effects of Modulating Shear Stress on the Developing Zebrafish Heart.</a> Journal of Visualized Experiments. (138), e57763(2018).</li>
<li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microinjection+of+Zebrafish+Embryos+to+Analyze+Gene+Function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function.</a> Journal of Visualized Experiments. (25), e1115(2009).</li>
<li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((4-Dimensional+light-sheet+microscopy+to+elucidate+shear+stress+modulation+of+cardiac+trabeculation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">4-Dimensional light-sheet microscopy to elucidate shear stress modulation of cardiac trabeculation.</a> The Journal of Clinical Investigation. 126 (5), 1679-1690 (2016).</li>
<li>Lenneman, C. G., Sawyer, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardio-Oncology%3A+An+Update+on+Cardiotoxicity+of+Cancer-Related+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Cardio-Oncology: An Update on Cardiotoxicity of Cancer-Related Treatment.</a> Circulation Research. 118 (6), 1008-1020 (2016).</li>
<li>Geyer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+Myocardial+Mechanics+Using+Speckle+Tracking+Echocardiography%3A+Fundamentals+and+Clinical+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Echocardiography%22%5BJournal%5D)">Assessment of Myocardial Mechanics Using Speckle Tracking Echocardiography: Fundamentals and Clinical Applications.</a> Journal of the American Society of Echocardiography. 23 (4), 351-369 (2010).</li>
<li>Castro, P. L., Greenberg, N. L., Drinko, J., Garcia, M. J., Thomas, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+pitfalls+of+strain+rate+imaging%3A+angle+dependency%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Sciences+Instrumentation%22%5BJournal%5D)">Potential pitfalls of strain rate imaging: angle dependency.</a> Biomedical Sciences Instrumentation. 36, 197-202 (2000).</li>
<li>Seo, Y., Ishizu, T., Aonuma, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+Status+of+3Dimensional+Speckle+Tracking+Echocardiography%3A+A+Review+from+Our+Experiences%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Ultrasound%22%5BJournal%5D)">Current Status of 3Dimensional Speckle Tracking Echocardiography: A Review from Our Experiences.</a> Journal of Cardiovascular Ultrasound. 22 (2), 49-57 (2014).</li>
<li>Amzulescu, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvements+of+Myocardial+Deformation+Assessment+by+Three-Dimensional+Speckle-Tracking+versus+Two-Dimensional+Speckle-Tracking+Revealed+by+Cardiac+Magnetic+Resonance+Tagging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Echocardiography%22%5BJournal%5D)">Improvements of Myocardial Deformation Assessment by Three-Dimensional Speckle-Tracking versus Two-Dimensional Speckle-Tracking Revealed by Cardiac Magnetic Resonance Tagging.</a> Journal of the American Society of Echocardiography. 31 (9), 1021-1033 (2018).</li>
<li>Wolterink, J. M., Leiner, T., Viergever, M. A., Išgum, I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWolterink%2C+JM+%22Reconstruction%2C+Segmentation%2C+and+Analysis+of+Medical+Images%22">Reconstruction, Segmentation, and Analysis of Medical Images</a>. Zuluaga, M. A., et al. , Springer International Publishing. 95-102 (2016).</li>
<li>Avendi, M. R., Kheradvar, A., Jafarkhani, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+combined+deep-learning+and+deformable-model+approach+to+fully+automatic+segmentation+of+the+left+ventricle+in+cardiac+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Image+Analysis%22%5BJournal%5D)">A combined deep-learning and deformable-model approach to fully automatic segmentation of the left ventricle in cardiac MRI.</a> Medical Image Analysis. 30, 108-119 (2016).</li>
<li>Packard, R. R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+Segmentation+of+Light-Sheet+Fluorescent+Imaging+to+Characterize+Experimental+Doxorubicin-Induced+Cardiac+Injury+and+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Automated Segmentation of Light-Sheet Fluorescent Imaging to Characterize Experimental Doxorubicin-Induced Cardiac Injury and Repair.</a> Scientific Reports. 7 (1), 8603(2017).</li>
<li>Jay Kuo, C. C., Chen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+data-driven+Saak+transform%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visual+Communication+and+Image+Representation%22%5BJournal%5D)">On data-driven Saak transform.</a> Journal of Visual Communication and Image Representation. 50, 237-246 (2018).</li>
<li>Natarajan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complement+Receptor+C5aR1+Plays+an+Evolutionarily+Conserved+Role+in+Successful+Cardiac+Regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Complement Receptor C5aR1 Plays an Evolutionarily Conserved Role in Successful Cardiac Regeneration.</a> Circulation. 137 (20), 2152-2165 (2018).</li>
<li>Zhukov, L., Barr, A. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhukov%2C+L+%22IEEE+Visualization+VIS+2003%22">IEEE Visualization VIS 2003</a>. , 597-602 (2003).</li>
<li>Nielles-Vallespin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+diffusion+tensor+MRI+of+the+human+heart%3A+Reproducibility+of+breath-hold+and+navigator-based+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Magnetic+Resonance+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vivo diffusion tensor MRI of the human heart: Reproducibility of breath-hold and navigator-based approaches.</a> Magnetic Resonance in Medicine. 70 (2), 454-465 (2013).</li>
</ol>

Autorzy oświadczyli, że nie występuje konflikt interesów.

Rygorystyczna strategia ilościowego oznaczania segmentowej funkcji mięśnia sercowego ma kluczowe znaczenie dla oceny mechaniki serca wykraczającej poza tradycyjną EF, o której wiadomo, że jest niewrażliwym i opóźnionym wskaźnikiem uszkodzenia mięśnia sercowego 1,4,12. W związku z tym rośnie zainteresowanie markerami wczesnych zmian w mięśniu sercowym, a rosnąca liczba piśmiennictwa potwierdza parametry deformacji mięśnia sercowe...

Toksyczność serca wywołana chemioterapią i wynikająca z niej niewydolność serca są jednym z głównych powodów zaprzestania chemioterapii1. Dlatego ocena czynnościowa serca odgrywa kluczową rolę w identyfikacji toksyczności kardiologicznej i, co ważniejsze, w przewidywaniu wczesnego uszkodzenia serca po chemioterapii2. Obecne podejścia do oceny czynnościowej serca napotykają jednak na ograniczenia. Metody takie jak frakcja wyrzutowa lewej komory (LVEF) zapewniają tylko globalną i często opóźnioną mechanikę serca po urazie3,4. Obrazowanie dopplerowskie tkanek dostarcza informacji o segmentowej deformacji mięśnia sercowego, ale cierpi na znaczną zmienność wewnątrz- i międzyobserwatoryczną, częściowo z powodu zależności od kąta wiązki ultradźwięków5. Dwuwymiarowe (2D) śledzenie plamek wykorzystuje tryb B echokardiografii, który teoretycznie eliminuje zależność od kąta, ale jego dokładność jest ograniczona przez ruch poza płaszczyzną6. W związku z tym zarówno w badaniach, jak i klinicznych brakuje rygorystycznego podejścia do ilościowego określania segmentowej funkcji serca.
W tym kontekście, opracowaliśmy metodę kwantyfikacji 4D do analizy segmentalnej funkcji serca, którą nazwaliśmy analizą przemieszczenia mechanicznego deformacji mięśnia sercowego (DIAMOND), aby określić wektory przemieszczenia centroidów masy mięśnia sercowego w przestrzeni 3D. Zastosowaliśmy DIAMOND do oceny in vivo czynności serca i toksyczności sercowej wywołanej doksorubicyną u danio pręgowanego (Danio rerio) jako modelu zwierzęcego, wybranego ze względu na ich regenerujący się mięsień sercowy i wysoce konserwatywne geny rozwojowe7. Następnie porównaliśmy segmentowe przemieszczenie DIAMOND z oznaczaniem globalnej frakcji wyrzutowej (EF) i odkształceniem 2D po leczeniu doksorubicyną. Integrując przemieszczenie DIAMOND z mikroskopią fluorescencyjną 4D (LSFM) uzyskaną w celu odwzorowania embrionalnych serc danio pręgowanego, projekt DIAMOND pokazuje, że podstawowe segmenty mięśnia sercowego przylegające do kanału przedsionkowo-komorowego ulegają największej deformacji mechanicznej i są najbardziej podatne na ostre uszkodzenie serca doksorubicyny8.
<!--Nie usuwaj—>

<table><tbody><tr><td>Amira6</td><td>FEI</td><td></td><td>Oprogramowanie do analizy obrazów</td></tr><tr><td>DAPT</td><td>Millipore Sigma</td><td>D5942-5MG</td><td></td></tr><tr><td>Chlorowodorek doksorubicyny</td><td>Millipore Sigma</td><td>D1515-10MG</td><td></td></tr><tr><td>3-aminobenzoesan etylu metanosulfonian</td><td>Millipore Sigma</td><td>E10521-10G</td><td>Trikaina</td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>MathWorks</td><td></td><td>Środowisko programistyczne</td></tr><tr><td>Zestaw narzędzi do przetwarzania obrazów MATLAB</td><td>MathWorks</td><td></td><td>Zestaw narzędzi do przetwarzania obrazów</td></tr></tbody></table>

analiza przemieszczenia mechanicznej deformacji mięśnia sercowego (diamond) ujawnia segmentalną heterogeniczność funkcji serca u embrionalnego danio pręgowanego

Displacement Analysis of Myocardial Mechanical Deformation (DIAMOND) Reveals Segmental Heterogeneity of Cardiac Function in Embryonic Zebrafish

Danio pręgowany jest coraz częściej wykorzystywany jako organizm modelowy do kardiomiopatii i regeneracji. Obecne metody oceny czynności serca nie są w stanie wiarygodnie wykryć mechaniki segmentowej i nie są łatwo wykonalne u danio pręgowanego. Przedstawiamy tutaj półautomatyczną, open-source'ową metodę ilościowej oceny czterowymiarowej (4D) segmentalnej funkcji serca: analiza przemieszczenia mechanicznego odkształcenia mięśnia sercowego (DIAMOND). Transgeniczne embrionalne danio pręgowane zostały zobrazowane in vivo przy użyciu systemu mikroskopii fluorescencyjnej z arkuszami świetlnymi z synchronizacją ruchu serca 4D. Pozyskane cyfrowe serca 3D zostały zrekonstruowane przy końcu skurczu i końcu rozkurczu, a komora została ręcznie podzielona na binarne zestawy danych. Następnie serce zostało przeorientowane i izotropowo ponownie próbkowane wzdłuż prawdziwej krótkiej osi, a komora została równomiernie podzielona na osiem części (I-VIII) wzdłuż krótkiej osi. Ze względu na różne płaszczyzny i matryce repróbkowania w skurczu końcowym i rozkurczu, do rejestracji obrazu zastosowano matrycę transformacji, aby przywrócić pierwotną relację przestrzenną między ponownie próbkowanymi skurczowymi i rozkurczowymi matrycami obrazu. Po zarejestrowaniu obrazu obliczono wektor przemieszczenia każdego segmentu od skurczu końcowego do rozkurczu końcowego na podstawie przemieszczenia środków ciężkości masy w trzech wymiarach (3D). DIAMOND pokazuje, że podstawowe segmenty mięśnia sercowego przylegające do kanału przedsionkowo-komorowego ulegają największej deformacji mechanicznej i są najbardziej podatne na uszkodzenie serca wywołane doksorubicyną. Podsumowując, projekt DIAMOND dostarcza nowych informacji na temat segmentalnej mechaniki serca w zarodkach danio pręgowanego, wykraczających poza tradycyjną frakcję wyrzutową (EF) zarówno w warunkach fizjologicznych, jak i patologicznych.

Proces opracowania metody DIAMOND do oceny trójwymiarowej (3D) segmentowej funkcji serca przedstawiono na Rysunku 1. Po akwizycji obrazów LSFM i rekonstrukcji 3D embrionalnego serca rybki zebrafish (Rysunek 1A), rzeczywistą płaszczyznę krótkiej osi określono jako płaszczyznę prostopadłą do pionowej i poziomej długiej osi, z których obie wyznaczono w przeglądarce wielopłaszczyznowej (Rysunek 1B). Nas...

Celem tego protokołu jest szczegółowe opracowanie nowatorskiej metody oceny segmentalnej funkcji serca u embrionalnych ryb danio pręgowanych, zarówno w warunkach fizjologicznych, jak i patologicznych.

Analiza przemieszczenia mechanicznej deformacji mięśnia sercowego (DIAMOND) ujawnia segmentalną heterogeniczność funkcji serca u embrionalnego danio pręgowanego

Zebrafish are increasingly utilized as a model organism for cardiomyopathies and regeneration. Current methods evaluating cardiac function fail to ...

Diament jest pierwszą metodą open source do ilościowej oceny czterowymiarowej segmentalnej funkcji serca w zarodkach danio pręgowanego. Nasza metoda ma rozdzielczość mikrometryczną, która może określić ilościowo lokalną mechanikę serca w przestrzeni 3D. Żadne inne obecne podejście na to nie pozwala.Diament odkrywa nowe wzorce urazów w toksyczności serca wywołanej doksorubicyną. Dlatego uważamy, że nasza metoda może być wykorzystana jako platforma do wysokoprzepustowych badań przesiewowych in vivo w kierunku toksyczności kardiologicznej wywołanej chemioterapią. Obecnie pracujemy nad przystosowaniem Diamond do serca ssaków.Potrzebne są jednak dodatkowe prace, aby uwzględnić orientację włókien mięśnia sercowego ssaków oraz ruchy obrotowe i skręcające. Podczas próbowania tej metody bardzo ważne jest, aby użytkownik miał wyraźną wizualizację budowy anatomicznej serca danio pręgowanego, aby prawidłowo zidentyfikować osie poziome i pionowe oraz podzielić komorę. Aby zrekonstruować skurczowe i rozkurczowe serce 3D, zacznij od otwarcia folderu utworzonego przez algorytm postsynchronizacji, a następnie otwórz folder wyjściowy.Znajdź pierwszą fazę skurczową i rozkurczową i zapisz numer klatki. Następnie otwórz folder danych wyjściowych według stanu i znajdź foldery, które mają takie same numery jak zarejestrowane numery ramek. Przekonwertuj obrazy w folderze na pliki 3D TIF i nazwij je rozkurczem.TIF i systole.tif. Aby przeprowadzić segmentację komory, otwórz oprogramowanie do analizy obrazu, klikając plik i otwórz dane. Następnie załaduj rozkurcz.tif i systole. tif i wprowadź rozmiar woksela zgodnie z ustawieniami obrazu. Kliknij panel segmentacji i ręcznie podziel na segmenty część komorową serca za pomocą wbudowanego narzędzia progowego.Następnie należy usunąć kanał przedsionkowo-komorowy i drogę odpływu w segmentowanej komorze, ponieważ wpłynie to na analizę przemieszczenia. Po zakończeniu segmentacji kliknij panel projektu, a następnie kliknij prawym przyciskiem myszy plik diastole.labels. tif i systore.labels.tif w konsoli i kliknij Eksportuj dane jako, aby zapisać dane jako pliki 3D TIF. Otwórz prepimage_1. m w środowisku programistycznym, upewnij się, że folder w programie InPath w wierszu piątym zawiera oryginalne i podzielone na segmenty pliki TIF, a następnie zmień wycinek w Live Four na liczbę wycinków plików TIF 3D.Po uruchomieniu kodu zostanie wygenerowanych pięć nowych plików 3D TIF oraz dwa nowe foldery. Zaimportuj wszystkie pięć plików TIF 3D do oprogramowania do analizy obrazów. Przejdź do panelu wielopłaszczyznowego i wybierz opcję diastole_200.tif jako dane podstawowe. Wyrównaj oś x z pionową osią długą komory, a oś z z poziomą osią długą komory. Następnie wybierz trzy losowe punkty z ukośnej płaszczyzny YZ w kierunku przeciwnym do ruchu wskazówek zegara i zapisz ich współrzędne położenia 3D.Powtórz ten proces dla systole_200.tif. Kliknij panel projektu i utwórz obiekt plasterka dla diastole_200. TIF, klikając prawym przyciskiem myszy diastole_200.tif i wyszukiwanie obiektu slice. Kliknij lewym przyciskiem myszy utworzony obiekt przekroju, zaznacz opcję ustaw płaszczyznę w opcjach panelu właściwości, wybierz trzy punkty w definicji płaszczyzny i wprowadź poprzednio zarejestrowane współrzędne. Kliknij prawym przyciskiem myszy diastole_200.tif, wyszukaj Resample Transformed Image i utwórz obiekt. W panelu właściwości wybierz plasterek jako odniesienie i kliknij przycisk Zastosuj, co powinno spowodować wygenerowanie obiektu o nazwie diastole_200.transformed. Następnie kliknij prawym przyciskiem myszy diastole_200.przekształcony, wyszukaj Resample i utwórz obiekt. Wybierz rozmiar woksela jako tryb i zmień go na x równa się jeden, y równa się jeden, a z równa się jeden w panelu właściwości. Kliknij przycisk Zastosuj, a następnie zapisz wygenerowane diastole_200.ponownie próbkowany obiekt jako plik TIF 3D. Powtórz ten proces dla dialabel. tif, test.tif, systole_200. tif, syslabel. tif i test.tif zgodnie ze wskazówkami rękopisu. Zaimportuj wszystkie sześć ponownie próbkowanych plików do ImageJ i zaznacz wycinek systole_200. Ponowne próbkowanie, w którym kanał przedsionkowo-komorowy jest wyraźnie uwidoczniony, upewniając się, że zapisano numer wycinka.Użyj funkcji obracania obrazu transformacji, aby ustawić kanał przedsionkowo-komorowy w pionie. Zastosuj ten sam obrót do wszystkich plików, a następnie zamknij wszystkie okna i zapisz zmiany. Następnie przejdź systole_200.Resampled, syslabel. Resampled i test2. Ponownie próbkowane do folderu resample_sys.Przenieś diastole_200. ponownie próbkowany, dialabelowany. ponownie próbkowany i testuj.Ponowne próbkowanie do folderu resample_dia. Otwórz divider_2_8_pieces. m i zmień InPath w wierszu piątym na katalog obrazu.Zmień zmienny środek w wierszu 22 na numer przekroju, w którym kanał przedsionkowo-komorowy jest wyraźnie uwidoczniony. Powtórz ten proces dla diastole_200. Ponownie próbkowane na liniach 394 i 411.Uruchom kod. Po wyświetleniu monitu kliknij raz środek komory i środek kanału przedsionkowo-komorowego. Aby zarejestrować skurczowe i rozkurczowe matryce obrazu, otwórz register_3.m i zmień InPath w wierszu czwartym na ścieżkę do folderu obrazów. Następnie otwórz displacement_4. m i zmień InPath na ścieżkę folderu obrazów.Uruchom program, aby wygenerować plik vector8. txt z macierzą osiem na cztery. Każdy wiersz macierzy zawiera wielkości składowej x, składowej y, składowej z oraz sumę wielkości wektora przemieszczenia określonego segmentu komory.Wartości te można następnie przenieść do arkusza kalkulacyjnego. Protokół ten wykorzystano do odkrycia segmentowej heterogeniczności funkcji serca i podatności na uszkodzenie mięśnia sercowego wywołane doksorubicyną u danio pręgowanego. Po 24-godzinnym leczeniu doksorubicyną od trzech do czterech dni po zapłodnieniu porównano przemieszczenie segmentów komorowych między grupą kontrolną a grupą leczoną.W warunkach kontrolnych segmenty podstawne pierwszy i szósty ulegają największym przemieszczeniom i są najbardziej podatne na uszkodzenie serca wywołane doksorubicyną. Przy sześciu dpf średnia norma L2 segmentowych wektorów przemieszczenia u ryb kontrolnych wahała się od 3,9 do 8% po normalizacji. Podstawowe segmenty pierwszy i sześć odzyskały przemieszczenie diamentu do poziomów kontrolnych sugerujących regenerację segmentową.Tymczasem bezpośrednio po leczeniu doksorubicyną zaobserwowano pogorszenie podstawowego szczepu 2D z ujemnych 53 do minus 38%, po którym nastąpił powrót do poziomów kontrolnych 48 godzin później, potwierdzając wyniki wypierania Diamonda. Zaobserwowano również równoległe zmniejszenie i powrót do globalnej frakcji wyrzutowej lub EF w odpowiedzi na leczenie. Diament został następnie zastosowany podczas leczenia doksorubicyną i modulacji szlaku notch przy użyciu inhibitora notch DAPT i dalszych efektorów NICD i mRNA NRG1.Mikroiniekcja mRNA uratowała zmniejszenie przemieszczenia Diamonda i EF po ostrym urazie wywołanym chemioterapią. Co więcej, zahamowanie szlaku karbowego po chemioterapii utrudniało odzyskanie przemieszczenia Diamonda segmentów podstawy i EF 48 godzin po leczeniu, ale hamowanie zostało uratowane przez efektory karbu za wycięciem. Wiadomo, że tradycyjna frakcja wyrzutowa jest niewrażliwym i opóźnionym wskaźnikiem uszkodzenia mięśnia sercowego.Diament pozwala naukowcom określić ilościowo ogniskową funkcję serca i wspomóc niejednorodność uszkodzenia mięśnia sercowego w zarodkach danio pręgowanego.

displacement-analysis-myocardial-mechanical-deformation-diamond

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia rozwojowa

Opisano przejrzystą, zestandaryzowaną metodę sekcji i izolacji serca danio pręgowanego na wielu etapach rozwoju. Omówiono również techniki adnotacji i kwantyfikacji.

Sekcja serca w larwalnym, młodzieżowym i dorosłym zebrafish, Danio rerio

Opisano szybką metodę immunobarwienia embrionalnego serca danio pręgowanego. W porównaniu z metodą immunobarwienia całych preparatów, metoda ta znacznie zwiększa penetrację przeciwciał, co pozwala na uzyskanie obrazów o wysokiej rozdzielczości, ujawniających struktury komórkowe i podkomórkowe w sercu przy znacznie krótszym czasie przetwarzania.

Immunobarwienie wypreparowanego serca embrionalnego ryby danio

Ten film opisuje technikę izolowania serca od danio pręgowanego na wielu etapach rozwoju w celu zbadania rozwoju, dojrzewania i starzenia się serca.

Sekcja serca: metoda obserwacji rozwoju serca danio pręgowanego

Ten protokół opisuje metodę fotokonwersji białka fluorescencyjnego Kaede w komórkach wsierdzia żywego zarodka danio pręgowanego, która umożliwia śledzenie komórek wsierdzia podczas rozwoju kanału przedsionkowo-komorowego i zastawki przedsionkowo-komorowej serca.

Śledzenie ruchów tkanki wsierdzia poprzez fotokonwersję komórek w zarodku danio pręgowanego

Tutaj prezentujemy protokół wizualizacji rozwijających się serc u danio pręgowanego w 4-Dimensions (4-D). Obrazowanie 4D, za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej z arkuszami świetlnymi (LSFM), wykonuje trójwymiarowe (3-D) obrazy w czasie, aby zrekonstruować rozwijające się serca. Pokazujemy jakościowo i ilościowo, że naprężenie ścinające aktywuje sygnalizację wsierdzia Notch podczas rozwoju komory, co sprzyja trabekulacji serca.

Mikroskopia fluorescencyjna arkuszy świetlnych w celu uchwycenia 4-wymiarowych obrazów wpływu modulacji naprężeń ścinających na rozwijające się serce danio pręgowanego

Opisujemy protokół oceny morfologii i funkcji serca u dorosłych ryb pręgowanych za pomocą echokardiografii o wysokiej częstotliwości. Metoda umożliwia wizualizację pracy serca i późniejsze ilościowe określenie parametrów funkcjonalnych, takich jak tętno (HR), pojemność minutowa serca (CO), ułamkowa zmiana obszaru (FAC), frakcja wyrzutowa (EF) oraz prędkości napływu i odpływu krwi.

Echokardiografia ultradźwiękowa wysokiej częstotliwości w celu oceny czynności serca danio pręgowanego

Opisujemy zoptymalizowane narzędzia do badania serca danio pręgowanego in vivo za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej za pomocą arkusza świetlnego. W szczególności sugerujemy jasne transgeniczne linie serca i prezentujemy nowe techniki delikatnego osadzania i unieruchamiania, które pozwalają uniknąć wad rozwojowych i wad serca. Przewidziano również możliwy potok pozyskiwania i analizy danych dostosowany do obrazowania serca.

Mikroskopia świetlna szybkiej dynamiki serca w zarodkach danio pręgowanego

Ten protokół wykorzystuje obrazowanie za pomocą arkusza świetlnego do badania funkcji skurczu serca u larw danio pręgowanego i uzyskania wglądu w mechanikę serca poprzez śledzenie komórek i interaktywną analizę.

Obrazowanie 4D Light-sheet skurczu serca danio pręgowanego

Ten protokół przedstawia metodę szczepienia magnetycznego koralika do rozwijającego się serca danio pręgowanego za pomocą mikrochirurgii, umożliwiając manipulowanie siłami mechanicznymi in vivo i wywołując mechaniczny, zależny od bodźca napływ wapnia do komórek wsierdzia.

Manipulowanie siłami mechanicznymi w rozwijającym się sercu danio pręgowanego za pomocą kulek magnetycznych

Protokół ten opisuje tanią metodę mikroskopii świetlnej do oceny morfologii i funkcji serca w embrionach danio pręgowanych, umożliwiającą powtarzalną ocenę rozwojowej kardiotoksyczności bez potrzeby stosowania zaawansowanych systemów obrazowania.

Funkcjonalne obrazowanie serca w zarodkach danio dano za pomocą standardowej mikroskopii i analizy wideo: zastosowania w badaniach środowiskowych i biomedycznych

Odkryj metodę DIAMOND do analizy segmentowej funkcji serca embrionalnego danio pręgowanego z mikrometrową rozdzielczością. Ta technika umożliwia ilościową ocenę lokalnej mechaniki serca w przestrzeni 3D.

Analiza przemieszczenia mechanicznej deformacji mięśnia sercowego (DIAMOND) ujawnia segmentalną heterogeniczność funkcji serca u embrionalnego danio pręgowanego (Wideo) | JoVE Journal

Analiza przemieszczenia mechanicznej deformacji mięśnia sercowego (DIAMOND) ujawnia segmentalną heterogeniczność funkcji serca u embrionalnego danio pręgowanego

Przeglądaj więcej filmów