Zmieniona metoda wywoływania wtórnego obrzęku limfatycznego w tylnej kończynie myszy
2 listopada 2019
Ten model zwierzęcy umożliwia badaczom wywołanie statystycznie istotnego wtórnego obrzęku limfatycznego w tylnej kończynie myszy, trwającego co najmniej 8 tygodni. Model może być wykorzystany do badania patofizjologii obrzęku limfatycznego i badania nowych opcji leczenia.
Ogólnym celem tej metody jest wywołanie konsekwentnego wtórnego obrzęku limfatycznego w tylnej kończynie myszy bez powodowania ciężkiej zachorowalności. Metodę tę można zastosować do wywołania wtórnego obrzęku limfatycznego w tylnej kończynie myszy. Główną zaletą tej metody jest to, że rozwiązuje nieznaczny obrzęk limfatyczny trwający co najmniej osiem tygodni, nie powodując ciężkiej zachorowalności.
Ktoś, kto jest nowy w zabiegu, może zmagać się z technikami mikrochirurgicznymi. Dlatego zalecamy szkolenie mikrochirurgiczne i kilka procedur praktycznych, aby zapewnić pomyślny wynik, ale także przygotować badacza do tego, aby mógł wykonać zabieg bardziej efektywnie. Ustaw źródło promieniowania i znieczul mysz zgodnie z opisem w protokole.
Umieść ołowianą podkładkę o grubości 1,5 milimetra, aby upewnić się, że napromieniany jest tylko obszar, który jest poddawany operacji. Pokazany przykład przedstawia mysz pooperacyjną w celu wyjaśnienia obszaru. Podać dawkę 10 szarego napromieniowania.
Naukowcy muszą podjąć środki ostrożności podczas pracy z promieniowaniem. Podczas tego eksperymentu całe napromieniowanie przeprowadzono w pomieszczeniu izolowanym od promieniowania. A źródło promieniowania było włączane dopiero wtedy, gdy cały personel opuścił pomieszczenie.
Zważ mysz przed operacją. Zbadaj głębokość znieczulenia za pomocą testu szczypania łapy lub ogona. Ogol nogę wybraną do zabiegu.
Ustaw przepływ tlenu na 0,8 litra na minutę. Połącz go ze stożkiem nosowym. Zastosuj maść okulistyczną.
Wstrzyknąć podskórnie 0,5 mililitra soli fizjologicznej, najlepiej w kark myszy, aby zapobiec hipowolemii podczas operacji. Umieść mysz na tkaninie chirurgicznej w pozycji leżącej. Umieść stożek nosowy nad pyskiem.
Delikatnie przymocuj koniec tylnych kończyn taśmą, aby zapobiec przesuwaniu się myszy podczas operacji. Podnieś skórę gładkimi kleszczami i przypnij mały otwór około pięciu milimetrów proksymalnie do dołu podkolanowego. Wsuń ostre nożyczki do otworu i przypnij w kierunku kolana, tak aby nacięcie kończyło się tuż nad kolanem.
Upewnij się, że nie nakłuwasz leżących pod spodem naczyń, podnosząc skórę kleszczami podczas strzyżenia. Przesuń mysz do pozycji leżącej i zakończ nacięcie obwodowe. Wytnij skórę do kilku milimetrów powyżej kąta.
Pamiętaj, aby przez cały czas trwania zabiegu utrzymywać tkankę wilgotną jałową solą fizjologiczną. Cofnij skórę rany proksymalnej za pomocą elastycznego retraktora. I upewnij się, że żyła kulszowa jest widoczna, jak pokazano.
Wstrzyknąć 0,01 mililitra Patent Blue V podskórnie między drugim a trzecim palcem. Delikatnie naciśnij łapę kilka razy, aby rozprowadzić Patent Blue V. Rozkład Patent Blue V można zobaczyć przez mikroskop. Struktury, które należy uwidocznić, to: proksymalne naczynie limfatyczne, PLV, węzeł chłonny podkolanowy, PLN, pierwsze dystalne naczynie limfatyczne, DLV1 i drugie dystalne naczynie limfatyczne, DLV2.
Powiększ, aby uwidocznić PLV i podwiązać go za pomocą nylonowego szwu 10-0. Naciśnij łapę, aby upewnić się, że Patent Blue nie przechodzi proksymalnie do ligatury. Podwiązać dwa dystalne naczynia limfatyczne, jak pokazano.
Ponownie naciśnij łapę kilka razy, aby upewnić się, że żaden Patent Blue V nie przechodzi proksymalnie do ligatury. W tym przykładzie widać, że jedno z naczyń limfatycznych pęka z powodu więzadła utrudniającego przepływ limfy. Usuń węzeł chłonny podkolanowy, węzeł chłonny ma gładką perłową powierzchnię i jest zabarwiony przez Patent Blue V w przeciwieństwie do otaczającej tkanki tłuszczowej.
Przed usunięciem pachwinowej poduszeczki tłuszczowej należy kauteryzować to naczynie, jak pokazano. Następnie usuń poduszeczkę tłuszczową w jednym kawałku. Upewnij się, że nie ma aktywnego krwawienia.
Jest to przykład zlokalizowanego pachwinowego węzła chłonnego. Węzeł chłonny znajdujący się w pachwinowej poduszce tłuszczowej rzadko jest barwiony przez Patent Blue V i może być trudny do odróżnienia od tłuszczu. Usunięcie poduszeczki tłuszczowej w jednym kawałku to najlepszy sposób, aby upewnić się, że węzeł chłonny został usunięty.
Zszyj krawędzie skóry aż do powięzi mięśniowej nylonowym szwem 6-0 za pomocą kleszczy i uchwytu na igłę, pozostawiając odstęp od dwóch do trzech milimetrów, aby ograniczyć powierzchowny przepływ limfy. Jest to przykład gotowych szwów w dole podkolanowym, bocznej stronie kończyny tylnej, powyżej kolana i przyśrodkowej stronie kończyny tylnej. Podaj środek przeciwbólowy i zważ mysz po operacji, a następnie umieść ją w szafce ogrzewanej w celu rekonwalescencji.
Powtórzyć procedurę napromieniania przed zabiegiem. Ten wykres przedstawia łączną średnią objętość kończyn tylnych w trzech oddzielnych badaniach w ciągu ośmiu tygodni po operacji. W sumie uwzględniono 31 myszy.
Oś x reprezentuje tygodnie po operacji. Oś y reprezentuje objętość kończyn tylnych w milimetrach sześciennych. Paski strzałek reprezentują odchylenie standardowe.
Należy się spodziewać, że obrzęk spowodowany zabiegiem chirurgicznym i indukowany obrzęk limfatyczny zmniejszą się w ciągu pierwszych czterech tygodni. Po pierwszych czterech tygodniach obserwujemy względnie stabilny stan obrzęku limfatycznego. Objętość kontrolnej kończyny tylnej zwiększa się w ciągu ośmiu tygodni, a więc ściśle mówiąc, różnica w objętości między tylną kończyną obrzęku limfatycznego a kontrolną kończyną tylną, było to nieoczekiwane.
Spekuluje się, że przyczyną jest to, że myszy używały swojej nieoperowanej tylnej kończyny częściej niż operowanej tylnej kończyny w ciągu kilku tygodni po operacji. Może to prowadzić do przerostu kontrolnej kończyny tylnej i być może wyjaśniać wzrost objętości. Poszczególne dane liczbowe dotyczące trzech włączonych badań znajdują się w protokole.
Poniższa tabela przedstawia test wielokrotnych porównań firmy Sidak dla łącznych pomiarów objętości trzech włączonych badań. Obliczona wartość P pokazuje, że istnieje statystycznie istotna różnica między kończynami tylnymi z indukowanym obrzękiem limfatycznym a kończynami tylnymi z grupy kontrolnej, podczas wszystkich ośmiu tygodni obserwacji. W celu zapoznania się z indywidualną analizą statystyczną trzech uwzględnionych projektów prosimy o zapoznanie się z protokołem.
Metoda ta wywołuje statystycznie istotny obrzęk limfatyczny, trwający co najmniej osiem tygodni. Procedura może być wykorzystana do badania petryfikacji obrzęku limfatycznego i do badania nowych opcji leczenia. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś zrozumieć, jak wywołać wtórny obrzęk limfatyczny w tylnej kończynie myszy, stosując kombinację mikrochirurgii oraz napromieniania przed i po operacji.
Po opanowaniu zabieg chirurgiczny można wykonać w ciągu 45 minut.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Przegląd
Ten model zwierzęcy umożliwia badaczom wywołanie statystycznie istotnego wtórnego obrzęku limfatycznego w kończynie tylnej myszy, utrzymującego się przez co najmniej 8 tygodni. Metoda ta może być wykorzystana do badania patofizjologii obrzęku limfatycznego oraz do poszukiwania nowych opcji terapeutycznych.
Kluczowe elementy badania
Dziedzina nauki
- Neuronauka
- Biologia
- Patofizjologia
Wstęp
- Wtórny obrzęk limfatyczny jest schorzeniem, które może znacząco wpływać na jakość życia.
- Zrozumienie jego mechanizmów jest kluczowe dla opracowania skutecznych metod leczenia.
- Niniejszy model ma na celu dostarczenie niezawodnej metody indukowania obrzęku limfatycznego u myszy.
- W celu pomyślnej implementacji zaleca się przeszkolenie w technikach mikrochirurgicznych.
Cel badania
- W celu wywołania spójnego wtórnego obrzęku limfatycznego w kończynie tylnej myszy.
- W celu zbadania leżącej u podłoża patofizjologii obrzęku limfatycznego.
- W celu zbadania potencjalnych nowych opcji terapeutycznych w leczeniu obrzęku limfatycznego.
Zastosowane metody
- Indukcja wtórnego obrzęku limfatycznego w kończynie tylnej myszy.
- Zastosowanie napromieniowania zgodnie z opisem w protokole.
- Znieczulenie myszy przed zabiegiem.
- Techniki mikrochirurgiczne w celu skutecznej indukcji obrzęku limfatycznego.
Główne wyniki
- Osiągnięto statystycznie istotny obrzęk limfatyczny trwający co najmniej 8 tygodni.
- Model nie wywołał ciężkiej zachorowalności u myszy.
- W wielu próbach uzyskano spójne wyniki.
- Szkolenie poprawiło efektywność procedury.
Wnioski
- Model ten jest skuteczny w badaniu obrzęku limfatycznego u myszy.
- Stanowi on platformę do testowania nowych podejść terapeutycznych.
- Dalsze badania mogą opierać się na tym modelu w celu pogłębienia wiedzy na temat obrzęku limfatycznego.
Najczęściej zadawane pytania
Znaczenie dla przemysłu
Metoda ta zapewnia powtarzalny mysi model wtórnego obrzęku limfatycznego, umożliwiając badania mechanistyczne dysfunkcji limfatycznej oraz ocenę interwencji terapeutycznych. Model ten wspomaga walidację celu poprzez stworzenie systemu istotnego dla przebiegu choroby z mierzalnymi efektami fenotypowymi w okresie 8 tygodni. Ułatwia on przedkliniczną redukcję ryzyka, pozwalając na ocenę wpływu związków na przepływ limfy i przebudowę tkanek bez wystąpienia ciężkiej zachorowalności.
Strategiczne zastosowania w badaniach i rozwoju biopharmaceuticals
Wstępne etapy odkrywania i walidacja celu
- Wartość naukowa: Umożliwia badanie komponentów szlaków limfatycznych oraz funkcjonalną walidację celów zaangażowanych w homeostazę płynów.
- Wartość operacyjna: Zapewnia spójny, mierzalny fenotyp do oceny oddziaływania na cel oraz modulacji szlaku.
Przesiewanie i opracowywanie testów
- Wartość naukowa: Umożliwia pomiar objętości kończyny tylnej jako ilościowy odczyt dla kampanii przesiewowych związków chemicznych.
- Wartość operacyjna: Wspiera standaryzację testu poprzez zastosowanie testu wielokrotnych porównań Sidaka w celu walidacji statystycznej między kohortami badawczymi.
Badania translacyjne i przedkliniczne
- Wartość naukowa: Modeluje patofizjologię wtórnego obrzęku limfatycznego u ludzi, umożliwiając translacyjne badania nad biomarkerami związanymi z wyciekiem chłonki i włóknieniem.
- Wartość operacyjna: Ułatwia zachowanie ciągłości badań przedklinicznych od etapu odkrycia do testów skuteczności dzięki stabilnemu fenotypowi utrzymującemu się przez co najmniej 8 tygodni.
Integracja potoku i przepływu pracy
Metoda ta wpisuje się w kontinuum od etapu odkrywania do badań przedklinicznych, wspierając walidację celów opartą na hipotezach oraz ocenę związków wiodących w programach badawczych nad chorobami układu limfatycznego.
- Biologia odkrywcza: Wspiera redukcję ryzyka mechanistycznego poprzez wyjaśnienie roli celów limfovaskularnych w powstawaniu obrzęków.
- Przesiewowe badania (Screening): Umożliwia zastosowanie gotowego systemu biologicznego do ekspozycji na związki z mierzalną wolumetrią kończyn tylnych jako głównym punktem końcowym.
- Analityka: Zapewnia strukturę statystyczną (test Sidaka) do porównywania grup leczonych i kontrolnych w podłużnych punktach czasowych.
- Badania translacyjne: Jest zgodny z klinicznymi fenotypami limfedemy, wspierając decyzje go/no-go w oparciu o biomarkery.
- Ponowne wykorzystanie w przedsiębiorstwie: Ustanawia wielokrotnego użytku platformę mikrochirurgiczno-radiacyjną do modelowania patologii układu limfatycznego w wielu projektach.
Wpływ operacyjny i przedsiębiorstw
- Wartość naukowa: Pewność prognostyczna w zakresie modulacji celu poprzez statystycznie istotną, trwałą odpowiedź fenotypową.
- Wartość operacyjna: Standaryzowany protokół naświetlania (10 Gy przed/po) i ligacji mikrochirurgicznej zapewnia powtarzalność wyników niezależnie od operatora.
- Wartość strategiczna: Zmniejsza ryzyko niepowodzenia na późnych etapach poprzez umożliwienie wczesnej oceny bezpieczeństwa limfatycznego oraz profili skuteczności.
- Wpływ na portfolio: Umożliwia priorytetyzację kandydatów celujących w układ limfatyczny z uwzględnieniem ryzyka, w oparciu o wierność modelu choroby.
Uwagi dotyczące wdrożenia
- Wymaga doświadczenia w technikach mikrochirurgicznych oraz w protokołach bezpieczeństwa radiacyjnego.
- Zależność od specjalistycznego sprzętu, w tym stereomikroskopu, źródła promieniowania z osłoną ołowianą oraz precyzyjnych narzędzi do szycia.
- Konieczność standaryzacji międzyzespołowej w jednostkach chirurgii, napromieniowania i fenotypowania w celu zapewnienia spójnych wyników.
- Adaptacja do innych systemów modelowych wymagałaby walidacji anatomii układu limfatycznego oraz tolerancji na promieniowanie.
- Ograniczenia praktyczne: czas trwania procedury (~45 minut po przeszkoleniu) oraz zależność od umiejętności mikrochirurgicznych mogą wpływać na przepustowość.
