Name: Zmniejszone powikłania po ponownym połączeniu tętnic w szczurzym modelu ortotopowego przeszczepu wątroby (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-11-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: Poznaj zmodyfikowany model ortotopowego przeszczepu wątroby u szczurów, który poprawia przeżycie biorców poprzez ponowne połączenie tętnic wątrobowych. Ta technika mikrochirurgiczna zmniejsza powikłania i lepiej odzwierciedla warunki ludzkie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Te badania zostały sfinansowane z funduszy z programu transplantacji wielonarządowych w UHN oraz wsparcia ze strony Toronto General i Toronto Western Foundation.

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Modele przeszczepiania wątroby u małych zwierząt są ważne dla zrozumienia odporności po przeszczepie i identyfikacji nowych strategii terapeutycznych32. Idealny model przeszczepu wątroby u małych zwierząt odtwarza wszystkie etapy procedury u ludzi, w tym zespolenie tętnicze. Interpretacja wyników z modelu OLT u szczurów może być trudna, ponieważ większość wersji nie obejmuje etapu zespolenia HA, co prowadzi do wyższych wskaźników powikłań i zachorowalności42. W niektórych zabiegach rekonstrukcyjnych wykorzystuje się tętnicę nerkową, która wymaga usunięcia nerki27. Protokół ten pozwala uniknąć usunięcia narządu, ponieważ wykracza to poza to, co dzieje się w procedurze u ludzi.
Rekonstrukcje tętnic można również wykonać, manipulując aortą szczura31. Metody te wymagają jednak rozległego rozwarstwienia i zaciśnięcia aorty. Jeśli czas zaciskania zostanie wydłużony, szczur biorca będzie miał słabe wyniki związane z dystalnym niedokrwieniem43. U ludzi technika chirurgiczna LT polega na podwiązaniu i podziale tętnicy żołądkowo-dwunastniczej biorcy (GDA). Jednak cechy fizjologiczne i anatomiczne gryzoni sprawiają, że przeszczep przy użyciu tej techniki jest trudniejszy fizjologicznie i może prowadzić do powikłań (tj. martwicy trzustki i dróg żółciowych35 oraz wycieku żółci44). Rekonekcja tętnicza w tym protokole ma na celu obejście tego wyzwania, utrzymanie przepływu krwi w przewodzie i poprawę wyników biorcy.
Zastosowanie techniki rękawa i stentowania do rekonstrukcji kwasu hialuronowego u szczura zostało opisane wcześniej27. W tej technice stent jest używany jako przewodnik, a tętnica jest rekonstruowana od pnia celiakii dawcy do wspólnego kwasu hialuronowego biorcy. Wspólny HA biorcy jest następnie preparowany, a GDA biorcy jest wiązanyz 27. W rezultacie dopływ krwi do dolnej części biorcy ChAD i głowy trzustki może zostać upośledzony. Uważa się, że krążenie uboczne w tym obszarze często zapewnia niewystarczający przepływ krwi do przewodu żółciowego. Na przykład, protokół ten testuje najpierw GDA biorcy za pomocą klipsa mikronaczyniowego, a następnie dzieli biorcę BD. Przy zaciśniętym GDA podzielony BD nie krwawi. Po zdjęciu klamry GDA obserwuje się energiczne krwawienie z BD. Protokół ten, który utrzymuje dobry przepływ do podzielonego przewodu żółciowego biorcy, chroni fizjologię tkanki wątroby biorcy, zapewniając odpowiednią perfuzję krwi w wątrobie i zapobiegając niedotlenieniu wątroby po OLT.
Po stronie dawcy stent HA jest z łatwością wprowadzany do pnia trzewnego podczas przygotowania przeszczepu, tworząc plaster z pnia trzewnego, lewej tętnicy żołądkowej i tętnicy śledzionowej. Stent można wprowadzić przez szeroki otwór, co jest mniej trudne niż próba wprowadzenia stentu do samego pnia trzewnego. Stwierdzono, że 24 G to idealny rozmiar do użycia w stencie HA. Długość stentu powinna wynosić 1,0-1,5 mm, ponieważ działa on jak otwarta brama, która umożliwia łatwe wciągnięcie właściwego kwasu hialuronowego biorcy do wspólnego kwasu hialuronowego dawcy. Przy zwróceniu szczególnej uwagi na miejsce, w którym umieszczany jest szew etylonowy 10-0, krew przepływająca przez to połączenie nigdy nie dotknie bezpośrednio stentu, a właściwy kwas hialuronowy biorcy osłoni go od wewnątrz, zmniejszając ryzyko powikłań. Co ważne, kwas hialuronowy dawcy nigdy nie jest zaciśnięty, aby uniknąć skurczu naczyń krwionośnych. Powodzenie rekonstrukcji tętnic ocenia się, pozostawiając otwartą GDA dawcy. Udane zespolenie skutkuje dobrym przepływem krwi od dawcy GDA po zakończeniu rekonstrukcji.
W tym protokole, podobnie jak w innych, ponowne połączenie SHVC jest najwolniejszym krokiem i ostatecznie dyktuje czas trwania fazy bezwątrobowej. Wraz ze wzrostem czasu trwania czasu znieczulenia wzrasta ryzyko uszkodzenia niedokrwiennego i dysfunkcji wątroby45. Innym krytycznym elementem modeli szczurów OLT są rozmiary przeszczepu, stentów i mankietów. Jeśli przeszczep jest zbyt mały, przeszczep może się skręcić lub odwrócić, blokując połączenia naczyniowe. Rozmiar stentów i mankietów może wymagać dostosowania w zależności od wieku, płci, wagi i szczepu szczura. Rozmiar użytych tutaj mankietów został wybrany zgodnie z wcześniejszym opisem28 i użyto jednego rozmiaru mankietu, który kontrolował rozmiar szczura. Nie stwierdzono żadnych oznak niepokoju ani powikłań (tj. przekrwienie wątroby, obrzęk, wodobrzusze lub powiększenie śledziony) w okresie obserwacji (do tej pory: mediana = 133 dni po operacji, minimum = 115 dni po operacji, maksimum = 161 dni po operacji). Uzasadnione są dalsze badania w celu określenia odpowiedniej wielkości PV i IHVC dla różnych szczepów szczurów, biorąc pod uwagę zarówno wiek, jak i płeć.
Ten zmodyfikowany protokół OLT dla szczurów wykorzystuje mankiety wydrukowane w 3D dla PV i IHVC, jak opisano wcześniej 39,40. Istniejące metody łączenia PV i IHVC obejmują technikę mikroszwu32, technikę mankietu46 i technikę tymczasowej szynymikroszwu 47. Wybrano technikę mankietu wydrukowanego w 3D, ponieważ pozwala ona na ujednolicenie rozmiaru mankietu w zależności od szczepu szczura i jest łatwa w przygotowaniu i użyciu. Jednorazowo można wydrukować duże ilości mankietów o tych samych wymiarach. Na zewnętrznej powierzchni mankietu znajdują się dwa rowki, które pomagają w zabezpieczaniu wiązań i zapobiegają ślizganiu się. Ogon jest również wbudowany w konstrukcję mankietu, aby umożliwić łatwiejszą manipulację mankietem. Ogólnie rzecz biorąc, uważa się, że włączenie mankietów drukowanych w 3D prowadzi do wysokich wskaźników sukcesu i powtarzalności procedury OLT poprzez skrócenie czasu znieczulenia. Stwierdzono, że technika ta skraca również krzywą uczenia się chirurgii.
Podsumowując, w opisanym protokole ustanowiono model, który jest bardziej podobny do przeszczepu wątroby u człowieka poprzez włączenie etapu rekoneksji tętniczej. Protokół ten może być zaadaptowany do badania wielu immunologicznych i chirurgicznych aspektów przeszczepiania wątroby i może służyć jako model do testowania nowych interwencji terapeutycznych związanych z transplantacją.

Globalne obciążenie chorobami wątroby nadal rośnie, z 30% wzrostem liczby zgonów związanych z chorobami wątroby od 2005 do 2013 roku1,2. Przeszczep wątroby jest często jedynym wyjściem dla pacjentów ze schyłkową niewydolnością wątroby. Wątroba jest drugim najczęściej przeszczepianym narządem stałym, a liczba przeszczepów wątroby wykonywanych na całym świecie wzrosła o 7,25% od 2015 do 2016 roku1,2. Pomimo jego rozpowszechnienia, wskaźniki przeżycia po przeszczepieniu uległy stagnacji3,4,5. Wskaźnik przeżycia pacjenta po 15 latach wynosi 53%, a wskaźnik przeżycia pacjenta po 20 latach może wynosić zaledwie 21%3,5. Chociaż istnieją nowe, ekscytujące inicjatywy immunobiologiczne, które mogą prowadzić do nowych metod leczenia i lepszych wyników klinicznych, nie ma jeszcze wiarygodnego modelu małych zwierząt, na którym można by je przetestować.
Model OLT szczura był szeroko stosowany w badaniach nad przeszczepami wątroby, w tym odrzuceniami6,7,8,9,10, tolerancja immunologiczna11, uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne po przeszczepie12, immunosupresja13, oraz żółciowe Tree injury14,15,16,17. Jednak wadą modelu w jego obecnej formie jest wysoka zachorowalność i śmiertelność pooperacyjna18,19. Jest to poważna wada, która jest sprzeczna z operacją przeprowadzoną przez człowieka i utrudnia wyciąganie klinicznie istotnych wniosków z modelu20.
Dodatkowo, duża część tej zachorowalności może być przypisana brakowi lub niedoskonałemu rekoneksji tętnicy wątrobowej (HA)18. Chociaż jest to krytyczny krok w transplantacji wątroby u ludzi, trudności techniczne mają tendencję do utrudniania rekoneksji HA w modelu OLT u szczurów. W rezultacie zespolenie dróg żółciowych (BD) jest słabe i powoduje wysokie wskaźniki wycieku żółci i martwicy BD21. Poza dużą częstością występowania powikłań ze strony dróg żółciowych22, brak dopływu tętniczego zmienia fizjologię przeszczepionej wątroby po przeszczepie23, z niedotlenieniem wątroby dawcy class<sup="xref">24 i uszkodzeniem wątroby obserwowanym w płatach zapalnych19,25,26. Szczurzy OLT bez rekoneksji tętniczej również ma tendencję do promowania zwłóknienia27. Opisany poniżej protokół OLT u szczurów rozwiązuje te problemy, włączając prosty etap rekonstrukcji HA do wcześniej opublikowanej metody OLT u szczurów28, co skutkuje zachowaniem miąższu wątroby i poprawą wskaźników przeżycia.
Przeszczep wątroby składa się z trzech faz: (1) pobrania przeszczepu wątroby od dawcy, (2) przygotowania przeszczepu wątroby dawcy oraz (3) zastąpienia wątroby biorcy przeszczepem wątroby. Zabieg polega na manipulacji pięcioma strukturami anatomicznymi: żyłą główną nadwątrobową dolną (SHVC), żyłą wrotną (PV), żyłą podwątrobową żyły głównej dolnej (IHVC), tętnicą wątrobową (HA) i drogami żółciowymi (BD).
OLT u szczura został po raz pierwszy wprowadzony przez Lee et al. przy użyciu zespolenia mikroszwów SHVC, PV i IHVC, oraz techniki przeciągania dla klasy BD<sup="xref">29. Model ten został później ulepszony dzięki zastosowaniu techniki dwóch mankietów w 1979 roku30. Od tego czasu zaproponowano kilka alternatywnych technik, z których większość koncentruje się na zespoleniu żylnym i wykorzystuje technikę dwóch mankietów z kilkoma modyfikacjami31. Chociaż zespolenie HA zostało opisane wcześniej w modelu OLT szczura przy użyciu technik takich jak mikroszew, mankiet i rękawy śródświetlne26,31,32,33,34, techniki te często wymagają wysoko wyszkolonych umiejętności mikrochirurgicznych, znacznie zmieniają fizjologię szczura i są utrudnione przez zakrzepicę i/lub powikłania żółciowe27,35.
Ponadto, wybór procedury chirurgicznej może również wpływać na czas znieczulenia (czas od zaciśnięcia PV do reperfuzji przeszczepu przez odtworzoną PV), co jest kluczowe dla powodzenia przeszczepu wątroby szczura. W szczególności wysokie wskaźniki przeżycia obserwuje się przy czasie bezwątroby wynoszącym 15-20 min36, a 30 minut to górna granica sukcesu37,38. Dlatego celem tej metody jest wdrożenie mniej inwazyjnego i łatwiejszego do przyjęcia chirurgicznego modelu OLT szczura, który jest w stanie ponownie połączyć tętnicę wątrobową, promować efektywną perfuzję przeszczepionej wątroby, utrzymać przepływ do przewodu żółciowego biorcy i zachować stan fizjologiczny biorcy.
Szczegółowo opisano tutaj wszystkie etapy tego poprawionego protokołu, w tym manipulację pniem celiakii wątroby dawcy, jak również użycie 1) stentu 1,5 mm do wykonania pozaświetlnego połączenia rękawa z biorcą właściwego HA, 2) szwu biegowego do rekonstrukcji SHVC, 3) dwóch wydrukowanych w 3D plastikowych mankietów do rekonstrukcji PV i IHVC39, 40, 4) ponowne połączenie rękawa mikronaczyniowego dla klasy HA<sup="xref">18,27,41 i 5) wcześniej opisana technika stentowania BD28. Uwzględniono również dwa dodatkowe etapy: płukanie zimnem przez PV oraz schemat antybiotykowy, który jest oparty na wcześniejszych ustaleniach17. Ten zoptymalizowany protokół OLT minimalizuje powikłania okołooperacyjne i zachorowalność oraz dokładniej modeluje chirurgiczną procedurę operacyjną stosowaną w przeszczepie wątroby u ludzi.

<table><tbody><tr><td>10-0 Ethilon</td><td>Ethicon</td><td>2830G</td><td>10-0 Ethilon Black 1X5" BV100-4 Stożek</td></tr><tr><td>10 ml Strzykawka</td><td>BD</td><td>B302995</td><td>Końcówka Luer-Lok, sterylna, jednorazowa</td></tr><tr><td>strzykawka 1 ml</td><td>BD</td><td>B309628</td><td>końcówka Luer-Lok, sterylna, jednorazowa</td></tr><tr><td>strzykawka 20 ml</td><td>BD</td><td>B301031</td><td>końcówka Luer-Lok, sterylna, jednorazowy</td></tr><tr><td>mankiet z nadrukiem 3D do IHVC</td><td></td><td></td><td>Niestandardowy</td></tr><tr><td>mankiet drukowany w 3D do PV</td><td></td><td></td><td>Niestandardowy</td></tr><tr><td>uchwyt drukowany w 3D do IHVC</td><td></td><td></td><td>Niestandardowy</td></tr><tr><td></td><td>uchwyt drukowany w 3D do strzykawki PV</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3mL</td><td>Końcówka BD</td><td>B309657</td><td>Luer-Lok, sterylna, jednorazowa</td></tr><tr><td>4-0 Sofsilk</td><td>Coviden</td><td>GS-835</td><td>Wx kodowany pleciony jedwab, 30 ", szew 1-igłowy 26 mm Długość 1/2 Okrągła igła stożkowa</td></tr><tr><td>5-0 Monocryl</td><td>Ethicon</td><td>Y433H</td><td>Niebarwiona monofilamentowa 1X27" TF</td></tr><tr><td>5mL Strzykawka</td><td>BD</td><td>B309646</td><td>końcówka Luer-Lok, sterylna, jednorazowa</td></tr><tr><td>7-0 Silk</td><td>Teleflex Medical</td><td>103-S</td><td></td></tr><tr><td>8-0 Prolene</td><td>Ethicon</td><td>2775G</td><td>8-0 Prolene Blue 1X24" BV130-5 EVP Dwuramienny</td></tr><tr><td>mikro uchwyt na igły Barraquer Bez zaczepu</td><td>Aesculap Instrumenty chirurgiczne</td><td>FD231R</td><td>zakrzywione 120 mm, 4 3/4&Prime;</td></tr><tr><td>Uchwyt igły Barraquer, bardzo drobne szczęki 8,0 mm, zakrzywiony bez blokady</td><td>Rumex International Co.</td><td>8-025T</td><td>Mały rozmiar, tytanowy</td></tr><tr><td>uchwyt igły Barraquer, drobne szczęki 12,0 mm, zakrzywione bez blokady</td><td>Rumex International Co.</td><td>8-021T</td><td>Mały rozmiar, tytanowy</td></tr><tr><td>BD Insyte Autoguard BC 22 GA x 1,00 IN</td><td>BD Angiocath / Autoguard</td><td>382523</td><td>Cewnik bezskrzydły 22 G x 1,00" (0,9 mm x 25 mm), 37 ml / min</td></tr><tr><td>BDPrecisionGlide Igły jednorazowego użytku: Regularny skos - Regularna ścianka.</td><td>Igły BD</td><td>B305106</td><td>PrecisionGlide ze stali nierdzewnej z przezroczystymi, oznaczonymi kolorami polipropylenowymi piastami. 22 G</td></tr><tr><td>BD Igła strzykawkowa Precisionglide 21G</td><td>BD</td><td>305167</td><td>Gauge 21, długość 1,5 cala, igła podskórna</td></tr><tr><td>BD Igła strzykawkowa Precisionglide 30G</td><td>BD</td><td>305128</td><td>Gauge 30, długość 1 cal, igła podskórna</td></tr><tr><td>Roztwór Betadine firmy Purdue Products LP</td><td>Purdue Products Lp</td><td>67618-150-17</td><td>10% powidonu&ndash; jod roztwór do stosowania miejscowego USP</td></tr><tr><td>Bupiwakaina do wstrzykiwań BP 0,5%</td><td>SteriMax Inc.</td><td>DIN:02443694</td><td>0,5% (100 mg / 20 ml)</td></tr> <tr><td>Zakrzywione kleszcze do wiązania</td><td>Duckworth & Platformy</td> wiążące Kent <td>2-501E</td><td>6mm, wały proste, uchwyt płaski, długość 88mm</td></tr><tr><td>Regulator temperatury DC</td><td>FHC Inc.</td><td>40-90-8D</td><td></td></tr><tr><td>DK Nożyczki do tęczówki (zakrzywione)</td><td>Duckworth & Kent</td><td>1-211B</td><td>końcówki, długość cięcia 4mm, długość końcówki do czopoli 11mm, okrągła rękojeść, długość 107mm</td></tr><tr><td>Etanol, 200 proof (100%), USP, Decon</td><td>Labs Decon Labs, Inc.</td><td>2716</td><td>Rozcieńczyć do 70% za pomocą d2H2O</td></tr><tr><td>Precyzyjnie regulowany zwijacz drutu</td><td>Fine Science Tools</td><td>17004-05</td><td>Maksymalny rozrzut: 3,5 cm, głębokość 5 cm</td></tr><tr><td>Harvard Apparatus Isoflurane Funnel-Fill Vaporizer</td><td>Harvard Appartus Limited</td><td>34-1040SV</td><td></td></tr><tr><td>Heparyna LEO (heparyna sodowa)</td> <td>LEO Pharma Inc.</td><td>DIN:00453811</td><td>10 000 j.m./10 ml</td></tr><tr><td>Ice-Pak</td><td>Cryopak</td><td>FIP88016</td><td>4,00 cala x 7,00 cala, grubość 1,50 cala</td></tr><tr><td>Isofluran Farmakopea Stanów Zjednoczonych (USP) 99,9%</td><td>Piramal Healthcare Limited</td><td>DIN: 02231929</td><td>250 mL, znieczulenie wziewne, NDC 66794-017-25</td></tr><tr><td>Khaw Przezspojówkowe regulowane kleszcze do kontroli szwów</td><td>Duckworth & Kent</td><td>2-502N</td><td>5mm polerowane platformy wiążące, proste trzonki, płaska rękojeść, długość 84mm</td></tr><tr><td>Mleczan Ringer's Injected USP, 1000 ml</td><td>Baxter Co.</td><td>DIN: 00061085</td><td>JB2324</td></tr><tr><td>Kleszcze do wiązania McPherson</td><td>Duckworth & Platformy</td><td>wiążące Kent 2-500E</td><td>6mm, trzonki proste, uchwyt płaski, długość 90mm</td></tr><tr><td>Nożyczki Metzenbaum - 14,5 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>14024-14</td><td>Prosty ostry/</td></tr><tr><td>zacisk Micro Kitzmiller</td><td>Scanlan</td><td>3003-630</td><td>Długość szczęk 23mm, długość 11cm</td></tr><tr><td>Mikroskop-Leica M525 F20</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>Brak numeru katalogowego</td></tr><tr><td>Gąbki z włókniny z gazy</td><td>Fisherbrand</td><td>22-028-556</td><td></td></tr><tr><td>Olsen-Hegar z obcinakiem do szwów</td><td>Fine Science Tools</td><td>12002-14</td><td>Krawędź tnąca 15 mm, powierzchnia szczęk 2 mm - 14 cm</td></tr><tr><td>OptixCare Eye lubrykant, 25 g</td><td>OptixCare</td><td>ES-KE8O-69U1</td><td>Dawniej Optixcare Chirurgiczny lubrykant do oczu</td></tr><tr><td>Sól sodowa piperacyliny</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8396</td><td>Analog penicyliny</td></tr><tr><td>Puritan 3 "Standardowy wacik bawełniany z / Drewniana rączka</td><td>Puritan Medical Products Company LLC</td><td>803-WC</td><td>Regularny aplikator z bawełnianą końcówką z drewnianą rączką</td></tr><tr><td>Uchwyt na igły z okrągłym uchwytem Prosty z zamkiem</td><td>Fine Science Tools</td><td>12075-12</td><td>Okrągłe uchwyty umożliwiają łatwą regulację opuszkami palców - 12,5 cm</td></tr><tr><td>Nożyczki shea Zakrzywione</td><td>narzędzia naukowe</td><td>14105-12</td><td>Nożyczki do przeszczepów z lekkim i delikatnym wzorem - 12cm</td></tr><tr><td>Stainless Steel Micro Serrefines Curved - 4mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-06</td><td>Długość szczęk 4mm, Szerokość szczęk 0.75mm, Długość całkowita 16mm, Nacisk szczęk 125g</td></tr><tr><td>Stainless Steel Micro Serrefines Curved - 6mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-05</td><td>Długość szczęk 6mm, Szerokość szczęk 1mm, Długość całkowita 17mm, Nacisk szczęk 100g</td></tr><tr><td>Stal nierdzewna Micro Serrefines Straight - 6mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-03</td><td>Długość szczęk 6mm, Szerokość szczęk 1mm, Długość całkowita 15mm, Nacisk szczęk 100g</td></tr><tr><td>Platforma</td><td></td><td></td> chirurgiczna <td>Niestandardowa, magnetyczna</td></tr><tr><td>maszyna do znieczulenia SurgiVet Vaporstick</td><td>Usługi znieczulenia ogólnego, Inc</td><td>V7015</td><td></td></tr><tr><td>Terapia miejscowa T / pompa Pompa</td> próżniowo-ciśnieniowa <td>Stryker</td><td></td><td>serii TP700</td></tr><tr><td></td><td>Barnant Co.</td><td>400-1901</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki Vannas z mikroząbkami Proste</td><td>narzędzia do nauki</td><td>15070-08</td><td>Krawędź tnąca: 5 mm, Średnica końcówki: 0,1 mm - 8,5 cm</td></tr><tr><td>Wetergesic Buprenorphine</td><td>Ceva Animal Health Ltd</td><td>Nr NAC: 12380352</td><td>0,324 mg / ml hydochlorku buprenorfiny roztwór do wstrzykiwań dla psów i kotów</td></tr><tr><td>Vetroson V-10 Bipolarny agregat elektrochirurgiczny</td><td>Summit Hill Laboratories</td><td></td><td>Nie numer katalogowy</td></tr><tr><td>Serweta chirurgiczna</td><td>PDC Healthcare</td><td>DRP1824</td><td>Wielofunkcyjne sterylne przezroczyste tworzywo sztuczne, 18" x 24", 40/opakowanie</td></tr></tbody></table>

zmniejszone powikłania po ponownym połączeniu tętnic w szczurzym modelu ortotopowego przeszczepu wątroby

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

Model ortotopowego przeszczepu wątroby (OLT) u szczurów jest potężnym narzędziem do badania ostrego i przewlekłego odrzucenia. Nie jest to jednak pełna reprezentacja przeszczepu wątroby u człowieka ze względu na brak ponownego połączenia tętnic. Opisano tutaj zmodyfikowaną procedurę przeszczepu, która obejmuje włączenie ponownego połączenia tętnicy wątrobowej (HA), co prowadzi do wyraźnej poprawy wyników przeszczepu. Przy średnim czasie bezwątroby wynoszącym 12 minut i 14 s, ponowne połączenie HA powoduje poprawę perfuzji przeszczepionej wątroby i zwiększenie długoterminowego przeżycia biorcy z 37,5% do 88,2%. Protokół ten obejmuje użycie wydrukowanych w 3D mankietów i uchwytów do połączenia żyły wrotnej i żyły podwątrobowej dolnej poniżej. Może być stosowany do badania wielu aspektów przeszczepu wątroby, od odpowiedzi immunologicznej i infekcji po techniczne aspekty procedury. Dzięki zastosowaniu prostej i praktycznej metody rekonekcji tętnic za pomocą techniki mikronaczyniowej, ten zmodyfikowany protokół OLT dla szczurów ściśle naśladuje aspekty przeszczepu ludzkiej wątroby i posłuży jako cenny i klinicznie istotny model badawczy.

Podczas ustanawiania szczurzego modelu OLT z anastomozą bez udziału tętniicy wątrobowej (non-HA) zgodnie z wcześniej opisanym protokołem28, nasz zespół zaobserwował przeżywalność na poziomie odpowiednio 50% i 37,5% w 21. i 60. dobie po operacji. Chociaż niektóre grupy raportowały wysokie wskaźniki przeżycia długoterminowego bez anastomozy HA28, te wstępne wyniki podkreślają wady braku dopływu tętniczego. W przeciwieństwie do tego, zoptymalizowana procedura ponownego połączenia HA znacząco zwiększyła przeżywalność długoterminową z 37,5% do 88,2% (p = 0,015) (Rysunek 6).
Analiza histologiczna reprezentatywnej podgrupy zwierząt z przeszczepem bez reconnectio tętnicy wątrobowej (HA) (w 6. i 13. dniu po operacji) wykazała oznaki niedotlenieniowego uszkodzenia wątroby z martwicą środkowoopłucną (Rysunek 7). Rozległa martwica wątroby wiązała się u tych zwierząt z ogromnie podwyższonym poziomem aminotransferazy alaninowej (ALT) i aminotransferazy asparaganianowej (AST) (Rysunek 7). W przeciwieństwie do nich, szczury z przeszczepem z reconnectio HA nie wykazywały oznak uszkodzenia wątroby, a analiza histologiczna ujawniła prawidłową strukturę miąższu wątroby z uporządkowanymi acinusami, zrazami (np. żyłą centralną i triadami wrotnymi z żyłą wątrobową), tętnicami oraz przewodami żółciowymi (Rysunek 7).
Choć średni czas anhepatyczny w ciągu 23 oddzielnych operacji był akceptowalny (12 min i 14 s [± 78 s]), wciąż możliwe jest, że przeżywalność w modelu bez reconnectio tętnicy wątrobowej (HA) może zostać ostatecznie poprawiona wraz z większą praktyką. Warto jednak zauważyć, że trzy z czterech zwierząt przeszczepionych bez reconnectio HA (które były monitorowane pod kątem długoterminowego przeżycia) zostały poddane eutanazji z powodu stresu w 56., 96. i 111. dniu po operacji. Dodatkowo analiza histologiczna wątrób ujawniła zmiany reaktywne po niedokrwiennym uszkodzeniu wątroby, w tym wyraźną proliferację przewodów żółciowych, włóknienie i zapalenie okołoportalne oraz zniekształcenie miąższu wątroby (Supplementary Figure 2). Obecność cech morfologicznych niedokrwiennego uszkodzenia wątroby potwierdza wnioski, że reconnectio HA jest istotne dla efektywnej perfuzji wątroby i jej prawidłowego funkcjonowania.
<img alt="Schemat komponentu mechanicznego z wymiarami opisanymi dla precyzyjnego montażu i analizy." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig1.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rysunek 1"> 
Rysunek 1: Schematyczne przedstawienie projektu wydrukowanej w 3D mankiety dla żyły wrotnej i podwątrobowego odcinka żyły głównej dolnej. Pierwszą więzadło zostaje zaciśnięta w rowku (ii) najbliższym uchwytowi (iii), a drugą więzadło zostaje zaciśnięta w rowku (i) najdalej oddalonym od uchwytu. Średnice zewnętrzne wynoszą (iv) 2,38 mm dla żyły wrotnej (PV) oraz 2,15 mm dla podwątrobowego odcinka żyły głównej dolnej (IHVC). Średnice wewnętrzne wynoszą (v) 1,74 mm dla PV i 1,38 mm dla IHVC. Długości wynoszą (vi) 2,60 mm dla PV i 2,15 mm dla IHVC (dokładne specyfikacje dla wszystkich materiałów wydrukowanych w 3D znajdują się w Materiałach Uzupełniających). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig1large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Sekwencja techniki szycia chirurgicznego, części oznaczone pęsetą, ilustracja procedury." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig2.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rycina 2"> 
Rycina 2: Wprowadzenie stentu tętnicy wątrobowej do przeszczepu. (A) Otwarty koniec pnia trzewnego (i) zostaje poszerzony poprzez przecięcie tętnicy śledzionowej do tętnicy żołądkowej lewej, co odsłania rozwidlenie wspólnej tętnicy wątrobowej (HA). (ii) Stent przewodu żółciowego (BD) jest wiązany przed pobraniem wątroby szczura dawcy. (iii) Mankiet żyły wrotnej (PV) oraz (iv) mankiet podwątrobowej żyły głównej (IHVC) zostają wprowadzone i zawiązane poprzez zagięcie końców naczyń nad mankietem. (B) (i) Aby wprowadzić stent HA, odsłoniętą wspólną tętnicę wątrobową wielokrotnie rozciąga się pęsetą. (C) (i) Stent HA zostaje bezpiecznie umieszczony we wspólnej tętnicy wątrobowej i zawiązany nicią prolene 8-0. (D) (i) Stent HA jest przepłukiwany (ii) roztworem mleczanu Ringera (BD = przewód żółciowy, IHVC = podwątrobowa żyła główna, HA = tętnica wątrobowa). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig2large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Proces chirurgicznego zespolenia wątroby w stopniowym powiększeniu, z uwzględnieniem interakcji między tkanką a zaciskiem." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig3.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rycina 3"> 
Rycina 3: Połączenie podwątrobowego odcinka żyły głównej dolnej z wykorzystaniem wydrukowanego w 3D uchwytu. (A) (i) Żyła wrotna (PV) jest łączona przy użyciu tej samej techniki, co w przypadku połączenia IHVC. Przeszczep zostaje (ii) zakleszczony powyżej (iii) mankietu IHVC. Otwór IHVC biorcy zostaje (iv) zaszyty po bokach do wydrukowanego w 3D uchwytu, aby utrzymać go w pozycji rozciągniętej. Luźna nić (v) jedwabna 7-0 zostaje zawiązana wokół IHVC biorcy. (B) Mankiet IHVC przeszczepu zostaje (i) wprowadzony do wnętrza IHVC biorcy. Luźny węzeł zostaje teraz zaciśnięty. (C) Zacisk zostaje usunięty, a (i) wydrukowany w 3D uchwyt zostaje odcięty nożyczkami. (D) Dodatkowa nić (i) jedwabna 7-0 zostaje zawiązana wokół połączenia, jeśli nie jest ono stabilne, choć zazwyczaj jeden węzeł jest wystarczający (PV = żyła wrotna, IHVC = podwątrobowy odcinek żyły głównej dolnej). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig3large.jpg" target="_blank">Prosimy kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Proces anastomozy tętnicy wątrobowej; schemat chirurgiczny i procedura, kroki A-D, technika szycia." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig4.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rysunek 4"> 
Rysunek 4: Mikronaczyniowe połączenie typu „rękaw” tętnicy wątrobowej. (A) (i) Stent BD nie jest połączony z biorcą. (ii) Stent HA umieszczono w przeszczepie, który jest połączony z (iv) właściwą HA biorcy. (iii) PV jest połączona. (B) Nitka ethilon 10-0 z (i) zakrzywioną igłą jest przeciągana przez stent HA do boków końca otworu HA biorcy. (C) Nitka ethilon 10-0 jest przeciągana z powrotem przez stent HA; w ten sposób właściwa HA biorcy jest wciągana przez stent niczym rękaw. (D) (i) Po wciągnięciu właściwej HA biorcy do stentu, do fragmentu, który jako pierwszy przechodzi przez stent HA, wykonuje się węzeł nitką ethilon 10-0. (E) Przedstawiono tutaj schemat anastomozy HA opisanej w punktach (B), (C) i (D) (BD = przewód żółciowy, HA = tętnica wątrobowa, PV = żyła wrotna). *Koniec otworu pnia trzewnego jest rozszerzany poprzez przecięcie tętnicy śledzionowej do tętnicy żołądkowej lewej. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig4large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Procedura szycia chirurgicznego podczas operacji medycznej, pokazująca szczegółowe kroki z opisanymi punktami." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig5.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rysunek 5"> 
Rysunek 5: Połączenie przewodów żółciowych przy użyciu dwóch stentów. (A) (i) Stent BD przeszczepu jest wprowadzany do BD biorcy przy pomocy (ii) stentu luźno zawiązanego w ujściu BD biorcy. (iii) Żyła wrotna (PV) jest łączona przed połączeniem BD, które znajduje się za BD. (B) Stent na końcu BD biorcy zostaje usunięty i wykorzystany jako poszerzone ujście do (i) wprowadzenia stentu BD przywiązanego do przeszczepu. (C) Wstęga luźno zabezpieczająca stent biorcy służy teraz do zawiązania połączenia, a (i) kolejny szew jedwabny 7-0 jest używany do mocnego utrwalenia stentu w miejscu, aby uniknąć jego wysunięcia lub skręcenia. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig5large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Wykres analizy przeżywalności; z rekonekcją/bez rekonekcji HA, krzywa Kaplana-Meiera, porównanie dni po operacji." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig6.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rysunek 6"> 
Rysunek 6: Procent przeżywalności przeszczepów. Ortotopowy przeszczep wątroby szczura bez rekonekcji HA (n = 8) oraz z rekonekcją HA (n = 17). Zwierzęta były ściśle monitorowane po transplantacji pod kątem oznak niewydolności wątroby i/lub infekcji przez co najmniej 60 dni. Szczury, u których po operacji nie wystąpiły powikłania, uznano za osobniki przeżyłe (*p = 0,015, obliczone metodą estymacji Kaplana-Meiera [test log-rank]). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig6large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Histologia wątroby po przeszczepieniu; poziomy ALT, AST; schemat przedstawia efekty ponownego połączenia HA." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60628/60628fig7.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rysunek 7"> 
Rysunek 7: Ocena histopatologiczna wątroby. Reprezentatywne przekroje barwione hematoksyliną i eozyną u zwierząt (A) bez i (B) z ponownym połączeniem tętnicy wątrobowej (HA) w 6. i 13. dobie po przeszczepieniu wątroby (LTx). (C) Prawidłowy miąższ wątroby z widoczną triadą portalną (żyła wrotna, tętnica i przewód żółciowy), zrazikami zawierającymi żyłę środkową oraz acinusami. Hepatocyty sąsiadujące z triadą portalną to hepatocyty strefy 1; hepatocyty sąsiadujące z żyłą środkową w obrębie zrazików to hepatocyty strefy 3; a hepatocyty pomiędzy strefami 1 i 3 to hepatocyty strefy 2 (ALT = aminotransferaza alaninowa, AST = aminotransferaza asparaginianowa, CV = żyła środkowa). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628fig7large.jpg" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.</a>
<img alt="Stenty naczyniowe i mankiety z linijką, demonstrujące rozmiary dla procedur medycznych." src="/files/ftp_upload/60628/60628suppfig1.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rycina uzupełniająca 1"> 
Rycina uzupełniająca 1: Wymiary stentów i mankietów. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628suppfig1large.jpg" target="_blank">Aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny, kliknij tutaj.</a>
<img alt="Progresja histologiczna po transplantacji wątroby, mikroskopia, ocena odrzucania przewlekłego." src="/files/ftp_upload/60628/60628suppfig2.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rycina uzupełniająca 2"> 
Rycina uzupełniająca 2: Histopatologiczna ocena wątroby wykazująca rozpad miąższu wątroby. Reprezentatywne przekroje barwione hematoksyliną i eozyną u zwierząt bez ponownego połączenia HA w dniach 54, 96 i 111 po LTx. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/60628suppfig2large.jpg" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
Materiał uzupełniający 1: Porta cuff 200g - support 2.0. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary1.stl" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić ten plik (kliknij prawym przyciskiem myszy, aby pobrać).</a>
Materiał uzupełniający 2: Cava cuff 200g - support 2.0. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary2.stl" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić ten plik (kliknij prawym przyciskiem myszy, aby pobrać).</a>
Materiał uzupełniający 3: Retraktor wątroby 200g. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary3.stl" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić ten plik (kliknij prawym przyciskiem myszy, aby pobrać).</a>
Materiał uzupełniający 4: Uchwyt tylny - 1.2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary4.stl" target="_blank">Aby wyświetlić ten plik, kliknij tutaj (kliknij prawym przyciskiem myszy, aby pobrać).</a>
Materiał uzupełniający 5: Cava 150g - 2.1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary5.stl" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić ten plik (kliknij prawym przyciskiem myszy, aby pobrać).</a>
Materiał uzupełniający 6: Porta 1.4.1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary6.stl" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić ten plik (kliknij prawym przyciskiem myszy, aby pobrać).</a>
Materiał uzupełniający 7: Ramię uchwytu McGil. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary7.stl" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić ten plik (kliknij prawym przyciskiem myszy, aby pobrać).</a>
Materiał uzupełniający 8: Mini ramię uchwytu LAB. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary8.stl" target="_blank">Prosimy kliknąć tutaj, aby wyświetlić ten plik (prawy przycisk myszy, aby pobrać).</a>
Materiał uzupełniający 9: Miękka część uchwytu i ramienia 1.3. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary9.stl" target="_blank">Kliknij tutaj, aby przejrzeć ten plik (prawy przycisk myszy, aby pobrać).</a>
Materiał uzupełniający 10: Podstawa uchwytu - 3.1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60628/supplementary10.stl" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić ten plik (kliknij prawym przyciskiem myszy, aby pobrać).</a>

Celem tego badania jest modyfikacja modelu ortotopowego przeszczepu wątroby u szczurów, aby lepiej reprezentowała przeszczep wątroby u człowieka i poprawiła przeżywalność biorców. Przedstawiona metoda przywraca dopływ tętniczy wątrobowej poprzez połączenie wspólnej tętnicy wątrobowej wątroby dawcy z właściwą tętnicą wątrobową biorcy.

Zmniejszone powikłania po ponownym połączeniu tętnic w szczurzym modelu ortotopowego przeszczepu wątroby

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...

Ortotopowy model przeszczepu wątroby u szczura jest potężnym narzędziem do badania wielu aspektów przeszczepu wątroby. Od odpowiedzi immunologicznej na infekcję, po techniczne aspekty zabiegu. Głównymi zaletami tej techniki jest to, że może ona zmniejszyć powikłania, lepiej reprezentując urodziwy przeszczep wątroby i poprawić przeżywalność biorcy.Ten zmodyfikowany protokół ortotopowego przeszczepu wątroby u szczurów ściśle naśladuje aspekty przeszczepiania wątroby u ludzi i będzie służył jako zmienny i klinicznie istotny model badawczy. Mamy nadzieję, że dzięki wizualnej demonstracji widzowie będą mogli poznać wszystkie szczegóły i skrócić krzywą uczenia się, aby opanować umiejętności mikrochirurgii wymagane w tej technice. Po wstrzyknięciu 300 jednostek międzynarodowych heparyny sodowej do wewnątrzwątrobowej żyły głównej dolnej znieczulonego szczura w wieku od 12 do 14 tygodni, należy wykonać pięciomilimetrowe nacięcie poniżej rozwidlenia dróg żółciowych i wprowadzić stent przewodu żółciowego do wspólnego przewodu żółciowego.Zabezpiecz stent jedną ligaturą jedwabną 7-0, jeden milimetr powyżej nacięcia i jedną ligaturą 10 milimetrów poniżej rozwidlenia. Przetnij przewód żółciowy między dwoma wiązaniami i odsłoń właściwą tętnicę wątrobową. Podziel tętnicę żołądkowo-dwunastniczą na dwie jedwabne ligatury 7-0 i odsłoń lewą tętnicę żołądkową, tętnicę śledzionową i pień trzewny.Następnie przeciąć lewą tętnicę żołądkową, tętnicę śledzionową i pień trzewny między więzami tętniczymi. Użyj 20-mililitrowej strzykawki wyposażonej w igłę o rozmiarze 21,5, aby powoli wstrzyknąć 20 mililitrów roztworu mleczanu Ringera o czterech stopniach Celsjusza do żyły wrotnej. Aby przygotować wątrobę dawcy, należy rozciąć rozwidlenie tułowia trzewnego, tętnicy śledziony i lewej tętnicy żołądkowej, aby utworzyć większy mankiet rękawa tętniczego i wprowadzić stent tętniczy o długości 1,5 milimetra o rozmiarze 24 do wspólnej tętnicy wątrobowej dawcy przez mankiet.Następnie zabezpiecz stent za pomocą 8-0 ligaturę polipropylenową i przepłukać stent roztworem mleczanu Ringera. Po odsłonięciu żyły wrotnej szczura w wieku od 12 do 14 tygodni, podziel przewód żółciowy biorcy na 0,5 centymetra poniżej rozwidlenia glazurnika i wprowadź stent do przewodu żółciowego dystalnego wspólnego. Odsłoń lewą, środkową i prawą tętnicę wątrobową i przywiąż naczynia dystalnie do rozwidlenia tętnicy wątrobowej.Przetnij tętnice blisko wątroby nad wiązaniami i umieść długi cienki kawałek gazy za żyłą główną dolną wątroby. Umieść wydrukowany w 3D uchwyt żyły głównej wewnątrzwątrobowej za żyłą główną wewnątrzwątrobową i użyj niewchłanialnego szwu monofilamentowego Tenno, aby zszyć ze sobą końce wydrukowanej w 3D rączki. Luźno zawiąż jedwabną ligaturę 7-0 poniżej zarówno wydrukowanego w 3D uchwytu między żyłą główną wewnątrzwątrobową a żyłą wrotną i zaciśnij żyłę główną wątroby tuż nad prawą żyłą nerkową poniżej wydrukowanego w 3D uchwytu cava.Zaciśnij żyłę wrotną tuż nad żyłą odźwiernika i poniżej wydrukowanego w 3D uchwytu PV. Za pomocą trzymililitrowej strzykawki z dołączoną igłą o rozmiarze 27 przepłucz dwa mililitry roztworu mleczanu Ringera o temperaturze 37 stopni Celsjusza przez rozwidlenie żyły wrotnej i zaciśnij żyłę główną nadwątrobową nad wątrobą za pomocą zacisku Kitzmiller. Następnie wytnij poniżej zacisku jak najbliżej wątroby i wytnij powyżej wydrukowanych w 3D uchwytów zarówno dla żyły wrotnej, jak i żyły głównej między wątrobami, aby usunąć wątrobę biorcy.W przypadku przeszczepu wątroby dawcy należy ostrożnie ustawić wątrobę dawcy w jamie ciała biorcy w taki sposób, aby można było utworzyć zespolenie z kostką brukową górną. Włóż mankiet żyły wrotnej dawcy do żyły wrotnej biorcy i zaciśnij jedwabną opaskę 7-0. Usuń atraumatyczny zacisk z żyły głównej super wątroby i usuń klips mikronaczyniowy do żyły wrotnej.Po ponownym przekrwieniu wątroby ciepłą krwią, włóż mankiet żyły głównej wewnątrzwątrobowej dawcy do żyły wewnątrzwątrobowej biorcy i zabezpiecz naczynie jedwabną opaską 7-0. Następnie usuń klips do żyły głównej wątroby dawcy przed zdjęciem klipsa biorcy. Aby wykonać zespolenie tętnicze, należy odciąć od dawcy część pnia trzewnego, która wystaje poza stent i zacisnąć właściwą tętnicę wątrobową biorcy.Odetnij krawat na końcu i wszelkie dodatkowe tkanki otaczające naczynie. I użyj roztworu mleczanu Ringera, aby przepłukać światło zarówno końca naczynia dawcy, jak i biorcy. Za pomocą zakrzywionej igły umieść szew etylonowy 10-0 przez lewą część tętnicy wątrobowej dawcy, 2,5 milimetra powyżej dystalnego otworu stentu i na zewnątrz przez koniec stentu.Przeciąć prawą tętnicę wątrobową biorcy 0,5 milimetra poniżej ujścia naczynia z lewej strony naczynia na prawą stronę tętnicy. Umieść następny szew przez prawą ścianę tętnicy wątrobowej dawcy od wewnątrz na zewnątrz, w odległości identycznej od otworu stentu jak oryginalny ścieg i pociągnij za dwa końce niewchłanialnej żyłki 10-0, aby wsunąć właściwą tętnicę wątrobową biorcy do góry i do stentu tętnicy wątrobowej. Następnie zawiąż niewchłanialną żyłkę 10-0 ze sobą nad tętnicą wątrobową dawcy.Przepłukać drogi żółciowe biorcy i dawcy, a następnie wprowadzić stent dróg żółciowych dawcy do przewodu żółciowego biorcy. Następnie zaciśnij opaskę, która została wcześniej umieszczona wokół przewodu żółciowego biorcy. W tym reprezentatywnym eksperymencie model ortotopowego przeszczepu wątroby u szczura z zespoleniem tętnicy wątrobowej wykazał 50 i 37,5% wskaźniki przeżycia, odpowiednio po 21 dniach i 60 dniach po operacji.Natomiast zoptymalizowana procedura ponownego połączenia tętnicy wątrobowej znacznie zwiększyła długoterminowe przeżycie. Analiza histologiczna reprezentatywnej podgrupy przeszczepionych zwierząt bez rekoneksji tętnicy wątrobowej ujawniła oznaki niedotlenienia wątroby z centralną martwicą zrazikową w szóstym i trzynastym dniu po przeszczepie. Rozległa martwica wątroby była związana z niezwykle podwyższonym poziomem alaninowych immunotransferów i aminotransferazy asparaginianowej u tych zwierząt.W przeciwieństwie do tego, przeszczepione szczury z ponownym połączeniem tętnicy wątrobowej nie wykazywały oznak uszkodzenia wątroby, a analiza histologiczna ujawniła normalną strukturę miąższu wątroby, ze zorganizowanymi acini, zrazikami, tętnicami i drogami żółciowymi. Ponadto analiza histologiczna wątroby szczurów z modelem ponownego połączenia tętnic innych niż wątrobowe ujawniła zmiany reaktywne po niedotlenionym uszkodzeniu wątroby. W tym proliferacja dróg żółciowych na rynku, zwłóknienie i zapalenie wrota okołoskórego oraz zniekształcony miąższ wątroby.Protokół ten może być zaadaptowany do badania wielu immunologicznych i chirurgicznych aspektów przeszczepiania wątroby i może służyć jako model do testowania nowych interwencji terapeutycznych związanych z transplantacją.

reduced-complications-after-arterial-reconnection-rat-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

W niniejszej pracy opisujemy procedurę ortotopowego przeszczepienia kończyny tylnej szczura, która wydaje się być złotym standardem modelu in vivo w badaniach nad allotransplantacją tkanek złożonych.

Ortotopowe przeszczepianie kończyny tylnej u szczurów

Przedstawiamy łatwą do wdrożenia modyfikację klasycznej techniki dwóch mankietów stosowanej w ortotopowym przeszczepieniu wątroby u szczura.

Ortotopowa transplantacja wątroby u szczurów

Ortotopowe przeszczepienie wątroby u szczurów jest niezbędnym modelem eksperymentalnym w badaniach biomedycznych. W niniejszym materiale przedstawiamy procedury chirurgiczne ortotopowego przeszczepienia wątroby szczura z rekonstrukcją tętnicy wątrobowej z wykorzystaniem 50% częściowego graftu.

Procedury chirurgiczne w szczurzym modelu częściowego ortotopowego przeszczepu wątroby z rekonstrukcją tętnicy wątrobowej

Pomocniczy przeszczep wątroby zapewnia tymczasowe wsparcie w ostrej niewydolności wątroby, aż do regeneracji niewydolnej wątroby. Heterotopowy pomocniczy przeszczep wątroby (HALT) z tętnicą żyły wrotnej (PVA) zapewnia wystarczającą czynność wątroby. Opracowaliśmy analogiczną technikę na szczurach, aby zbadać wpływ tętnicy żyły wrotnej na morfologię i funkcję przeszczepu.

Heterotopowe pomocnicze przeszczepienie wątroby szczura z tętnicą żyły wrotnej o regulowanym przepływie w ostrej niewydolności wątroby

Tutaj przedstawiono protokół polegający na ponownym przeszczepieniu wątroby szczurowi. W szczególności 70% wątroby wycięto in vivo przy użyciu zaktualizowanej techniki hepatektomii zorientowanej na naczynia. Tętnicę wątrobową zrekonstruowano w sposób end-to-side. Technika mankietu została zmodyfikowana w celu skrócenia czasu zespolenia żyły podwątrobowej głównej.

Ponownie zarteryalizowany częściowy przeszczep wątroby szczura z 70% hepatektomią in vivo zorientowaną na naczynia

Rekonstrukcja żyły głównej nadwątrobowej (SHVC) pozostaje trudnym krokiem w ortotopowym przeszczepie wątroby u szczurów. W tym artykule przedstawiamy krok po kroku protokół rekonstrukcji SHVC u szczurów przy użyciu nowatorskiej techniki zespolenia magnetycznego.

Szczurzy model ortotopowego przeszczepu wątroby z wykorzystaniem nowatorskiej techniki zespolenia magnetycznego do rekonstrukcji żyły głównej nadwątrobowej

Ten artykuł zawiera szczegółowy opis, jak zbudować zwierzęcy model fazy anhepatycznej (niedokrwienie wątroby) u szczurów, aby ułatwić podstawowe badania nad uszkodzeniem niedokrwienno-reperfuzyjnym po przeszczepie wątroby.

Uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne narządów poprzez symulację zmian hemodynamicznych w modelu przeszczepu wątroby szczura

W tym protokole opisany jest model ortotopowego przeszczepu wątroby u świń po statycznym przechowywaniu narządów dawcy w chłodni przez 20 godzin bez użycia bypassu żylno-żylnego podczas wszczepienia. Podejście to wykorzystuje uproszczoną technikę chirurgiczną z minimalizacją fazy bezwątrobowej oraz zaawansowanym zarządzaniem objętością i wazopresorem.

Przeszczepienie wątroby świni bez bypassu żylno-żylnego jako model dawcy o rozszerzonych kryteriach

Ten protokół dostarcza informacji technicznych dotyczących rekonstrukcji naczyń krwionośnych przy użyciu techniki mankietowej w ortotopowym przeszczepie wątroby u myszy.

Rekonstrukcja naczyń krwionośnych techniką mankietową w ortotopowym przeszczepie wątroby u myszy

W niniejszym filmie zaprezentowano model ortotopowego przeszczepu aorty jako prosty model do badania rozwoju waskulopatii przeszczepu (TVP) u szczurów. <br...

Ortotopowy przeszczep aorty: model szczurzy do badania rozwoju przewlekłej waskulopatii

Poznaj zmodyfikowany model ortotopowego przeszczepu wątroby u szczurów, który poprawia przeżycie biorców poprzez ponowne połączenie tętnic wątrobowych. Ta technika mikrochirurgiczna zmniejsza powikłania i lepiej odzwierciedla warunki ludzkie.

Zmniejszone powikłania po ponownym połączeniu tętnic w szczurzym modelu ortotopowego przeszczepu wątroby

Przeglądaj więcej filmów