Name: Ocena specyficznej dla wieku zdolności fagocytarnej dorosłych hemocytów Drosophila melanogaster za pomocą testu fagocytozy in vivo (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-11T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 20 s
Description: Poznaj metodę oceny fagocytozy in vivo w hemocytach Drosophila melanogaster różniących się wiekiem. Technika umożliwia ilościową analizę zdarzeń fagocytarnych w pojedynczych komórkach i wykrywanie różnic między genotypami.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez granty z National Institutes of Health R03 AG061484-02 oraz UMBC College of Natural and Mathematical Sciences Becton Dickinson Faculty Research Fund.

<ol><li>Abhyankar, V., Kaduskar, B., Kamat, S. S., Deobagkar, D., Ratnaparkhi, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+DNA%2FRNA+methyltransferase+contributes+to+robust+host+defense+in+ageing+animals+by+regulating+sphingolipid+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Drosophila DNA/RNA methyltransferase contributes to robust host defense in ageing animals by regulating sphingolipid metabolism.</a> The Journal of Experimental Biology. 221, Pt 22 (2018).</li>
<li>DeVeale, B., Brummel, T., Seroude, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunity+and+aging%3A+the+enemy+within%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Immunity and aging: the enemy within.</a> Aging Cell. 3 (4), 195-208 (2004).</li>
<li>Gomez, C. R., Nomellini, V., Faunce, D. E., Kovacs, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immunity+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Gerontology%22%5BJournal%5D)">Innate immunity and aging.</a> Experimental Gerontology. 43 (8), 718-728 (2008).</li>
<li>Panda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+innate+immunosenescence%3A+causes+and+consequences+for+immunity+in+old+age%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Human innate immunosenescence: causes and consequences for immunity in old age.</a> Trends in Immunology. 30 (7), 325-333 (2009).</li>
<li>Aw, D., Silva, A. B., Palmer, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosenescence%3A+emerging+challenges+for+an+ageing+population%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunosenescence: emerging challenges for an ageing population.</a> Immunology. 120 (4), 435-446 (2007).</li>
<li>Min, K. -J., Tatar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unraveling+the+molecular+mechanism+of+immunosenescence+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Unraveling the molecular mechanism of immunosenescence in Drosophila.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (9), 2472(2018).</li>
<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li>
<li>Hales, K. G., Korey, C. A., Larracuente, A. M., Roberts, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+on+the+fly%3A+a+primer+on+the+Drosophila+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetics on the fly: a primer on the Drosophila model system.</a> Genetics. 201 (3), 815-842 (2015).</li>
<li>Banerjee, U., Girard, J. R., Goins, L. M., Spratford, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+as+a+genetic+model+for+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Drosophila as a genetic model for hematopoiesis.</a> Genetics. 211 (2), 367-417 (2019).</li>
<li>Rämet, M., Manfruelli, P., Pearson, A., Mathey-Prevot, B., Ezekowitz, R. A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genomic+analysis+of+phagocytosis+and+identification+of+a+Drosophila+receptor+for+E.+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Functional genomic analysis of phagocytosis and identification of a Drosophila receptor for E. coli.</a> Nature. 416 (6881), 644-648 (2002).</li>
<li>Garschall, K., Flatt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interplay+between+immunity+and+aging+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22F1000Research%22%5BJournal%5D)">The interplay between immunity and aging in Drosophila.</a> F1000Research. 7, (2018).</li>
<li>Brennan, C. A., Anderson, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%3A+The+genetics+of+innate+immune+recognition+and+response%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Drosophila: The genetics of innate immune recognition and response.</a> Annual Review of Immunology. 22 (1), 457-483 (2004).</li>
<li>Rosales, C., Uribe-Querol, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytosis%3A+a+fundamental+process+in+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Phagocytosis: a fundamental process in immunity.</a> BioMed Research International. 9042851, Research article (2017).</li>
<li>Kinchen, J. M., Ravichandran, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagosome+maturation%3A+going+through+the+acid+test%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Phagosome maturation: going through the acid test.</a> Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 9 (10), 781-795 (2008).</li>
<li>Stuart, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systems+biology+analysis+of+the+Drosophila+phagosome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A systems biology analysis of the Drosophila phagosome.</a> Nature. 445 (7123), 95-101 (2007).</li>
<li>Mackenzie, D. K., Bussière, L. F., Tinsley, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence+of+the+cellular+immune+response+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Gerontology%22%5BJournal%5D)">Senescence of the cellular immune response in Drosophila melanogaster.</a> Experimental Gerontology. 46 (11), 853-859 (2011).</li>
<li>Horn, L., Leips, J., Starz-Gaiano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytic+ability+declines+with+age+in+adult+Drosophila+hemocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Phagocytic ability declines with age in adult Drosophila hemocytes.</a> Aging Cell. 13 (4), 719-728 (2014).</li>
<li>Elrod-Erickson, M., Mishra, S., Schneider, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+the+cellular+and+humoral+immune+responses+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Interactions between the cellular and humoral immune responses in Drosophila.</a> Current Biology. 10 (13), 781-784 (2000).</li>
<li>Garg, A., Wu, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+Rab14+mediates+phagocytosis+in+the+immune+response+to+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Drosophila Rab14 mediates phagocytosis in the immune response to Staphylococcus aureus.</a> Cellular Microbiology. 16 (2), 296-310 (2014).</li>
<li>Bloomington Drosophila Stock Center: Indiana University Bloomington. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://bdsc.indiana.edu/innformation/recipes/molassesfood.html">https://bdsc.indiana.edu/innformation/recipes/molassesfood.html</a> (2019).</li>
<li>Fellous, S., Lazzaro, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Larval+food+quality+affects+adult+%28but+not+larval%29+immune+gene+expression+independent+of+effects+on+general+condition%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Ecology%22%5BJournal%5D)">Larval food quality affects adult (but not larval) immune gene expression independent of effects on general condition.</a> Molecular Ecology. 19 (7), 1462-1468 (2010).</li>
<li>Kurucz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemese%2C+a+hemocyte-specific+transmembrane+protein%2C+affects+the+cellular+immune+response+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Hemese, a hemocyte-specific transmembrane protein, affects the cellular immune response in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (5), 2622-2627 (2003).</li>
<li>Goto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+haemocyte-specific+protein%2C+hemolectin%2C+similar+to+human+von+Willebrand+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Journal%22%5BJournal%5D)">A Drosophila haemocyte-specific protein, hemolectin, similar to human von Willebrand factor.</a> Biochemical Journal. 359, Pt 1 99-108 (2001).</li>
<li>Cevik, D., Acker, M., Michalski, C., Jacobs, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericardin%2C+a+Drosophila+collagen%2C+facilitates+accumulation+of+hemocytes+at+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Pericardin, a Drosophila collagen, facilitates accumulation of hemocytes at the heart.</a> Developmental Biology. 454 (1), 52-65 (2019).</li>
<li>Ghosh, S., Mandal, S., Mandal, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detecting+proliferation+of+adult+hemocytes+in+Drosophila+by+BrdU+incorporation+and+PH3+expression+in+response+to+bacterial+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Wellcome+Open+Research%22%5BJournal%5D)">Detecting proliferation of adult hemocytes in Drosophila by BrdU incorporation and PH3 expression in response to bacterial infection.</a> Wellcome Open Research. 3, (2018).</li>
<li>Hao, Y., Yu, S., Luo, F., Jin, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jumu+is+required+for+circulating+hemocyte+differentiation+and+phagocytosis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Communication+and+Signaling%22%5BJournal%5D)">Jumu is required for circulating hemocyte differentiation and phagocytosis in Drosophila.</a> Cell Communication and Signaling. 16 (1), 95(2018).</li>
<li>Petraki, S., Alexander, B., Brückner, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assaying+blood+cell+populations+of+the+Drosophila+melanogaster+larva%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Assaying blood cell populations of the Drosophila melanogaster larva.</a> Journal of Visualized Experiments. (105), (2015).</li>
<li>Gyoergy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tools+allowing+independent+visualization+and+genetic+manipulation+of+Drosophila+melanogaster+macrophages+and+surrounding+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22G3%3A+Genes%2C+Genomes%2C+Genetics%22%5BJournal%5D)">Tools allowing independent visualization and genetic manipulation of Drosophila melanogaster macrophages and surrounding Tissues.</a> G3: Genes, Genomes, Genetics. 8 (3), 845-857 (2018).</li>
<li>Bosch, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+cells+of+adult+Drosophila+do+not+expand%2C+but+control+survival+after+bacterial+infection+by+induction+of+Drosocin+around+their+reservoir+at+the+respiratory+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22BioRxiv%22%5BJournal%5D)">Blood cells of adult Drosophila do not expand, but control survival after bacterial infection by induction of Drosocin around their reservoir at the respiratory epithelia.</a> BioRxiv. 578864, (2019).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Opisany tutaj protokół jest wiarygodnym sposobem ilościowego określenia różnych aspektów fagocytozy w kontrolowanych warunkach eksperymentalnych. Zwracamy uwagę, że przetestowaliśmy tę procedurę tylko z cząstkami bakterii Gram-ujemnych, a wyniki mogą się różnić, jeśli używane są cząstki bakterii Gram-dodatnich. Rzeczywiście, interesujące byłoby porównanie odpowiedzi fagocytarnych zarówno na bakterie Gram-ujemne, jak i Gram-dodatnie w różnych warunkach eksperymentalnych. Zastosowanie nanoiniektora pozwala na precyzyjną kontrolę nad objętościami iniekcji, zapewniając, że każda mucha jest wstrzykiwana z tą samą objętością cząstek. Jednym z ograniczeń protokołu są niespójności w przygotowaniu cząstek. Cząstki agregują się po zamrożeniu, więc niewielkie różnice w objętościach rozcieńczeń lub brak wirowania mogą wpływać na stężenie cząstek między eksperymentami. Aby zminimalizować możliwe różnice w stężeniach cząstek w zależności od wieku, korzystne jest wstrzykiwanie 1- i 5-tygodniowych muszek tego samego dnia, przy użyciu tej samej igły i roztworu cząstek. Inną potencjalną wadą jest to, że podczas sekcji naczynie grzbietowe i/lub naskórek mogą łatwo ulec uszkodzeniu, jeśli szpilki nie są odpowiednio obsługiwane. Aby uniknąć przerwania naczynia grzbietowego, zminimalizuj liczbę szpilek używanych na preparację. Zaletą tej metody preparacji jest to, że wszystkie etapy utrwalania, mycia i barwienia można wykonać na płycie preparcyjnej. Ponieważ skórki są przyklejone, zapobiega to gubieniu skórek między krokami.
W porównaniu z istniejącymi metodami 18,19,25,26,27,28,29, opisany protokół ma swoje zalety i ograniczenia. Przeprowadzając sekcję naczynia grzbietowego, jesteśmy w stanie uwidocznić i określić ilościowo poszczególne hemocyty w tym miejscu. Umożliwia to wykrycie subtelnych zmian w aktywności fagocytarnej między grupami eksperymentalnymi. Inne metody wizualizują fluorescencyjnie znakowane cząstki poprzez zbieranie hemocytów za pomocą testu Bleed/Scrape 19,25,26,27 lub przez nienaruszony naskórek brzuszny 18,19,28,29; Jednak poszczególnych hemocytów nie można ocenić, gdy są one uwidocznione przez naskórek grzbietowy. Zaletą tego protokołu, w porównaniu z metodą Bleed/Scrape, jest to, że nasza metoda pozwala nam ocenić tylko te hemocyty związane z naczyniem grzbietowym i uwzględnia komórki krążące lub te wzdłuż ściany ciała, które mogą być funkcjonalnie różne. Wypreparowanie naczynia grzbietowego eliminuje również potrzebę włączania drugiej rundy iniekcji z gaszeniem fluorescencji, takim jak błękit trypanowy19,26. Dzieje się tak, ponieważ wszelkie cząsteczki, które nie są związane z komórką lub przez nią pochłonięte, zostaną zmyte podczas etapów prania. I odwrotnie, metody alternatywne mogą być łatwiejsze do wykonania, ponieważ nie wymagają sekcji. Chociaż preparowanie naczynia grzbietowego jest łatwe do nauczenia, ten krok dodaje poziom złożoności, który może być niewykonalny w niektórych projektach eksperymentalnych.
Chociaż opisane zastosowanie tego testu fagocytozy in vivo polega na ocenie i ilościowym określeniu zdarzeń fagocytarnych w różnym wieku, protokół ten jest wysoce elastyczny i może być używany do analizy różnych aspektów fagocytozy między genotypem, płcią lub typem tkanki. Ponieważ fagocytoza ma kluczowe znaczenie dla większości zwierząt wielokomórkowych, zrozumienie, w jaki sposób proces ten zanika wraz z wiekiem, może prowadzić do lepszych metod leczenia starzejącej się populacji. Podejście to oferuje długoterminowy potencjał w zakresie wyjaśniania aspektów związanych z wiekiem zmian w odpowiedzi immunologicznej, ze szczególnym uwzględnieniem fagocytozy.

Wrodzony układ odpornościowy, który składa się z fizycznych i chemicznych barier dla infekcji, jak również składników komórkowych, jest ewolucyjnie zachowany w organizmach wielokomórkowych1,2. Jako pierwsza linia obrony, wrodzony układ odpornościowy odgrywa kluczową rolę w zwalczaniu atakujących patogenów u wszystkich zwierząt1,2,3. Składniki wrodzonej odpowiedzi immunologicznej obejmują szeroki zakres typów komórek, które są klasyfikowane na podstawie braku swoistości i pamięci immunologicznej2,3,4. U ludzi te typy komórek obejmują monocyty fagocytarne i makrofagi, neutrofile i cytotoksyczne komórki NK 4,5. Chociaż posiadanie funkcjonalnego układu odpornościowego jest niezbędne do przetrwania gospodarza, jasne jest, że funkcja komórek odpornościowych zmniejsza się wraz z wiekiem, co jest zjawiskiem znanym jako immunosenescencja5,6. Możliwość oceny związanych z wiekiem zmian w odpowiedzi immunologicznej, w tym różnych aspektów procesu fagocytozy, może pomóc w zrozumieniu immunosenescencji. Opisana tutaj procedura zapewnia skuteczne i powtarzalne podejście do oceny i ilościowego określania zdarzeń fagocytarnych przez hemocyty u Drosophila melanogaster. 
Drosophila jest idealnym modelem do badania odpowiedzi immunologicznej z wielu powodów. Po pierwsze, dostępny jest obszerny zestaw narzędzi genetycznych, które umożliwiają łatwe manipulowanie ekspresją genów w sposób zależny od tkanki7. Narzędzia te obejmują kolekcję mutantów, zasoby interferencyjne RNA, stada GAL4/UAS oraz Panel Referencyjny Genetyki Drosophila, który zawiera 205 różnych linii wsobnych, dla których skatalogowane są całe sekwencje genomu8. Krótki cykl życiowy Drosophila i duża liczba wyprodukowanych osobników pozwalają naukowcom na przetestowanie wielu osobników w kontrolowanym środowisku w krótkim czasie. To znacznie poprawia zdolność do identyfikowania subtelnych różnic w odpowiedziach immunologicznych na infekcję między genotypami, płciami lub w różnym wieku. Co ważne, wiele składników genetycznych i funkcji wrodzonej odpowiedzi immunologicznej, w tym fagocytoza, jest ewolucyjnie zachowanych między Drosophila a ssakami1,2.
U Drosophila, proces fagocytozy, który następuje po infekcji, jest przeprowadzany przez hemocyty fagocytarne zwane plazmatocytami, które są odpowiednikiem makrofagów ssaków9. Hemocyty są niezbędne do rozpoznawania szerokiej gamy cząstek i usuwania patogenów mikrobiologicznych9,10,11,12,13. Komórki te wyrażają różnorodne receptory, które muszą odróżniać siebie od nie-siebie i inicjować zdarzenia sygnalizacyjne potrzebne do przeprowadzenia procesu fagocytarnego10,11,12,13,14,15. Gdy cząstka jest związana, zaczyna być internalizowana przez reorganizację cytoszkieletu aktyny i przebudowę błony plazmatycznej, aby rozszerzała się wokół cząstki, tworząc fagocytarną miseczkę11,12,13,14. Podczas tego procesu inny zestaw sygnałów mówi komórce, aby dalej internalizowała cząstkę poprzez zamknięcie miseczki fagocytarnej, tworząc fagosom związany z błoną11,12,13,14,15. Fagosom przechodzi następnie proces dojrzewania, łącząc się z różnymi białkami i łącząc się z lizosomami, tworząc kwaśny fagolizosom11,12,13,14,15. W tym momencie cząsteczki mogą być skutecznie degradowane i eliminowane11,12,13,14,15. Badania Drosophila wykazały, że starsze muszki (w wieku 4 tygodni) mają zmniejszoną zdolność do usuwania infekcji w porównaniu z młodszymi muchami (w wieku 1 tygodnia), prawdopodobnie z powodu, przynajmniej częściowo, spadku niektórych aspektów fagocytozy16,17.
Opisana tutaj metoda wykorzystuje dwie oddzielne, znakowane fluorescencyjnie, zabite termicznie cząstki E. coli, jedna z wzorcowym fluoroforem, a druga wrażliwą na pH, do oceny dwóch różnych aspektów fagocytozy: początkowego pochłaniania cząstek i degradacji cząstek w fagolizosomie. W tym teście fluorescencję cząstek można zaobserwować, gdy cząstki są związane i pochłaniane przez hemocyty, podczas gdy cząstki wrażliwe na pH fluoryzują tylko w warunkach niskiego pH fagosomu. Zdarzenia fluorescencyjne można następnie zaobserwować w hemocytach, które lokalizują się wzdłuż naczynia grzbietowego. Skupiamy się na hemocytach zlokalizowanych w naczyniu grzbietowym, które stanowią anatomiczny punkt orientacyjny do lokalizacji hemocytów, o których wiadomo, że przyczyniają się do usuwania bakterii i konsekwentnego ich izolowania. Jednak hemocyty w innych częściach ciała i hemolimfie są również ważne dla klirensu. Chociaż nie badaliśmy tej populacji komórek, nasza ogólna procedura może mieć zastosowanie również do testów fagocytarnych tych komórek. Jedną z zalet naszego podejścia jest to, że możemy określić ilościowo zdarzenia fagocytarne w obrębie poszczególnych hemocytów, co pozwala nam wykryć subtelne zmiany w procesach fagocytarnych. Inne badania, które wizualizują zdarzenia fluorescencyjne przez naskórek18,19 nie uwzględniają różnic w liczbie obecnych hemocytów, co jest szczególnie ważne do rozważenia w naszym przypadku, ponieważ oczekuje się, że całkowita liczba hemocytów zmieni się wraz z wiekiem17.

<table><tbody><tr><td>0,10 mm Szpilki do owadów</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td>Tutaj: szpilki są przecinane na pół, a ostry koniec jest używany</td></tr><tr><td>1 ml sterylne strzykawki</td><td>Becton Dickinson</td><td>309602</td><td>Wypełniony olejem mineralnym do ładowania igły</td></tr><tr><td>15% płodowej surowicy bydlęcej (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td>do podłoża preparacyjnego</td></tr><tr><td>16 % Paraformaldehyd</td><td>Mikroskopia elektronowa Nauki</td><td>15710</td><td>Klasa EM, 4% pracy, rozcieńczona w 1X PBS</td></tr><tr><td>1x Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS)</td><td>Sigma</td><td>P3813</td><td></td></tr><tr><td>3 mL Trasnfer Pipet</td><td>Falcon</td><td>357524</td><td></td></tr><tr><td>3,5-calowe szklane kapilary</td><td>Drummond</td><td>3-000-203-G / X</td><td>1,14 mm OD X 3,5 "długości X 0,53" ID</td></tr><tr><td>35x10 mm Szalki Petriego</td><td>Becton Dickinson</td><td>351008</td><td>Używany jako płytka preparacyjna, wypełniona do połowy Sylgard</td></tr><tr><td>6x penicylina/streptomycyna</td><td>Life Technologies</td><td>15140-122</td><td>do mediów preparacyjnych</td></tr><tr><td>70% Glycerol</td><td>Sigma</td><td>G9012</td><td></td></tr><tr><td>Analogowy mieszalnik wirowy</td><td>VWR</td><td>58816-121</td><td></td></tr><tr><td>Biologiczne kleszcze punktowe, Dumont No. 5</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-10</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4',6-diamidino-2-fenyloindol)</td><td>Life Technologies</td><td>D1306</td><td>Rozcieńczony w stosunku 1:1000 w 1x PBST</td></tr><tr>szczep <td></td><td></td><td>Drosophila</td><td>w[*]; P{w[+mC]=He-GAL4.Z}85, P{w[+mC]=UAS-GFP.nls}8</td></tr><tr><td>E. coli (szczep K-12) BioParticles&trade;, Alexa Fluor&trade; 594 sprzężony</td><td>Life Technologies</td><td>E23370</td><td></td></tr><tr><td>Szkiełka</td> podstawowe <td>Premiere</td><td>D17026102</td><td></td></tr><tr><td>Rozwiązanie do obrazowania żywych komórek</td><td>Life Technologies</td><td>A14291DJ</td><td>preferowany bufor do przygotowania i rozcieńczania cząstek</td></tr><tr><td>Olej mineralny</td><td>Mpbio</td><td></td><td></td>194836</tr><tr><td>Automatyczny wtryskiwacz nanolitrów Nanoject II</td><td>Drummond</td><td>3-000-204</td><td></td></tr><tr><td>Wąskie fiolki z polistyrenu Super Bulk Drosophila</td><td>Genesee</td><td>32-116SB</td><td>Rozmiar: 25 X 95 mm</td></tr><tr><td>Mikser nutacyjny</td><td>Fisher Scientific</td><td>88-861-043</td><td>Używana prędkość: 20 obr./min</td></tr><tr><td>pHrodo&trade; Czerwone biocząstki E. coli i handel; Koniugat do fagocytozy</td><td>Life Technologies</td><td>P35361</td><td></td></tr><tr><td>Pożywka do hodowli komórkowych Drosophila Schneidera (1x)</td><td>Gibco</td><td>21720-024</td><td>Pożywki preparacyjne, łączenie: Schneiders, FBS i długopis / paciorkowiec; filtr sterylizować</td></tr><tr><td>Azydek sodu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2002</td><td>2mM (lub 20%) robocze</td></tr><tr><td>Nożyczki sprężynowe</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 Elastomer silikonowy</td><td>Mikroskopia elektronowa Nauki</td><td>24236-10</td><td>Przygotuj zgodnie z dostarczonym protokołem</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma</td><td>P1379</td><td>Dla pionowego ściągacza do pipet PBS + 0,1% teen</td></tr><tr><td>Model 700C</td><td>David Kopf Instrumenty</td><td>812368</td><td>Grzałka: 55? Elektrozaid: 45</td></tr><tr><td>Mikroskop fluorescencyjny Zeiss AxioImager.Z1</td><td>Zeiss</td><td></td><td>Here: System interferencji strukturalnej Apotome z oprogramowaniem do obrazowania Zeiss Zen</td></tr></tbody></table>

ocena specyficznej dla wieku zdolności fagocytarnej dorosłych hemocytów drosophila melanogaster za pomocą testu fagocytozy in vivo

Assessing the Age-Specific Phagocytic Ability of Adult Drosophila melanogaster Hemocytes using an In Vivo Phagocytosis Assay

Fagocytoza jest podstawową funkcją wrodzonej odpowiedzi immunologicznej. Proces ten jest przeprowadzany przez hemocyty fagocytarne, których podstawową funkcją jest rozpoznawanie szerokiej gamy cząstek i niszczenie patogenów drobnoustrojowych. Wraz z wiekiem organizmów proces ten zaczyna zanikać, jednak niewiele wiadomo na temat mechanizmów leżących u podstaw immunosenescencji. W tym przypadku test fagocytozy oparty na wstrzyknięciu in vivo służy do oceny związanych z wiekiem zmian w różnych aspektach fagocytozy, takich jak wiązanie, pochłanianie i degradacja zinternalizowanych cząstek, poprzez ilościowe określenie zdarzeń fagocytarnych w hemocytach u dorosłych Drosophila. Drosophila melanogaster stała się idealnym modelem do badania związanych z wiekiem zmian we wrodzonej funkcji immunologicznej z wielu powodów. Po pierwsze, wiele składników genetycznych i funkcji wrodzonej odpowiedzi immunologicznej, w tym fagocytoza, jest ewolucyjnie zachowanych między Drosophila a ssakami. Z tego powodu wyniki uzyskane przy użyciu tego protokołu mogą mieć duże znaczenie dla zrozumienia związanych z wiekiem zmian w funkcjonowaniu układu odpornościowego w różnych organizmach. Ponadto zauważamy, że metoda ta zapewnia ilościowe oszacowanie zdolności fagocytarnej hemocytów, co może być przydatne w różnych tematach badawczych i nie musi ograniczać się do badań nad starzeniem się.

Aby zilustrować opisane metody iniekcji, Rysunek 1A przedstawia miejsce iniekcji u Drosophila melanogaster, a także sposób, w jaki barwnik spożywczy pozwala na wizualne potwierdzenie wykonania iniekcji u muchy (Rysunek 1B). Dodatek barwnika spożywczego ułatwia również rozpoznanie zatkanej igły. Iniekcje można wykonywać w odwłoku, jednak należy zachować spójność miejsca iniekcji we wszystkich doświadczeniach. Pomoże to zminimalizować możliwe różnice między poszczególnymi eksperymentami.
Aby zwizualizować fluorescencyjnie znakowane cząsteczki w obrębie hemocyt rezydentnych wzdłuż naczynia grzbietowego, wypreparowano naczynie grzbietowe oraz przylegającą kutykulę odwłosa. Rysunek 2A-F przedstawia metody preparowania.
Aby ocenić zależną od wieku zdolność młodych i starych much do przeprowadzania fagocytozy, hemocyty wzdłuż naczynia grzbietowego są wizualizowane przy użyciu mikroskopu fluorescencyjnego. Aby upewnić się, że liczone są tylko komórki wzdłuż naczynia grzbietowego, można zastosować przeciwciała lub geny z tagiem GFP dla określonych markerów komórek krwi lub kolagenu specyficznego dla serca, takich jak Hemese i Hemolectin, lub Pericardin (Rycina 3)2,23,24. Cząsteczki E. coli znakowane fluorescencyjnie mają długość 1 mm, podczas gdy hemocyty mają średnicę 10 mm17. Liczone są tylko te zdarzenia fluorescencyjne, które znajdują się w obrębie obszaru o średnicy 10 mm z centrum w jądrze DAPI-dodatnim (Rycina 4). Do ilościowego określenia zdarzeń fluorescencyjnych wykorzystuje się oprogramowanie ImageJ (Rycina 5).
<img alt="Disekcja Drosophila i ekspresja GFP; obraz mikroskopowy; badanie genetyczne." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60983/60983fig1.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rycina 1"> 
Rysunek 1: Miejsce wstrzyknięcia i weryfikacja wizualna. (A) Boczną stronę klatki piersiowej przebija się igłą z kapilarą o wyciągniętym końcu. (BWstrzyknięcia są weryfikowane wizualnie poprzez dodanie zielonego barwnika spożywczego do roztworu cząstek. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60983/60983fig1large.jpg" target="_blank">Prosimy kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej figury.</a>
<img alt="Disekcja Drosophila, obrazy mikroskopowe, przedstawiające proces analizy genetycznej z użyciem markerów krok po kroku." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60983/60983fig2.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rysunek 2"> 
Rysunek 2: Disekcja naczynia grzbietowego. (A) Szpilki umieszcza się w klatce piersiowej oraz tylnej części odwłoka (czarne strzałki). (B-C) Wykonuje się dwa poziome nacięcia (zielone strzałki) na tylnym końcu odwłoka (B), oraz koniec przedni (C). (D) Wykonuje się pionate nacięcie (zielona strzałka) wzdłuż środka brzucha, łącząc dwa nacięcia poziome. (E) Opcjonalne piny (*) są wykorzystywane do rozwarcia jamy brzusznej w celu odsłonięcia tkanek wewnętrznych. (F) Usunięto tkanki wewnętrzne (wole, jelita, macicę, jajniki, ciała tłuszczowe), odsłaniając naczynie grzbietowe. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60983/60983fig2large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Obraz mikroskopowy aktywności sieci neuronalnej w mikroskopii fluorescencyjnej, uwidaczniający szlaki neuronalne." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60983/60983fig3.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rysunek 3"> 
Rycina 3: Widok brzuszny wypreparowanego naczynia grzbietowego samicy w wieku 5 tygodni, której wstrzyknięto cząstki wrażliwe na pH, z barwieniem przeciwciałem skierowanym przeciwko perikardynie (A). Biała przerywana linia obrysowuje boczną stronę naczynia grzbietowego, a strzałka wskazuje region przedni.B) Powiększony obraz (A): skupiska hemocytów (niebieska strzałka) aktywnie degradujących bakterie, w obrębie pierwszej komory aorty naczynia grzbietowego. (C) Powiększony obraz (A) z zaznaczeniem białka przypominającego kolagen z macierzy pozakomórkowej (ECM), perikardyny (zielona strzałka), która stabilizuje naczynie grzbietowe w jego położeniu24. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60983/60983fig3large.jpg" target="_blank">Prosimy kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Mikroskopia fluorescencyjna; barwienie na czerwono i niebiesko; struktury komórkowe; skala 10 µm; schemat; analiza." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60983/60983fig4.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rysunek 4"> 
Rycina 4: Disekowane naczynie grzbietowe i powiązane z nim hemocyty z samicy muchy po wstrzyknięciu cząsteczek wrażliwych na pH lub cząsteczek fluorescencyjnych. (A) naczynie grzbietowe i powiązane hemocyty z pochłoniętym znacznikiem wrażliwym na pH E. coli cząstki (czerwone), lub (E) znakowany fluorescencyjnie E. coli cząsteczki (czerwone), wyizolowane z 1-tygodniowej muchy, po 60 min regeneracji (B,F) Powiększony wycinek (A) i (E) (biała ramka), odpowiednio, przedstawiające dwa poszczególne hemocyty z policzalnymi zdarzeniami. (C) Naczynie grzbietowe oraz powiązane hemocyty z pochłoniętymi znacznikami wrażliwymi na pH *E. coli* cząsteczki (czerwone) lub ( G) znakowane fluorescencyjnie E. coli cząsteczki (czerwone), wyizolowane z 5-tygodniowej muchy, po 60 min regeneracji (D,H) Powiększony wstawka z (C) i (G) (biała ramka), odpowiednio, przedstawiające dwa pojedyncze hemocyty z policzalnymi zdarzeniami. Biała przerywana linia obrysowuje boczną stronę naczynia grzbietowego, a strzałka wskazuje region przedni. Jądra barwione DAPI (niebieski). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60983/60983fig4large.jpg" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<img alt="Obrazy z mikroskopii fluorescencyjnej przedstawiające segmentację i analizę komórek; zastosowanie wtyczki ImageJ." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60983/60983fig5.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rycina 5"> 
Rycina 5: Ilościowe określanie zdarzeń fagocytozy w obszarze 10 mm hemocyty za pomocą licznika komórek w programie ImageJ. (APo otwarciu obrazu lub obrazów w programie ImageJ można użyć narzędzia Cell Counter Notice, aby monitorować liczbę zdarzeń fagocytozy w każdej komórce.BNarzędzie to przypisze inny kolor do każdej komórki wybranej do policzenia, przy czym każda kropka będzie odpowiadać zdarzeniu fluorescencyjnemu w obrębie danej komórki. Naciśnięcie kombinacji klawiszy „alt+y” spowoduje wyświetlenie tabeli przedstawiającej liczbę zdarzeń policzonych w każdej komórce. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60983/60983fig5large.jpg" target="_blank">Aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny, kliknij tutaj.</a>

Ten protokół opisuje test in vivo fagocytozy używany do oceny i ilościowego określenia zdolności młodych i starszych hemocytów Drosophila melanogaster do fagocytozy bakterii.

Ocena specyficznej dla wieku zdolności fagocytarnej dorosłych hemocytów Drosophila melanogaster za pomocą testu fagocytozy in vivo

Phagocytosis is an essential function of the innate immune response. This process is carried out by phagocytic hemocytes whose primary function is to ...

Nasz protokół zapewnia skuteczne i powtarzalne podejście do oceny i ilościowego określania zdarzeń fagocytarnych w hemocytach. Główną zaletą tej techniki jest to, że możemy określić ilościowo zdarzenia fagocytarne w obrębie poszczególnych hemocytów, co pozwala nam wykryć różnice w procesach fagocytarnych między genotypami u poszczególnych muszek. Wykonywanie sekcji może być trudne, więc wykonując tę technikę po raz pierwszy, ćwicz sekcje tak często, jak to możliwe, przed przeprowadzeniem pełnej procedury.Zacznij od przygotowania szklanych igieł do wstrzykiwań. Napełnij jednomilimetrową strzykawkę olejem mineralnym i przymocuj igłę podskórną o rozmiarze 30 dostarczonym z nano-wstrzykiwaczem. Włóż igłę o rozmiarze 30 do końca ciągniętej igły kapilarnej i napełnij ją olejem mineralnym.Powoli wyjmij igłę o rozmiarze 30, upewniając się, że nie tworzą się pęcherzyki powietrza. Zdejmij tuleję zaciskową i umieść uszczelniony O-ring wgłębieniem skierowanym do góry. Umieść większy O-ring na metalowym tłoku, a następnie ponownie zamocuj tuleję zaciskową bez dokręcania.Włóż metalowy tłok do końca szklanej igły wypełnionej olejem i delikatnie dociśnij go w dół, wkładając go do większego O-ringu. Następnie dokręć tuleję zaciskową, aż będzie bezpieczna. Po napełnieniu igły cząstkami fluorowymi lub wrażliwymi na pH, wstrzyknąć muchy w płytkę mostkowo-opłucnową klatki piersiowej.Wstrzyknięcie jest udane, jeśli zielony barwnik dostaje się do muchy. Umieścić wstrzyknięte muchy w nowej fiolce z pokarmem, zwracając uwagę na czas wstrzyknięcia pierwszej i ostatniej muchy. Położyć fiolkę na boku, aż wszystkie muchy wyzdrowieją, aby zapobiec utknięciu ich w jedzeniu.Ustaw muchę brzuszną stroną do góry pod preparacyjnym mikroskopem stereoskopowym. Następnie włóż szpilkę do owadów w klatkę piersiową, a drugą przez najbardziej tylny koniec brzucha w pobliżu narządów płciowych. Gdy wszystkie muchy zostaną przypięte, użyj pipety transferowej, aby dodać wystarczającą ilość pożywki do preparacji, aby pokryć muchy.Usuń głowę nożyczkami do skórek i wykonaj poziome nacięcie bezpośrednio nad tylną szpilką w jamie brzusznej, a następnie drugie na najbardziej wysuniętym końcu brzucha. Wykonaj pionowe nacięcie łączące dwa poziome nacięcia, które otworzą jamę brzuszną. Użyj kleszczy, aby usunąć narządy wewnętrzne i tkanki, upewniając się, że omijasz naczynie grzbietowe.W razie potrzeby użyj dodatkowych szpilek, aby zabezpieczyć odcięte końce naskórka. Następnie usuń klatkę piersiową nożyczkami do skórek. Wyrzuć pożywkę preparacyjną i zastąp ją jednym mililitrem 4% PFA, chroniąc preparacje tak bardzo, jak to możliwe.Utrwal sekcje na 15 minut w temperaturze pokojowej, kołysząc się z prędkością 20 obr./min. Następnie usuń utrwalacz i dodaj jeden mililitr 1X PBST. W razie potrzeby wybarwić sekcje przeciwciałami.Po zamontowaniu skórek na szkiełku mikroskopowym użyj kleszczyków, aby ustawić je brzuszną stroną do góry i upewnij się, że naczynie grzbietowe jest widoczne. Młode i starsze muchy oceniano pod kątem specyficznej dla wieku zdolności do przeprowadzania fagocytozy poprzez obrazowanie fluorescencyjne hemocytów wzdłuż naczynia grzbietowego. Zastosowano przeciwciało przeciwko perikardynie, aby upewnić się, że policzone zostały tylko komórki wzdłuż naczynia grzbietowego.Ponieważ znakowane fluorescencyjnie cząstki E. coli mają długość jednego mikrometra, a hemocyty mają średnicę 10 mikrometrów, policzono tylko zdarzenia fluorescencyjne o średnicy 10 mikrometrów wyśrodkowane na jądrze DAPI-dodatnim. Oprogramowanie ImageJ zostało następnie wykorzystane do ilościowego określenia zdarzeń. Próbując wykonać tę procedurę, ważne jest, aby wyobrazić sobie, że mucha została faktycznie wstrzyknięta i pamiętać, że czas ma kluczowe znaczenie.Terminowe wykonywanie iniekcji i sekcji pomoże zminimalizować błąd eksperymentalny i możliwe zmiany szybkości fagocytarów. Technika ta pozwoli naukowcom na zbadanie różnych tematów badawczych, w tym pytań dotyczących odporności komórkowej, różnych populacji komórek krwi lub odróżnienia fagocytozy od produkcji AMP podczas udanej odpowiedzi immunologicznej.

assessing-age-specific-phagocytic-ability-adult-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Drosophila hemocyty rozprzestrzeniają się po całym rozwijającym się embrionie. Niniejszy protokół demonstruje sposób montowania i obrazowania tych migracji z wykorzystaniem embrionów z hemocytami znakowanymi fluorescencyjnie.

Obrazowanie na żywo migracji hemocytów embrionalnych Drosophila melanogaster

Molimimfa Drosophila służy zarówno jako krew, jak i płyn śródmiąższowy, krążąc po całym ciele podczas stadium larwy i dorosłego osobnika. Ten film opisuje protokół pobierania larw hemolimfy w celu ilościowego określenia krążących komórek.

Przerwanie naskórka: metoda zbierania hemolimfy z larw Drosophila

Ten film demonstruje technikę barwienia immunologicznego, aby uwidocznić pochłanianie komórek apoptotycznych w homogenizowanych komórkach embrionalnych Drosophila melanogaster. Metoda ta zapewnia wgląd w fizjologię komórkową poprzez określenie zakresu apoptotycznego pochłaniania komórek.

Test fagocytozy: technika barwienia immunologicznego do wizualizacji pochłaniania komórek apoptotycznych w komórkach embrionalnych Drosophila melanogaster

Ten film demonstruje test in vivo przeznaczony do pomiaru fagocytozy bakteryjnej u dorosłych muszek Drosophila. Po wstrzyknięciu fluorescencyjnie znakowanych bakterii do brzucha dorosłych muszek, hemocyty związane z naczyniem grzbietowym angażują się w fagocytozę. Wprowadzenie barwnika błękitu trypanowego służy wygaszeniu fluorescencji emitowanej przez zewnątrzkomórkowe, niefagocytozowane bakterie. Ten proces wygaszania poprawia identyfikację bakterii fagocytozowanych, gdy są obserwowane pod...

Test in vivo do ilościowego określenia fagocytozy bakteryjnej u dorosłych much Drosophila

Krwinki Drosophila, czyli hemocyty, krążą między miejscami rezydentnymi a krążeniem.  U larwy hemocyty rezydentne (siedzące) lokalizują się w mikrośrodowiskach indukcyjnych, kieszeniach krwiotwórczych, podczas gdy krążące hemocyty poruszają się swobodnie w hemolimfie. Celem tego protokołu jest standaryzowana izolacja i kwantyfikacja tych dwóch, behawioralnie odrębnych, ale wymiennych populacji hemocytów.

Oznaczanie populacji krwinek larwy Drosophila melanogaster

Drosophila i systemy krwiotwórcze ssaków mają wiele wspólnych cech, co czyni Drosophila atrakcyjnym modelem genetycznym do badania hematopoezy. Tutaj pokazujemy rozwarstwienie i montaż głównego larwalnego narządu krwiotwórczego do immunohistochemii. Opisano również metody oznaczania różnych larwalnych przedziałów krwiotwórczych, w tym krążących hemocytów i siedzących komórek krystalicznych.

Metody badania gruczołu limfatycznego i hemocytów u larw Drosophila

Opisujemy tutaj test fagocytozy z wykorzystaniem rozproszonych komórek embrionalnych Drosophila. Umożliwia nam łatwe i precyzyjne ilościowe określenie poziomów fagocytozy in vivo oraz identyfikację nowych cząsteczek wymaganych do fagocytozy komórek apoptotycznych.

Test fagocytozy na obecność komórek apoptotycznych w zarodkach Drosophila

Ta metoda pokazuje, jak wizualizować inwazję patogenów na komórki owadów za pomocą trójwymiarowych (3D) modeli. Hemocyty larw Drosophila były zakażone patogenami wirusowymi lub bakteryjnymi, zarówno ex vivo, jak i in vivo. Zainfekowane hemocyty zostały następnie utrwalone i wybarwione w celu obrazowania za pomocą mikroskopu konfokalnego, a następnie rekonstrukcji komórkowej 3D.

Ekstrakcja hemocytów z larw Drosophila melanogaster do infekcji mikrobiologicznej i analizy

Ten protokół opisuje test fagocytozy in vivo u dorosłych Drosophila melanogaster w celu ilościowego określenia rozpoznawania fagocytów i usuwania infekcji mikrobiologicznych.

Ocena komórkowej odpowiedzi immunologicznej muszki owocowej, Drosophila melanogaster, przy użyciu testu fagocytozy in vivo

Ten protokół ma na celu ocenę żywotności Drosophila na każdym etapie rozwoju, od zarodka do dorosłego osobnika. Metoda ta może być stosowana do określania i porównywania żywotności różnych genotypów lub warunków wzrostu.

Bezpośrednia i prosta metoda oceny żywotności Drosophila melanogaster od zarodka do dorosłego osobnika

Poznaj metodę oceny fagocytozy in vivo w hemocytach Drosophila melanogaster różniących się wiekiem. Technika umożliwia ilościową analizę zdarzeń fagocytarnych w pojedynczych komórkach i wykrywanie różnic między genotypami.

Ocena specyficznej dla wieku zdolności fagocytarnej dorosłych hemocytów Drosophila melanogaster za pomocą testu fagocytozy in vivo (Wideo) | JoVE Journal

Ocena specyficznej dla wieku zdolności fagocytarnej dorosłych hemocytów Drosophila melanogaster za pomocą testu fagocytozy in vivo

Przeglądaj więcej filmów