Name: Pomiary fizjologicznych reakcji na stres u C. elegans (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-21T13:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 36 s
Description: Poznaj metody pomiaru fizjologicznych reakcji na stres u C. elegans przy użyciu fluorescencyjnych reporterów transkrypcyjnych. Techniki te umożliwiają szybkie badanie odpowiedzi komórkowych na stres proteotoksyczny.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

R.BZ. jest wspierany przez długoterminowe stypendium EMBO i Fundację Larry'ego L. Hillbloma. R.H.S jest wspierany przez grant 5F32AG032023-02 za pośrednictwem National Institute of Aging (NIA) i stypendium podoktorskiego Glenn Foundation for Medical Research. A.F. jest wspierany przez F32AG051355 grantowe za pośrednictwem NIA. H.K.G. jest wspierany przez granty DGE1752814 w ramach programu stypendialnego National Science Foundation Graduate Research Fellowship Program. M.G.M. jest obsługiwany przez 1F31AG060660-01 przez NIA. A.D. jest wspierany przez Fundację Thomasa i Stacey Siebel, Instytut Medyczny Howarda Hughesa oraz 4R01AG042679-04 i 5R01AG055891-02 z NIA oraz 5R01ES021667-09 z NIEHS. Dziękujemy Larry'emu Joe, Melissie Sanchez, Naame Kelet i Anel Esquivel za znaczącą pomoc techniczną. Dziękujemy laboratorium Morimoto i CGC (finansowane przez NIH Office of Research Infrastructure Program P40 OD010440) za szczepy.

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

W tym miejscu opisano metody badania reakcji na stres komórkowy u C. elegans, przy użyciu fluorescencyjnych reporterów transkrypcyjnych i testów przeżycia stresu fizjologicznego. Wszystkie reportery wykorzystują ekspresję GFP napędzaną pod wpływem promotora dalszego celu transkrypcyjnego czynników transkrypcyjnych zaangażowanych w narastanie odpowiedzi na stres komórkowy. Wyjaśniono zastosowanie hsp-4p::GFP modulowanego przez UPRER, za pośrednictwem XBP-1s, hsp-6p::GFP kontrolowanego...

Zdolność organizmu do reagowania na zmiany w środowisku wewnątrz- i zewnątrzkomórkowym jest kluczowa dla jego przetrwania i adaptacji. Osiąga się to na poziomie komórkowym poprzez liczne szlaki ochronne, które zapewniają integralność komórki. Podczas gdy wiele składników komórkowych ulega uszkodzeniom związanym ze stresem, jednym z głównych udziałów w reakcjach na stres komórkowy jest naprawa i ochrona homeostazy proteomu komórkowego. Jednak podział białek na specjalne struktury, zwane organellami, stanowi wyzwanie dla komórki, ponieważ nie może ona polegać na jednej scentralizowanej formie kontroli jakości białek, aby zapewnić, że wszystkie białka w komórce są prawidłowo pofałdowane i funkcjonalne. Dlatego, aby poradzić sobie z zaburzeniami ich białek, organelle wykształciły dedykowane mechanizmy kontroli jakości, które mogą wykrywać nieprawidłowo sfałdowane białka i aktywować reakcję na stres w celu złagodzenia stresu w tym przedziale. Na przykład cytozol opiera się na reakcji szoku cieplnego (HSR), podczas gdy retikulum endoplazmatyczne (ER) i mitochondria opierają się na specyficznych dla przedziałów odpowiedziach niesfałdowanych białek (UPR). OxSR służy do łagodzenia toksycznego działania reaktywnych form tlenu (ROS). Każda reakcja na stres jest wyzwalana w obecności wyzwań komórkowych i zniewag środowiskowych i indukuje dostosowaną odpowiedź transkrypcyjną. Cechy charakterystyczne tych reakcji obejmują syntezę cząsteczek, które ponownie fałdują nieprawidłowo sfałdowane białka (takie jak białka opiekuńcze) skierowane do odpowiednich organelli lub alternatywnie, usuwają uszkodzone białka przez degradację białek. Brak aktywacji tych reakcji stresowych powoduje akumulację uszkodzonych białek, dysfunkcję komórkową propagowaną do ogólnoustrojowej niewydolności tkanek i ostatecznie śmierć organizmu. Funkcja i regulacja różnych reakcji na stres są omówione w innym miejscu1.
Wiele spostrzeżeń dotyczących regulacji i aktywności reakcji na stres komórkowy przypisuje się nicieniu, Caenorhabditis elegans, wielokomórkowemu organizmowi modelowemu w badaniach genetycznych. Nicienie pozwalają nie tylko badać aktywację reakcji stresowych na poziomie komórkowym, ale także na poziomie organizmu; Nicienie zostały wykorzystane do badania wpływu zaburzeń genetycznych lub narażenia na leki i zanieczyszczenia na ich wzrost i przeżycie. Ich szybki czas wytwarzania, izogenność, przezroczystość, podatność genetyczna i łatwość użycia podczas eksperymentów sprawiają, że idealnie nadają się do takich badań. Dodatkowo, stosunkowo szybka reakcja fizjologiczna na stres (od kilku godzin do kilku dni) i ewolucyjne zachowanie szlaków komórkowych sprawiają, że nicienie są ważnym narzędziem w badaniu odporności na stres.
Istnieją dwa powszechnie używane szczepy E. coli używane jako źródło pożywienia do hodowli C. elegans: standardowy OP50, szczep B, w którym historycznie przeprowadzono większość eksperymentów2 i HT115, szczep K-12, który jest używany do prawie wszystkich eksperymentów RNAi3,4. Należy zauważyć, że istnieją znaczne różnice między dietami bakteryjnymi OP50 i HT115. Wykazano, że wzrost na tych różnych źródłach bakteryjnych powoduje znaczne różnice w profilu metabolicznym, liczbie kopii mitochondrialnego DNA i kilku głównych fenotypach, w tym długości życia5. Niektóre z tych różnic przypisuje się niedoborowi witaminy B12 związanemu ze wzrostem bakterii OP50, co może skutkować defektami homeostazy mitochondriów i zwiększoną wrażliwością na patogeny i stresy. Wykazano, że wszystkie te fenotypy są łagodzone przez wzrost bakterii HT115, które mają wyższy poziom witaminy B126. Dlatego zaleca się, aby wszystkie eksperymenty dotyczące fizjologicznych reakcji na stres były wykonywane na bakteriach HT115, niezależnie od konieczności wystąpienia warunków RNAi. Jednakże, ze względu na łatwość utrzymania zwierząt na OP50, cały standardowy wzrost (tj. utrzymanie i amplifikacja zwierząt) może być przeprowadzony na OP50, ponieważ znaczące różnice w opisanych tutaj paradygmatach eksperymentalnych nie zostały wykryte u robaków utrzymywanych na OP50, o ile zostały przeniesione do HT115 po synchronizacji (tj. z wylęgu po bieleniu z lub bez zatrzymania L1) do czasu eksperymentów.
Tutaj opisana jest charakterystyka aktywności komórkowych reakcji na stres przy użyciu dwóch metod funkcjonalnych. Należy zauważyć, że przedstawione protokoły koncentrują się przede wszystkim na komórkowych reakcjach na stres i ich wpływie na homeostazę białek. Po pierwsze, wykorzystywane są fluorescencyjne reportery transkrypcyjne, które są regulowane przez endogenne promotory genów, które są specyficznie aktywowane w odpowiedzi na różne stresy komórkowe. Te fluorescencyjne reportery transkrypcyjne opierają się na indukcji transkrypcji określonych genów, które są natywnie częścią odpowiedzi na stres. Na przykład HSP-4, białko szoku cieplnego ortologiczne dla ludzkiego białka opiekuńczego HSPA5 / BiP, jest aktywowane po stresie ER i lokalizuje się w ER, aby złagodzić stres. W warunkach stresu ER (np. narażenie na tunikamycynę) zielone białko fluorescencyjne (GFP), umieszczone pod kontrolą promotora hsp-4, jest syntetyzowane w wysokich poziomach, które można ocenić za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej lub zmierzyć ilościowo za pomocą cytometrii przepływowej dużych cząstek nicieni7. Podobnie, promotor mitochondrialnego białka opiekuńczego, hsp-6 (ortologiczny do ssaczego HSPA9), jest wykorzystywany do monitorowania aktywacji UPRMT8, a promotor cytozolowego białka opiekuńczego hsp-16.2 (ortologicznego dla ludzkich krystalicznych genów alfa) jest używany do oceny aktywności klasy HSR9. Reportery te pozwalają na szybką charakterystykę ścieżek aktywowanych w odpowiedzi na różne perturbacje.
Często prezentowane tutaj reportery są obrazowane za pomocą mikroskopii, która dostarcza jakościowych danych wyjściowych aktywacji reakcji na stres. Jednakże, chociaż techniki obrazowania dostarczają zarówno informacji na temat intensywności, jak i lokalizacji tkanek reporterów opisanych powyżej, ich kwantyfikacja nie zawsze jest dokładna lub solidna. Chociaż możliwe jest ilościowe określenie aktywacji fluorescencyjnej za pomocą narzędzi do analizy obrazowania, metody te mają stosunkowo niską przepustowość, a wielkość próbki jest niewielka ze względu na stosunkowo niską liczbę obrazowanych zwierząt. Łatwość i zdolność do szybkiego pozyskiwania dużych ilości zwierząt sprawiają, że C. elegans jest idealnym systemem modelowym do oznaczania aktywacji fluorescencyjnych reporterów stresu za pomocą cytometru przepływu dużych cząstek. Cytometr przepływowy o dużych cząstkach jest w stanie rejestrować, analizować i sortować na podstawie wielkości i fluorescencji wielu żywych zwierząt. Za pomocą tej metody możliwe jest uzyskanie intensywności fluorescencji, rozmiaru, a także informacji przestrzennych (2D) dla tysięcy robaków. Sterowanie systemem odbywa się za pomocą FlowPilot, który pozwala na pozyskiwanie danych w czasie rzeczywistym i analizę mierzonych parametrów. W tym przypadku oferowane są metody zarówno obrazowania mikroskopowego, jak i analizy ilościowej przy użyciu cytometru przepływowego o dużych cząstkach jako metody pomiaru aktywacji reakcji na stres.
Poza analizą reportera, wrażliwość lub odporność zwierząt na stres może być mierzona za pomocą fizjologicznych testów stresu. Osiąga się to poprzez wystawianie zwierząt na stresujące środowisko, które aktywuje określone komórkowe szlaki stresu. W tym miejscu przedstawiono kilka metod pomiaru wrażliwości całych zwierząt na określone rodzaje stresorów.
ER stres jest stosowany do C. elegans za pomocą środka chemicznego, tunikamycyny, który blokuje glikozylację połączoną z N, powodując akumulację nieprawidłowo sfałdowanych białek w klasie ER<sup="xref">10. U C. elegans wzrost po ekspozycji na tunikamycynę powoduje poważne zaburzenia funkcji ER i znacznie skróconą długość życia11. Mierząc przeżywalność zwierząt na płytkach zawierających tunikamycynę, można określić ilościowo wrażliwość zwierząt na stres ER. Na przykład zwierzęta z ektopową indukcjąUPR ER, a tym samym zwiększoną odpornością na stres związany z nieprawidłowym fałdowaniem białek w ER, mają zwiększoną przeżywalność po ekspozycji na tunikamycynę w porównaniu ze zwierzętami typu dzikiego12.
Stres oksydacyjny i mitochondrialny jest stosowany do C. elegans poprzez wystawienie zwierząt na działanie czynnika chemicznego, parakwatu. Parakwat jest powszechnie stosowanym herbicydem, który powoduje powstawanie ponadtlenków w mitochondriach13. Ze względu na specyficzną lokalizację reaktywnych form tlenu (ROS) pochodzących z mitochondriów, testy parakwatu są często stosowane jako "mitochondrialne" testy stresu. Jednak ponadtlenek jest szybko przekształcany w nadtlenek wodoru przez mitochondrialne dysmutazy ponadtlenkowe (SODs)14. Nadtlenek wodoru może następnie dyfundować z mitochondriów i powodować stres oksydacyjny w innych przedziałach komórki. Dlatego opisujemy testy przeżycia parakwatu jako mierzące czułość zarówno na stres mitochondrialny, jak i oksydacyjny (inne testy stresu oksydacyjnego można znaleźć15).
Testy termotolerancji są przeprowadzane u C. elegans poprzez umieszczanie zwierząt w podwyższonych temperaturach. Temperatury otoczenia dla nicieni wynoszą ~15-20 °C, a stres termiczny jest indukowany w temperaturach powyżej 25 °C16,17. Testy termotolerancji są zwykle wykonywane w temperaturach w zakresie 30-37 °C, ponieważ zwierzęta wykazują poważne defekty komórkowe w tej temperaturze, a testy przeżycia są wykonywane w ciągu 24 godzin16,18. W tym przypadku przewidziano dwie alternatywne metody przeprowadzania testów termotolerancji: wzrost w temperaturze 34 °C i wzrost w temperaturze 37 °C. Razem przedstawione tutaj protokoły mogą być wykorzystane do wykonywania badań przesiewowych na dużą skalę w połączeniu ze standardowym knock-downem genów przy użyciu interferencji RNA lub bibliotek leków chemicznych.
Protokół można podzielić na 4 szerokie procedury - wzrost C. elegans i przygotowanie do obrazowania (sekcje 1 i 2), obrazowanie reporterów transkrypcyjnych za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej (sekcje 3-5), pomiary ilościowe reporterów za pomocą cytometru przepływowego o dużych cząstkach (sekcja 6) oraz testy fizjologiczne do pomiaru wrażliwości na stres u C. elegans (sekcja 7).

<table><tbody><tr><td>Antymycyna A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8674</td><td>na stres mitochondrialny</td></tr><tr><td>Bacto Peptone</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0118072</td><td>do płytek NGM</td></tr><tr><td>Agar granulowany BD Difco</td><td>VWR</td><td>90000-782</td><td>do płytek NGM</td></tr><tr><td>Chlorek wapnia dwuwodny</td><td>VWR</td><td>97061-904</td><td>do płytek NGM</td></tr><tr><td>Karbenicylina</td><td>BioPioneer</td><td>C0051-25</td><td>dla RNAi</td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>57-88-5</td><td>do płytek</td></tr><tr><td>NGM COPAS Biosorter</td><td>Union Biometrica</td><td>350-5000-000</td><td>wyposażony w źródło światła o długości fali 488 nm.</td></tr><tr><td>COPAS Cleaning Solution</td><td>Union Biometrica</td><td>300-5072-000</td><td>do stosowania z COPAS</td></tr><tr><td>COPAS Scover Solution</td><td>Union Biometrica</td><td>300-5070-100</td><td>do stosowania z COPAS</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>472301</td><td>rozpuszczalnik do leków</td></tr><tr><td>IPTG wolny od dioksanu</td><td>Denville Scientific</td><td>CI8280-4</td><td>do RNAi</td></tr><tr><td>LB Bulion Miller</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1426500</td><td>dla stereoskopu LB</td></tr><tr><td>M205FA</td><td>Leica</td><td>10450040</td><td>wyposażona w monochromatyczną kamerę CCD Leica DFC3000G, standardowy filtr Leica GFP (ex 395-455, EM 480 LP) oraz oprogramowanie LAS X</td></tr><tr><td>Siarczan magnezu siedmiowodny</td><td>VWR</td><td>EM-MX0070-3</td><td>do płyt NGM, M9</td></tr><tr><td>Paraquat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>36541</td><td>do stresu oksydacyjnego/mitochondrialnego</td></tr><tr><td>Chlorek potasu</td><td>Fisher</td><td>P217-500</td><td>do roztworu wybielacza</td></tr><tr><td>Fosforan potasu dwuzasadowy</td><td>VWR</td><td>EM-PX1570-2</td><td>do płytek NGM</td></tr><tr><td>Fosforan potasu jednozasadowy</td><td>VWR</td><td>EM-PX1565-5</td><td>do M9</td></tr><tr><td>Revolve</td><td>ECHO</td><td>75990-514</td><td>wyposażony w soczewkę obiektywową Olympus 4x Plan Fluorite NA 0,13, standardowy filtr Olympus FITC (ex 470/40; em 525/50; DM 560) oraz iPad Pro do aparatu fotograficznego i do sterowania oprogramowaniem ECHO</td></tr><tr><td>Sodium Azide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71289-50G</td><td>do obrazowania</td></tr><tr><td>Sodium Chloride</td><td>EMD Millipore</td><td>SX0420-5</td><td>do płytek NGM, M9</td></tr><tr><td>Sodium Phosphate dibasic</td><td>VWR</td><td>71003-472</td><td>do M9</td></tr><tr><td>Wodoronadtlenek tert-butylu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>458139</td><td>na stres</td></tr> <tr><td>oksydacyjnyChlorowodorek tetracykliny</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T7660-5G</td><td>dla RNAi</td></tr><tr><td>Tunicamycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T7765-50MG</td><td>dla stresu ER</td></tr></tbody></table>

pomiary fizjologicznych reakcji na stres u c. elegans

Measurements of Physiological Stress Responses in C. Elegans

Organizmy są często narażone na zmienne warunki środowiskowe i zmiany w homeostazie wewnątrzkomórkowej, co może mieć szkodliwy wpływ na ich proteom i fizjologię. W ten sposób organizmy wyewoluowały ukierunkowane i specyficzne reakcje na stres przeznaczone do naprawy uszkodzeń i utrzymania homeostazy. Mechanizmy te obejmują niesfałdowaną odpowiedź białkową retikulum endoplazmatycznego (UPRER), niesfałdowaną odpowiedź białkową mitochondriów (UPRMT), odpowiedź na szok cieplny (HSR) i odpowiedź na stres oksydacyjny (OxSR). Przedstawione tutaj protokoły opisują metody wykrywania i charakteryzowania aktywacji tych szlaków oraz ich fizjologicznych konsekwencji u nicienia C. elegans. Po pierwsze, opisano zastosowanie specyficznych dla szlaku fluorescencyjnych reporterów transkrypcyjnych do szybkiej charakterystyki komórek, badań przesiewowych leków lub badań genetycznych na dużą skalę (np. RNAi lub bibliotek mutantów). Ponadto opisano komplementarne, solidne testy fizjologiczne, które można wykorzystać do bezpośredniej oceny wrażliwości zwierząt na określone czynniki stresogenne, służąc jako walidacja funkcjonalna reporterów transkrypcyjnych. Łącznie metody te pozwalają na szybką charakterystykę komórkowych i fizjologicznych skutków wewnętrznych i zewnętrznych zaburzeń proteotoksycznych.

Wykorzystanie reporterów transkrypcyjnych do pomiaru aktywacji odpowiedzi stresowych 
W niniejszym protokole zastosowano fluorescencyjne reportery transkrypcyjne, które stanowią niezawodne narzędzia do pomiaru aktywacji większości odpowiedzi stresowych u C. elegans. Ekspresja GFP jest sterowana przez promotory kanonicznych genów docelowych głównych regulatorów transkrypcyjnych zaangażowanych w odpowiedź na stresy specyficzne dla konkretnych przedziałów komór...

Tutaj charakteryzujemy komórkowe reakcje na stres proteotoksyczny u nicieni C. elegans, mierząc aktywację fluorescencyjnych reporterów transkrypcyjnych i oceniając wrażliwość na stres fizjologiczny.

Pomiary fizjologicznych reakcji na stres u C. elegans

Organisms are often exposed to fluctuating environments and changes in intracellular homeostasis, which can have detrimental effects on their proteome and ...

Metody te można wykorzystać do scharakteryzowania reakcji na stres u C. elegans i określenia, czy zaburzenia genetyczne lub farmakologiczne wpływają na aktywację ochronnych szlaków komórkowych. Metody te pozwalają na szybkie i wysokoprzepustowe testowanie setek perturbacji, takich jak knockdown genów, zarówno na poziomie molekularnym, jak i fizjologicznym. Aby upewnić się, że test jest wykonywany prawidłowo, należy uwzględnić kontrole dodatnie i ujemne.Zsynchronizuj zdrowe, dobrze odżywione zwierzęta do odpowiedniego etapu i użyj świeżych talerzy do eksperymentu. Wizualizacja mikromanipulacji robakami za pomocą kilofa może pomóc nowym użytkownikom zrozumieć, w jaki sposób robaki mogą być ustawiane w szeregu i oceniane pod kątem żywotności. Procedury zademonstrują Phil Frankino, Holly Gildea i Melissa Metcalf, doktoranci w naszym laboratorium.Aby wykorzystać zwierzęta wykazujące ekspresję GFP pod promotorem białka szoku cieplnego cztery do aktywacji odpowiedzi białkowej niewiasty retikulum endoplazmatycznego, należy wyhodować zsynchronizowane zwierzęta reporterowe w temperaturze 20 stopni Celsjusza do etapu L4 i zmyć robaki z płytki za pomocą pożywki M9 i przenieść do probówki. Po z

measurements-of-physiological-stress-responses-in-c-elegans

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Opracowaliśmy system mikroskopu śledzącego w czasie rzeczywistym, który umożliwia rejestrację i kwantyfikację zachowania C. elegans z wysoką rozdzielczością i przy dużych prędkościach. Opracowaliśmy również metody obliczeniowe pozwalające na redukcję wymiarowości obrazów nicieni do podstawowego zestawu pomiarów, które w pełni opisują kształt organizmu.

Śledzenie i pomiar zachowania C. elegans

Ten film przedstawia test krótkoterminowego przeżycia, który testuje leczenie ostrej toksyczności lub testuje szczep genetyczny pod kątem odporności na stan toksyczny. Przykładowy protokół pokazuje przykładowy test przeżycia, w którym robaki są testowane pod kątem ich odporności na stres oksydacyjny wywołany przez parakmet (PQ).

C. elegans (C. elegans) Test przeżycia: test toksyczności krótkoterminowej

Aby zbadać związek między homeostazą białek, stresem i starzeniem się, monitorowaliśmy zmiany w fałdowaniu białek, śledząc dysfunkcję białek, lokalizację białek w komórce i stabilność białek na poziomie organizmu, komórkowym i białkowym, używając genetycznie wykonalnego metazoanu Caenorhabditis elegans jako systemu modelowego.

Wykorzystanie Caenorhabditis elegans jako systemu modelowego do badania homeostazy białek w organizmie wielokomórkowym

Test EIW (egg-in-worm) jest użyteczną metodą do ilościowego określenia zachowania podczas składania jaj. Zmiany w składaniu jaj mogą być reakcją behawioralną organizmu modelowego Caenorhabditis elegans na potencjalnie szkodliwe substancje środowiskowe, takie jak te wytwarzane przez bakterie chorobotwórcze.

Pomiar wpływu bakterii na zachowanie C. elegans za pomocą testu retencji jaj

Opisano protokół, który wykorzystuje anoksję/głód u C. elegans do modelowania niedokrwienia/reperfuzji. Wyniki funkcjonalne obejmują zwiększoną śmiertelność, widoczne nieprawidłowości w procesach neuronalnych znakowanych GFP oraz upośledzone reakcje behawioralne, które wymagają funkcji neuronalnej.

Model niedokrwienia/reperfuzji beztlenowej u C. elegans

C. elegans jest atrakcyjnym organizmem modelowym do badania szlaków transdukcji sygnałów zaangażowanych w odporność na stres oksydacyjny. Tutaj przedstawiamy protokół pomiaru odporności zwierząt C. elegans na stres oksydacyjny w fazie ciekłej, przy użyciu kilku środków utleniających w 96-dołkowych płytkach.

Pomiar odporności Caenorhabditis elegans na stres oksydacyjny w 96-dołkowych płytkach mikromiareczkowych

Tutaj przedstawiono standardowe protokoły do oceny indukcji reakcji na szok cieplny (HSR) u Caenorhabditis elegans za pomocą RT-qPCR na poziomie molekularnym, fluorescencyjnych reporterów na poziomie komórkowym i termoregeneracji na poziomie organizmu.

Znormalizowane metody pomiaru indukcji reakcji na szok cieplny u Caenorhabditis elegans

Spadek proteostazy jest cechą charakterystyczną starzenia się, ułatwiając wystąpienie chorób neurodegeneracyjnych. Przedstawiamy protokół do ilościowego pomiaru proteostazy w dwóch różnych tkankach Caenorhabditis elegans poprzez heterologiczną ekspresję powtórzeń poliglutaminy połączonych z fluorescencyjnym reporterem. Model ten umożliwia szybką analizę genetyczną proteostazy in vivo.

Kwantyfikacja swoistego dla tkanki spadku proteostazy u Caenorhabditis elegans

To badanie przedstawia protokoły dla dwóch półautomatycznych metod analizy aktywności lokomotorycznej u robaków C. elegans complex I disease gas-1(fc21), a mianowicie ZebraLab (test o średniej przepustowości) i WormScan (test o wysokiej przepustowości) i dostarcza analizy porównawczej wśród szerokiego wachlarza metod badawczych do ilościowego określenia zachowania nicieni i zintegrowanej funkcji nerwowo-mięśniowej.

Analiza porównawcza metod eksperymentalnych do ilościowego określania aktywności zwierząt w modelach choroby mitochondrialnej Caenorhabditis elegans

Mikroby jelitowe mogą pozytywnie lub negatywnie wpływać na zdrowie swojego gospodarza poprzez specyficzne lub konserwatywne mechanizmy. Caenorhabditis elegans to wygodna platforma do badań przesiewowych pod kątem takich drobnoustrojów. Niniejszy protokół opisuje wysokoprzepustowe badania przesiewowe 48 izolatów bakteryjnych pod kątem wpływu na odporność nicieni na stres, wykorzystywane jako wskaźnik zdrowia robaków.

Wysokoprzepustowe badania przesiewowe izolatów drobnoustrojów mające wpływ na zdrowie Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans służy jako doskonały system modelowy z solidnymi i tanimi metodami badania zdrowia, długości życia i odporności na stres.

Badanie tanich metod pomiaru długości życia i długości zdrowia u Caenorhabditis elegans

Poznaj metody pomiaru fizjologicznych reakcji na stres u C. elegans przy użyciu fluorescencyjnych reporterów transkrypcyjnych. Techniki te umożliwiają szybkie badanie odpowiedzi komórkowych na stres proteotoksyczny.

Pomiary fizjologicznych reakcji na stres u C. elegans

Przeglądaj więcej filmów