Name: Produkcja szybko rosnących brojlerów wolnych od zarazków z komercyjnej linii do badań mikrobioty (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-18T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 51 s
Description: Poznaj metodę produkcji brojlerów wolnych od zarazków z jaj komercyjnej linii Ross PM3. Technika umożliwia badania mikrobioty z wykorzystaniem genetycznego tła ptaków hodowlanych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy są wdzięczni hodowcom i towarzystwu Boyé accouvage (La Boissière en Gâtine, Francja) za dostarczenie zapłodnionych jaj. Badanie zostało przeprowadzone pod auspicjami konsorcjum badawczego APR-IA "INTEGRITY" (2017-2019), które zostało sfinansowane przez Région Centre Val de Loire we Francji.

Procedury opieki nad zwierzętami zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi określonymi przez Dyrektywę Rady Wspólnot Europejskich (86/609/EWG) oraz przez francuskie przepisy dotyczące doświadczeń na zwierzętach.
1. Przygotowanie izolatora
<ol>
	<li>Do sztywnego izolatora pod nadciśnieniem należy włożyć niezbędne materiały: probówki o pojemności 50 ml, pipety plastikowe o pojemności 5, 10 i 25 ml, napromieniowaną pożywkę, wodę w autoklawie i sterylnie zamknięte pojemniki z tworzywa sztucznego.</li>
	<li>Napełnij transferową pułapkę bakteriobójczą 2% czwartorzędowym roztworem amoniowym.</li>
	<li>Wysterylizuj izolator trzykrotnie oparami formaldehydu, używając 60 ml formaliny (24% formaldehydu) dodanej do 30 g nadmanganianu potasu na metr sześcienny (m3). Przesuwaj materiały wewnątrz izolatora między każdą sterylizacją, aby zapewnić sterylizację wszystkich powierzchni kontaktowych.</li>
	<li>Ustawić temperaturę izolatora na 37 °C na co najmniej 2 dni przed wprowadzeniem jaj. Ustaw higrometr na 65-70% wilgotności względnej (RH) w dniu wprowadzenia.</li>
</ol>
2. Zbieranie jaj i inkubacja
<ol>
	<li>Zbiera się jaja z ferm wybranych na podstawie dobrego wskaźnika wylęgu kur niosek (co najmniej 80% w szczycie produkcji jaj) i ich dobrego stanu sanitarnego (tj. braku powszechnych patogenów drobiu i braku chorób w stadzie). Wizualnie wybierz czyste i nieskazitelne jajka na bieżni.</li>
	<li>Natychmiast odkaż powierzchnię jaj, zanurzając je na 5 minut w 1,5% roztworze kwasu nadoctowego o temperaturze pokojowej.</li>
	<li>Jaja należy przetransportować do zakładu doświadczalnego za pomocą pudełka odkażonego oparami formaldehydu.</li>
	<li>Jaja należy przechowywać przez 24 godziny w temperaturze 4 °C. Powtórzyć proces odkażania opisany w kroku 2.2 i umieścić je w inkubatorze wylęgowym (dzień 0) na 19 dni.</li>
</ol>
3. Kreskowanie
<ol>
	<li>W dniu 19 należy sprawdzić płodność, żywotność (ruchliwość) i rozwój zarodka, prześwietlając je za pomocą świecy do jaj w sterylnych warunkach. Do sterylnych izolatorów wylęgowych należy wprowadzać tylko żywe zarodki jajowe.</li>
	<li>Odkaż wybrane jaja, rozpylając 1,5% roztwór kwasu nadoctowego przez 30 s lub do momentu, gdy cała powierzchnia każdego jajka zostanie pokryta. Jaja pozostaną w kontakcie ze sprayem przez 16 minut i 30 s podczas przenoszenia do izolatorów.</li>
	<li>Przenieś jaja do sterylnych izolatorów wylęgowych i przepłucz je sterylną wodą demineralizowaną przed umieszczeniem ich w przestrzeni wylęgowej. 
	UWAGA: Zwierzęta wykluwają się i są hodowane w sterylnych izolatorach. Są one karmione ad libitum komercyjną dietą, sterylizowane promieniowaniem gamma i podlewane autoklawowaną wodą z kranu dostarczaną przez dystrybutory wody.</li>
</ol>
4. Analiza stanu bakteriologicznego
<ol>
	<li>Jednego dnia po wykluciu należy pobrać próbkę kału bezpośrednio z odbytnicy różnych piskląt i zebrać je w wysterylizowanej szklanej probówce, aby próbka ta była reprezentatywna dla wszystkich zwierząt w danym izolatorze.</li>
	<li>Próbki kału są mniej lub bardziej płynne, dodać równowartość 1 ml kału do 9 ml bulionu tioglikolanowego z rezazuryną. Dodać pozostałą próbkę kału do 9 ml bulionu z naparu z serca mózgu (BHI) i inkubować probówki w temperaturze 37 °C bez wstrząsania przez 18–48 godzin. Pozwoli to na wzrost szerokiej gamy gatunków tlenowych, fakultatywnych tlenowych i niewybrednych gatunków beztlenowych. 
	UWAGA: Rosół tioglikolanowy z rezazuryną przeznaczony jest do wykrywania niewybrednych bakterii beztlenowych, ale umożliwia również wykrywanie bakterii tlenowych. To podłoże jest zgodne z europejskimi, amerykańskimi i japońskimi farmakopeach dotyczącymi testowania sterylności18,19,20.</li>
	<li>Obserwuj wzrokowo, czy po 18 godzinach inkubacji nie nastąpią jakiekolwiek zmiany w pożywce wzrostowej. Po 48 godzinach weź kroplę z pożywki bulionowej kałowej BHI, umieść ją na szkiełku podstawowym i obserwuj pod mikroskopem (powiększenie 40x) pod kątem braku lub obecności bakterii.</li>
	<li>Jeśli istnieje podejrzenie obecności bakterii, należy pobrać próbkę z kultury BHI i wysadzić ją na płytki agarowe BHI. Inkubować w temperaturze 37 °C przez 18–48 godzin.</li>
	<li>Jeśli kolonie są obecne, należy przeprowadzić techniki wysokoprzepustowe, takie jak spektrometria mas MALDI-TOF, w celu precyzyjnej identyfikacji drobnoustrojów. 
	UWAGA: Po 72 godzinach, jeśli wyniki analiz bakteriologicznych są negatywne, zwierzęta uznaje się za wolne od zarazków.</li>
</ol>

<ol><li>Shang, Y., Kumar, S., Oakley, B., Kim, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chicken+microbiota%3A+importance+and+detection+echnology%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Chicken microbiota: importance and detection echnology.</a> Frontiers in Veterinary Science. 23, 5(2018).</li>
<li>Grover, M., Kashyap, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germ-free+mice+as+a+model+to+study+effect+of+gut+microbiota+on+host+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterology+%26+Motility%22%5BJournal%5D)">Germ-free mice as a model to study effect of gut microbiota on host physiology.</a> Neurogastroenterology & Motility. 26 (6), 745-748 (2014).</li>
<li>Umesaki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+gnotobiotic+mice+to+identify+and+characterize+key+microbes+responsible+for+the+development+of+the+intestinal+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Japan+Academy%2C+Ser.+B%2C+Physical+and+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Use of gnotobiotic mice to identify and characterize key microbes responsible for the development of the intestinal immune system.</a> Proceedings of the Japan Academy, Ser. B, Physical and Biological Sciences. 90 (9), 313-332 (2014).</li>
<li>Carrasco, J. M., Casanova, N. A., Fernández, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiota%2C+gut+health+and+chicken+productivity%3A+what+is+the+connection%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Miyakawa.+Microorganisms%22%5BJournal%5D)">Microbiota, gut health and chicken productivity: what is the connection?</a> Miyakawa. Microorganisms. 7 (10), 374(2019).</li>
<li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+microbial+communities+in+the+chicken+oviduct+and+the+origin+of+chicken+embryo+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Characterization of microbial communities in the chicken oviduct and the origin of chicken embryo gut microbiota.</a> International Journal of Scientific Reports. 9 (1), 6838(2019).</li>
<li>Hincke, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+structural+barriers+and+innate+immune+components+during+incubation+of+the+avian+egg%3A+critical+interplay+between+autonomous+embryonic+development+and+maternal+anticipation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Innate+Immunity%22%5BJournal%5D)">Dynamics of structural barriers and innate immune components during incubation of the avian egg: critical interplay between autonomous embryonic development and maternal anticipation.</a> Journal of Innate Immunity. 11 (2), 111-124 (2019).</li>
<li>Le Bars, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstration+of+a+protocol+for+obtaining+germ-free+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Demonstration of a protocol for obtaining germ-free chickens.</a> Annals of Veterinary Research. 7, 383-396 (1976).</li>
<li>Lafont, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+study+of+some+factors+limiting+%27competitive+exclusion%27+of+Salmonella+in+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Research+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Experimental study of some factors limiting 'competitive exclusion' of Salmonella in chickens.</a> Research in Veterinary Science. 34 (1), 16-20 (1983).</li>
<li>Brée, A., Dho, M., Lafont, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+infectivity+for+axenic+and+specific-pathogen-free+chickens+of+O2+Escherichia+coli+strains+with+or+without+virulence+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Avian+Diseases%22%5BJournal%5D)">Comparative infectivity for axenic and specific-pathogen-free chickens of O2 Escherichia coli strains with or without virulence factors.</a> Avian Diseases. 33 (1), 134-139 (1989).</li>
<li>Dozois, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+colonization+and+in+vivo+expression+of+F1+%28type+1%29+fimbrial+antigens+in+chickens+experimentally+infected+with+pathogenic+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Avian+Diseases%22%5BJournal%5D)">Bacterial colonization and in vivo expression of F1 (type 1) fimbrial antigens in chickens experimentally infected with pathogenic Escherichia coli.</a> Avian Diseases. 38 (2), 231-239 (1994).</li>
<li>Schouler, C., Taki, A., Chouikha, I., Moulin-Schouleur, M., Gilot, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genomic+island+of+an+extraintestinal+pathogenic+Escherichia+coli+strain+enables+the+metabolism+of+fructooligosaccharides%2C+which+improves+intestinal+colonization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bacteriology%22%5BJournal%5D)">A genomic island of an extraintestinal pathogenic Escherichia coli strain enables the metabolism of fructooligosaccharides, which improves intestinal colonization.</a> Journal of Bacteriology. 191 (1), 388-393 (2009).</li>
<li>Porcheron, G., Chanteloup, N., Trotereau, A., Brée, A., Schouler, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+fructooligosaccharide+metabolism+on+chicken+colonization+by+an+extra-intestinal+pathogenic+Escherichia+coli+strain%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Effect of fructooligosaccharide metabolism on chicken colonization by an extra-intestinal pathogenic Escherichia coli strain.</a> PLoS One. 7 (4), 35475(2012).</li>
<li>Kraimi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+a+gut+microbiota+transfer+on+emotional+reactivity+in+Japanese+quails+%28Coturnix+japonica%29%5BTitle%5D)+AND+%22of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Effects of a gut microbiota transfer on emotional reactivity in Japanese quails (Coturnix japonica).</a> of Experimental Biology. 222, (2019).</li>
<li>Stanley, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+microbiota+associated+with+differential+feed+conversion+efficiency+in+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+microbiology+and+biotechnology%22%5BJournal%5D)">Intestinal microbiota associated with differential feed conversion efficiency in chickens.</a> Applied microbiology and biotechnology. 96, 1361-1369 (2012).</li>
<li>Han, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+the+gut+microbiota+composition+on+Campylobacter+jejuni+colonization+in+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Influence of the gut microbiota composition on Campylobacter jejuni colonization in chickens.</a> Infection and Immunity. 85 (11), 0038017(2017).</li>
<li>Thomas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbial+dynamics+during+conventionalization+of+germ-free+chicken%5BTitle%5D)+AND+%22mSphere%22%5BJournal%5D)">Gut microbial dynamics during conventionalization of germ-free chicken.</a> mSphere. 4 (2), 00035-00119 (2019).</li>
<li>Langhout, D. J., Schutte, J. B., de Jong, J., Sloetjes, H., Verstegen, M. W., Tamminga, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+viscosity+on+digestion+of+nutrients+in+conventional+and+germ-free+chicks%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Effect of viscosity on digestion of nutrients in conventional and germ-free chicks.</a> British Journal of Nutrition. 83 (5), 533-540 (2000).</li>
<li>European Pharmacopoeia. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22European+Pharmacopoeia+%28Ph.+Eur.%29%3A+Supplement+6.3%2C+Sterility%22">European Pharmacopoeia (Ph. Eur.): Supplement 6.3, Sterility</a>. , reference 01/2009:20601 (2009).</li>
<li>Japanese Pharmacopoeia, Japanese Pharmacopoeia. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJapanese+Pharmacopoeia%2C++%22Japanese+Pharmacopoeia+%28JP%29%3A+The+4.06+Sterility+Test+as+it+appeared+in+the+partial+revision+of+the+JP+15th+edition%22">Japanese Pharmacopoeia (JP): The 4.06 Sterility Test as it appeared in the partial revision of the JP 15th edition</a>. , made official March 31, 2009, by the Ministry of Health, Labour and Welfare Ministerial Notification No. 190 (2009).</li>
<li>United States Pharmacopeia (USP). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22United+States+Pharmacopeia+%28USP%29%3A+Sterility+Tests+as+presented+in+Pharmacopeial+Forum%2C+Interim+Revision+Announcement+No.+6%22">United States Pharmacopeia (USP): Sterility Tests as presented in Pharmacopeial Forum, Interim Revision Announcement No. 6</a>. 34 (6), December 1, 2008, official on May 1, 2009 (2008).</li>
<li>Harrison, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+germ-free+chicks%3A+a+comparison+of+the+hatchability+of+eggs+sterilized+externally+by+different+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Production of germ-free chicks: a comparison of the hatchability of eggs sterilized externally by different methods.</a> Laboratory Animals. 3 (1), 51-59 (1969).</li>
<li>Yokota, H., Furuse, M., Okumura, J., Iwao Task, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+production+and+rearing+of+the+germ-free+chick%5BTitle%5D)+AND+%22J-STAGE+home+Nihon+Chikusan+Gakkaiho%22%5BJournal%5D)">A simple method for production and rearing of the germ-free chick.</a> J-STAGE home Nihon Chikusan Gakkaiho. 55 (8), (1984).</li>
<li>Ding, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inheritance+and+establishment+of+gut+microbiota+in+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Inheritance and establishment of gut microbiota in chickens.</a> Frontiers in Microbiology. 8, 1967(2017).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Wcześniej opisano kilka metod generowania kurczaków wolnych od zarazków 7,21,22. Proste metody, takie jak ta przedstawiona tutaj, wykorzystują różne środki dezynfekujące w celu zmniejszenia obciążenia bakteryjnego na powierzchni jaj i w izolatorach. Najczęściej stosowanymi środkami dezynfekującymi są chlorek rtęci, czwartorzędowy amon, jodoform, podchloryn sodu i roztwory dwutlenku chloru. Efekty są często zadowalające. Jednak pomimo dostępności tych metod, niewiele struktur może zastosować tę metodę i hodować zwierzęta na dużą skalę, co sprawia, że wykorzystanie kurczaków wolnych od zarazków jest stosunkowo rzadkim podejściem, stosowanym tylko w celu rozwiązania bardzo konkretnych pytań naukowych. Opisane tu metody, materiały i sprzęt pozwalają na wysoce wydajną proporcję wylęgową brojlerów wolnych od zarazków, które pozostają zdrowe i bezpłodne przez co najmniej 3 tygodnie (czas trwania eksperymentów naukowych, do których zostały wyprodukowane).
Wyniki pokazują, że adaptacja protokołu do produkcji piskląt wolnych od zarazków z jaj zebranych na komercyjnych fermach drobiu zakończyła się sukcesem. Doświadczenia z produkcją jaj SPF pokazują, że efektywność wylęgu zależy przede wszystkim od wieku kur niosek oraz od jakości zebranych jaj. Oba parametry były brane pod uwagę przy wyborze ferm i zbieraniu jaj. Przy zastosowaniu tej samej metody średni wskaźnik wylęgu brojlerów wolnych od zarazków jest znacznie lepszy niż uzyskany w ostatniej produkcji kur niosek SPF w naszym zakładzie (79% vs 35%), bez wpływu na sterylność zwierząt (87% vs 83%). Różnice te mogą być związane z pochodzeniem genetycznym ptaków (brojlery w porównaniu z nioskami), a także z jakością skorupki jaja, która prawdopodobnie będzie bardziej krucha w jajach zwierząt SPF utrzymywanych w zamkniętych hodowlach przez ponad 40 lat. Ponadto wykazaliśmy również, że transport trwający dłużej niż 2 godziny (z fermy do zakładu doświadczalnego) nie wpływa na wydajność i jakość wylęgu.
Chociaż proces sterylizacji stosowany do izolatorów wylęgowych i protokół odkażania jaj zostały zoptymalizowane, około 10% izolatorów nie było wolnych od zarazków. Aby zrozumieć pochodzenie zanieczyszczenia, bardzo ważne jest przeprowadzenie rutynowej kontroli sterylności wyklutych izolatorów przed wprowadzeniem jaj.
Jeśli chodzi o stan sterylności ptaków, staraliśmy się zastosować metody, które pozwalają na wzrost bakterii tlenowych i niewybrednych bakterii beztlenowych z próbek kału, zapewniając w ten sposób, że wykrywamy żywe, zdolne do życia bakterie. Metody te są zgodne z międzynarodowymi farmakopeami dotyczącymi badania sterylności i stanowią szybkie, łatwe i tańsze techniki do rutynowego stosowania. Jednak techniki biologii molekularnej, takie jak sekwencjonowanie genu 16S rRNA, choć nie dostarczają informacji na temat żywotności bakterii, mogą być stosowane do potwierdzenia obecności bakterii niehodowlanych. Rzeczywiście, niedawne badania sugerują, że niektóre bakterie mikrobioty jajowodu matki wydają się być przenoszone do zarodka przez białko jaja, stanowiąc później większość populacji bakterii jelitowych zarodka5. Co więcej, inne badanie sugerowało, że część kolonizatorów mikrobiologicznych przechowywanych we wczesnych zarodkach została odziedziczona po kurach matczynych, a na obfitość i różnorodność mikroorganizmów jelitowych miały później wpływ czynniki środowiskowe i genetyka gospodarzapodczas rozwoju. Jednak wyniki tych badań opierają się na analizie sekwencji DNA, w której duża liczba tych bakterii może być martwa lub nie do odtworzenia w białku jaja kurzego (znacznie naładowanym cząsteczkami przeciwdrobnoustrojowymi). Thomas i współpracownicyprzeprowadzili testy sterylności poprzez ocenę hodowlanych bakterii tlenowych i fakultatywnych bakterii tlenowych poprzez upuszczanie kału na płytki BHI, podkreślając w ten sposób skuteczność standardowych metod bakteriologicznych w kontroli sterylności wolnej od zarazków. Ponadto w zaproponowanym protokole zastosowaliśmy monitorowanie wzrostu w bulionie tioglikolanowym z rezazuryną, aby móc wykryć wzrost niewybrednych bakterii beztlenowych.
Protokół, stosowany już do produkcji przepiórek i kurcząt wolnych od zarazków, można go dostosować do produkcji zwierząt wolnych od zarazków z większości ptaków gniazdujących i oferuje perspektywy badania wkładu mikrobioty w fizjologię tych zwierząt. Oprócz wykorzystania tego modelu do badania wzajemnych interakcji między gospodarzem a mikrobiotą w jelicie drobiu, może on być również przydatny w badaniach stosowanych. Na przykład można go wykorzystać do oceny bezpieczeństwa i skuteczności probiotyków pochodzących z mikroorganizmów komensalnych jelit kurczaka w celu poprawy zdrowia i odporności zwierząt.

Nastąpił dramatyczny wzrost zainteresowania naukowego i popularnego wkładem mikrobioty jelitowej w zdrowie zwierząt. Mikrobiota, składająca się z bakterii, wirusów, grzybów i archeonów, które zamieszkują różne nisze w jelicie zwierzęcia, jest bezpośrednio lub pośrednio zaangażowana w regulację chorób zapalnych, zakaźnych i metabolicznych dotykających nie tylko gatunki ssaków, ale także zwierzęta gospodarskie, takie jak drób1. Opracowano kilka modeli zwierzęcych, aby lepiej zbadać wpływ mikrobioty jelitowej na zdrowie i choroby. Na przykład zwierzęta wolne od zarazków i gnotobiotyczne pozwalają na badanie całkowitego braku drobnoustrojów lub znanej mikrobioty, odpowiednio, w fizjopatologii infekcji2,3. Jednak hodowla i utrzymanie tych zwierząt wymaga specjalistycznych technik i urządzeń, a koszty, praca i umiejętności wymagane do ich utrzymania ograniczają ich dostęp do wielu badaczy. Rzeczywiście, zwierzęta wolne od zarazków muszą być regularnie monitorowane pod kątem możliwego zanieczyszczenia przy użyciu kombinacji metod hodowli bakterii, mikroskopii, serologii, morfologii ogólnej i technik wykrywania opartych na sekwencjonowaniu. Podobne procedury mają również zastosowanie do innych gatunków, takich jak zwierzęta gospodarskie, gdzie zwierzęta są na ogół większe i wymagają większych obiektów do ich hodowli i utrzymania, co może w pewnym stopniu utrudniać badania nad mikrobiotą.
Drób, a dokładniej kurczaki, są podstawą produkcji zwierzęcej na całym świecie, z populacją stada, która może przekroczyć 40 miliardów ptaków rocznie. Jest to najważniejsze źródło białka zwierzęcego na świecie (http://www.fao.org/poultry-production-products/en/). Co więcej, nie ma kulturowych ani religijnych tabu związanych z hodowlą lub konsumpcją kurczaków. Mikrobiota jelitowa drobiu jest istotnie zaangażowana we wzrost zwierząt, współczynnik wykorzystania paszy, odporność, odporność na patogeny, a także wiele innych procesów żywieniowych, fizjologicznych lub patologicznych4. Hodowla kurcząt wolnych od zarazków jest zatem niezbędna, aby podkreślić dialog między mikrobiotą a jej gospodarzem4. Nawet jeśli jajowód kurzy zamieszkują społeczności mikroorganizmów5, zawartość jaja świeżo zniesionego przez zdrową kurę jest w większości wolna od mikroorganizmów, a skorupka jaja i błony posiadają mechaniczne bariery zapobiegające inwazji mikroorganizmów4. Ponadto pisklęta są łatwo odchowywane pod nieobecność ich krewnych, co w przeciwieństwie do ssaków pozwala na produkcję zwierząt wolnych od zarazków bez hodowli rodzicielskiej w sterylnych warunkach.
Eksperymentalny obiekt "Zakaźność zwierząt hodowlanych, modelowych i dzikich" (PFIE, UE-1277, Centre INRAE Val de Loire, Nouzilly, Francja, https://doi.org/10.15454/1.5572352821559333e12) jest częścią francuskiej Narodowej Sieci Infrastruktury EMERG'IN (https://www.emergin.fr/). PFIE od ponad 40 lat opanował produkcję kurczaków wolnych od zarazków, aby przeprowadzać różne badania eksperymentalne7,8,9,10,11. Zwierzęta te zostały wyprodukowane z jaj wolnych od specyficznych patogenów (SPF) z białej linii niosek leghorn hodowanej w hodowli zamkniętej od 1970 roku. Używany głównie do badań mikrobiologicznych7,8,9, ptaki wolne od zarazków doświadczają odrodzenia zainteresowania takimi kwestiami, jak wpływ mikrobioty jelitowej na zachowanie13, wykorzystanie składników odżywczych14, rozwój immunologiczny15 i aktywność hormonalna. Nawet jeśli niektóre badania zostały opublikowane przy użyciu linii brojlerów wolnych od zarazków16, badania te pozostają niedostatecznie reprezentowane w porównaniu z badaniami, w których zastosowano eksperymentalne linie warstwowe. Ewolucja zagadnień naukowych w kierunku wzajemnych oddziaływań między mikrobiotą a jej gospodarzem w zakresie zdrowia i dobrostanu drobiu skłoniła nas do dostosowania naszego historycznego protokołu w celu wyhodowania wolnych od zarazków brojlerów z linii Ross PM3, najczęściej wykorzystywanej linii brojlerów na świecie.

<table><tbody><tr><td>Sterylne plastikowe pipety 2 ml</td><td>Starsted</td><td>86.1252.001</td><td></td></tr><tr><td>Probówki 50 ml</td><td>Płytki</td> agarowe Falcon <td></td><td></td></tr><tr><td>BHI</td><td>PO1198A</td><td></td><td>diagnostyczne Thermo</td></tr><tr><td>fisher Bulion do infuzji serca</td><td>Thermo fisher</td> diagnostic <td>CM1135</td><td></td></tr><tr><td>Szklane probówki z bulionem</td><td></td><td></td> BHI o pojemności 9 ml domowej <td>roboty i sterylizowane w autoklawie</td></tr><tr><td>Szklane probówki z 9 ml bulionu tioglikolanowego z resazuryną</td><td></td><td></td><td>domowej roboty i sterylizowane w autoklawie</td></tr><tr><td>Inkubator wylęgowy</td><td>Fieme</td><td>MG 576</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator</td><td>Memmert</td><td></td><td>do hodowli bakteriologicznej, 37 &; C</td></tr><tr><td>Napromieniowana pasza</td><td>Bezpieczny</td><td>U8983G10R</td><td>40 kG napromieniowane</td></tr><tr><td>Izolatory</td><td></td><td></td><td>domowej roboty. 1 m3 sztywny izolator pod nadciśnieniem</td></tr> Szafa <tr><td>bezpieczeństwa mikrobiologicznego</td><td>thermon electron corporation</td><td></td><td>model: Hera Bezpieczny</td></tr><tr><td>mikroskop Visiscope seria 300</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pomoc do pipet</td><td>Drummond</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipety plastikowe</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterylnie zamknięte pudełka</td><td>Średnica</td><td>tuperware</td><td></td></tr><tr><td>Sterylizowana szklana rurka</td><td></td><td></td> <td>"sovirel"</td></tr> <tr><td>Bulion tioglikolanowy z rezazuryną</td><td>Merck</td><td>90404-500G</td><td></td></tr><tr><td>Kąpiel wodna</td><td>Fisher scientific</td><td></td><td>Model: Polystat 36, używany do inkubacji 10 min w temperaturze 100 &; C szklane probówki z 9 ml bulionu tioglikolanowego z rezazuryną w celu regeneracji pożywki</td></tr></tbody></table>

produkcja szybko rosnących brojlerów wolnych od zarazków z komercyjnej linii do badań mikrobioty

Production of Germ-Free Fast-Growing Broilers from a Commercial Line for Microbiota Studies

Badania nad wkładem mikrobioty jelitowej w fizjologię i immunokompetencję gospodarza są ułatwione dzięki dostępności wolnych od zarazków modeli zwierzęcych, które są uważane za złoty standard. Ptaki gniazdujące są idealnymi modelami do produkcji zwierząt wolnych od zarazków, ponieważ nie ma potrzeby wychowywania ich krewnych w sterylnych warunkach. Kurczęta wolne od zarazków są głównie uzyskiwane z linii eksperymentalnych wolnych od specyficznych patogenów (SPF), które są słabo reprezentatywne dla komercyjnych linii kurczaków. Zaproponowana tutaj metoda pozwoliła na produkcję kurczaków wolnych od zarazków z szybko rosnącej linii brojlerów Ross PM3, powszechnie stosowanej w przemyśle drobiarskim. Jaja były szybko zbierane po zniesieniu na fermie hodowlanej brojlerów. Zostały one poddane rygorystycznemu procesowi dekontaminacji od momentu pobrania do wprowadzenia do sterylnego jaja izolator wylęgowy. Pisklęta zostały wylęgnięte i trzymane w tych sterylnych izolatorach przez okres niezbędny do kontrolowania ich bezpłodności. Pierwotnie opracowany dla eksperymentalnej linii SPF white leghorn, obecny protokół został dostosowany nie tylko do linii brojlerów Ross PM3, ale także do przepiórek. Jest to zatem solidna i łatwa do dostosowania procedura do innych gatunków drobiu i ptaków gniazdujących o znaczeniu gospodarczym, biologicznym lub ekologicznym.

Przeprowadzono sześć serii pozyskiwania kurcząt wolnych od drobnoustrojów z jaj rasy Ross PM3 pochodzących z dwóch różnych ferm we Francji (Tabela 1). Zebrano łącznie 853 jaja, z których po dwóch etapach dekontaminacji i 19 dniach inkubacji 86,40% pozostało żywotnych. 490 z tych żywotnych jaj poddano trzeciemu etapowi dekontaminacji i wprowadzono do różnych izolatorów wylęgowych, co dało średni wskaźnik wylęgowości na poziomie 79,80%. Stanowi to wskaźnik wylęgowości rzędu 68,94% w stosunku do początkowej liczby zebranych jaj.
Jednak wyniki wylęgu znacząco różnią się w zależności od przeprowadzonej serii: od 41,67% do 88,16% żywych piskląt w stosunku do liczby zebranych jaj. Wariacje te zaobserwowano również pomiędzy poszczególnymi wylęgami w ramach tego samego eksperymentu. Ponieważ nie wszystkie izolatory były wykorzystywane we wszystkich cyklach, trudno jest wykluczyć efekt zależny od izolatora. Jednak efekt serii ten był bezpośrednio skorelowany z wiekiem kur niosek (Rysunek 1), przy czym jaja pochodzące od starszych kur wykazywały mniejszą żywotność.
Sześć serii przeprowadzono z wykorzystaniem czterech różnych izolatorów wylęgarni. Po kontroli bakteriologicznej potwierdzono, że zwierzęta z 14 z 16 izolatorów były wolne od drobnoustrojów. Odpowiada to wskaźnikowi sukcesu na poziomie 87,5%. Dwa pozostałe izolatory zostały zanieczyszczone pojedynczą, środowiskową i niepatogenną bakterią.
Wszystkie zwierzęta wykorzystane w eksperymentach naukowych pozostały wolne od drobnoustrojów aż do zakończenia badań, przez co najmniej trzy tygodnie po wykluciu.
<img alt="Wykres porównawczy żywotności jaj; D19 vs. wskaźniki wyklucia w zależności od tygodnia inkubacji (W6-W26)." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61148/61148fig1v2.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1: Wpływ wieku kury na wskaźnik wykluciaNiniejsza rycina przedstawia wskaźniki wyklucia zaobserwowane w zależności od wieku stada kur niosek, wyrażonego w tygodniach znoszenia jaj. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61148/61148fig1v2large.jpg" target="_blank">Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
<table border="1" fo:font-size="5px" fo:keep-together.within-page="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Zebrane jaja</td>
			<td>żywe jaja D19</td>
			<td>D19 jaja żywe/pobrane jaja</td>
			<td>Jaja przeniesione do izolatora 1</td>
			<td>Przeniesienie jaj do izolatora 2</td>
			<td>Jaja przeniesione do izolatora 3</td>
			<td>Jaja przeniesione do izolatora 4</td>
			<td>całkowita liczba przeniesionych jaj</td>
			<td>żywe pisklęta wyklute w izolatorze 1</td>
			<td>żywe pisklęta wyklute w izolatorze 2</td>
			<td>żywe pisklęta wyklute w izolatorze 3</td>
			<td>żywe pisklęta wyklute w izolatorze 4</td>
			<td>całkowita liczba żywych wyklutych piskląt</td>
			<td>żywe jaja po wykluciu/przeniesione izolator1</td>
			<td>żywe jaja po wykluciu/przeniesione izolator2</td>
			<td>żywe jaja po wylęgu/przeniesione izolator3</td>
			<td>żywe jaja po wylęgu/przeniesione izolator4</td>
			<td c="">globalna liczba żywotnych jaj po wykluciu/przeniesieniu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>seria 1</td>
			<td>101</td>
			<td>93</td>
			<td>92.08%</td>
			<td>23</td>
			<td>24</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>47</td>
			<td>22</td>
			<td>23</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>45</td>
			<td>95.65%</td>
			<td>95.83%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>95.74%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>seria 2</td>
			<td>130</td>
			<td>117</td>
			<td>90.00%</td>
			<td>25</td>
			<td>25</td>
			<td>25</td>
			<td></td>
			<td>75</td>
			<td>20</td>
			<td>24</td>
			<td>18</td>
			<td>-</td>
			<td>62</td>
			<td>80.00%</td>
			<td>96.00%</td>
			<td>72.00%</td>
			<td></td>
			<td>82.67%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pomiar 3</td>
			<td>132</td>
			<td>97</td>
			<td>73.48%</td>
			<td>26</td>
			<td>-</td>
			<td>26</td>
			<td>45</td>
			<td>97</td>
			<td>14</td>
			<td>-</td>
			<td>13</td>
			<td>28*</td>
			<td>27</td>
			<td>53.85%</td>
			<td></td>
			<td>50.00%</td>
			<td>62.22%</td>
			<td>56.70%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pomiar 4</td>
			<td>130</td>
			<td>116</td>
			<td>89.23%</td>
			<td>36</td>
			<td>35</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>71</td>
			<td>33</td>
			<td>34</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>67</td>
			<td>91.67%</td>
			<td>97.14%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>94.37%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Próba 5</td>
			<td>180</td>
			<td>148</td>
			<td>82.22%</td>
			<td>30</td>
			<td>30</td>
			<td>30</td>
			<td>30</td>
			<td>120</td>
			<td>26*</td>
			<td>25</td>
			<td>17</td>
			<td>24</td>
			<td>66</td>
			<td>86.67%</td>
			<td>83.33%</td>
			<td>56.67%</td>
			<td>80.00%</td>
			<td>76.67%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cykl 6</td>
			<td>180</td>
			<td>166</td>
			<td>92.22%</td>
			<td>-</td>
			<td>40</td>
			<td>40</td>
			<td>-</td>
			<td>80</td>
			<td>-</td>
			<td>35</td>
			<td>35</td>
			<td>-</td>
			<td>70</td>
			<td>86.67%</td>
			<td>87.50%</td>
			<td>87.50%</td>
			<td></td>
			<td>87.50%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suma</td>
			<td>853</td>
			<td>737</td>
			<td>86.40%</td>
			<td>140</td>
			<td>154</td>
			<td>121</td>
			<td>75</td>
			<td>490</td>
			<td>89</td>
			<td>141</td>
			<td>83</td>
			<td>24</td>
			<td>337</td>
			<td>82.14%</td>
			<td>91.56%</td>
			<td>68.60%</td>
			<td>69.33%</td>
			<td>79.80%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 1: Wyniki techniczne różnych eksperymentów z wylęganiem. Niniejsza tabela przedstawia wyniki 6 serii wylęgania w warunkach wolnych od drobnoustrojów: liczbę zebranych jaj, żywotność zarodka w 19. dniu oraz liczbę żywych wyklutych piskląt w poszczególnych izolatorach.

Tutaj opisujemy metodę generowania piskląt wolnych od zarazków z jaj komercyjnej linii brojlerów, Ross PM3. Metoda ta może być dostosowana do hodowli zwierząt wolnych od zarazków z innych gatunków drobiu.

Produkcja szybko rosnących brojlerów wolnych od zarazków z komercyjnej linii do badań mikrobioty

Studies of the gut microbiota contribution to the host physiology and immunocompetence are facilitated by the availability of germ-free animal models, ...

Do tej pory produkcja ptaków wolnych od zarazków ograniczała się do hodowli zwierząt w celach badawczych. Pokazujemy tutaj, że można to zrobić ze zwierzętami komercyjnymi. Technika ta umożliwia prowadzenie badań wpływu mikrobioty z wykorzystaniem tła genetycznego ptaków gospodarskich.Przystępując do tego protokołu, ważne jest, aby kontrolować hodowlę wybranych gatunków w standardowych warunkach i posiadać solidną wiedzę na temat pracy w izolatorach. Zacznij od ustawienia 50-mililitrowych probówek, plastikowych pipet, napromieniowanego napromieniowania, autoklawowanej wody i sterylnie zamkniętych plastikowych pojemników w sztywnym izolatorze pod nadciśnieniem. Napełnij transferową pułapkę bakteriobójczą 2% czwartorzędowym roztworem amoniowym i trzykrotnie wysterylizuj izolator parami formaldehydu, przesuwając materiały wewnątrz izolatora między każdą sterylizacją, aby zapewnić dezynfekcję wszystkich powierzchni kontaktowych.Co najmniej dwa dni przed wprowadzeniem jaj należy ustawić temperaturę izolatora na 37 stopni Celsjusza. W dniu wprowadzenia ustaw areometr na 65 do 70% wilgotności względnej. Po wybraniu czystych i nieskazitelnych jaj należy natychmiast odkazić powierzchnię jaja, zanurzając je w 1,5% roztworze kwasu nadoctowego na pięć minut, a następnie przetransportować jaja do zakładu doświadczalnego za pomocą pudełka odkażonego oparami formaldehydu.Przechowuj jaja przez 24 godziny w temperaturze 14 stopni Celsjusza, a następnie powtórz sterylizację 1,5% kwasem nadoctowym i umieść jaja w inkubatorze wylęgowym na 19 dni. W 19 dniu sprawdź płodność, żywotność i rozwój zarodka za pomocą świecy do jaj w sterylnych warunkach. Wybierz żywe, zarodkowe jaja i odkaż je, spryskując je 1,5% roztworem kwasu nadoctowego przez 30 sekund lub do momentu, gdy cała powierzchnia każdego jaja zostanie pokryta.Przenieś jaja do sterylnych izolatorów wylęgowych i przepłucz je sterylną wodą demineralizowaną przed umieszczeniem ich w przestrzeni wylęgowej. Po wykluciu zwierzęta są trzymane w sterylnych izolatorach, karmione ad libitum dietą komercyjną sterylizowaną promieniowaniem gamma i podlewane autoklawizowaną wodą z kranu. Jednego dnia po wykluciu pobierz próbkę kału bezpośrednio z odbytnicy różnych piskląt i zbierz je w wysterylizowanej szklanej probówce.Dodaj jeden mililitr stolca do dziewięciu mililitrów bulionu tioglikolanowego z rezazuryną, a pozostałą próbkę dodaj do dziewięciu mililitrów naparu z serca mózgu lub bulionu BHI. Inkubować probówki w temperaturze 37 stopni Celsjusza bez wstrząsania przez 18 do 48 godzin. Po 18 godzinach należy wizualnie zbadać probówki pod kątem wszelkich modyfikacji pożywki wzrostowej.Po 48 godzinach weź kroplę z pożywki bulionowej kałowej BHI, umieść ją na szkiełku podstawowym i obserwuj pod mikroskopem. Jeśli podejrzewa się obecność bakterii, należy pobrać próbkę z kultury BHI i wysiać ją na płytkę agarową BHI, a następnie inkubować płytkę w temperaturze 37 stopni przez 18 do 48 godzin. Jeśli pojawią się kolonie, zidentyfikuj bakterie za pomocą techniki wysokoprzepustowej, takiej jak spektrometria mas MALDI-TOF.Przeprowadzono sześć serii hodowli piskląt wolnych od zarazków z jajami ROSS PM3 pochodzącymi z dwóch różnych francuskich ferm. Zebrano łącznie 853 jaja, a po dwóch etapach dekontaminacji i 19 dniach inkubacji 86,40% było zdolnych do życia. Spośród jaj zdolnych do życia 490 przeszło trzeci etap dekontaminacji i zostało wprowadzonych do różnych izolatorów wylęgowych, uzyskując średni wskaźnik wylęgu 79,80%Stanowi to wskaźnik wylęgu 68,94% w porównaniu z początkową liczbą zebranych jaj.Wyniki wylęgu różnią się znacznie od 41,67% do 88,16% zdolnych do życia piskląt w porównaniu z liczbą zebranych jaj. Efekt ten był bezpośrednio skorelowany z wiekiem kur niosek, w którym jaja pochodzące od starszych kur były mniej żywotne. Sześć serii przeprowadzono przy użyciu czterech różnych izolatorów wylęgowych.Po kontroli bakteriologicznej potwierdzono, że zwierzęta z 14 z 16 izolatorów są wolne od zarazków, co odpowiada wskaźnikowi sukcesu wynoszącemu 86,5%Kluczowym punktem tej procedury jest utrzymanie sterylności izolatora. Wymaga to przestrzegania procedur dezynfekcji, a przede wszystkim kontrolowania wprowadzania elementów przez płynną śluzę powietrzną. Procedura ta umożliwia zwierzętom zmierzenie wpływu mikrobioty na fizjologię i zdrowie ptaków.Można go dostosować i wykorzystać do badania mikrobioty innych ptaków hodowlanych lub dzikich zwierząt, jeśli jaja są dostępne.

production-germ-free-fast-growing-broilers-from-commercial-line-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Źródło: Taylor, M. N., et.al. Wykorzystanie danych dotyczących pojedynczego robaka do ilościowego określenia niejednorodności interakcji Caenorhabditis elegans z bakteriami. J. Vis. Exp. (2022)Ten film pokazuje narażenie wolnych od zarazków, dopasowanych do wieku robaków Caenorhabditis elegans na szczep bakteryjny w celu kolonizacji jelit. Wyjaśnia selektywne usuwanie nieprzylegających i zewnętrznych bakterii, pozostawiając tylko żywe bakterie przylegające do nabłonka jelitowego w celu...

Ocena kolonizacji bakteryjnej jelit u C. elegans wolnych od zarazków

Opracowano metodę uprawy kapusty pekińskiej wolnej od zarazków, która umożliwia badaczom ocenę, jak pojedyncze gatunki mikroorganizmów lub wielogatunkowe społeczności mikroorganizmów oddziałują na powierzchnię liści kapusty. Przedstawiono również sterylny ekstrakt roślinny, który można wykorzystać do pomiaru zmian w składzie zbiorowiska podczas fermentacji warzyw.

System gnotobiotyczny do badania składania mikrobiomu w filosferze i fermentacji warzywnej

Ten protokół jest używany do tworzenia i utrzymywania gnotobiotycznych karaluchów amerykańskich (Periplaneta americana) poprzez powierzchniową sterylizację jaj (oothecae) przed wykluciem. Te gnomiotyczne owady zawierają pionowo przenoszone endosymbionty Blattabacterium, ale mają akseniczne jelita.

Założenie i utrzymanie gnotobiotycznych karaluchów amerykańskich (Periplaneta americana)

Aby uzyskać aksenicznego owada, jego powierzchnia jaja jest sterylizowana, a wykluta larwa jest następnie hodowana za pomocą aksonicznych liści. Metoda ta zapewnia skuteczny sposób przygotowania owadów aksenowych bez podawania antybiotyków lub opracowywania sztucznej diety, którą można również zastosować do innych owadów żywiących się liśćmi.

Przygotowanie i hodowla owadów aksonowych z siewkami z hodowli tkankowej do badań interakcji mikrobioty gospodarz-jelito chrząszcza liściowego

Opisana jest prosta procedura hodowli aksenicznej Delia antiqua z na wpół fermentowaną, sterylną dietą. Tylko jeden szczep Wolbachia został wykryty w każdym stadium rozwojowym aksenu D. antiqua za pomocą PCR.

Hodowla Axenic Delia antiqua z częściowo fermentowaną, sterylną dietą

Ten protokół przedstawia podstawowe kroki do uzyskania wolnych od zarazków (GF) zarodków ryb i utrzymania ich od larw do stadium młodocianego, w tym pobieranie próbek i wykrywanie ich sterylnego statusu. Zastosowanie modeli GF w przypadku infekcji jest ważne dla zrozumienia roli drobnoustrojów w zdrowiu gospodarza.

Generowanie, utrzymanie i identyfikacja wolnych od zarazków modeli danio pręgowanego od larw do stadiów młodocianych

Protokół przedstawia dwie metodologie poprawy izolacji beztlenowych bakterii jelitowych. Pierwszy z nich koncentruje się na izolacji różnych bakterii przy użyciu różnych pożywek hodowlanych. Drugi koncentruje się na etapach uprawy określonej grupy drobnoustrojów, ewentualnie asymilując mio-inozytol, aby w pełni zrozumieć jego znaczenie ekologiczne.

Strategie mające na celu poprawę hodowli bakterii beztlenowych z przewodu pokarmowego kurczaka

Ten protokół opisuje czterogatunkowy model wielogatunkowego biofilmu polimikrobiologicznego dla płuc związanego z mukowiscydozą (CF), który może być wykorzystany do zbadania wpływu interakcji międzygatunkowych bakterii.

Hodowla biofilmu wielodrobnoustrojowego istotnego dla mukowiscydozy w celu zbadania fenotypów społeczności

Tutaj opisujemy strukturę i procedury operacyjne, w tym środki powstrzymywania mikroorganizmów w obiekcie dla "dzikich myszy", używając próbki krwi do immunofenotypowania jako przykładu.

Procedury operacyjne i hermetyzacji biologicznej w obiekcie dla myszy laboratoryjnych z naturalnym mikrobiomem: procedura immunofenotypowania

Ten protokół opisuje najlepsze praktyki transferu myszy wolnych od zarazków do eksperymentalnych izolatorów jednoklatkowych (izoklatek) przy zachowaniu sterylnych warunków. Omówiono metody przeszczepu kału myszom wolnym od zarazków i pobierania żywych bakterii od tych "humanizowanych" myszy jelitowych w celu dalszych zastosowań.

Przygotowanie i utrzymanie eksperymentu z izododatnią klatką z wykluczeniem biologicznym do przeszczepu kału u myszy wolnych od zarazków

Metoda ta przedstawia zarodek kurczaka jako prosty i opłacalny model in vivo do przywrócenia patogenu bakteryjnego L. monocytogenes ze stanu żywotnego, ale nienadającego się do hodowli (VBNC) i z potencjalnymi dalszymi zastosowaniami w zrozumieniu mechanizmów spoczynku bakteryjnego.

Zarodek kurczaka jako model in vivo do ożywiania żywotnych, ale nienadających się do hodowli patogenów

Poznaj metodę produkcji brojlerów wolnych od zarazków z jaj komercyjnej linii Ross PM3. Technika umożliwia badania mikrobioty z wykorzystaniem genetycznego tła ptaków hodowlanych.

Produkcja szybko rosnących brojlerów wolnych od zarazków z komercyjnej linii do badań mikrobioty

Przeglądaj więcej filmów