Bakteryjny test żywienia doustnego z komarami leczonymi antybiotykami

Jelito środkowe komara jest siedliskiem złożonej społeczności drobnoustrojów, które wpływają na metabolizm gospodarza, reprodukcję, sprawność i kompetencje weterynarza. Z każdym mikrobem jelitowym występuje inny efekt. Ten film przedstawia procedurę badania odpowiedniej roli każdego szczepu bakterii lub fizjologii gospodarza.

Aby uzyskać kulturę kolonii bakterii jelitowych, należy wyciąć jelito środkowe komara w sterylnych warunkach. Zmielić wypreparowane jelito środkowe, serotologować i rozprowadzić na płytce agarowej. Wybierz pojedyncze kolonie z płytki i zidentyfikuj gatunki bakterii na podstawie ich sekwencji 16 genów SRNA.

Karm komary ChZT Emboss zawierającym antybiotyki przez kolejne trzy dni, aby usunąć mikrobiotę jelitową. Skuteczność antybiotykoterapii można potwierdzić poprzez wypreparowanie jelita środkowego aseptycznego komara w celu przeprowadzenia testu jednostkowego tworzącego kolonie przed kolejnymi ekstremistami. Następnie ponownie wprowadź określone gatunki bakterii, które wcześniej wyizolowano z jelit komarów za pomocą doustnego testu karmienia.

Wpływ bakterii na fizjologię gospodarza można ocenić, porównując komary nieleczone, komary leczone antybiotykami i komary, które ponownie wprowadziły specyficzne ograniczenia. Rozwarstwienie jelita środkowego i izolacja bakterii hodowlanych. Na początek zbierz komary w klatce za pomocą aspiratora i umieść komary w pudełku zbiorczym.

Znieczul komary, poddając je temperaturze 4 stopni przez trzy do pięciu minut. Utrzymuj komary w znieczuleniu, umieszczając je na lodowatej szalce Petriego. Zdezynfekuj ławkę, mikroskop preparacyjny i kleszcze, rozpylając 75% etanolu, aby uniknąć zanieczyszczenia bakteriami z otoczenia.

Wysterylizuj powierzchnię komara, przyklejając go taśmą i potrząsając nim w 75% etanolu przez trzy minuty i dwukrotnie spłucz buforem PBS. Przetnij komara osobno na sterylnym szkiełku zawierającym kroplę PBS. Ostrożnie usuń nogi, skrzydła i głowę komara za pomocą kleszczy.

Zaciśnij klatkę piersiową komara, a ostatnią częścią brzucha były kleszcze i rozsuń, aby odizolować przewód pokarmowy. Użyj kleszczy, aby usunąć plon i rurkę malpighiana z przewodu pokarmowego. Uprawa jest umieszczona w przedniej części jelita środkowego i wybrzusza się po spożyciu wody z cukrem.

Rurki Malpighiego to grupa smukłych rurek wydalniczych na styku jelita środkowego i tylnego. Umieść wypreparowany makijaż w probówce EP z 200 mikrolitrami sterylnego buforu PBS i zmiel go sterylnym pastorem do mielenia w czystej ławce. Zboże, aby załadować homogenat do trzech złudzeń tempa po 50 mikrolitrach każdego złudzenia do płytki agarowej LB i płytki rozpaczliwej.

Inkubuj płytkę pod kątem 37 stopni przez jeden do dwóch dni, aż pojedyncze kolonie będą możliwe. Zbierz pojedyncze kolonie do stożkowej kolby o pojemności 150 mililitrów zawierającej 50 mililitrów pożywki dla biustonoszy. Wstrząśnij bakteriami w temperaturze 37 stopni przez noc.

Identyfikacja gatunku. Ekstrahuj DNA TOTO za pomocą zestawu do budowy genomowego DNA bakteryjnego i amplifikuj 16 SRDNA metodą PCR. Odzyskiwanie i oczyszczanie fragmentów DNA z produktów PCR za pomocą elektroforezy żelowej Ambrose i zestawu do odzyskiwania napędu.

Przeprowadzono sekwencjonowanie DNA na oczyszczonych fragmentach DNA, aby uzyskać uzyskane sekwencje łańcucha bakteryjnego. Uruchom wyszukiwanie strumieniowe, aby zapytać o sekwencję genu 16 SRNA w celu zidentyfikowania bakterii przeciwko bakteriom i archeonom oraz bazie danych. Identyfikacja na poziomie gatunku została zdefiniowana jako większe lub równe 99%16 podobieństwo sekwencji SRDNA do najbliższego wpisu w banku zespołu.

Izolat przypisano do odpowiedniego rodzaju, gdy jest to sekwencja 16 SRDNA, podobieństwo było mniejsze niż 99% i większe lub równe 95% antybiotykoterapii i ponownego wprowadzenia bakterii. Zważ wymaganą ilość penicyliny sacharozowej i streptomycyny, aby przygotować nam 10% roztwór sacharozy, w tym próbując 20 jednostek penicyliny i 20 mikrogramów streptomycyny na mililitr. Naciekaj waciki w roztworze sacharozy zawierającym antybiotyki i umieść je na papierowym kubku zawierającym komara.

Przykryj wacik 10-centymetrową szalką Petriego, aby zapobiec parowaniu nabrzeża. Wymieniaj waciki dwa razy dziennie i karm komara przez kolejne trzy dni. Komary dzielą się na dwie grupy.

Pierwszą grupę umieszczono w kubku na komary bez żadnego leczenia, dowolny wacik doktor z 10%, więc krzyż podawano codziennie. Druga grupa była leczona antybiotykami i podawana przez trzy dni. W każdej grupie komary Siergieja zostały wypreparowane.

Mika została wyekstrahowana w celu całkowitej ekstrakcji DNA, a QPCR przeprowadzono przy użyciu uniwersalnych starterów bakteryjnych, rysunek pierwszy pokazuje ekspresję 16 SRNA w grupie kontrolnej i grupie leczonej antybiotykami. Wyniki pokazują, że koszt lub realizacja penicyliny i streptomycyny zakończyła się sukcesem. przygotować roztwór bakteryjny, odmierzyć roztwór bakteryjny w wirusie za pomocą spektrofotometru, dodać jedną zawiesinę bakterii OT do probówki EP.

Odwirować zawiesinę w temperaturze 5 000 RCA przez pięć minut w temperaturze czterech stopni Wyrzucić supernatant, umyć paletę bakterii sterylnym buforem PBS. Ponownie zawieś paletę bakteryjną za pomocą sterylnego buforu PBS o pojemności 200 mikrolitrów Dodaj 600 mikrolitrów, 10% roztwór sacharozy, 200 mikrolitrów ATP i 200 mikrolitrów zawiesinę bakteryjną do nowej probówki AP i dobrze wymieszaj. Alternatywnie, bakterie mogą być ponownie zawieszone w cieple, aby aktywować krew.

Przygotowanie ogrzewania aktywowanej krwi. Skrzepnij świeżą krew za pomocą probówki przeciwzakrzepowej, weź od dwóch do trzech mililitrów świeżej krwi. Wirować w 1000 przez 10 minut w czterech stopniach, aby oddzielić osocze i krwinki.

Zbierz plazmę do nowej probówki EP i tutaj aktywuj aktywowaną pod kątem 56 stopni przez jedną godzinę. Umyj Blast house przez swoje czasy sterylnym buforem PBS. Przepłukać zawieszoną komorę śrutowniczą za pomocą ogrzewania plazmy aktywowanej.

Zmontuj membranę i system podawania. Wyciągnij chorobę filmową do maksimum. Przymocuj za pomocą plastikowego pierścienia i parafilmu w miejscu pracy, aby uniknąć wycieku Powolne dodawanie przygotowanego roztworu bakteryjnego do podajnika, do maksymalnego portfela.

Aby uniknąć upadku pęcherzyka z jednego kierunku i uszczelnij podajnik. Podłącz zasilanie. Poczekaj, aż temperatura osiągnie 37 stopni Zainstalowano podajnik z roztworem bakterii na podajniku.

Przed karmieniem komarów bakteryjnych należy zatrzymać je na 24 godziny w celu metabolizowania antybiotyków. W przypadku jednostki karmowej na papierowym kubku z komarami, pozostaw na karmienie przez 90 minut. W pełni zachęcone komary można było wybrać do dalszych badań.

Reprezentatywne wyniki. Rysunek drugi pokazuje nam średnią liczbę wyróżnień na komara. Po poletku poczęstowanym antybiotykiem leczonym komarami widzimy meningosepticum.

Rycina trzecia pokazuje ekspresję genów związanych z rozwojem wariantu 24 godziny po posiłku z krwi zawierającym C meningosepticum. Wyniki pokazują, że nie ma znaczących zmian w produkcji jaj w grupie kontrolnej i grupie więdnącej. Dziękujemy za zainteresowanie bakteriami lub esej o karmieniu komarów leczonych antybiotykami.