Name: Podsiatkówkowy przeszczep ludzkiej embrionalnej tkanki siatkówki pochodzącej z komórek macierzystych w modelu dużego zwierzęcia kota (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: Poznaj technikę podsiatkówkowego przeszczepu organoidów siatkówki pochodzących z ludzkich komórek macierzystych w modelu kota. Ta metoda umożliwia bezpośrednie dostarczenie tkanki do siatkówki w leczeniu zwyrodnień.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca została sfinansowana przez NEI Fast-track SBIR grant R44-EY027654-01A1 i SBIR grant 3 R44 EY 027654 - 02 S1 (I.O.N., Lineage Cell Therapeutics; Dr. Petersen-Jones jest współkierownikiem projektu). Autorzy chcieliby podziękować Pani Janice Querubin (MSU RATTS) za jej pomoc w znieczuleniu i ogólnej opiece nad zwierzętami włączonymi do tego badania, a także pomoc w ustawieniu chirurgicznym i przygotowaniu/sterylizacji narzędzi. Autorzy pragną podziękować dr Paige Winkler za pomoc w otrzymaniu organoidów i umieszczeniu ich w pożywce w dniu poprzedzającym implantację oraz za pomoc w dniu implantacji. Autorzy są również wdzięczni panu Randy'emu Garcharowi (LCTX) za staranną wysyłkę organoidów siatkówki, montaż transportera i pobieranie zapisów temperatury i przeciążenia G po każdej wysyłce. Praca ta została wykonana, gdy autor Igor Nasonkin był zatrudniony przez Biotime (obecnie Lineage).

Dr Ratnesh K. Singh, dr Francois Binette i dr Igor O. Nasonkin są pracownikami Lineage Cell Therapeutics, Inc. Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Implantacja tkanki siatkówki pochodzącej z hPSC (organoidów siatkówki) do przestrzeni podsiatkówkowej jest obiecującym podejściem eksperymentalnym do przywracania wzroku w późnym stadium choroby zwyrodnieniowej siatkówki spowodowanej śmiercią komórek PR (głęboka lub terminalna ślepota). Prezentowane podejście opiera się na wcześniej opracowanej i z powodzeniem przetestowanej terapii eksperymentalnej opartej na podsiatkówkowym przeszczepie fragmentu tkanki siatkówki ludzkiego płodu 23,24,25.</...

Miliony ludzi na całym świecie cierpią na zwyrodnienie siatkówki (RD) z wynikającym z tego upośledzeniem wzroku lub ślepotą związaną z utratą fotoreceptorów wyczuwających światło (PR). Zwyrodnienie plamki żółtej związane z wiekiem (AMD) jest główną przyczyną ślepoty wynikającej z połączenia genetycznych czynników ryzyka i czynników środowiskowych/stylu życia. Ponadto stwierdzono, że ponad 200 genów i loci powoduje dziedziczne RD (IRD)1. Barwnikowe zwyrodnienie siatkówki (RP), najczęstsze IRD, jest genetycznie heterogenne z ponad 3,000 mutacjami genetycznymi w około 70 genach, które są zgłaszane2,3,4. Wrodzona ślepota Lebera (LCA), która powoduje ślepotę w dzieciństwie, jest również genetycznie heterogeniczna5,6. Terapia wzmacniająca geny została opracowana i jest w fazie badań klinicznych w leczeniu niewielkiej liczby IRD3,7. Należy jednak opracować oddzielną terapię do leczenia każdej odrębnej postaci genetycznej IRD, a tym samym leczyć tylko niewielką podgrupę pacjentów. Co więcej, augmentacja genów opiera się na obecności populacji możliwych do uratowania fotoreceptorów i dlatego nie ma zastosowania w przypadku zaawansowanego zwyrodnienia.
Istnieje zatem pilna i jeszcze niezaspokojona kliniczna potrzeba opracowania terapii adresujących i leczących zaawansowane RD oraz głęboką lub terminalną ślepotę. W ciągu ostatnich 2 dekad implanty neuroprotetyczne zostały opracowane i przetestowane na dużych modelach zwierzęcych, takich jak koty, przed użyciem u ludzi8,9,10,11,12,13,14. Podobnie, w ciągu ostatnich 20 lat opracowano terapie wymiany siatkówki z wykorzystaniem arkuszy embrionalnej lub nawet dojrzałej siatkówki ssaków przeszczepionych podsiatkówkowo15,16,17,18,19,20,21,22 i nawet przetestowane pomyślnie u pacjentów z RD23,24,25. Oba podejścia wykorzystują ideę wprowadzenia nowych czujników (fotowoltaiczne fotodiody krzemowe w przypadku urządzeń neuroprotetycznych 26,27, oraz zdrowych, wolnych od mutacji fotoreceptorów zorganizowanych w arkusze, w przypadku implantacji arkusza siatkówki) do siatkówki ze zdegenerowanymi PR. Ostatnie badania dotyczyły zastosowania podejść opartych na komórkach macierzystych, takich jak przeszczepianie ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych pochodzących z komórek macierzystych siatkówki pochodzących z pluripotencjalnych komórek macierzystych (hPSC)28,29, hPSC-photoreceptors30 i hPSC-organoidy siatkówkowe31,32,33. Organoidy siatkówki umożliwiają tworzenie tkanki siatkówki w naczyniu i wyprowadzanie arkuszy fotoreceptorów z tysiącami wolnych od mutacji PR, które przypominają warstwę fotoreceptorów w rozwijającej się siatkówce płodu ludzkiego34,35,36,37,38,39,40. Przeszczepianie tkanki siatkówki pochodzącej z hPSC (organoidów) do przestrzeni podsiatkówkowej pacjentów z chorobami RD jest jednym z nowych i obiecujących eksperymentalnych podejść terapii komórkowej, nad którym pracuje wiele zespołów31,32,41,42. W porównaniu z przeszczepem zawiesiny komórkowej (młodych fotoreceptorów lub komórek progenitorowych siatkówki), wykazano, że przeszczepione arkusze fotoreceptorów płodowych skutkują poprawą widzenia w badaniach klinicznych23,24.
Protokół przedstawiony tutaj szczegółowo opisuje procedurę transplantacji w celu dostarczenia podsiatkówkowego całych organoidów siatkówki (zamiast obrzeży organoidów33,41) jako potencjalnie lepszy sposób na wprowadzenie nienaruszonych arkuszy siatkówki z PR, w celu zwiększenia przeżywalności przeszczepu i poprawy zachowania arkusza. Chociaż opracowano procedury wprowadzania płaskiego fragmentu ludzkiej siatkówki, a także plastrów RPE43,44,45, przeszczepy większych przeszczepów 3D nie zostały zbadane. Organoidy siatkówki pochodzące z komórek macierzystych stanowią niewyczerpane źródło arkuszy fotoreceptorów do opracowywania technologii przywracania wzroku, są wolne od ograniczeń etycznych i są uważane za doskonałe źródło ludzkiej tkanki siatkówki w terapiach skoncentrowanych na leczeniu zaawansowanego RD i śmiertelnej ślepoty46. Opracowanie metod chirurgicznych do precyzyjnej implantacji organoidów podsiatkówkowych przy minimalnym uszkodzeniu niszy siatkówki gospodarza (siatkówka nerwowa, nabłonek barwnikowy siatkówki oraz unaczynienie siatkówki i naczyniówki) jest jednym z kluczowych kroków w kierunku rozwoju takiej terapii w kierunku zastosowań klinicznych31,32. Duże modele zwierzęce, takie jak koty, psy, świnie i małpy, okazały się dobrymi modelami do badania metod chirurgicznego podawania, a także do demonstrowania bezpieczeństwa wszczepionych arkuszy tkanki (komórek nabłonka barwnikowego siatkówki (RPE)) i badania zastosowania organoidów41,44,45,47,48,49,50. Duże oko zwierzęcia ma podobny rozmiar kuli do ludzkiej, a także podobną anatomię, w tym obecność obszaru o dużej gęstości fotoreceptorów, w tym czopków (obszar centralny), przypominających ludzką plamkę żółtą6,51,52.
W tym manuskrypcie opisana jest technika implantacji tkanki siatkówki pochodzącej z hPSC (organoidów) do przestrzeni podsiatkówkowej dużych modeli zwierzęcych kotów (zarówno kotów typu dzikiego, jak i CrxRdy/+), która wraz z obiecującymi wynikami skuteczności32,53 buduje podstawę do dalszego rozwoju takiej eksperymentalnej terapii w kierunku zastosowań klinicznych w leczeniu schorzeń RD.

<table><tbody><tr><td>0,22 &mikro; Filtr strzykawkowy m porowy z membraną PES</td><td>Cameo</td><td>NA</td><td>można znaleźć u różnych dostawców</td></tr><tr><td>Wstrzykiwacz podsiatkówkowy 23G z wysuwaną kaniulą 41 G</td><td>DORC</td><td>1270.EXT</td><td></td></tr><tr><td>250 i mikro; L hamilton gazoszczelna strzykawka luer lock</td><td>Hamilton</td><td>NA</td><td>można znaleźć u różnych dostawców</td></tr><tr><td>6-0 Szew jedwabny</td><td>Ethicon</td><td>707G</td><td></td></tr><tr><td>6-0/7-0 szew poliglaktynowy</td><td>Ethicon</td><td>J570G</td><td></td></tr><tr><td>Maleinian acepromazyny 500mg/5mL (Aceproject)</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>NA</td><td>można znaleźć u różnych dostawców</td></tr><tr><td>Buprenorfina 0,3 mg / ml</td><td>Par Farmaceutyczny</td><td>NA</td><td>można znaleźć u różnych dostawców</td></tr><tr><td>cSLO + SD-OCT</td><td>Heidelberg Engineering</td><td>Spectralis HRA+ OCT</td><td></td></tr><tr><td>Cyklosporyna</td><td>Novartis</td><td>NA</td><td>można znaleźć u różnych dostawców</td></tr><tr><td>Deksametazon 2 mg / ml (Az)</td> <td>Veton</td><td>NA</td><td>można znaleźć u różnych dostawców</td></tr><tr><td>Doksycylina 25 mg / 5 ml</td><td>Cipla</td><td>NA</td><td>można znaleźć u różnych dostawców</td></tr><tr><td>Roztwór Fatal Plus (roztwór pentobarbitalu)</td><td>Vortech</td><td>NA</td><td>można znaleźć u różnych dostawców</td></tr><tr><td>Gentamycyna 20 mg / 2 ml</td><td>Hospira</td><td>NA</td><td>można znaleźć u różnych dostawców</td></tr><tr><td>Kapilara szklana (cienkościenna standardowa borokrzemian z pojedynczą lufą (Schott Duran) Rurki szklane</td><td>World Precision Instruments</td><td>TW150-4</td><td></td></tr><tr><td>Aktetan metyloprednizolonu 40 mg / ml</td><td>Pfizer</td><td>NA</td><td>można znaleźć u różnych dostawców</td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>OCT medium (Tissue-Tek OCT Compound)</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Olympic Vac-Pac Rozmiar 23</td><td>Natus</td><td>NA</td><td>można znaleźć u różnych dostawców</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd 16% roztwór</td><td>EMS</td><td>15719</td><td></td></tr><tr><td>Chlorowodorek fenylefryny 10% roztwór okulistyczny</td><td>Akorn</td><td>NA</td><td>można znaleźć u różnych dostawców</td></tr><tr><td>Prednizolon 15 mg / 5 ml</td><td>Akorn</td><td>NA</td><td>można znaleźć u różnych dostawców</td></tr><tr><td>Propofol 500 mg / 50 ml (10 mg / ml) (PropoFlo28)</td> <td>Zoetis</td><td>NA</td><td>można znaleźć u różnych dostawców</td></tr><tr><td>RetCam II kamera wideo do badania dna oka</td><td>Clarity Medical Systems</td><td>NA</td><td>można znaleźć u różnych dostawców</td></tr><tr><td>Triamcynolon 400mg/10 mL (Kenalog-40)</td><td>Bristol -Myers Squibb Company</td><td>NA</td><td>można znaleźć za pośrednictwem różnych dostawców</td></tr><tr><td>Tropikamid 1% roztwór okulistyczny</td><td>Akorn</td><td>NA</td><td>można znaleźć u różnych dostawców</td></tr><tr><td>Witrektomia 23G port</td><td>Alcon</td><td>Systemy</td><td></td>Accurus</tr><tr><td>Maszyna do witrektomii Systemy</td><td>Alcon</td><td>Accurus</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki szklistkowo-siatkówkowe pionowe 80& z uchwytem do wyciskania</td><td>Frimen</td><td>FT170206T</td><td></td></tr></tbody></table>

podsiatkówkowy przeszczep ludzkiej embrionalnej tkanki siatkówki pochodzącej z komórek macierzystych w modelu dużego zwierzęcia kota

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model

Choroby zwyrodnieniowe siatkówki (RD) związane z utratą fotoreceptorów, takie jak zwyrodnienie plamki żółtej związane z wiekiem (AMD), barwnikowe zwyrodnienie siatkówki (RP) i wrodzona ślepota Lebera (LCA) powodują postępującą i wyniszczającą utratę wzroku. Istnieje niezaspokojone zapotrzebowanie na terapie, które mogą przywrócić wzrok po utracie fotoreceptorów. Przeszczepienie ludzkiej tkanki siatkówki pochodzącej z pluripotencjalnych komórek macierzystych (hPSC) (organoidów) do przestrzeni podsiatkówkowej oka z zaawansowanym RD przynosi arkusze tkanki siatkówki z tysiącami zdrowych, wolnych od mutacji fotoreceptorów i ma potencjał do leczenia większości/wszystkich chorób powodujących ślepotę związanych ze zwyrodnieniem fotoreceptorów za pomocą jednego zatwierdzonego protokołu. Przeszczep tkanki siatkówki płodu do przestrzeni podsiatkówkowej modeli zwierzęcych i osób z zaawansowaną RD został pomyślnie opracowany, ale nie może być stosowany jako rutynowa terapia ze względu na obawy etyczne i ograniczoną podaż tkanek. Modele zwierzęce z dziedzicznym zwyrodnieniem siatkówki (IRD) dużego oka są cenne dla opracowywania terapii przywracających wzrok wykorzystujących zaawansowane podejścia chirurgiczne do przeszczepiania komórek/tkanek siatkówki do przestrzeni podsiatkówkowej. Podobieństwa w rozmiarach kuli i rozmieszczeniu fotoreceptorów (np. obecność obszaru centralnego obszaru plamki żółtej) oraz dostępność modeli IRD ściśle rekapitulujących ludzkie IRD ułatwiłyby szybkie przełożenie obiecującej terapii na praktykę kliniczną. Przedstawiono tu chirurgiczną technikę przeszczepiania tkanki siatkówki pochodzącej z hPSC do przestrzeni podsiatkówkowej dużego modelu zwierzęcego, co pozwala na ocenę tego obiecującego podejścia w modelach zwierzęcych.

Niniejsza procedura umożliwia skuteczną i powtarzalną implantację organoidów siatkówki pochodzących z hPSC w przestrzeni podsiatkówkowej dużego modelu zwierzęcego (przedstawiono tutaj na 2 przykładach: kotów typu dzikiego ze zdrowymi fotoreceptorami (PRs) oraz kotów CrxRdy/+ z degenerującymi się PRs i siatkówką). Postępując zgodnie z krokami wskazanymi na Rysunku 1, należy przygotować i załadować organoidy siatkówki pochodzące z hPSC do borokrzemianowej szklanej ...

Prezentowana tutaj jest chirurgiczna technika przeszczepiania tkanki siatkówki pochodzącej z ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych (hPSC) do przestrzeni podsiatkówkowej dużego modelu zwierzęcego.

Podsiatkówkowy przeszczep ludzkiej embrionalnej tkanki siatkówki pochodzącej z komórek macierzystych w modelu dużego zwierzęcia kota

Retinal degenerative (RD) conditions associated with photoreceptor loss such as age-related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa (RP) and ...

Obecny protokół szczegółowo pokazuje podsiatkówkowe dostarczanie całych organoidów siatkówki w dużym modelu zwierzęcym, mając na celu opracowanie metod terapii komórkowej w przypadku zwyrodnienia siatkówki. Główną zaletą tej techniki jest to, że pozwala ona na dostarczanie organoidów bezpośrednio do tkanki docelowej, czyli siatkówki. Technika ta ma na celu leczenie zaawansowanych, oślepiających stanów zwyrodnieniowych siatkówki, takich jak zwyrodnienie plamki żółtej związane z wiekiem, barwnikowe zwyrodnienie siatkówki lub wrodzona ślepota Lebera.Procedurę zademonstruje dr Peterson Jones. W celu implantacji organoidów podsiatkówkowych użyj nożyczek do tenotomii Stevensa, aby wykonać kantotomię boczną o długości od 0,5 do 1 centymetra u czteromiesięcznego kota znieczulonego na czczo na noc i umieść wziernik powieki Barraquer o odpowiedniej wielkości w nacięciu, aby powieki były otwarte z asystentem chirurgicznym regularnie irygującym rogówkę za pomocą BSS przez cały zabieg. Użyj kleszczy do wiązania rogówki Castroviejo o grubości 0,5 cala i małego hemostatu komara, aby delikatnie chwycić spojówkę opuszkową obok rąbka.Umieść dwa jedwabne szwy 6-0 w spojówce bezpośrednio przylegającej do rąbka w pozycjach godziny 4 i 8, aby utrzymać oko w pierwotnym spojrzeniu i cofnąć trzecią powiekę. Zacisnąć końce szwów małymi hemostatami komarów, aby ułatwić ich manipulację, i umieścić kolejny szew w pozycji godziny 12 na rąbku częściowo przez grubość rąbka, uważając, aby nie przebić oka. Luźno zawiąż szew, odcinając koniec na krótko, i umieść szew podtrzymujący w spojówce bezpośrednio przylegającej do rąbka w pozycji godziny 4, aby utrzymać oko i pierwotne spojrzenie.Odbij spojówkę opuszkową między godziną 10 a 2 i użyj nożyczek do tenotomii, aby naciąć spojówkę dwa do trzech milimetrów od rąbka. Podważ spojówkę i oczyść torebkę Tenon, aby odsłonić twardówkę w miejscach portu witrektomii na godzinie drugiej i 10 w odległości od trzech do pięciu milimetrów od rąbka. Użyj suwmiarki, aby zidentyfikować miejsca sklerotomii, unikając głównych naczyń twardówkowych, które mogą być widoczne u kota.Planując trzymilimetrowy obszar w porcie instrumentu na godzinie 10 dla praworęcznego chirurga, należy wstępnie umieścić szwy krzyżowe poliglaktyny 6-0 lub 7-0 bez wiązania w miejscach proponowanych sklerotomii. Po założeniu szwów poproś asystenta, aby chwycił szwy rozwleczone na godzinie 12, aby pomóc utrzymać gałkę ziemską na miejscu, i użyj 0,12-milimetrowych kleszczy Castroviejo, aby przytrzymać tkankę obok miejsca sklerotomii. Używa trokara do wprowadzenia portu witrektomii o rozmiarze 23 przez twardówkę zarówno w pozycji godziny 2, jak i 10 pod kątem w kierunku nerwu wzrokowego, aby uniknąć kontaktu z soczewką, i używa kleszczy do wiązania, aby delikatnie popchnąć port irygacyjny, aby określić, czy końcówki można uwidocznić w ciele szklistym.Poproś asystenta, aby umieścił powiększającą soczewkę witrektomijną irygacyjną Machemer na rogówce, aby umożliwić wizualizację tylnego odcinka oka, oraz frez do sondy witrektomicznej o rozmiarze 23 przez port instrumentu, aby wykonać częściową witrektomię rdzenia. Następnie wprowadzić igłę jednomililitrowej strzykawki zawierającej jeden mililitr roztworu triamcynolonu do portu instrumentu i wstrzyknąć od 250 do 500 mikrolitrów zawiesiny krystalicznej. Po dostarczeniu roztworu przesuń sondę witrektomii przez port instrumentu, aby zbliżyć się do głowy nerwu wzrokowego, tak aby port był skierowany w stronę przeciwną do powierzchni siatkówki.Użyj wysokiej próżni, aby odłączyć powierzchnię ciała szklistego od siatkówki, włóż wstrzykiwacz przez port instrumentu w kierunku powierzchni siatkówki i wyciśnij końcówkę kaniuli. Delikatnie nacisnąć końcówkę powierzchni siatkówki i poprosić asystenta, aby lekko szybko nacisnął tłok strzykawki, aby rozpocząć odwarstwienie siatkówki, zmniejszając ciśnienie wstrzyknięcia, aby umożliwić powolne zwiększanie odwarstwienia siatkówki, aż do osiągnięcia pożądanego rozmiaru. Użyj kaniuli wstrzykiwacza o rozmiarze 41, aby nieznacznie powiększyć odwarstwienie, aż będzie można wprowadzić nożyczki siatkówki i usuń port twardówki na godzinie 10.Następnie użyj prostego noża do cięcia o średnicy 2.850 milimetra skierowanego w stronę nerwu wzrokowego, aby uniknąć dotykania soczewki, aby powiększyć sklerotomię w tym miejscu. Wykonaj retinotomię na pęcherzyku z dala od nerwu wzrokowego, aby uniknąć uszkodzenia włókien nerwowych siatkówki pochodzących z przeszczepionego obszaru i uniknąć przecinania głównych naczyń siatkówki, aby zmniejszyć ryzyko krwotoku. Aby wszczepić organoidy, wprowadź szklaną kapilarnę wypełnioną organoidami przez powiększoną sklerotomię w kierunku miejsca retinotomii i użyj końcówki naczynia włosowatego, aby lekko otworzyć retinotomię, aby umożliwić dostęp do ujścia pęcherzyka podsiatkówkowego.Poproś asystenta, aby ponownie powoli nacisnął tłok wstrzykiwacza, aby wstrzyknąć organoidy do pęcherzyka podsiatkówkowego. BSS powinien przejść do organoidów, narządów i przepłukać retinotomię. Po dostarczeniu wszystkich organoidów pozostaw szklaną kapilarnę na miejscu na kilka sekund, a następnie powoli usuń naczynia włosowate z oka, uważając, aby uniknąć nagłego uwolnienia płynu.Po usunięciu naczynia włosowatego zamknij sklerotomię za pomocą wstępnie założonego szwu w kształcie krzyża. Poproś asystenta, aby usunął port infuzyjny i szybko zawiązał szew sklerotomijny i zamknął peritomię szwami poliglaktynowymi w prosty, ciągły wzór. Zamknij kantotomię boczną za pomocą szwu poliglaktynowego 6-0 i szwów skórnych z figury ósemkowej, aby wykonać boczny kant i użyj prostych przerywanych szwów skórnych, aby zamknąć resztę rany.Następnie należy podać odpowiedni pooperacyjny koktajl sterydowy i antybiotykowy. Obciążenie ludzkimi pluripotencjalnymi organoidami siatkówki pochodzącymi z komórek macierzystych można potwierdzić w szklanej kaniuli urządzenia do wstrzykiwania oraz podczas operacji poprzez bezpośrednią wizualizację. Obecność organoidów w przestrzeni podsiatkówkowej można potwierdzić pooperacyjnie za pomocą badania okulistycznego i obrazowania dna oka.Przed eutanazją można również wykonać konfokalną skaningową oftalmoskopię laserową i obrazowanie optycznej koherentnej tomografii w domenie spektralnej w celu oceny położenia organoidów. Techniki te można wykorzystać do wykazania trwałości organoidów siatkówki w przestrzeni podsiatkówkowej między siatkówką nerwową a nabłonkiem barwnikowym siatkówki oka biorcy. Analizy histologiczne i immunohistochemiczne można wykorzystać do zilustrowania przeżycia wykresów ksenogenicznych w przestrzeni podsiatkówkowej dużego oka u zwierzęcia z obniżoną odpornością.Tylko osoby wykwalifikowane w chirurgii witreoretinalnej, takie jak przeszkoleni okuliści weterynaryjni lub chirurdzy witreoretinalni zaznajomieni z różnicami gatunkowymi w kocim oku w porównaniu z ludzkim okiem, powinni podejmować się tej procedury. Technika przedstawiona w tym filmie powinna mieć zastosowanie do innych dużych modeli zwierzęcych, które są używane do tłumaczenia technik chirurgicznych witreoretinalnych na potrzeby klinik.

subretinal-transplantation-human-embryonic-stem-cell-derived-retinal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Przeszczep komórek stanowi strategię leczenia zwyrodnienia siatkówki charakteryzującego się utratą fotoreceptorów. W tym miejscu opisujemy metodę wzbogacania fotoreceptorów do przeszczepiania i ich przeszczepiania podsiatkówkowego dorosłym myszom.

Podsiatkówkowy przeszczep oczyszczonych komórek prekursorowych fotoreceptorów MACS do siatkówki dorosłej myszy

Tutaj prezentujemy akceptowany przez społeczność protokół w formacie multimedialnym do podsiatkówkowego wstrzykiwania bolusa komórek RPE szczurom i myszom. Podejście to można wykorzystać do określenia potencjałów ratunkowych, profili bezpieczeństwa i zdolności przeżycia przeszczepionych komórek RPE po implantacji w zwierzęcych modelach zwyrodnienia siatkówki.

Wykonywanie iniekcji podsiatkówkowych u gryzoni w celu dostarczenia komórek nabłonka barwnikowego siatkówki w zawiesinie

Wstrzyknięcie podsiatkówkowe jest szeroko stosowane w badaniach przedklinicznych terapii zastępczej komórkami macierzystymi w przypadku zwyrodnienia plamki żółtej związanego z wiekiem. W tym zwizualizowanym artykule opisujemy mniej ryzykowną, powtarzalną i precyzyjnie zmodyfikowaną technikę wstrzykiwania podsiatkówkowego za pomocą podejścia przeztwardówkowego w celu dostarczenia komórek do oczu szczura.

Opracowanie udoskonalonego protokołu przeztwardówkowego przeszczepu podsiatkówkowego ludzkich komórek nabłonka barwnikowego siatkówki do oczu szczurów

Komórki nabłonka barwnikowego siatkówki mogłyby służyć jako terapia zastępcza dla zaawansowanej formy suchego, związanego z wiekiem zwyrodnienia plamki żółtej. Protokół ten opisuje generowanie wielkookiego modelu atrofii geograficznej i podsiatkówkowy przeszczep ludzkich embrionalnych komórek nabłonka barwnikowego siatkówki pochodzących z embrionalnych komórek macierzystych do tego modelu choroby.

Przeszczep podsiatkówkowy ludzkich embrionalnych komórek nabłonka barwnikowego pochodzących z komórek macierzystych siatkówki do wielkookiego modelu atrofii geograficznej

Naczelny (NHP) jest idealnym modelem do badania terapii komórkowej ludzkiej siatkówki ze względu na podobieństwa anatomiczne i genetyczne. W artykule opisano metodę podplamkowego przeszczepu komórek nabłonka barwnikowego siatkówki w oku NHP oraz strategie zapobiegania powikłaniom śródoperacyjnym związanym z manipulacją plamki żółtej.

Przeszczep nabłonka barwnikowego siatkówki w modelu naczelnych innych niż człowiek w chorobach zwyrodnieniowych siatkówki

Ten protokół przedstawia przezźrenicowe, sterowane widzeniem podejście przeztwardówkowe do bezpiecznego i precyzyjnego dostarczania przeszczepów komórkowych podsiatkówkowych, z niskim wskaźnikiem powikłań chirurgicznych, u myszy, biorców ze zwyrodnieniem siatkówki lub bez.

Przezźrenicowe przeszczepienie przeztwardówkowe przeszczepów podsiatkówkowych w mysim modelu zwyrodnienia siatkówki

Opisujemy szczegółowy protokół przygotowania komórek progenitorowych fotoreceptorów pochodzących z kriokonserwacji hESC oraz dostarczania tych komórek do tkanki podsiatkówkowej u myszy rd10.

Podsiatkówkowe dostarczanie progenitorów fotoreceptorów pochodzących z ludzkich embrionalnych komórek macierzystych u myszy rd10

Opracowaliśmy protokół indukcji neuroblastów bezpośrednio z pluripotencjalnych ludzkich embrionalnych komórek macierzystych utrzymywanych w ściśle określonych warunkach z zastosowaniem małych cząsteczek, co umożliwia pozyskanie dużej ilości ludzkich progenitorów neuronalnych oraz typów komórek neuronalnych rozwijającego się OUN w celu regeneracji tkanki nerwowej.

Efektywne wyprowadzanie ludzkich progenitorów neuronalnych i neuronów z pluripotencjalnych ludzkich embrionalnych komórek macierzystych z zastosowaniem indukcji małymi cząsteczkami

Izolacja embrionalnej grzebieni neuralnej z rurki neuralnej umożliwia zastosowanie metod in vitro do badania migracji, samoodnawiania oraz multipotencji grzebieni neuralnej.

Izolacja i hodowla komórek grzebienia neuronalnego z zarodkowej rurki nerwowej myszy

Xenopus laevis dostarcza idealnego systemu modelowego do badania specyfikacji losu komórki i funkcji fizjologicznych poszczególnych komórek siatkówki w pierwotnej hodowli komórkowej. Tutaj przedstawiamy technikę preparowania tkanek siatkówki i generowania pierwotnych kultur komórkowych, które są obrazowane pod kątem aktywności wapnia i analizowane przez hybrydyzację in situ.

Sekcja, hodowla i analiza embrionalnej tkanki siatkówki Xenopus laevis

Poznaj technikę podsiatkówkowego przeszczepu organoidów siatkówki pochodzących z ludzkich komórek macierzystych w modelu kota. Ta metoda umożliwia bezpośrednie dostarczenie tkanki do siatkówki w leczeniu zwyrodnień.

Podsiatkówkowy przeszczep ludzkiej embrionalnej tkanki siatkówki pochodzącej z komórek macierzystych w modelu dużego zwierzęcia kota (Wideo) | JoVE Journal

Podsiatkówkowy przeszczep ludzkiej embrionalnej tkanki siatkówki pochodzącej z komórek macierzystych w modelu dużego zwierzęcia kota

Przeglądaj więcej filmów