Name: Wytwarzanie matryc mikrotkanek serca 3D przy użyciu ludzkich kardiomiocytów pochodzących z iPSC, fibroblastów serca i komórek śródbłonka (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 37 s
Description: Poznaj metodę wytwarzania 3D mikrotkanek serca z ludzkich kardiomiocytów iPSC, fibroblastów i komórek śródbłonka. Technika umożliwia generowanie niemal 1000 bijących sferoidów w płytce 12-dołkowej do modelowania chorób i testowania leków.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dziękujemy dr Amandzie Chase za jej pomocne opinie na temat manuskryptu. Wsparcie finansowe zostało zapewnione przez Program Badań nad Chorobami Związanymi z Tytoniem (TRDRP) Uniwersytetu Kalifornijskiego, T29FT0380 (D.T.) i 27IR-0012 (J.C.W.); Amerykańskie Towarzystwo Kardiologiczne 20POST35210896 (H.K.) i 17MERIT33610009 (J.C.W.); oraz National Institutes of Health (NIH) R01 HL126527, R01 HL123968, R01 HL150693, R01 HL141851 i NIH UH3 TR002588 (J.C.W).

<ol><li>Neofytou, E., O'Brien, C. G., Couture, L. A., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hurdles+to+clinical+translation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Hurdles to clinical translation of human induced pluripotent stem cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 125 (7), 2551-2557 (2015).</li>
<li>Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organogenesis+in+a+dish%3A+Modeling+development+and+disease+using+organoid+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Organogenesis in a dish: Modeling development and disease using organoid technologies.</a> Science. 345 (6194), 1247125(2014).</li>
<li>Liu, C., Oikonomopoulos, A., Sayed, N., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+human+diseases+with+induced+pluripotent+stem+cells%3A+from+2D+to+3D+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Modeling human diseases with induced pluripotent stem cells: from 2D to 3D and beyond.</a> Development. 145 (5), 156166(2018).</li>
<li>Yin, X., Mead, B. E., Safaee, H., Langer, R., Karp, J. M., Levy, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+stem+cell+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Engineering stem cell organoids.</a> Cell Stem Cell. 18 (1), 25-38 (2016).</li>
<li>Giacomelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+cardiac+microtissues+composed+of+cardiomyocytes+and+endothelial+cells+co-differentiated+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional cardiac microtissues composed of cardiomyocytes and endothelial cells co-differentiated from human pluripotent stem cells.</a> Development. 144 (6), 1008-1017 (2017).</li>
<li>Kurokawa, Y. K., George, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering+the+cardiac+microenvironment%3A+Multicellular+microphysiological+systems+for+drug+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering the cardiac microenvironment: Multicellular microphysiological systems for drug screening.</a> Advances in Drug Delivery Reviews. 96, 225-233 (2016).</li>
<li>Cartledge, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+crosstalk+between+cardiac+fibroblasts+and+adult+cardiomyocytes+by+soluble+mediators%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Functional crosstalk between cardiac fibroblasts and adult cardiomyocytes by soluble mediators.</a> Cardiovascular Research. 105 (3), 260-270 (2015).</li>
<li>Ravenscroft, S. M., Pointon, A., Williams, A. W., Cross, M. J., Sidaway, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+non-myocyte+cells+show+enhanced+pharmacological+function+suggestive+of+contractile+maturity+in+stem+cell+derived+cardiomyocyte+microtissues%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+Science%22%5BJournal%5D)">Cardiac non-myocyte cells show enhanced pharmacological function suggestive of contractile maturity in stem cell derived cardiomyocyte microtissues.</a> Toxicology Science. 152 (1), 99-112 (2016).</li>
<li>Ieda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+fibroblasts+regulate+myocardial+proliferation+through+beta1+integrin+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Cardiac fibroblasts regulate myocardial proliferation through beta1 integrin signaling.</a> Developmental Cell. 16 (2), 233-244 (2009).</li>
<li>Brutsaert, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+endothelial-myocardial+signaling%3A+its+role+in+cardiac+growth%2C+contractile+performance%2C+and+rhythmicity%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Cardiac endothelial-myocardial signaling: its role in cardiac growth, contractile performance, and rhythmicity.</a> Physiological Reviews. 83 (1), 59-115 (2003).</li>
<li>Huebsch, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+video-based+analysis+of+contractility+and+calcium+flux+in+human-induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes+cultured+over+different+spatial+scales%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Automated video-based analysis of contractility and calcium flux in human-induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes cultured over different spatial scales.</a> Tissue Engineering Part C Methods. 21 (5), 467-479 (2015).</li>
<li>Burridge, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemically+defined+generation+of+human+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Chemically defined generation of human cardiomyocytes.</a> Nature Methods. 11 (8), 855-860 (2014).</li>
<li>Gu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pravastatin+reverses+obesity-induced+dysfunction+of+induced+pluripotent+stem+cell-derived+endothelial+cells+via+a+nitric+oxide-dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Pravastatin reverses obesity-induced dysfunction of induced pluripotent stem cell-derived endothelial cells via a nitric oxide-dependent mechanism.</a> European Heart Journal. 36 (13), 806-816 (2015).</li>
<li>Williams, I. M., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+endothelial+cells+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Generation of endothelial cells from human pluripotent stem cells.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 39 (7), 1317-1329 (2019).</li>
<li>Zhang, H., Shen, M., Wu, J. C. Generation of quiescent cardiac fibroblasts derived from human induced pluripotent stem cells. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhang%2C+H+%22Methods+in+Molecular+Biology%22">Methods in Molecular Biology</a>. , Springer. New York. 1-7 (2020).</li>
<li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+quiescent+cardiac+fibroblasts+from+human+induced+pluripotent+stem+cells+for+in+vitro+modeling+of+cardiac+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Generation of quiescent cardiac fibroblasts from human induced pluripotent stem cells for in vitro modeling of cardiac fibrosis.</a> Circulation Research. 125 (5), 552-566 (2019).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+cardiac+fibroblasts+derived+from+human+pluripotent+stem+cells+via+second+heart+field+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Functional cardiac fibroblasts derived from human pluripotent stem cells via second heart field progenitors.</a> Nature Communications. 10 (1), 2238-2315 (2019).</li>
<li>Giacomelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human-iPSC-derived+cardiac+stromal+cells+enhance+maturation+in+3d+cardiac+microtissues+and+reveal+non-cardiomyocyte+contributions+to+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Human-iPSC-derived cardiac stromal cells enhance maturation in 3d cardiac microtissues and reveal non-cardiomyocyte contributions to heart disease.</a> Cell Stem Cell. 26 (6), 862-879 (2020).</li>
<li>Burridge, P. W., Holmström, A., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemically+defined+culture+and+cardiomyocyte+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Human+Genetics%22%5BJournal%5D)">Chemically defined culture and cardiomyocyte differentiation of human pluripotent stem cells.</a> Current Protocols in Human Genetics. 87 (1), 1-15 (2015).</li>
<li>Lian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+cardiomyocyte+differentiation+from+human+pluripotent+stem+cells+by+modulating+Wnt%2F%CE%B2-catenin+signaling+under+fully+defined+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Directed cardiomyocyte differentiation from human pluripotent stem cells by modulating Wnt/β-catenin signaling under fully defined conditions.</a> Nature Protocols. 8 (1), 162-175 (2013).</li>
<li>Buikema, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+activation+and+reduced+cell-cell+contact+synergistically+induce+massive+expansion+of+functional+human+iPSC-derived+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Wnt activation and reduced cell-cell contact synergistically induce massive expansion of functional human iPSC-derived cardiomyocytes.</a> Cell Stem Cell. 27 (1), 50-63 (2020).</li>
<li>Feyen, D. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+maturation+media+improve+physiological+function+of+human+iPSC-derived+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Metabolic maturation media improve physiological function of human iPSC-derived cardiomyocytes.</a> Cell Reports. 32 (3), 107925(2020).</li>
<li>Karbassi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiomyocyte+maturation%3A+Advances+in+knowledge+and+implications+for+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Cardiomyocyte maturation: Advances in knowledge and implications for regenerative medicine.</a> Nature Reviews Cardiology. 17 (6), 341-359 (2020).</li>
<li>Li, Z., Hu, S., Ghosh, Z., Han, Z., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+characterization+and+expression+profiling+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-+and+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Development%22%5BJournal%5D)">Functional characterization and expression profiling of human induced pluripotent stem cell- and embryonic stem cell-derived endothelial cells.</a> Stem Cells Development. 20 (10), 1701-1710 (2011).</li>
<li>Lian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+endothelial+progenitors+via+small-molecule+activation+of+WNT+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Report%22%5BJournal%5D)">Efficient differentiation of human pluripotent stem cells to endothelial progenitors via small-molecule activation of WNT signaling.</a> Stem Cell Report. 3 (5), 804-816 (2014).</li>
<li>Gu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Human+Genetics%22%5BJournal%5D)">Efficient differentiation of human pluripotent stem cells to endothelial cells.</a> Current Protocols in Human Genetics. 98 (1), 64(2018).</li>
<li>Acharya, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bHLH+transcription+factor+Tcf21+is+required+for+lineage-specific+EMT+of+cardiac+fibroblast+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The bHLH transcription factor Tcf21 is required for lineage-specific EMT of cardiac fibroblast progenitors.</a> Development. 139 (12), 2139-2149 (2012).</li>
<li>Wessels, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epicardially+derived+fibroblasts+preferentially+contribute+to+the+parietal+leaflets+of+the+atrioventricular+valves+in+the+murine+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Development+Biology%22%5BJournal%5D)">Epicardially derived fibroblasts preferentially contribute to the parietal leaflets of the atrioventricular valves in the murine heart.</a> Development Biology. 366 (2), 111-124 (2012).</li>
<li>Ali, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+heterogeneity+of+cardiac+fibroblasts+does+not+predict+pathological+proliferation+and+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Developmental heterogeneity of cardiac fibroblasts does not predict pathological proliferation and activation.</a> Circulation Research. 115 (7), 625-635 (2014).</li>
<li>McMurtrey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analytic+and+numerical+models+of+oxygen+and+nutrient+diffusion%2C+metabolism+dynamics%2C+and+architecture+optimization+in+three-dimensional+tissue+constructs+with+applications+and+insights+in+cerebral+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Analytic and numerical models of oxygen and nutrient diffusion, metabolism dynamics, and architecture optimization in three-dimensional tissue constructs with applications and insights in cerebral organoids.</a> Tissue Engineering Part C Methods. (3), 221-249 (2015).</li>
<li>Thomas, D., O'Brien, T., Pandit, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+customized+extracellular+niche+engineering%3A+progress+in+cell-entrapment+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Materials%22%5BJournal%5D)">Toward customized extracellular niche engineering: progress in cell-entrapment technologies.</a> Advanced Materials. 30 (1), 1703948(2018).</li>
<li>Thomas, D., Shenoy, S., Sayed, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Building+Multi-dimensional+induced+pluripotent+stem+cells-based+model+platforms+to+assess+cardiotoxicity+in+cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Building Multi-dimensional induced pluripotent stem cells-based model platforms to assess cardiotoxicity in cancer therapies.</a> Front Pharmacol. 12, 39(2021).</li>
<li>Rhee, J. -W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+secondary+iron+overload+cardiomyopathy+with+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Modeling secondary iron overload cardiomyopathy with human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes.</a> Cell Reports. 32 (2), 107886(2020).</li>
<li>Paik, D. T., Cho, S., Tian, L., Chang, H. Y., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA+sequencing+in+cardiovascular+development%2C+disease%2C+and+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA sequencing in cardiovascular development, disease, and medicine.</a> Nature Reviews Cardiology. 17 (8), 457-473 (2020).</li>
<li>Nguyen, Q. H., Pervolarakis, N., Nee, K., Kessenbrock, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+considerations+for+single-cell+RNA+sequencing+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Experimental considerations for single-cell RNA sequencing approaches.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 6, 108(2018).</li>
<li>Lau, E., Paik, D. T., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systems-wide+approaches+in+induced+pluripotent+stem+cell+models%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Reviews+in+Pathology%22%5BJournal%5D)">Systems-wide approaches in induced pluripotent stem cell models.</a> Annual Reviews in Pathology. 14 (1), 395-419 (2019).</li>
<li>Maddah, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+non-invasive+platform+for+functional+characterization+of+stem-cell-derived+cardiomyocytes+with+applications+in+cardiotoxicity+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Report%22%5BJournal%5D)">A non-invasive platform for functional characterization of stem-cell-derived cardiomyocytes with applications in cardiotoxicity testing.</a> Stem Cell Report. 4 (4), 621-631 (2015).</li>
<li>Sala, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Musclemotion%3A+A+versatile+open+software+tool+to+quantify+cardiomyocyte+and+cardiac+muscle+contraction+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Musclemotion: A versatile open software tool to quantify cardiomyocyte and cardiac muscle contraction in vitro and in vivo.</a> Circulation Research. 122 (3), 5-16 (2018).</li>
</ol>

J.C.W. jest współzałożycielem Khloris Biosciences, ale nie ma konkurencyjnych interesów, ponieważ prezentowane tu prace są całkowicie niezależne. Pozostali autorzy nie zgłaszają żadnych konfliktów.

Aby wygenerować mikrotkanki serca ze wstępnie zróżnicowanych iPSC-CM, iPSC-EC i iPSC-CF, konieczne jest uzyskanie wysoce czystej hodowli w celu lepszej kontroli liczby komórek po zahamowanym kontaktowo zagęszczeniu komórek w mikrotkankach serca. Ostatnio Giacomelli i inni. al.18 zademonstrowali wytwarzanie mikrotkanek serca przy użyciu iPSC-CM, iPSC-EC i iPSC-CFs. Mikrotkanki serca wygenerowane opisaną metodą składają się z ~5 000 komórek (70% iPSC-CMs, 15% iPSC-EC i 15% iPSC-CFs). W tej metodzie ...

Odkrywanie leków i modelowanie chorób w dziedzinie badań sercowo-naczyniowych napotyka na kilka wyzwań z powodu braku klinicznie istotnych próbek i nieodpowiednich narzędzi translacyjnych1. Wysoce złożone modele przedkliniczne lub nadmiernie uproszczone modele pojedynczych komórek in vitro nie wykazują warunków patofizjologicznych w powtarzalny sposób. W związku z tym powstało kilka zminiaturyzowanych platform inżynierii tkankowej, które pomagają wypełnić tę lukę, mając na celu osiągnięcie równowagi między łatwością aplikacji w sposób wysokoprzepustowy a wiernym odwzorowaniem funkcji tkanki2,3. Wraz z pojawieniem się technologii indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPSC), narzędzia inżynierii tkankowej mogą być stosowane do komórek specyficznych dla pacjenta z lub bez choroby sercowo-naczyniowej, aby odpowiedzieć na pytania badawcze4,5,6. Takie modele inżynierii tkankowej o składzie komórkowym podobnym do tkanki serca mogą być wykorzystane w pracach nad opracowaniem leków w celu zbadania kardiotoksyczności i dysfunkcji wywołanych patologicznymi zmianami w zachowaniu jednego lub wielu typów komórek.
Samoorganizujące się mikrotkanki lub organoidy pochodzące z ludzkich iPSC to trójwymiarowe (3D) struktury, które są miniaturowymi zespołami tkankopodobnymi, wykazującymi funkcjonalne podobieństwa do swoich odpowiedników in vivo. Istnieje kilka różnych podejść, które umożliwiają tworzenie organoidów in situ poprzez ukierunkowane różnicowanie iPSC lub poprzez tworzenie ciał embrionalnych4. Uzyskane w ten sposób organoidy są niezbędnym narzędziem do badania procesów morfogenetycznych, które napędzają organogenezę. Jednak obecność różnych populacji komórek i różnice w samoorganizacji mogą prowadzić do zmienności wyników między różnymi organoidami5. Alternatywnie, wstępnie zróżnicowane komórki, które samoorganizują się w mikrotkanki z typami komórek specyficznymi dla tkanek w celu zbadania lokalnych interakcji komórka-komórka, są doskonałymi modelami, w których możliwe jest wyizolowanie samoorganizujących się składników. Szczególnie w badaniach nad sercem u ludzi, opracowanie trójwymiarowych mikrotkanek serca z komponentami wielokomórkowymi okazało się wyzwaniem, gdy komórki pochodzą z różnych linii pacjentów lub ze źródeł komercyjnych.
Aby poprawić nasze mechanistyczne zrozumienie zachowań komórek w fizjologicznie istotnym, spersonalizowanym modelu in vitro, idealnie byłoby, gdyby wszystkie typy komórek składowych pochodziły z tej samej linii pacjenta. W kontekście ludzkiego serca, prawdziwie reprezentatywny model serca in vitro uchwyciłby wzajemne oddziaływanie między dominującymi typami komórek, a mianowicie kardiomiocytami (CM), komórkami śródbłonka (EC) i fibroblastami serca (CFs)6,7. Wierna rekapitulacja mięśnia sercowego wymaga nie tylko biofizycznego rozciągnięcia i stymulacji elektrofizjologicznej, ale także sygnalizacji komórka-komórka, która powstaje dzięki wspierającym typom komórek, takim jak EC i CFs8. CF biorą udział w syntezie macierzy zewnątrzkomórkowej i utrzymaniu struktury tkanki; a w stanie patologicznym mukowiscydozy mogą indukować zwłóknienie i zmieniać przewodnictwo elektryczne w CMs9. Podobnie, EC mogą regulować właściwości skurczowe CM poprzez sygnalizację parakrynną i zaspokajanie niezbędnych potrzeb metabolicznych10. W związku z tym potrzebne są ludzkie mikrotkanki serca składające się ze wszystkich trzech głównych typów komórek, aby umożliwić przeprowadzanie fizjologicznie istotnych eksperymentów o wysokiej przepustowości.
Tutaj opisujemy podejście oddolne do wytwarzania mikrotkanek serca poprzez uzyskanie ludzkich kardiomiocytów pochodzących z iPSC (iPSC-CMs), komórek śródbłonka pochodzących z iPSC (iPSC-ECs) i fibroblastów serca pochodzących z iPSC (iPSC-CFs) oraz ich hodowli 3D w jednolitych układach mikrotkanek serca. Ta prosta metoda generowania spontanicznie bijących mikrotkanek serca może być wykorzystana do modelowania chorób i szybkiego testowania leków w celu funkcjonalnego i mechanistycznego zrozumienia fizjologii serca. Co więcej, takie wielokomórkowe platformy mikrotkanek serca można wykorzystać za pomocą technik edycji genomu w celu naśladowania postępu choroby serca w czasie w przewlekłych lub ostrych warunkach hodowli.

<table><tbody><tr><td>Płytki 12-dołkowe</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-29</td><td></td></tr><tr><td>Mikroformy 3D Mikrotkanki</td> Płytki <td>6-dołkowe formatu</td><td></td><td>12-81</td></tr><tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-1B</td><td></td></tr><tr><td>Roztwór do płukania AutoMACS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>NC9104697</td><td></td></tr><tr><td>Suplement B27 bez Insulin</td><td>Life Technologies</td><td>A1895601</td><td></td></tr><tr><td>Suplement B27 plus Insulin</td><td>Life Technologies</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>BD Cytofix</td><td>BD Biosciences</td><td>554655</td><td></td></tr><tr><td>BD Matrigel, matryca z kwalifikacją hESC</td><td>BD Biosciences</td><td>354277</td><td></td></tr><tr><td>Przeciwciało T przeciwko troponinie sercowej</td><td>Miltenyi</td><td>130-120-403</td><td></td></tr><tr><td>CD144 (VE-Kadheryna)</td><td>Mikrokulki Miltenyi</td><td>130-097-857</td><td></td></tr><tr><td>Przeciwciało CD31</td><td>Miltenyi</td><td>130-110-670</td><td></td></tr><tr><td>CD31 Mikrogranulki</td><td>Miltenyi</td><td>130-091-935</td><td></td></tr><tr><td>CHIR-99021</td><td>Selleckchem</td><td>S2924</td><td></td></tr><tr><td>DDR2</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-81707</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw do apoptozy martwych komórek z załącznikiem V FITC i PI</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>V13242</td><td></td></tr><tr><td>Dispase I</td><td>Millipore Sigma</td><td>4942086001</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, wysoka zawartość glukozy (4,5 g / l) bez pożywki glutaminy</td><td>11960044</td><td></td>pożywka <td></td></tr><tr><td>podstawowa DMEM/F-12</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna buforowana fosforanem Dulbecco (DPBS), bez wapnia, bez magnezu</td><td>Life Technologies</td><td>14190-136</td><td></td></tr><tr><td>EGM2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>CC-3124</td><td></td></tr><tr><td>Bydło płodowe surowica</td><td>Life Technologies</td><td>10437</td><td></td></tr><tr><td>FibroLife Zestaw LifeFactors bez serum</td><td>LifeLIne Cell Technology</td><td>LS-1010</td><td></td></tr><tr><td>Glukoza bez glukozy RPMI medium</td><td>Life Technologies</td><td>11879-020</td><td></td></tr><tr><td>Kozia surowica</td><td>Life Technologies</td><td>16210-064</td><td></td></tr><tr><td>Ludzka FGF-basic</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13256029</td><td></td></tr><tr><td>Ludzki VEGF-165</td><td>PeproTech</td><td>100-20</td><td></td></tr><tr><td>IWR-1-endo</td><td>Selleckchem</td><td>S7086</td><td></td></tr><tr><td>Liberase TL</td><td>Millipore Sigma</td><td>5401020001</td><td></td></tr><tr><td>LS Kolumny sortujące</td><td>Miltenyi</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MACS BSA Roztwór podstawowy</td><td>Miltenyi</td><td>130-091-376</td><td></td></tr><tr><td>Bufor płuczący MACS</td><td>Miltenyi</td><td>130-091-222</td><td></td></tr><tr><td>Separator MidiMACS</td><td>Miltenyi</td><td>130-042-302</td><td></td></tr><tr><td>RPMI średni</td><td>Life Technologies</td><td>11835055</td><td></td></tr><tr><td>SB431542</td><td>Selleckchem</td><td>S1067</td><td></td></tr><tr><td>TO-PRO 3</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R37170</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Millipore Sigma</td><td>X100-100ML</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Select 10X</td><td>Thermo Fisher Naukowe</td><td>czerwone</td><td></td></tr><tr><td>przeciwciało sprzężone z Vimentin Alexa Fluor&reg; 488</td><td>R& D Systems</td><td>IC2105G</td><td></td></tr></tbody></table>

wytwarzanie matryc mikrotkanek serca 3d przy użyciu ludzkich kardiomiocytów pochodzących z ipsc, fibroblastów serca i komórek śródbłonka

Fabrication of 3D Cardiac Microtissue Arrays using Human iPSC-Derived Cardiomyocytes, Cardiac Fibroblasts, and Endothelial Cells

Generowanie ludzkich kardiomiocytów (CM), fibroblastów serca (CF) i komórek śródbłonka (EC) z indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPSC) dostarczyło unikalnej okazji do zbadania złożonych zależności między różnymi typami komórek sercowo-naczyniowych, które napędzają rozwój tkanek i choroby. W obszarze modeli tkanki serca kilka zaawansowanych podejść trójwymiarowych (3D) wykorzystuje indukowane pluripotencjalne kardiomiocyty pochodzące z komórek macierzystych (iPSC-CMs) do naśladowania znaczenia fizjologicznego i natywnego środowiska tkankowego za pomocą kombinacji macierzy zewnątrzkomórkowych i środków sieciujących. Jednak systemy te są skomplikowane do wytworzenia bez wiedzy z zakresu mikrofabrykacji i wymagają kilku tygodni na samodzielny montaż. Co najważniejsze, wielu z tych systemów brakuje komórek naczyniowych i fibroblastów serca, które stanowią ponad 60% niemiocytów w ludzkim sercu. W tym miejscu opisujemy pochodzenie wszystkich trzech typów komórek serca z iPSC w celu wytworzenia mikrotkanek serca. Ta łatwa technika formowania replik umożliwia hodowlę mikrotkanek serca na standardowych wielodołkowych płytkach do hodowli komórkowych przez kilka tygodni. Platforma umożliwia zdefiniowaną przez użytkownika kontrolę nad rozmiarami mikrotkanek w oparciu o początkową gęstość wysiewu i wymaga mniej niż 3 dni na samodzielny montaż, aby osiągnąć obserwowalne skurcze mikrotkanek serca. Ponadto mikrotkanki serca mogą być łatwo trawione przy zachowaniu wysokiej żywotności komórek do badania pojedynczych komórek za pomocą cytometrii przepływowej i sekwencjonowania jednokomórkowego RNA (scRNA-seq). Przewidujemy, że ten model in vitro mikrotkanek serca pomoże przyspieszyć badania walidacyjne w zakresie odkrywania leków i modelowania chorób.

Charakterystyka barwienia immunologicznego i cytometrii przepływowej CM, EC i CF pochodzących z iPSC 
Aby wygenerować mikrotkanki serca złożone z iPSC-CM, iPSC-EC i iPSC-CFs, wszystkie trzy typy komórek są różnicowane i charakteryzowane indywidualnie. W ciągu ostatnich kilku lat poprawiło się różnicowanie in vitro między iPSC a iPSC-CM. Jednak wydajność i czystość iPSC-CM różnią się w zależności od linii. Obecny protokół daje ponad 75% czystych iPSC-CM, które spontanicznie zaczynają bić około...

Tutaj opisujemy łatwą w użyciu metodologię generowania 3D samodzielnie składających się układów mikrotkanek serca składających się z wcześniej zróżnicowanych, indukowanych przez człowieka pluripotencjalnych kardiomiocytów pochodzących z komórek macierzystych, fibroblastów serca i komórek śródbłonka. Ta przyjazna dla użytkownika i wymagająca niewielkiej liczby komórek technika generowania mikrotkanek serca może zostać wdrożona do modelowania chorób i wczesnych etapów opracowywania leków.

Wytwarzanie matryc mikrotkanek serca 3D przy użyciu ludzkich kardiomiocytów pochodzących z iPSC, fibroblastów serca i komórek śródbłonka

Generation of human cardiomyocytes (CMs), cardiac fibroblasts (CFs), and endothelial cells (ECs) from induced pluripotent stem cells (iPSCs) has provided ...

Protokół łączy w sobie moc generowania typów ludzkich komórek sercowo-naczyniowych przy użyciu indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych i wszechstronną technikę generowania sferoid bijących serca w czasie krótszym niż 72 godziny. Te sferoidy serca mogą być wykorzystywane do modelowania chorób i testowania leków. Jedną z głównych zalet tej łatwej techniki jest to, że można wygenerować prawie 1000 bijących sferoid serca na standardowej 12-dołkowej płytce.A co najważniejsze, każdy sferoid serca może być badany pod kątem jego funkcji skurczowej za pomocą techniki opartej na obrazowaniu. Po stopieniu agarozy w kuchence mikrofalowej umieść ją w komorze bezpieczeństwa biologicznego i pozwól jej ostygnąć przez trzy minuty. Odpipetować 700 mikrolitrów stopionej agarozy i dodać ją do silikonowej mikroformy o wymiarach dziewięć na dziewięć, uważając, aby nie powstawać pęcherzyków.Ostrożnie umieść formę na zimnym bloku lodu, aby przyspieszyć czas trwania agarozy. Gdy agaroza stanie się półprzezroczysta, ostrożnie zegnij krawędzie mikroformy, aby zgubić replikę agarozy i delikatnie oderwij replikę ze wszystkich stron, aby odłączyć ją od silikonowej mikroformy. Przenieś tackę na mikrotkanki agarozy zawierającą 81 okrągłych wgłębień na sterylną płytkę 12-dołkową, a następnie dodaj dwa mililitry PBS do tacki na mikrotkanki agarozy i sprawdź ją pod mikroskopem pod kątem uwięzionych pęcherzyków lub studzienek o nieregularnych kształtach.Zanurz tackę agarozy w dwóch mililitrach 70% etanolu na noc, a następnie poddaj ją działaniu promieniowania UV w komorze bezpieczeństwa biologicznego na godzinę. Usuń 70% etanol i umyj dwa razy wodą destylowaną i raz dwoma mililitrami PBS. Po zliczeniu indukowanych pluripotencjalnych kardiomiocytów, fibroblastów serca i komórek śródbłonka pochodzących z pluripotencjalnych komórek macierzystych po trypsynizacji i neutralizacji, umieść zawiesiny komórek na lodzie.W nowej probówce wymieszaj indukowane pluripotencjalne kardiomiocyty pochodzące z komórek macierzystych, fibroblasty serca i komórki śródbłonka. Następnie wyjmij PBS ze studzienki i komory wysiewu komórek, nie dotykając wgłębień, i dodaj kroplami 200 mikrolitrów zawiesiny komórek. Pozwól komórkom osiąść w temperaturze 37 stopni Celsjusza w inkubatorze dwutlenku węgla przez dwie godziny.Dodaj pożywkę do produkcji mikrotkanek otaczającą formę agarozy, aby pokryć powierzchnię komory wewnętrznej. Po 24 godzinach obserwuj, czy w okrągłych wgłębieniach znajdują się samoorganizujące się i kompaktowe sferoidy. Zmieniaj podłoże co dwa dni, aby utrzymać sferoidy.Zazwyczaj po 48 godzinach można zaobserwować spontaniczne bicie sferoid. Hodowlę poszczególnych typów komórek należy przeprowadzić oddzielnie na pożywce o macierzy błony podstawnej lub na szkiełkach komorowych pokrytych żelatyną. Delikatnie wypłucz mikrotkanki serca z okrągłych wgłębień i zbierz je w 15-mililitrowej probówce kronikowej.Odessać pożywkę i przepłukać komórki lub mikrotkanki jednym mililitrem PBS. Następnie utrwalić komórki lub mikrotkanki za pomocą buforu utrwalającego zawierającego 4,2% PFA i inkubować w temperaturze pokojowej. Odessać PFA i inkubować komórki lub mikrotkanki z jednym mililitrem roztworu przepuszczalnego.Następnie odessać roztwór i spłukać dwoma do trzech mililitrów PBS. Dodać 500 do 1000 mikrolitrów roztworu blokującego do komórek i inkubować przez co najmniej godzinę w przypadku szkiełek w komorze i przez trzy do czterech godzin w przypadku mikrotkanek. Próbki należy inkubować ze sprzężonymi przeciwciałami w roztworze blokującym przez godzinę w przypadku szkiełek w komorze i przez noc w temperaturze czterech stopni Celsjusza w przypadku mikrotkanek serca.Umyj szkiełka komory trzykrotnie 500 mikrolitrami 0,1% Tween 20, z pięciominutowymi przerwami między każdym praniem, a następnie wykonaj końcowe płukanie za pomocą PBS. Umyj mikrotkanki serca pięć razy dwoma mililitrami 0,1% Tween 20, z zachowaniem 20-minutowego czasu między każdym myciem. Następnie wykonaj ostatnie pranie przez dodatkowe 20 minut.Inkubuj komórki lub mikrotkanki za pomocą DAPI przed mikroskopią konfokalną, a następnie ostrożnie przenieś mikrotkanki serca do 35-milimetrowego szklanego naczynia z dnem i dodaj PBS, aby zanurzyć mikrotkankę. Wypłucz mikrotkanki z okrągłych wgłębień za pomocą pożywki za pomocą szerokiej lub jednomililitrowej końcówki pipety do 15-mililitrowej probówki chronicznej i pozwól im się osadzić. Następnie odessać pożywkę i spłukać jednym mililitrem PBS.Dodać 200 do 300 mikrolitrów buforu do trawienia enzymatycznego i inkubować przez 10 minut w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Następnie delikatnie mieszaj mikrotkanki przez minutę i powtórz inkubację. Po inkubacji energicznie wymieszaj mikrotkanki zwykłą jednomililitrową końcówką pipety, aby strawić je na pojedyncze komórki.Uzyskać mętną zawiesinę komórek i natychmiast zneutralizować zawiesinę komórek za pomocą pięciu mililitrów pożywki zawierającej 5% FBS. Przecedź zawiesinę komórek przez sitko o średnicy 40 mikrometrów i policz całkowitą liczbę komórek. Odwirować zawiesinę jednokomórkową o temperaturze 300 razy G przez pięć minut w temperaturze czterech stopni Celsjusza.Odessać supernatant i ponownie zawiesić komórki w buforze wiążącym aneksynę z Aneksyną V FITC i jodkiem propidyny lub barwnikiem wykluczającym martwe komórki TO-PRO-3 i inkubować przez 10 minut na lodzie. Po inkubacji dodać 300 mikrolitrów buforu wiążącego aneksynę do zawiesiny komórek i przenieść ją do probówki FACS z okrągłym dnem w celu analizy cytometrii przepływowej. Oczyszczone indukowane pluripotencjalne kardiomiocyty, komórki śródbłonka i fibroblasty serca pochodzącymi z komórek macierzystych uwidoczniono za pomocą mikroskopii z kontrastem fazowym.Czystość różnych typów komórek określono za pomocą barwienia immunologicznego i cytometrii przepływowej. Troponina T została użyta jako marker dla kardiomiocytów i osiągnięto ponad 90% czystość. Cząsteczka adhezyjna komórek śródbłonka płytek krwi CD31 i wimentyna zostały użyte jako markery komórek śródbłonka i fibroblastów serca i wykazały czystość odpowiednio ponad 98 i 96%.Barwienie immunofluorescencyjne wykazało, że kardiomiocyty były najcięższe i zajmowały środek mikrotkanek, podczas gdy komórki śródbłonka były przeplatane w mikrotkankach, a fibroblasty serca zajmowały głównie obrzeża. Trawienie mikrotkanek przy użyciu tego tempa i Liberazy TL spowodowało uzyskanie wysoce żywotnych proporcji komórek z mniejszą liczbą komórek apoptotycznych po dwóch tygodniach hodowli. Jednogodzinna ekspozycja mikrotkanek serca na wysokie stężenie doksorubicyny indukowała kardiotoksyczność zależną od dawki.Kurczliwość mikrotkanek i ruch wektorów wygenerowały pseudomapę cieplną, która ilustrowała średni profil skurczu w całej mikrotkance. Ruch skurczu mikrotkanek serca generował dodatnie szczyty, które mierzono jako prędkość skurczu, prędkość relaksacji i szybkość dudnienia, która została obliczona jako czas między dwoma cyklami skurczu. Kurczliwość mikrotkanek serca była stała przez cztery tygodnie w hodowli.Ogrzewanie komórek jest jednym z najważniejszych etapów w tym konkretnym protokole, w którym należy zadbać o ostrożne dozowanie zawiesiny komórek kroplami do układu agarozowego w celu równomiernego rozprowadzenia w mikrodołkach i zapobieżenia przepełnieniu. Korzystając ze zoptymalizowanego protokołu promieniowania tych mikrotkanek, można poddać je technologiom sekwencjonowania o wysokiej przepustowości, takim jak sekwencjonowanie RNA pojedynczej komórki lub sekwencja ATAC pojedynczej komórki, aby zrozumieć wzorce ekspresji genów specyficzne dla komórki, wynikające z różnych warunków leczenia.

fabrication-3d-cardiac-microtissue-arrays-using-human-ipsc-derived

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioinżynieria

W tym protokole demonstrujemy wytwarzanie biomimetycznych substratów do hodowli komórek serca wykonanych z dwóch różnych materiałów polimerowych za pomocą litografii kapilarnej.  Opisane metody zapewniają skalowalną, opłacalną technikę inżynierii struktury i funkcji makroskopowych tkanek serca do zastosowań in vitro i in vivo.

Litografia sił kapilarnych w inżynierii tkankowej serca

Generowanie wyrównanej tkanki mięśnia sercowego jest kluczowym wymogiem dla dostosowania najnowszych osiągnięć w biologii komórek macierzystych do klinicznie użytecznych celów. W tym artykule opisujemy podejście do druku mikrokontaktowego w celu precyzyjnej kontroli kształtu i funkcji komórki. Korzystając z wysoce oczyszczonych populacji embrionalnych komórek progenitorowych serca pochodzących z embrionalnych komórek macierzystych, generujemy anizotropową funkcjonalną tkankę mięśnia sercowego.

Generowanie wyrównanej funkcjonalnej tkanki mięśnia sercowego poprzez drukowanie mikrokontaktowe

Ten manuskrypt opisuje tworzenie zdefiniowanych tkanek serca za pomocą ekspresji markerów powierzchniowych i sortowania komórek. Zdefiniowane tkanki mogą być następnie wykorzystane w bioreaktorze wielotkankowym do zbadania mechanizmów terapii komórkami serca w celu zapewnienia funkcjonalnego, a jednocześnie kontrolowanego systemu modelowego ludzkiego serca.

Budowa zdefiniowanych tkanek serca zaprojektowanych przez człowieka w celu zbadania mechanizmów terapii komórkami serca

Ten protokół opisuje biodrukowanie 3D tkanki serca bez użycia biomaterials. 3D biodrukowane plastry serca wykazują mechaniczną integrację sferoid składowych i są bardzo obiecujące w regeneracji tkanki serca oraz jako modele 3D chorób serca.

Tworzenie tkanki serca wykazującej mechaniczną integrację sferoid za pomocą biodruku 3D

Ten protokół opisuje metodę opartą na pleśni sieciowej do tworzenia trójwymiarowych, wolnych od rusztowań tkanek serca o zadowalającej integralności strukturalnej i synchronicznym zachowaniu bicia.

Oparta na formie metoda trójwymiarowego tworzenia tkanki serca bez rusztowań

Obecny protokół generuje siatkowe tkanki serca zawierające komórki sercowo-naczyniowe pochodzące z ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych, aby umożliwić badanie terapii implantacji komórek w chorobach serca.

Przygotowanie zmodyfikowanych tkanek serca w kształcie siatki pochodzących z ludzkich komórek iPS do naprawy mięśnia sercowego in vivo

Celem tego protokołu jest wyjaśnienie i zademonstrowanie rozwoju trójwymiarowego (3D) modelu mikroprzepływowego wysoce wyrównanej tkanki serca ludzkiego, składającej się z kardiomiocytów pochodzących z komórek macierzystych hodowanych wspólnie z fibroblastami serca (CF) w biomimetycznym hydrożelu na bazie kolagenu, do zastosowań w inżynierii tkankowej serca, badaniach przesiewowych leków i modelowaniu chorób.

Opracowywanie zorganizowanej w 3D ludzkiej tkanki serca w ramach platformy mikroprzepływowej

Trójwymiarowe tkanki serca bioinżynieryjne wykorzystujące kardiomiocyty pochodzące z komórek macierzystych okazały się obiecującymi modelami do badania zdrowego i chorego ludzkiego mięśnia sercowego in vitro, jednocześnie podsumowując kluczowe aspekty rodzimej niszy sercowej. Manuskrypt ten opisuje protokół wytwarzania i analizy zmodyfikowanych tkanek serca o wysokiej zawartości wygenerowanych z ludzkich pluripotencjalnych kardiomiocytów pochodzących z komórek macierzystych.

Projektowanie bioreaktora w celu usprawnienia pozyskiwania danych i modelowania przepustowości zmodyfikowanych tkanek serca

Użycie światła do kontrolowania komórek i tkanek serca umożliwia bezkontaktową stymulację, zachowując w ten sposób naturalny stan i funkcję komórek, co czyni ją wartościowym podejściem zarówno do badań podstawowych, jak i zastosowań terapeutycznych.

Mikrofizjologiczny system serca do badania propagacjiCa2+ za pomocą niegenetycznej stymulacji optycznej

Przedstawiono powtarzalną metodę generowania 3D tkanek mięśnia sercowego, łączących rusztowania polikaprolaktonu (PCL) i hydrożele fibrynowe pochodzące z hiPSC. Technika ta zapewnia precyzyjną kontrolę nad architekturą rusztowania i może być stosowana w przedklinicznych testach leków i modelowaniu chorób serca.

Generowanie 3D ludzkiej tkanki mięśnia sercowego przy użyciu elektroprzędzenia stopionego zapisu rusztowań polikaprolaktonowych i komórek serca pochodzących z hiPSC

Poznaj metodę wytwarzania 3D mikrotkanek serca z ludzkich kardiomiocytów iPSC, fibroblastów i komórek śródbłonka. Technika umożliwia generowanie niemal 1000 bijących sferoidów w płytce 12-dołkowej do modelowania chorób i testowania leków.

Wytwarzanie matryc mikrotkanek serca 3D przy użyciu ludzkich kardiomiocytów pochodzących z iPSC, fibroblastów serca i komórek śródbłonka (Wideo) | JoVE Journal

Wytwarzanie matryc mikrotkanek serca 3D przy użyciu ludzkich kardiomiocytów pochodzących z iPSC, fibroblastów serca i komórek śródbłonka

Przeglądaj więcej filmów