Zachowanie płodności u pacjentek z ciężką dysfunkcją jajników

Celem tego filmu jest pokazanie procedury naszego nowego podejścia do pacjentek z dysfunkcją jajników. Funkcja jajników pogarsza się stopniowo wraz ze starzeniem się i niektórymi stanami patofizjologicznymi, w tym nieprawidłowościami kariotypu, chorobami autoimmunologicznymi, chemioterapią i radioterapią oraz operacjami jajników. Większość kobiet w średnim wieku z niską rezerwą jajnikową wykazywała słabą reakcję jajników na stymulację jajników w celu uzyskania dojrzałych komórek jajowych.

Ponadto młode pacjentki z małą liczbą pęcherzyków antralnych wykazywały również słabą odpowiedź jajników na stymulację jajników. Zachowanie płodności jest ważne, aby zachować potencjalny OCS na przyszłą ciążę. W celu zachowania płodności ustalono kriokonserwację oocytów.

Jednak te pacjentki ze słabą reakcją jajników mogły pobrać bardzo ograniczoną liczbę oocytów nawet po odpowiedniej stymulacji jajników, co prowadziło do konieczności powtarzania kosztownych procedur w celu zapewnienia wystarczającej liczby oocytów, aby zagwarantować jedno dziecko. Aby rozwiązać te problemy, opracowaliśmy niedawno procedurę aktywacji in vitro, IVA, która umożliwia nam stymulację wczesnego etapu pęcherzyków jajnikowych do stadium pęcherzyka przedantralnego. Oryginalna procedura IVA może sprzyjać pierwotnemu, pierwotnemu i wtórnemu wzrostowi pęcherzyków jajnikowych poprzez fragmentację kory jajników, co prowadzi do zakłócenia sygnalizacji hipopotama.

Następnie następuje dwudniowa hodowla stymulatorem sygnalizacji Akt. Ta procedura jest odpowiednia dla pacjentów z UM z niewielką liczbą pęcherzyków resztkowych. Jednak ta procedura jest nadmiernym leczeniem dla pacjentów, którzy mają wiele pęcherzyków wtórnych.

Dla pacjentów, którzy mają pewne resztkowe pęcherzyki wtórne, opracowaliśmy metodę zwaną IVA bez leków i już przetestowaliśmy możliwość promowania wzrostu pęcherzyków wtórnych poprzez zakłócanie szlaku sygnałowego hipopotama. Mieliśmy również kilka udanych przypadków porodu za pomocą IVA bez leków. Opublikowaliśmy już procedurę chirurgiczną IVA bez leku oraz protokół następującej stymulacji jajników.

W tym filmie przedstawiamy szczegółowe informacje na temat metod laboratoryjnych wymaganych do uzyskania IVA bez leków. Rekrutację pacjentów do bezlekowego IVA przeprowadziliśmy w oparciu o kryteria bolońskie. Pacjenci mogą mieć wiele pęcherzyków wtórnych.

Początkowo część kory została usunięta z jednego lub obu jajników za pomocą laparoskopii. Pacjentki z POR to te, które miały jajniki średniej wielkości. U większości pacjentek pobrano tylko część tkanek korowych z jajników po jednej lub obu stronach.

Wyekstrahowane krytyczne tkanki natychmiast przeniesiono do szalki hodowlanej zawierającej pożywkę hodowlaną z buforem HEPES i rozcięto tę małą tkankę na małe kostki w celu zakłócenia sygnalizacji hipopotama. Szczegóły procedury zostaną pokazane w tym filmie. Szlak sygnałowy hipopotama jest niezbędny do utrzymania optymalnej wielkości narządu.

Szlak ten składa się z kilku negatywnych regulatorów wzrostu. Gdy sygnalizacja hipopotama zostanie zakłócona, poziom fosforylacji YAP, jednego z negatywnych regulatorów wzrostu działających w kaskadzie kinazy, jest obniżony, a poziomy jądrowe YAP wzrastają. YAP działa w porozumieniu z czynnikami transkrypcyjnymi TEAD w celu zwiększenia czynnika wzrostu CCN.

Z drugiej strony, polimeryzacja aktyny o działaniu globularnym, G-aktynie, do postaci nitkowatej, F-aktyny, jest ważna dla utrzymania kształtu komórki i lokomocji. Wcześniej zgłaszane indukcja tworzenia F-aktyny zakłóca sygnalizację hipopotama i indukuje przerost w ludzkich komórkach HeLa. Wcześniej informowaliśmy, że fragmentacja jajników zwiększa tworzenie F-aktyny i prowadzi do obniżenia poziomu fosforylacji YAP.

Prowadzi to do zwiększonej ekspresji czynnika wzrostu CCN. Po wycięciu kostki te są przeszczepiane do pozostałego jajnika. Procedura ta może sprzyjać resztkowemu wzrostowi pęcherzyków wtórnych i prowadzić do zwiększenia liczby dojrzałych komórek jajowych.

IVA bez leków składa się z czterech kroków. Opublikowaliśmy już procedurę chirurgiczną dla IVA bez leków. Proszę zapoznać się z tą literaturą, aby uzyskać informacje na temat ekstrakcji kory jajnikowej i automatycznego przeszczepu.

Poniżej przedstawiamy szczegółowe procedury metod laboratoryjnych wymaganych do uzyskania IVA bez leków. W kroku pierwszym pokazujemy, jak przebiega fragmentacja kory jajnikowej. W kroku drugim pokazujemy, jak załadować kostki kory jajnika do urządzenia do przeszczepu, Tutaj pokażę fragmentację kory jajników.

Badanie to zostało zatwierdzone przez komisję etyczną naszego instytutu, a wszystkie procedury zostały przeprowadzone zgodnie z Kodeksem Etycznym Światowego Stowarzyszenia Lekarzy. Fragmentacja kory jajnikowej. Następujące narzędzia wymagane do tego kroku: naczynie, sterylna gaza, cienkie nożyczki, cienkie kleszczyki i skalpel.

Zwykle używamy tego typu naczynia i sterylnej gazy, ale inne produkty, takie jak plastikowa szalka Petriego, szklane naczynie i tak dalej, mogą być również odpowiednie do tej procedury, a każdy rodzaj sterylnej gazy jest również odpowiedni. Zdecydowanie zalecamy jednak stosowanie tego kształtu kleszczy i skalpela. Ponadto użyj płyty grzejnej do utrzymania temperatury naczyń zawierających chusteczki Umieść pod sterylnym serweratem.

Tkanki korowe są natychmiast przenoszone do naczynia zawierającego mHTF. Zrób zdjęcie z imieniem i nazwiskiem pacjenta w celu skorelowania go z danymi pacjenta. Zapisz rozmiar, grubość i stan tkanki.

Usuń resztki tkanki rdzenia. Przed fragmentacją tkanki należy usunąć tkankę rdzenia. Połóż korę na sterylnej gazie.

Jak pokazano na filmie, gazę zwilża się podłożem. Podczas tej procedury nałóż pożywkę jednorazową pipetą, zanim powierzchnia kory zostanie wysuszona. Usuń resztki tkanek mikronożyczkami, aż grubość osiągnie jeden do dwóch milimetrów.

U pacjentów z POR pęcherzyki wtórne znajdują się głębiej niż jeden milimetr od powierzchni kory, więc nie należy tworzyć tkanek o grubości mniejszej niż jeden milimetr. Przetnij jedną stronę kory każdej tkanki na pasek o wymiarach jeden po drugim na pięć milimetrów do analizy histologicznej w celu określenia obecności pozostałych pęcherzyków. Umieść ten pasek w 1,5 mililitrowej probówce z pożywką hodowlaną i utrzymuj w temperaturze czterech stopni Celsjusza do momentu utrwalenia.

Przygotowanie kostek kory jajnikowej. Po usunięciu tkanki rdzenia kora jajnika ulega fragmentacji w celu zakłócenia sygnalizacji hipopotama. Najpierw pokrój korę na paski jeden po drugim na 10 milimetrów za pomocą skalpela.

Następnie pokrój te paski w jedną milimetrową kostkę w kostkę. W podłożu tkanka jest śliska i trudna do cięcia. Aby ułatwić cięcie, odetnij paski, naciskając skalpel, a nie ciągnąc go.

Po pokrojeniu policz liczbę kostek i przygotuj automatyczne szczepienie. Aby uniknąć zmian ciśnienia osmotycznego w pożywce, należy dodać pożywkę z umiarem przed automatycznym przeszczepem tkanki. W przypadku automatycznego przeszczepu jajników użycie urządzenia w kształcie kaniuli pozwala na łatwiejsze ładowanie.

Ten krok składa się z dwóch kroków. Wcześniej fragmenty jajników przeszczepiano jeden po drugim za pomocą kleszczy pod laparoskopią. Jednak zakończenie operacji zajęło około trzech do czterech godzin.

W tej procedurze używamy urządzenia w kształcie kaniuli wykonanego z wewnętrznej strzykawki i zewnętrznego cylindra. Jest to prosty kształt i lekkość. Ponadto końcówka tego urządzenia ma okrągły kształt.

Nie ma ostrych końcówek, co pozwala uniknąć uszkodzenia miejsca przeszczepu. Korzystanie z tego typu urządzenia pozwala na sprowadzenie jednorazowo do miejsca implantacji od 20 do 30 kostek. Prowadzi to do efektywnego przeszczepu i skrócenia czasu operacji.

Ładowanie fragmentów kory jajnikowej. Przygotowanie kaniuli IVA. Przygotuj kaniulę IVA i umyj to urządzenie w mHTF.

Powtórzyć kilkakrotnie zasysanie i wyładowywanie pożywki. Napełnij końcówkę kangurki, zasysając około 100 mikrolitrów pożywki. Ma to na celu uniknięcie wyciągania się kostek podczas ładowania fragmentów tkanki.

Ładowanie kostek korowych. Wybierz kostkę za pomocą cienkich kleszczy i włóż ją do końcówki kaniuli. Liczba automatycznie przeszczepionych kostek zależy od wielkości miejsca przeszczepu.

Powtarzaj ładowanie kostek jedna po drugiej, aż osiągniesz liczbę docelową. Po załadowaniu kostek ostrożnie przekaż kaniulę chirurgowi. Jeśli miejsce szczepienia nie jest gotowe, część kanciastka, która zawiera kostki jajnika, należy trzymać palcami, aby uniknąć spadku temperatury kostek.

Informowaliśmy już o wynikach klinicznych IVA bez leków. Prosimy o zapoznanie się z opublikowanym artykułem na temat wyników klinicznych. Ten protokół laboratoryjny wymagał od 30 do 50 minut dla jednego pacjenta.

Średni czas wynosi od 10 do 20 minut w przypadku fragmentacji kory jajnika i od 20 do 30 minut w przypadku ładowania tych fragmentów do kaniuli IVA. Zależy to od wielkości tkanki, ale prawie wszyscy pacjenci mogą zostać wykończeni w tym średnim czasie. Wnioski. Lekologiczne IVA to nowe podejście do leczenia niepłodności u pacjentek z POR ze zmniejszającą się rezerwą jajnikową.

Ten protokół laboratoryjny prowadzi do skrócenia zarówno czasu potrzebnego na operację, jak i utraty fragmentów podczas przeszczepu. Laboratoryjna technika bezlekowego IVA może stać się podstawą przyszłego zastosowania hodowli tkanek jajnikowych w celu uzyskania dojrzałych oocytów bez przeszczepiania.