Name: Barwienie całego wierzchu, wizualizacja i analiza grzybokształtnych, obwodowych i podniebienia kubków smakowych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: Poznaj metodę preparowania całych kubków smakowych grzybokształtnych, obwodowych i podniebienia u myszy. Technika umożliwia analizę morfologii, liczby komórek i unerwienia w badaniach neurobiologii smaku.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dziękujemy Kavisca Kuruparanantha za jej wkład w barwienie tkanek i obrazowanie okołokształtnych kubków smakowych, Jennifer Xu za barwienie i obrazowanie unerwienia brodawki, Kaytee Horn za opiekę nad zwierzętami i genotypowanie, oraz Liqun Ma za barwienie tkanek kubków smakowych podniebienia miękkiego. Projekt ten był wspierany przez R21 DC014857 i R01 DC007176 do R.F.K oraz F31 DC017660 do L.O.

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Opracowanie podejścia do konsekwentnego zbierania i barwienia całych kubków smakowych z trzech regionów smakowych jamy ustnej (grzybowatych, okołosmakowych i podniebienia) zapewnia znaczące ulepszenia w analizie komórek transdukujących smak, śledzeniu nowo włączonych komórek, unerwieniu i związkach między tymi strukturami. Ponadto ułatwia lokalizację potencjalnego wtórnego markera neuronu zarówno w obrębie znakowanej populacji, jak i poza nią50. Jest to szczególnie istotne, biorąc pod uwagę, że br...

Kubki smakowe to zbiory 50-100 wyspecjalizowanych komórek nabłonkowych, które wiążą podzbiory bodźców chemiczno-smakowych obecnych w jamie ustnej. Powszechnie uważa się, że komórki przekazujące smak istnieją jako typy1,2,3,4,5,6,7,8,9, początkowo oparty na kryteriach mikroskopii elektronowej, które później skorelowano z markerami molekularnymi. Komórki typu II wyrażają fosfolipazę C-beta 2 (PLCβ2)2 i kanał kationowy potencjału receptora przejściowego, podrodzina M członek 51 i obejmują komórki, które transdukują słodkie, gorzkie i umami1,10. Komórki typu III wyrażają anhydrazę węglanową 4 (Car4)11 i białko związane z synaptosomalami 258 i oznaczają komórki, które przede wszystkim reagują na kwaśny smak11. Komórki, które zmieniają zasolenie, nie zostały tak wyraźnie oznaczone12,13,14, ale potencjalnie mogą zawierać komórki typu I, Typu II i Typu III15,16,17,18,19. Środowisko kubków smakowych jest złożone i dynamiczne, biorąc pod uwagę, że komórki transdukujące smak nieustannie zmieniają się przez całe dorosłe życie i są zastępowane przez podstawowych przodków3,20,21. Te komórki przenoszące smak łączą się z pseudo-unipolarnymi włóknami nerwowymi z kolankowatych i zwojów petrosalnych, które przekazują informacje o smaku do pnia mózgu. Neurony te zostały przede wszystkim skategoryzowane na podstawie rodzaju informacji o smaku, które zawierają22,23, ponieważ informacje o ich morfologii były do niedawna nieuchwytne24. Komórki typu II komunikują się z włóknami nerwowymi za pośrednictwem kanałów jonowych białka modulatora homeostazy wapnia 125, podczas gdy komórki typu III komunikują się za pośrednictwem klasycznych synaps8,26. Dalsza charakterystyka komórek kubków smakowych, w tym transdukcja linii typów komórek, czynniki wpływające na ich różnicowanie oraz struktury łączących się trzpieni, są obszarami aktywnych badań.
Badania nad kubkami smakowymi zostały utrudnione przez kilka wyzwań technicznych. Heterogenne i gęste tkanki tworzące język znacznie zmniejszają przepuszczalność przeciwciał dla immunohistochemii27,28,29. Przeszkody te wymusiły protokoły podziału, które skutkują podziałem kubków smakowych na sekcje, tak że pomiary są albo przybliżone na podstawie reprezentatywnych sekcji, albo sumowane między sekcjami. Poprzednio reprezentatywne cienkie przekroje były używane do przybliżania zarówno wartości objętości, jak i liczby komórek transdukcyjnych30. Grubsze przekroje szeregowe pozwalają na obrazowanie wszystkich sekcji kubków smakowych i sumowanie pomiarów z każdej sekcji31. Wycinanie tak grubych odcinków i wybieranie tylko całych kubków smakowych skłania próbkowanie do mniejszych kubków smakowych32,33,34. Szacunki unerwienia nerwów z podzielonych kubków smakowych zostały oparte na analizach liczby pikseli13,35, jeśli w ogóle określono ilościowo36,37,38. Pomiary te całkowicie ignorują strukturę i liczbę poszczególnych altan nerwowych, ponieważ altany są podzielone (i zwykle słabo oznaczone). W końcu, mimo że odklejanie nabłonka pozwala na zabarwienie całych kubków smakowych39,40, usuwa również włókna nerwowe kubków smakowych i może zakłócić normalne relacje między komórkami. W związku z tym badania nad relacjami strukturalnymi w kubkach smakowych były ograniczone z powodu tego zakłócenia spowodowanego podejściami do barwienia.
Kolekcja całej struktury eliminuje potrzebę reprezentatywnych sekcji i pozwala na określenie pomiarów wartości bezwzględnej objętości, liczby komórek i morfologii struktury41. Takie podejście zwiększa również dokładność, ogranicza stronniczość i zmniejsza zmienność techniczną. Ten ostatni element jest ważny, ponieważ kubki smakowe wykazują znaczną zmienność biologiczną zarówno w obrębie 34,42, jak i między regionami43,44, a analizy całych kubków smakowych pozwalają na porównanie bezwzględnej liczby komórek między warunkami kontrolnymi i eksperymentalnymi. Co więcej, zdolność do zbierania nienaruszonych kubków smakowych pozwala na analizę fizycznych relacji między różnymi komórkami transdukującymi i powiązanymi z nimi włóknami nerwowymi. Ponieważ komórki przekazujące smak mogą komunikować się ze sobą45 i komunikują się z włóknami nerwowymi46, te relacje są ważne dla normalnego funkcjonowania. Tak więc warunki utraty funkcji mogą nie być spowodowane utratą komórek, ale zmianami w relacjach komórkowych. Przedstawiono tutaj metodę zbierania całych kubków smakowych w celu osiągnięcia korzyści płynących z pomiarów bezwzględnych w celu udoskonalenia analiz objętościowych zarówno kubków smakowych, jak i ich unerwienia, liczby i kształtów komórek smakowych, a także w celu ułatwienia analiz relacji między komórkami transdukcyjnymi i morfologii trzpieni nerwowych. Przedstawiono również dwa procesy robocze po tej nowatorskiej, całościowej metodzie przygotowania tkanek: 1) do analizy objętości kubków smakowych i całkowitego unerwienia oraz 2) do genetycznego znakowania neuronów smakowych w rzadkich komórkach (z oznakowanymi podzbiorami komórek przekazujących smak) i późniejszych analiz morfologii trzpienia nerwowego smakowego, liczby typów komórek smakowych i ich kształtów oraz wykorzystania oprogramowania do analizy oprogramowania do analizy fizycznych relacji między komórkami transdukującymi a komórkami między transdukującymi komórki i ich altany nerwowe. Razem te procesy robocze zapewniają nowatorskie podejście do przygotowania tkanek oraz do analizy całych kubków smakowych i pełnej morfologii ich unerwionych altan.

<table><tbody><tr><td>2,2,2-tribromoetanol</td><td>ACROS Organics</td><td>AC421430100</td><td></td></tr><tr><td>2-metylobutan</td><td>ACROS</td><td>126470025</td><td></td></tr><tr><td>AffiniPure Fab Fragment Osioł Anty-Królik IgG</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>711-007-003</td><td>15,5&mu; L/mL</td></tr><tr><td>Alexa Fluor&reg; 647 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>712-605-150</td><td>(1:500)</td></tr><tr><td>Oprogramowanie AutoQuant X3</td><td>&nbsp; Media Cybernetyka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze z końcami</td><td>Narzędzia do nauki pięknej&nbsp;</td><td>FST 91100-12</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT&handel; Zestaw do proliferacji komórek Plus EdU</td><td>Sondy molekularne</td><td>C10637</td><td>Postępuj zgodnie z instrukcjami zestawu&nbsp;</td></tr><tr><td>Coverglass</td><td>Marienfeld</td><td>107242</td><td></td></tr><tr><td>Cytokeratin-8</td><td>Developmental Studies Hybridoma Bank (DSHB), (RRID: AB_531826)&nbsp;</td><td>Supernatant Troma1</td> <td>(1:50, przechowywać w 4&deg; C)</td></tr> <tr><td>Nożyczki preparacyjne (grube)</td> Nożyczki do preparowania <td>Roboz</td><td>RS-5619</td><td></td></tr><tr><td>(drobne)</td> <td>Moria</td><td>MC19B</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anty-Rabbit IgG (H + L) Wysoce adsorbowane krzyżowo przeciwciało wtórne, Alexa Fluor 488</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A21206</td> <td>(1:500)</td></tr> <tr><td>Osioł anty-królik, Alexa Fluor&reg; 555</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A31572</td> <td>(1:500)</td></tr><tr><td>DyLight&trade; 405 AffiniPure Fab Fragment bydlęcy anty-kozi IgG</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>805-477-008</td><td>(1:500)</td></tr><tr><td>Fluoromount G</td><td>Southern Biotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>Szkiełka</td><td>szklane Fisher Scientific (zjeżdżalnie Superfrost Plus Miscroscope)</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>Kozia anty-Car4</td><td>R& D Systems&nbsp;</td><td>AF2414</td><td>(1:500)</td></tr><tr><td>Identyfikator&nbsp;</td><td>Płaszczyzna bitowa&nbsp;</td>oprogramowanie <td></td><td>do analizy obrazu oparte na</td></tr><tr><td>pikselach Neurolucida 360 + Explorer</td><td>MBF Biosciences</td><td>Oprogramowanie</td><td></td>do analizy obrazów wektorowych 3D</tr><tr><td>Normalna surowica osła</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Normalna surowica królika&nbsp;</td><td>Equitech-Bio, Inc</td><td>SR30</td><td></td></tr><tr><td>Olympus FV1000</td><td></td> <td>(laser multiargonowy o długościach fal 458, 488, 515 i dodatkowe lasery HeNe emitujące 543 i 633)</td><td></td></tr> <tr><td>Paraformaldehyd</td><td></td><td>EMD PX0055-3</td><td>4% w 0,1 M PB</td></tr><tr><td>Królik anty-dsRed</td><td>Living Colors DsRed Przeciwciało poliklonalne; Clontech Clontech Laboratories, Inc. (632496)</td><td>632496</td><td>(1:500)</td></tr><tr><td>Królik anty-PLC&beta; 2&nbsp;</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>Cat# sc-206</td><td>(1:500)</td></tr><tr><td>Fosforan sodu dwuzasadowy bezwodny</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP332-500</td><td></td></tr><tr><td>Monopodstawowy fosforan sodu</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP330-500</td><td></td></tr><tr><td>alkohol tert-amylowy</td><td>Aldrich Chemical Company</td><td>8.06193</td><td></td></tr><tr><td>Formy tkankowe</td><td>Mikroskopia elektronowa Nauki</td><td>70180</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek&reg; &nbsp;O.C.T. Compound</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>BIO-RAD</td><td>#161-0407</td><td></td></tr><tr><td>Zenon&trade; Alexa Fluor&handel; 555 Zestaw do etykietowania IgG królika</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Z25305</td><td>Postępuj zgodnie z instrukcjami zestawu&nbsp;</td></tr></tbody></table>

barwienie całego wierzchu, wizualizacja i analiza grzybokształtnych, obwodowych i podniebienia kubków smakowych

Whole-Mount Staining, Visualization, and Analysis of Fungiform, Circumvallate, and Palate Taste Buds

Kubki smakowe to zbiory komórek przekazujących smak, wyspecjalizowanych w wykrywaniu podzbiorów bodźców chemicznych w jamie ustnej. Te transdukujące komórki komunikują się z włóknami nerwowymi, które przenoszą tę informację do mózgu. Ponieważ komórki przenoszące smak nieustannie umierają i są wymieniane przez całe dorosłe życie, środowisko kubków smakowych jest zarówno złożone, jak i dynamiczne, co wymaga szczegółowych analiz typów komórek, ich lokalizacji i wszelkich fizycznych relacji między nimi. Szczegółowe analizy były ograniczone ze względu na niejednorodność i gęstość tkanki języka, które znacznie zmniejszyły przepuszczalność przeciwciał. Przeszkody te wymagają protokołów sekcji, które skutkują podziałem kubków smakowych na sekcje, tak że pomiary są tylko przybliżone, a relacje komórkowe są tracone. Aby przezwyciężyć te wyzwania, opisane tutaj metody obejmują zbieranie, obrazowanie i analizowanie całych kubków smakowych i poszczególnych końcowych altan z trzech regionów smakowych: brodawek grzybowych, brodawek okołobrzegich i podniebienia. Zbieranie całych kubków smakowych zmniejsza stronniczość i zmienność techniczną i może być wykorzystywane do raportowania liczb bezwzględnych dla takich cech, jak objętość kubków smakowych, całkowite unerwienie kubków smakowych, liczba komórek transdukcyjnych i morfologia poszczególnych końcowych altan. Aby zademonstrować zalety tej metody, w niniejszym artykule przedstawiono porównania objętości kubków smakowych i unerwienia między grzybowatymi i obwodowymi kubkami smakowymi przy użyciu ogólnego znacznika kubków smakowych i etykiety dla wszystkich włókien smakowych. Przedstawiono również przepływ pracy do wykorzystania znakowania genetycznego neuronów smaku przez rzadkie komórki (z oznakowanymi podzbiorami komórek przekazujących smak). Ten przepływ pracy analizuje struktury poszczególnych altan nerwowych smakowych, liczbę typów komórek oraz fizyczne relacje między komórkami za pomocą oprogramowania do analizy obrazu. Razem te procesy robocze zapewniają nowatorskie podejście do przygotowania tkanek i analizy zarówno całych kubków smakowych, jak i pełnej morfologii ich unerwionych altan.

Barwienie nabłonka języka przeciwciałami przeciwko dsRed oraz keratynie-8 (ogólnym markerowi pączków smakowych) pozwoliło na uwidocznienie zarówno całych pączków smakowych, jak i całej ich innowacji u myszy Phox2b-Cre:tdTomato50,51 (Rysunek 3A). Obrazowanie tych pączków smakowych od ich ujść do podstawy pozwoliło uzyskać obrazy w płaszczyźnie x-y o najwyższej rozdzielczości (Rysunek 3A,B...

Ten artykuł opisuje metody przygotowania tkanek, barwienia i analizy całych grzybów, obwodowych i podniebiennych kubków smakowych, które konsekwentnie dają całe i nienaruszone kubki smakowe (w tym włókna nerwowe, które je unerwiają) i utrzymują relacje między strukturami wewnątrz kubków smakowych a otaczającą je brodawką.

Barwienie całego wierzchu, wizualizacja i analiza grzybokształtnych, obwodowych i podniebienia kubków smakowych

Taste buds are collections of taste-transducing cells specialized to detect subsets of chemical stimuli in the oral cavity. These transducing cells ...

Ten całościowy proces preparacji i analizy zapewnia nowatorskie podejście do analizy pełnej morfologii poszczególnych boborów nerwowych smakowych, przekształcania liczby typów komórek i fizycznych relacji między komórkami. Pobranie całego nabłonka językowego pozwala nam zmierzyć bezwzględną liczbę komórek i objętość unerwienia w obrębie całego kubka smakowego. Takie podejście jest dokładniejsze niż oszacowania struktury komórki na podstawie próbkowania z sekcji, co zmniejsza zmienność techniczną.Jest to również pierwsza metoda zapewniająca szczegółową analizę komórek kubków smakowych w odniesieniu do ich unerwienia. Metoda ta może usprawnić badania nad potencjalnymi obwodami w kubkach smakowych, a także nad procesami chorobowymi i chemioterapią, które zakłócają normalne funkcje smaku. W większości tych przypadków nie jest jasne, która struktura lub relacja jest zaburzona, więc utrzymanie wszystkich tych czynników w stanie nienaruszonym pozwala na przeprowadzenie wszystkich analiz w ramach jednego preparatu.Najczęstszym błędem jest próba uniknięcia uszkodzenia nabłonka poprzez niepreparowanie wystarczająco blisko spodu nabłonka. Konieczne jest usunięcie jak największej ilości tkanki znajdującej się pod spodem przed zamrożeniem tkanki w formie tkankowej. Ważne jest również, aby upewnić się, że nabłonek leży płasko na dnie formy tkankowej.Rozpocznij od rozmrożenia i wypłukania języka w 0,1-molowym buforze fosforanowym. Następnie umieść 1/2 przedniego języka zawierającego brodawki grzybowe na szkiełku podstawowym pod mikroskopem preparacyjnym. Użyj kleszczy z końcami i nożyczek preparacyjnych, aby usunąć mięsień i utrzymać tkankę otwartą, gdy nabłonek językowy jest zakrzywiony, zapewniając płaską orientację tkanki, utrzymując ostrza gruboziarnistych nożyczek preparacyjnych równolegle do nabłonka.Wyrzuć brzuszny, niezrogowaciały nabłonek języka, ponieważ nie zawiera on kubków smakowych. Następnie użyj cienkich nożyczek preparacyjnych, aby dokładniej wypreparować spód zrogowaciałego nabłonka. Użyj kleszczyków z końcami, aby umieścić kawałek nabłonka w formie tkankowej i upewnij się, że leży płasko.Następnie dodaj kroplę związku o optymalnej temperaturze cięcia lub OCT do tkanki. Umieść formę tkankową na wcześniej schłodzonej metalowej podstawie pod lunetą sekcyjną, a następnie kontynuuj lekkie stukanie w tkankę kleszczami, aż OCT zamarznie, upewniając się, że tkanka zamarznie tak płasko, jak to możliwe. Po zamrożeniu OCT szybko dodaj dodatkowe OCT i umieść formę w zlewce ze schłodzonym 2-metylobutanem do zamrożenia.Zamontuj formę OCT na kriosacie i pokrój ją na sekcje o grubości 20 mikronów. Zbierz każdy fragment i obejrzyj go pod mikroskopem świetlnym, aby ocenić jego bliskość do podstawy nabłonka. Po ogoleniu tkanki od spodu nabłonka należy rozmrozić nabłonek i przepłukać go dwukrotnie w 0,1 molowym PB na shakerze.Przetnij podniebienie twarde przed połączeniem podniebienia miękkiego i twardego, a następnie oddziel podniebienie miękkie od tkanki leżącej pod spodem, upewniając się, że wszelkie pozostałe fragmenty kości zostały odcięte i usuwając dodatkowe mięśnie i tkankę łączną. Przytrzymaj podniebienie tępo zakończonymi kleszczami i usuń pozostałe gruczoły i usuń tkankę łączną, delikatnie zeskrobując je żyletką. Całe kubki smakowe i całe unerwienie kubków smakowych u myszy Phox2b-Cre TdTomato oznaczono poprzez zabarwienie nabłonka językowego przeciwciałami przeciwko DsRed i keratynie ósmej.Objętość kubków smakowych została zmierzona i nie wykazała korelacji między objętością kubków smakowych a objętością unerwienia ani w obszarach pomiaru grzybotwórczego, ani obwodowego. Podanie małej dawki tamoksyfenu myszom TrkB CreER TdTomato powoduje rekombinację genów i znakowanie niewielkiej liczby neuronów. Pokazano tutaj całą filiżankę smakową poplamioną markerami komórkowymi transdukującymi smak, anhydrazą węglanową cztery i fosfolipazą C beta 2.Ten kubek smakowy ma dwie oznaczone altany końcowe, które są pokazane z kubkiem smakowym usuniętym po zrekonstruowaniu włókien. Użycie oprogramowania do obrazowania opartego na pikselach komórkowych w celu określenia najbliższej bliskości między włóknami nerwowymi a komórkami transdukującymi smak ujawniło, że spośród 19 komórek transdukujących smak, niebieska altana końcowa znajdowała się w odległości 200 nanometrów od jasnoniebieskiej anhydrazy węglanowej cztery plus komórka. Końcowa altana, związana z zielonym śladem, jest pokazana w kolorze magenta i znajduje się w odległości 200 nanometrów zarówno od jasnoniebieskich, jak i ciemnoniebieskich komórek anhydrazy węglanowej cztery plus.Barwienie pełnoziarnistą keratyną ósemką i 5-etynylo-2'deoksyurydyną lub EdU grzybowych kubków smakowych ujawniło, że komórki znakowane EdU były obecne zarówno wewnątrz, jak i na zewnątrz kubków smakowych. Purpurowe i fioletowe jądra obserwuje się poza keratyną osiem plus granica kubka smakowego. Żółte, turkusowe i niebieskie komórki znajdowały się w kubku smakowym.Podczas prób stosowania tego protokołu kluczowe znaczenie mają etapy rozwarstwiania tkanek i zamrażania. Te metody preparacji tkanek można zastosować poprzez barwienie różnych komórek i struktur w celu przeanalizowania relacji zarówno w kubku smakowym, jak i na zewnątrz kubka smakowego, ale w obrębie brodawki. Jest to pierwsza analiza całych altanek smakowych w kubku smakowym, a także ich związków z komórkami transdukującymi smak.Konserwacja i barwienie kilku z tych pierwiastków w jednym preparacie zarówno rozszerza możliwości analizy, jak i udoskonala możliwe pomiary.

whole-mount-staining-visualization-analysis-fungiform-circumvallate

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Wiedza na temat mechanizmów molekularnych leżących u podstaw transdukcji smaku poczyniła ostatnio znaczne postępy, głównie dzięki wykorzystaniu modeli zwierzęcych. Jednakże szeroka rozpiętość czułości i specyficzności smakowej wśród ssaków uzasadnia prowadzenie badań na tkankach ludzkich. Opisujemy technikę biopsji służącą do pobierania żywych komórek smakowych z brodawek języka człowieka.

Technika pobierania brodawek grzybiastych (smakowych) z ludzkiego języka

Naszym celem było opracowanie powtarzalnego protokołu izolacji i długoterminnego utrzymywania kultur komórek ludzkich brodawek smakowych grzybiastych. Komórki z ludzkich brodawek grzybiastych uzyskane drogą biopsji zostały pomyślnie utrzymane w kulturze przez ponad osiem pasażów (12 miesięcy) bez utraty żywotności.

Izolacja i hodowla komórek ludzkich brodawek smakowych grzybiastych

Źródło: Fowler, B. E., et al. Obrazowanie wapnia in vivo reakcji neuronów zwojowych przestępczych myszy na bodźce smakowe. J. Vis. Exp. (2021) Ten film demonstruje protokół dostarczania degustantów do chirurgicznie odsłoniętego zwoju kolankowatego u znieczulonej myszy i wykorzystania fluorescencji GCaMP z mikroskopią epifluorescencyjną do wizualizacji odpowiedzi neuronalnych w czasie rzeczywistym, wspomagając badania nad przetwarzaniem sygnałów smaku obwodowego.

Obrazowanie in vivo odpowiedzi neuronów zwojowych układu nerwowego za pomocą mikroskopii epifluorescencyjnej

Doustna chemorecepcja kwasów tłuszczowych i związek z dietą i preferencjami dotyczącymi tłustych potraw może umożliwić identyfikację mechanizmów związanych z rozwojem otyłości i dlaczego zmiany w diecie mogą być trudne dla wielu osób.

Pomiar doustnych progów kwasów tłuszczowych, percepcji tłuszczu, upodobania do tłustych potraw i gęstości brodawek u ludzi

Tutaj prezentujemy protokół do pomiaru gęstości brodawek grzybowych na podstawie zdjęć cyfrowych. Metoda ta włącza priorytetyzację i obiektywne wskaźniki charakterystyki do oryginalnej pracy opisowej na temat brodawek grzybowatych autorstwa Millera i Reedy'ego (1990).

Protokół Denver Papillae do obiektywnej analizy brodawek grzybiczych

Prezentujemy trzy nowe metody do nauki kodowania smakowego. Posługując się prostym zwierzęciem, Manduca sexta (Manduca), opisujemy protokół preparacji, użycie zewnątrzkomórkowych tetrod do rejestrowania aktywności wielu neuronów receptorów smakowych oraz system dostarczania i monitorowania precyzyjnie wymierzonych impulsów degustacji.

Nowe metody badania kodowania smaku

Tutaj prezentujemy protokół obrazowania na żywo fuzji wtórnego podniebienia myszy za pomocą mikroskopii konfokalnej. Protokół ten może być stosowany w połączeniu z różnymi fluorescencyjnymi liniami myszy reporterowych oraz z inhibitorami szlaków w celu uzyskania wglądu mechanistycznego. Protokół ten może być zaadaptowany do obrazowania na żywo w innych systemach rozwojowych.

Obrazowanie na żywo fuzji wtórnego podniebienia myszy

Tutaj prezentujemy, jak odsłonić kolankowaty ganglion żywej, znieczulonej myszy laboratoryjnej i jak wykorzystać obrazowanie wapnia do pomiaru reakcji zespołów tych neuronów na bodźce smakowe, co pozwala na wielokrotne próby z różnymi stymulantami. Pozwala to na dogłębne porównania, które neurony reagują na które degustacje.

Obrazowanie wapnia in vivo reakcji neuronów zwojowych układu nerwowego myszy na bodźce smakowe

Artykuł przedstawia urządzenie μTongue (mikrofluidyka na języku) do funkcjonalnego obrazowania komórek smaku in vivo poprzez integrację mikrofluidyki z okienkiem obrazowania przyżyciowego na języku.

μTongue: oparta na mikrofluidyce funkcjonalna platforma obrazowania języka in vivo

Podejście do obrazowania wapnia umożliwia rejestrowanie reakcji wywołanych smakiem w mózgach obudzonych muszek, podczas gdy roztwór jest nakładany na labellum. Jako przykład podano pierwotne reakcje smakowe u Drosophila melanogaster, ale protokół ten można dostosować do badania neuronów w dół rzeki lub innych gatunków.

In vivo (in vivo) Obrazowanie wapnia reakcji neuronalnych wywołanych smakiem u dorosłych Drosophila

Poznaj metodę preparowania całych kubków smakowych grzybokształtnych, obwodowych i podniebienia u myszy. Technika umożliwia analizę morfologii, liczby komórek i unerwienia w badaniach neurobiologii smaku.

Barwienie całego wierzchu, wizualizacja i analiza grzybokształtnych, obwodowych i podniebienia kubków smakowych

Przeglądaj więcej filmów