Name: System in vitro do oceny skuteczności trombolitycznej hestotrypsji i leku litycznego (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-06-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 50 s
Description: Poznaj metodę in vitro oceny skuteczności hestotrypsji w leczeniu zakrzepicy żył głębokich. Technika wykorzystuje aktywność bąbelkową do wzmocnienia fibrynolizy i hemolizy w skrzepach krwi.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca została sfinansowana przez National Institutes of Health, Grant R01HL13334. Autorzy chcieliby podziękować dr Kevinowi Haworthowi za pomoc w teście Drabkina oraz dr Viktorowi Bollenowi za wsparcie w opracowaniu protokołu. Autorzy są również wdzięczni dr Adamowi Maxwellowi za jego wskazówki dotyczące projektowania źródła histotrypsji.

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

W proponowanym protokole przedstawiono model ilościowego określenia skuteczności leczenia lizotrypsją. Chociaż kluczowe szczegóły zostały omówione, istnieją pewne krytyczne aspekty, które należy wziąć pod uwagę dla powodzenia tego protokołu. Aktywność enzymatyczna rt-PA ma zależność od temperatury Arrheniusa30. Temperatura jest również czynnikiem wpływającym na prędkość dźwięku w wodzie i tkankach, a zmiany temperatury mogą powodować niewielkie zmiany w geometrii strefy ogniskowej. Dlatego tempera...

Zakrzepica to stan tworzenia się skrzepów w zdrowym naczyniu krwionośnym, które utrudniają krążenie1,2. Żylna choroba zakrzepowo-zatorowa wiąże się z rocznym kosztem opieki zdrowotnej w wysokości 7-10 miliardów dolarów, z 375 000-425 000 przypadków w Stanach Zjednoczonych3. Zatorowość płucna jest niedrożnością tętnicy płucnej i jest najpoważniejszą konsekwencją żylnej choroby zakrzepowo-zatorowej. Głównym źródłem niedrożności płuc jest skrzepliny żył głębokich, głównie z odcinków żył biodrowo-udowych4,5,6. Zakrzepica żył głębokich (DVT) ma nieodłączne następstwa oprócz niedrożności płuc, z długotrwałymi powikłaniami, które skutkują bólem, obrzękiem, owrzodzeniami nóg i amputacjami kończyn7,8,9. W przypadku krytycznych niedrożności, trombolityki kierowane cewnikiem (CDT) są pierwszym podejściem do rekanalizacji naczyń10. Wynik CDT zależy od wielu czynników, w tym wieku skrzepliny, lokalizacji, wielkości, składu, etiologii i kategorii ryzyka pacjenta11. Co więcej, CDT wiąże się z uszkodzeniem naczyń krwionośnych, infekcjami, powikłaniami krwotocznymi i długim czasem leczenia10. Urządzenia nowej generacji mają na celu połączenie trombektomii mechanicznej z trombolitykami (tj. trombektomią farmakomechaniczną)12,13. Stosowanie tych urządzeń obniża dawkę lityczną, co prowadzi do zmniejszenia powikłań krwotocznych i skrócenia czasu leczenia12,13,14 w porównaniu do CDT. Urządzenia te nadal borykają się z problemami związanymi z krwotocznymi skutkami ubocznymi i niepełnym usuwaniem przewlekłych zakrzepów15. W związku z tym potrzebna jest strategia adiuwantowa, która może całkowicie usunąć skrzeplinę przy mniejszych powikłaniach krwotocznych.
Jednym z możliwych podejść jest leczenie trombolityczne wspomagane histotrypsją, określane jako lizotrypsja. Histotripsy to nieinwazyjna metoda leczenia, która wykorzystuje skoncentrowane ultradźwięki do zarodkowania chmur bąbelkowych w tkankach16. Aktywność pęcherzyków jest generowana nie przez jądra egzogenne, ale przez zastosowanie impulsów ultradźwiękowych o napięciu wystarczającym do aktywacji jąder nieodłącznie związanych z tkankami, w tym skrzepu17,18. Mechaniczna oscylacja chmury bąbelkowej nadaje skrzepowi napięcie, rozkładając strukturę na bezkomórkowe szczątki19. Aktywność pęcherzyków hestotrypsji zapewnia skuteczną degradację cofniętych i niecofniętych skrzepów krwi zarówno in vivo, jak i in vitro20,21,22. Wcześniejsze badania wykazały23,24 wykazały, że połączenie histotrypsji i litycznego rekombinowanego tkankowego aktywatora plazminogenu (rt-PA) znacznie zwiększa skuteczność leczenia w porównaniu z samym litykiem lub samą histotrypsją. Przypuszcza się, że dwa podstawowe mechanizmy związane z aktywnością pęcherzyków histotrypsji są odpowiedzialne za poprawę skuteczności leczenia: 1) zwiększona fibrynoliza spowodowana zwiększonym dostarczaniem litów oraz 2) hemoliza czerwonych krwinek w skrzepie. Większość masy skrzepu składa się z czerwonych krwinek24, a zatem śledzenie degradacji erytrocytów jest dobrym substytutem ablacji próbki. Inne utworzone elementy skrzepu są również prawdopodobnie rozpadane pod wpływem aktywności pęcherzyków histotrypsji, ale nie są uwzględniane w tym protokole.
Tutaj przedstawiono podejście laboratoryjne do leczenia zakrzepicy żył głębokich in vitro za pomocą lizotrypsji. Protokół opisuje krytyczne parametry operacyjne źródła histotrypsji, ocenę skuteczności leczenia oraz wskazówki dotyczące obrazu. Protokół obejmuje zaprojektowanie kanału przepływowego naśladującego odcinek żyły biodrowo-udowej i wytwarzanie ludzkich skrzepów krwi pełnej. Procedura eksperymentalna określa umiejscowienie źródła histotrypsji i matrycy obrazowania w celu uzyskania ekspozycji histotrypsji wzdłuż skrzepu umieszczonego w kanale przepływowym. Zdefiniowano odpowiednie parametry insonacji w celu osiągnięcia zakłócenia skrzepu i zminimalizowania aktywności pęcherzyków poza celem. Zilustrowano zastosowanie obrazowania ultrasonograficznego do prowadzenia i oceny aktywności pęcherzyków24. Wskaźniki określające skuteczność leczenia, takie jak utrata masy skrzepu, D-dimer (fibrynoliza) i hemoglobina (hemoliza), są przedstawione23,24,25,26,27. Ogólnie rzecz biorąc, badanie dostarcza skutecznych środków do wykonywania i oceny skuteczności lizotrypsji w leczeniu zakrzepicy żył głębokich.

<table><tbody><tr><td>Arkusze absorpcyjne</td><td>Precyzyjna akustyka</td><td>F28-SMALL-M</td><td>300mm x 300 mm x 10 mm</td></tr><tr><td>Borokrzemianowe pipety Pasteura</td><td>Fisher Scientific</td><td>1367820A</td><td>14,6 cm długości, pojemność 2 ml</td></tr><tr><td>Probówki wirówkowe</td><td>Eppendorf</td><td>22364111</td><td>pojemność 1,5 ml</td></tr><tr><td>Test Drabkina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D5941-6VL</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka</td> <td>do pobieraniaCole-Parmer</td><td>EW-07945-43</td><td>Pojemność 60 ml</td></tr><tr><td>Worki filtracyjne</td><td>McMaster-Carr</td><td>5162K111</td><td>Usuń cząstki o wielkości do 1 mikrona</td></tr><tr><td>Rurka kanału przepływowego</td><td>McMaster-Carr</td><td>5154K25</td><td>Rurka z tworzywa sztucznego EVA wyłożona polietylenem (średnica zewnętrzna: 3/8", średnica wewnętrzna: 1/4"</td></tr><tr><td>Elementy grzejne</td><td>Won Brothers</td><td>HT 300 Tytan</td><td>Tytanowe pręty umieszczone na dnie zbiornika</td></tr><tr><td>Matryca obrazowania</td><td>Element Verasonics</td><td>L11-5v</td><td>128 o czułości od -55 do -49 dB</td></tr><tr><td>Agaroza o niskim żelowaniu</td><td>Millipore Sigma</td><td>A9414</td><td></td></tr><tr><td>Model naczynia</td><td>McMaster-Carr</td><td>5234K98</td><td>Długość 6,6 cm, średnica wewnętrzna 0,6 cm, grubość 1 mm</td></tr><tr><td>Nanoczysta woda</td><td>Barnstead</td><td>Nanopure Diamond</td><td>ASTM typ I, rezystywność 18 Mohm-cm</td></tr><tr><td>Plazma</td><td>Vitalant</td><td>4PF000</td><td>Osocze zamrożone w ciągu 24 godzin</td></tr><tr><td>Czytnik płytek</td><td>Biotek</td><td>Synergy Neo HST Czytnik płytek</td><td>Do oznaczania ilościowego hemoglobiny</td></tr><tr><td>Osłona sondy</td><td>Civco</td><td>610-362</td><td></td></tr><tr><td>Platforma programistyczna</td><td>MATLAB (the Mathworks, Natick, MA, USA)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rekombinowany tkankowy aktywator plazminogenu (rt-PA)</td><td>Aktywaza</td> <td>Genentech</td><td></td></tr><tr><td>Zbiornik</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-07945-43</td><td>Pojemność 60 ml</td></tr><tr><td>Pompa strzykawkowa</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-74900-20</td><td>dołączona do strzykawki do pobierania przepływu w kanale przepływowym z wcześniej ustaloną szybkością</td></tr><tr><td>Przetwornik Ośmioelementowy</td>, eliptyczny przetwornik <td>dostosowany do potrzeb</td><td></td> klienta <td>(oś główna 9 cm, oś mniejsza 7 cm i ogniskowa 6 cm), zasilany przez specjalnie zaprojektowaną i zbudowaną klasę D wzmacniacz i sieć dopasowująca</td></tr><tr><td>System skanowania ultradźwiękowego</td><td>Verasonics</td><td></td><td>Vantage Research System ultrasonograficzny</td></tr><tr><td>Zbiornik na wodę</td><td>Zaawansowane akryle</td><td>C133</td><td>14 x 14 x 12, 1/2"</td></tr></tbody></table>

system in vitro do oceny skuteczności trombolitycznej hestotrypsji i leku litycznego

An In vitro System to Gauge the Thrombolytic Efficacy of Histotripsy and a Lytic Drug

Zakrzepica żył głębokich (DVT) jest globalnym problemem zdrowotnym. Podstawowym podejściem do osiągnięcia rekanalizacji naczyń w przypadku krytycznych przeszkód jest trombolityka kierowana przez cewnik (CDT). Aby złagodzić skutki uboczne i długi czas leczenia związany z CDT, opracowywane są metody adiuwantowe i alternatywne. Jednym z takich podejść jest histotrypsja, skoncentrowana terapia ultradźwiękowa mająca na celu ablację tkanki poprzez zarodkowanie chmury pęcherzykowej. Badania przedkliniczne wykazały silną synergię między histotrypsją a lekami trombolitycznymi w degradacji skrzepów. W niniejszym raporcie przedstawiono metodę laboratoryjną służącą do oceny skuteczności terapii trombolitycznej wspomaganej histotrypsją lub lizotrypsją.
Skrzepy wykonane ze świeżej ludzkiej krwi żylnej zostały wprowadzone do kanału przepływowego, którego wymiary i właściwości akustyczno-mechaniczne naśladują żyłę biodrowo-udową. Kanał był perfundowany osoczem i litycznym rekombinowanym tkankowym aktywatorem plazminogenu. Chmury pęcherzykowe zostały wygenerowane w skrzepie za pomocą zogniskowanego źródła ultradźwięków przeznaczonego do leczenia zakrzepów żył udowych. Zmotoryzowane pozycjonery zostały użyte do przesunięcia ogniska źródłowego na całej długości skrzepu. W każdym miejscu insonacji emisje akustyczne z chmury bąbelkowej były pasywnie rejestrowane i formowane wiązką w celu wygenerowania pasywnych obrazów kawitacyjnych. Wskaźniki mierzące skuteczność leczenia obejmowały utratę masy skrzepu (ogólna skuteczność leczenia) oraz stężenia D-dimerów (fibrynolizacja) i hemoglobiny (hemoliza) w perfuzacie. Istnieją ograniczenia w tym projekcie in vitro, w tym brak środków do oceny skutków ubocznych in vivo lub dynamiczne zmiany szybkości przepływu w miarę lizy skrzepu. Ogólnie rzecz biorąc, konfiguracja zapewnia skuteczną metodę oceny skuteczności strategii opartych na histotrypsji w leczeniu zakrzepicy żył głębokich.

Protokół opisany w niniejszym badaniu przedstawia szczegóły modelowania zakrzepu żylnego, lizotripsji w celu rozbicia zakrzepu oraz obrazowania ultradźwiękowego w układzie in vitro symulującym zakrzepicę żył głębokich (DVT). Przyjęta procedura demonstruje kroki niezbędne do oceny rozbicia zakrzepu pod wpływem połączonego działania rt-PA oraz aktywności chmury pęcherzyków histotripsji. Układ laboratoryjny został zaprojektowany tak, aby naśladować charakterystykę żyły biodrowo-udowej. Rysunek 1A</stron...

Wspomagane przez Histotripsy'ego dostarczanie lityczne lub lizotrypsja są w trakcie opracowywania do leczenia zakrzepicy żył głębokich. Przedstawiono procedurę in vitro mającą na celu ocenę skuteczności tej terapii skojarzonej. Omówiono kluczowe protokoły dotyczące modelu skrzepu, wskazówek obrazowych i oceny skuteczności leczenia.

System in vitro do oceny skuteczności trombolitycznej hestotrypsji i leku litycznego

Deep vein thrombosis (DVT) is a global health concern. The primary approach to achieve vessel recanalization for critical obstructions is ...

Protokół ten zapewnia laboratoryjną metodę oceny skuteczności i mechanizmów działania terapii trombolitycznej wspomaganej histotrypsją lub lizotrypsji, alternatywnego nieinwazyjnego podejścia do leczenia krytycznej zakrzepicy żył głębokich. Technika ta wykorzystuje aktywność pęcherzyków, aby uzyskać dwukierunkowy efekt poprzez zwiększoną fibrynolizację spowodowaną zwiększonym dostarczaniem litów i hemolizą czerwonych krwinek w skrzepie. To stacjonarne podejście do leczenia zakrzepicy żył głębokich ułatwia modelowanie skrzepów krwi, leczenie lizotrypsją i jednoczesne obrazowanie podczas leczenia.Generowanie chmur bąbelkowych, planowanie leczenia i wskazówki dotyczące obrazowania mogą być dalej wykorzystywane do badania leczenia in vitro opartych na histoprypsji innych chorób, takich jak nowotwory nerki i wątroby. Aby skonfigurować źródło histotrypsji, zamontuj źródło w zmotoryzowanym systemie pozycjonowania. Przykryj matrycę obrazowania osłoną sondy i zamocuj matrycę współosiowo w otworze źródła histotrypsji.Podłącz matrycę obrazowania do systemu skanowania ultrasonograficznego i całkowicie zanurz źródło histotrypsji i matrycę obrazowania w zbiorniku. Użyj strzykawki, aby delikatnie usunąć wszelkie pęcherzyki powietrza i użyj matrycy obrazowania i skanera, aby uzyskać odgazowane obrazy wody w trybie B z prędkością 20 klatek na sekundę. Podczas rejestrowania obrazów dostosuj położenie matrycy obrazowania wewnątrz otworu przetwornika konfokalnego, aż chmura bąbelkowa znajdzie się w przybliżeniu w środku okna obrazu i zarejestruj wykrytą lokalizację ogniskową w oknie obrazowania.Następnie przerwij insonację i ustaw napięcie przyłożone do źródła histotrypsji na zero. Aby przygotować skrzep do analizy, użyj szczypiec, aby przeciąć zapieczętowany koniec pipety zawierającej skrzep i pozwól, aby skrzep i surowica wsunęły się na szalkę Petriego. Użyj skalpela, aby przyciąć skrzep do długości jednego centymetra i użyj chusteczki czyszczącej, aby delikatnie osuszyć przeciętą część, aby usunąć nadmiar płynu.Użyj pęsety, aby ostrożnie umieścić część skrzepu na wadze i zapisać wagę. Następnie ręcznie podnieś kanał przepływowy z odgazowanego zbiornika wody odwróconej osmozy i wyjmij model naczynia z kanału. Użyj pęsety, aby ostrożnie umieścić skrzep w naczyniu modelowym, nie uszkadzając skrzepu i przymocuj naczynie do kanału przepływowego.Obniż kanał przepływu do zbiornika tak, aby bliższy koniec stopnia w stosunku do zbiornika był niski w porównaniu ze stroną dystalną i użyj pipety, aby dodać 30 mikrolitrów osocza ogrzanego o temperaturze 37 stopni Celsjusza do zbiornika. Monitoruj temperaturę zbiornika na wodę, aż osiągnie co najmniej 36 stopni Celsjusza i za pomocą pipety dodaj 80,4 mikrogramów rt-PA do zbiornika osocza. Aby zalać kanał przepływowy, użyj pompy strzykawkowej, aby pobrać plazmę ze zbiornika do kanału, aż model naczynia zostanie napełniony.Następnie ręcznie wypoziomuj model naczynia, aby upewnić się, że w naczyniu modelu nie ma pęcherzyków powietrza, jak widać w oknie obrazowania. Aby zaplanować ścieżkę dla źródła histotrypsji i matrycy obrazowania w celu uzyskania jednolitej ekspozycji na histotrypsję wzdłuż długości skrzepu, użyj skryptu obrazowania, aby użyć zmotoryzowanych pozycjonerów do wyrównania matrycy obrazowania równolegle do długości skrzepu i upewnij się, że w naczyniu nie ma pęcherzyków powietrza. Użyj zmotoryzowanych pozycjonerów, aby wyrównać matrycę obrazowania tak, aby płaszczyzna obrazowania była równoległa do przekroju poprzecznego skrzepu.Korzystając z okienka obrazowania jako przewodnika, przesuń źródło histotrypsji na bliższy koniec skrzepu, w stosunku do zbiornika. Aby określić ścieżkę insonacji wzdłuż długości skrzepu, ustaw punkty orientacyjne wzdłuż długości skrzepu w odstępach co pięć milimetrów. Przed sfinalizowaniem każdego punktu trasy, test ogniowy impulsów ze źródła histotrypsji o tych samych parametrach insonacji, jak pokazano, ale z ogólną ekspozycją zmniejszoną do 10 całkowitych impulsów.W każdym punkcie trasy zapisz pozycje silnika za pomocą poleceń wyznaczonych przez producenta. Aby oczyścić skrzep na całej jego długości zgodnie ze ścieżką określoną na etapie obróbki wstępnej, należy ustawić pompę strzykawkową na 0,65 mililitra na minutę i poczekać, aż menisk osocza zacznie się poruszać. Interpoluj ścieżkę leczenia z krokami pośrednimi między ustalonymi punktami trasy o ustalonym rozmiarze kroku i użyj pozycjonerów, aby przesunąć źródło histotrypsji w każdym miejscu ścieżki, używając pierwotnie ustawionych parametrów insonacji.Następnie utwórz skrypt, aby ustawić matrycę obrazowania tak, aby uzyskała obraz skrzepu i modelu naczynia w trybie B na kilka sekund przed zastosowaniem impulsu histotrypsji w każdej lokalizacji. Następnie zastosuj impuls histotrypsji w każdym punkcie trasy, uzyskując emisje akustyczne w skrypcie, aby po analizie utworzyć pasywne obrazy kawitacji. Użyj okna obrazowania, aby zobrazować aktywność pęcherzyków podczas aplikacji impulsu histotrypsji w każdym miejscu ścieżki.Po analizie ręcznie podnieś modelowe naczynie ze zbiornika na wodę, aby spuścić perfuzat grawitacyjnie, a następnie użyj pompy strzykawkowej, aby pobrać roztwór plazmy z kanału przepływowego, aby umożliwić zebranie całego perfuzatu w małej zlewce. Odłącz model naczynia i usuń skrzep. Następnie przetrzyj skrzep tkankami laboratoryjnymi i zważ skrzep, aby ocenić utratę masy skrzepu.Po przyłożeniu wystarczającego napięcia do źródła histotrypsji, w obszarze ogniskowym przetwornika generowana jest chmura pęcherzykowa, która jest wizualizowana za pomocą obrazowania ultradźwiękowego. Położenie ogniskowej jest definiowane jako środek chmury bąbelkowej. Ten kontrolny perfuzat skrzepu wystawionego na działanie samego osocza i ten perfuzat skrzepu poddanego lizotrypsji zastosowano do oceny zawartości hemoglobiny i D-dimerów, jak wykazano.Zmienność stężenia hemoglobiny można określić ilościowo za pomocą absorbancji optycznej. W tym przypadku skrzep można uwidocznić w modelowym naczyniu za pomocą obrazowania w trybie B przed ekspozycją na histotrypsję w celu określenia pozycji skrzepu do segmentacji obrazu kawitacji pasywnej. Jak potwierdza ten pasywny obraz kawitacji zarejestrowany jednocześnie z obrazem skrzepu w trybie B, energia akustyczna jest zawarta głównie w skrzepie podczas ekspozycji na histotrypsję.W próbkach narażonych na histoprpsję zakłócenie jest głównie ograniczone do centrum skrzepu, co jest zgodne z obserwowanymi lokalizacjami aktywności pęcherzyków śledzonymi za pomocą pasywnego obrazowania kawitacyjnego. Wraz z dodatkiem litu utrata masy następuje również w regionach bliżej obrzeży skrzepu. Alternatywnie, liposomy ekogeniczne zawierające rt-PA mogą być stosowane zamiast ogólnoustrojowego dostarczania rt-PA, aby umożliwić ocenę celowego dostarczania leku do skrzepu.Lizotrypsja stanowi alternatywne nieinwazyjne podejście do leczenia wielu chorób. Ten protokół in vitro umożliwia ocenę skuteczności leczenia i jego potencjalnego powodzenia w zastosowaniu in vivo.

an-vitro-system-to-gauge-thrombolytic-efficacy-histotripsy-lytic

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioinżynieria

Opracowaliśmy model wycinka mózgu, który może być wykorzystany do zbadania mechanizmów molekularnych związanych z uszkodzeniem mózgu za pośrednictwem ekscytotoksyczności. Ta technika generuje żywotną dojrzałą tkankę mózgową i zmniejsza liczbę zwierząt wymaganych do eksperymentów, jednocześnie utrzymując częściowo nienaruszone obwody neuronalne, interakcje komórkowe i przedziały postsynaptyczne.

Ekscytotoksyczna stymulacja mikrowycinków mózgu jako model udaru in vitro

W tym manuskrypcie przedstawiono techniki eksperymentalne, w tym przygotowanie krwi, mikroskopię konfokalną i analizę szybkości lizy, w celu zbadania różnic morfologicznych między normalnymi i nieprawidłowymi strukturami skrzepu spowodowanymi stanami chorobowymi.

Techniki eksperymentalne i obrazowe do badania struktur skrzepów fibryny w stanach prawidłowych i chorobowych

Modele udaru zakrzepowo-zatorowego są kluczowymi narzędziami do optymalizacji terapii rekanalizacyjnej. W tym miejscu przedstawiamy mysi model udaru zakrzepowego oparty na przejściowym niedotlenieniu niedotlenienia i niedokrwieniu mózgu (tHI), które wywołuje zakrzepicę i zawał oraz pozytywnie reaguje na fibrynolizację za pośrednictwem tkankowego aktywatora plazminogenu (tPA) w oknie terapeutycznym podobnym do tych u pacjentów po udarze.

Model udaru zakrzepowego oparty na przejściowym niedotlenieniu-niedokrwieniu mózgu

Prezentujemy model choroby naczyniowej in vitro do zbadania interakcji krwi pełnej ze śródbłonkiem pochodzącym od pacjenta. System ten pozwala na badanie właściwości trombogennych pierwotnych komórek śródbłonka w różnych okolicznościach. Metoda ta jest szczególnie przydatna do oceny trombogenności in situ i terapii przeciwzakrzepowej w różnych fazach krzepnięcia.

Model choroby mikroprzepływowej in vitro do badania interakcji krew pełna - śródbłonek i dynamiki zakrzepów krwi w czasie rzeczywistym

Prezentowany tutaj jest protokół dla ustandaryzowanego modelu pętli hemodynamicznej in vitro. Model ten pozwala na przetestowanie hemokompatybilności probówek perfuzyjnych lub stentów naczyniowych zgodnie z normą ISO (Międzynarodowa Organizacja Normalizacyjna) 10993-4.

Model pętli hemodynamicznej in vitro do badania kompatybilności hemocytologicznej i aktywacji komórek gospodarza naczyniowych wyrobów medycznych

Tradycyjne modele udaru fotozakrzepowego (PTS) głównie indukują gęste agregaty płytek krwi o wysokiej odporności na tkankowe leczenie aktywatorem plazminogenu (tPA)-litycznym. Tutaj zmodyfikowany mysi model PTS jest wprowadzany przez jednoczesne wstrzykiwanie trombiny i barwnika światłoczułego w celu fotoaktywacji. Model PTS wzmocniony trombiną wytwarza mieszane skrzepy płytkowo-fibrynowe i jest bardzo wrażliwy na trombolizę tPA.

Wzbogacony fibryną i wrażliwy na tPA model udaru fototrombotycznego

Testy trombolizy in vitro często miały trudności z odtworzeniem warunków in vivo, czy to w trawionej skrzeplinie, czy w środowisku, w którym tromboliza zachodzi. W tym artykule badamy, w jaki sposób sprzężenie pętli Chandlera i testu fluorometrycznej fibrynolizy przepływowej w czasie rzeczywistym (RT-FluFF) jest wykorzystywane do monitorowania lizy skrzepów ex vivo o wysokiej wierności.

Śledzenie fibrynolizy skrzepów krwi pełnej uformowanych w pętli Chandlera pod wpływem przepływu ścinającego w modelu trombolizy in vitro

Prezentujemy protokół laboratoryjny do wywoływania zakrzepicy w urządzeniach wspomagających komorowe (VAD) w ramach recyrkulacyjnej platformy testowej. Metoda ta służy do identyfikacji zakrzepowych punktów zapalnych na ścieżce przepływu krwi i może pomóc w poprawie trombooporności przed badaniami przedklinicznymi na modelach zwierzęcych.

In vitro Test na zakrzepicę dla urządzeń wspomagających pracę komór

Aby zasymulować udar zakrzepowo-zatorowy, do tętnicy środkowej mózgowej wstrzykiwano zatory przygotowane z heterologicznego krwi szczura, a następnie podano trombolizę ogólnoustrojową w celu reanalizacji. Ta wersja modelu jest zoptymalizowana do pracy w sieci wielolaboratoryjnej i wspiera testowanie wielu kandydatów na terapię.

Wielolaboratoryjny model udaru zakrzepowo z trombolizą Stroke Preclinical Assessment Network Stroke: TE-MCAo

Praca ta opisuje test mikrofluidyczny, który wykorzystuje naprężenie ścinające do wywołania powstawania zakrzepów we krwi i charakteryzuje zakrzep za pomocą wielu wymiarów odczytu. Test pozwala mierzyć tendencję protrombotyczną próbek krwi, dzięki czemu jest przydatny w diagnozowaniu chorób, odkrywaniu leków oraz podstawowych badaniach mechanistycznych związanych z zakrzepicą.

Testy profilowania zakrzepów: platforma oparta na mikrofluidyce do kompleksowej charakterystyki trombogenezy biomechanicznej

Protokół ten opisuje test hemostazy Nijmegen, który umożliwia jednoczesne, czasowo rozdzielcze pomiary generacji trombiny i plazminy, zapewniając zintegrowaną ocenę krzepnięcia i fibrynozy. Celem testu jest poprawa charakterystyki równowagi hemostatycznej w badaniach i środowiskach klinicznych wykraczających poza zakresu konwencjonalnych testów hemostatycznych.

Test hemostazy Nijmegen: Jednoczesny pomiar fluorogenny generacji trombiny i plazminy w pojedynczej studni

Poznaj metodę in vitro oceny skuteczności hestotrypsji w leczeniu zakrzepicy żył głębokich. Technika wykorzystuje aktywność bąbelkową do wzmocnienia fibrynolizy i hemolizy w skrzepach krwi.

System in vitro do oceny skuteczności trombolitycznej hestotrypsji i leku litycznego

Przeglądaj więcej filmów