Wykorzystanie zarodka kurzego jako potężnego narzędzia w ocenie kardiotoksyczności rozwojowej

Witam wszystkich. Nazywam się Qixiao Jiang i jestem profesorem nadzwyczajnym na Wydziale Toksykologii Szkoły Zdrowia Publicznego na Uniwersytecie Qingdao. W imieniu mojej grupy badawczej zamierzam przedstawić korzyści płynące z wykorzystania zarodka kurzego w procesie oceny naszej kardiotoksyczności.

Zarodek kurczaka to klasyczny model rozwojowy, który ma wiele zalet, takich jak łatwa manipulacja, wysoka dostępność, zamknięty niezależny system i tak dalej. Praca z wieloma zanieczyszczeniami środowiska, takimi jak fenolowy kwas garbnikowy. Spaliny z silników wysokoprężnych, szczególnie materia na nanorurkach węglowych.

W laboratorium opracowaliśmy wiele metod ekspozycji, ale w przypadku większych przypadków rutynowo przeprowadza się również oceny funkcjonalne. W tym filmie pokażę Wam szczegóły dotyczące metod ekspozycji i metod morfologicznej oceny funkcjonalnej. Jeśli jesteś zainteresowany, skontaktuj się z nami.

Dziękuję. Oto nasze metody ekspozycji, które mogę Ci przedstawić. Pierwszą metodą, którą zamierzam przedstawić, jest wstrzyknięcie komórki powietrznej, w której bezpośrednio wstrzykniesz do komórki powietrznej.

Oczyść powierzchnię jaj roztworem polijodku. Jest to dostępny w handlu roztwór polijodku, rozcieńczony wodą dejonizowaną w 1/5. A następnie suszę skorupkę jajka bibułą, bez szorowania.

Jest to ważne, ponieważ szorowanie spowoduje zerwanie powłoki warstwy ochronnej na zewnątrz skorupy. Oczyściłem wszystkie jajka w ciemnym pokoju i zaznacz komórkę powietrzną ołówkiem. Wyklucz jajka z pęknięciami na skorupce.

Wyklucz również jaja z komórkami powietrznymi z boku. Jeśli ma końcówkę, jest bardzo mało prawdopodobne, że wyklują się normalnie. Zdezynfekuj obszar komórki powietrznej, a także metalową sondę, 75% alkoholem.

Wytrzyj je do sucha, a następnie wywierć mały otwór w środku obszaru komórki powietrznej za pomocą sondy. Nie wkładaj sondy głęboko w komórkę powietrzną. Zamiast tego rozbij skorupę tylko końcówką sondy.

Jeśli otwór nadal nie jest wystarczająco duży, ponownie rozbij skorupę w pobliżu istniejącego otworu, aż będzie wystarczająco duża, aby umożliwić włożenie końcówki. Włóż końcówkę pipety do otworu tak, aby końcówka dotykała wewnętrznej membrany. Powoli wstrzykiwać mieszaninę i przytrzymać ją w tym miejscu przez co najmniej 10 sekund.

Ma to na celu umożliwienie pełnego dozowania dozowanego oleju. A następnie usuń końcówkę. Teraz uszczelnij otwór pędzlem i kroplą stopionej parafiny.

Uważaj, aby nie kapać stopionej parafiny na pamięć wewnętrzną. Po zamknięciu umieść jaja w inkubatorze, aż osiągną pożądane stadium embrionalne. Drugą, metodą, którą zamierzam przedstawić, jest mikroiniekcja.

Przede wszystkim jaja należy oczyścić i obchodzić się z nimi zgodnie z opisem w sekcji dotyczącej wtrysku powietrza. Ta procedura musi być wykonywana w wysterylizowanym kapturze. Wysterylizuj obszar komórek powietrznych i narzędzia acetonem.

Wywierć mały otwór w środku obszaru komórki powietrznej za pomocą metalowej sondy. Nie wkładaj sondy głęboko w komórkę powietrzną, ponieważ może to spowodować uszkodzenie pamięci wewnętrznej. Następnie użyj tego samego procesu, aby ostrożnie powiększyć otwór, aż średnica wyniesie około dwóch milimetrów.

Może to pozwolić na potwierdzenie proporcji pamięci wewnętrznej. Następnie załaduj roztwór do mikrowtryskiwacza i ostrożnie włóż igłę przez otwór do wewnętrznej membrany na łączną odległość około trzech milimetrów. Delikatnie dozować roztwór, a następnie wyjąć igłę.

Igła powinna być ustawiona jak najbardziej prostopadle. Cienko uszczelnij otwór małym kawałkiem taśmy. Całkowicie zakryj otwór, aby zapobiec odwodnieniu i śmierci zarodka podczas kolejnej inkubacji.

Trzecią metodą, którą zamierzam przedstawić, jest infuzja komórek powietrznych, w której wkraplacz zanieczyszczenie gazowe do komórki powietrznej. Oczyść jaja i obchodź się z nimi zgodnie z opisem w sekcji dotyczącej wstrzykiwania komórek powietrznych.

A potem możesz czytać z jaj aż do 17 dnia embrionalnego. Z jajami należy obchodzić się w 17 dniu embrionalnym, aby oznaczyć obszar komórek powietrznych. W 18 dniu embrionalnym wyjmij jaja z inkubatora, wysterylizuj obszar komórek powietrznych i narzędzia acetonem.

A następnie ostrożnie wywierć dwa małe otwory po dwóch stronach komórki powietrznej. Jeden z nich służy do wstrzykiwania gazu lub aerozolu. Drugi służy do rozszerzania naszego powietrza.

Dokładnie kontroluj wielkość otworów, tak aby bok otworu iniekcyjnego był wystarczający tylko do wprowadzenia igły cewnika, natomiast średnica otworu rozszerzającego się powinna być nieco większa. Około jednego milimetra średnicy. To jest worek na próbki, którego używamy do przechowywania docelowego gazu lub aerozolu.

Możesz zastąpić go dowolnym urządzeniem, którego używasz. Delikatnie wlej 10 ml gazu lub aerozolu do strzykawki. A następnie ostrożnie przymocuj strzykawkę do naszej igły cewnika za pomocą wewnętrznego pilota igły, aby była miękka.

Delikatnie wprowadzić igłę cewnika do otworu infuzyjnego. Gdy już się tam znajdzie, dociśnij igłę cewnika. Ma to na celu zminimalizowanie wycieku z miejsca wstrzyknięcia.

Drugi palec można umieścić wokół otworu wydalającego w celu potwierdzenia infuzji. Jeśli napar wykonasz delikatnie, przepływ powietrza z otworu wydalniczego powinien być łatwo wyczuwalny. To jest pierwotne powietrze w komórce powietrznej, które jest wydmuchiwane.

Po zakończeniu naparu należy natychmiast uszczelnić oba otwory. Te taśmy i jaja wracają do inkubatora. Mogę przedstawić nasz proces oceny punktów końcowych.

W pełni znieczulić zwierzęta pentobarbitalem 33 mg/kg. Wtrysk IP testowany przez otwarcia. Następnie umieść kurczaki na stole operacyjnym.

Wysterylizuj obszar brzucha i elektrody etanolem. Następnie wprowadź dwie elektrody igłowe z dwóch stron brzucha podciągle. Upewnij się, że igły nie wchodzą do jamy brzusznej, lekko unosząc skórę.

I włóż igłę stamtąd. Po włożeniu ostrożnie popchnąć igłę do przodu, aż dotrze do boku jamy klatki piersiowej. Upewnij się, że igła nie wchodzi głęboko w ciało ani nie wystaje ze skóry.

Następnie wykonaj pomiary za pomocą przyrządu elektrokardiograficznego. Można również korzystać z innych instrumentów seminaryjnych zdolnych do EKG. Jest to nasza druga metoda oceny punktu końcowego, która polega na mapowaniu dla Motrin.

Jest to przekrój serca na drodze HME. To jest prawa komora, którą będziemy mierzyć. Aby to zrobić, używamy dwóch linijek.

Linijka 1 i linijka 2. Teraz po prostu kopiujemy linijkę na ekran i zmieniamy jej rozmiar do odpowiedniego rozmiaru, a następnie obracamy. I przesuwamy go tak, aby dwa końce linii poziomej spoczywały na 2 końcach 3 ścian prawej komory.

A teraz mamy siedem linii pomiarowych, które przechodzą przez ścianę naszych trzech prawych komór. Teraz kopiujemy również linijkę pomocniczą do obrazu. Zmieniamy również nieco jego rozmiar, obracamy i zastępujemy, aby był umieszczony podobnie.

Ta pozioma linia biegnie równolegle do zewnętrznej ściany prawej komory. A prostopadła przechodziłaby przez punkt, w którym linie istoty białej linijki stykają się z wewnętrzną ścianą lub prawą komorą. A następnie wykonujemy kropki pomiarowe, aby można je było później zmierzyć za pomocą obrazu J. Powtarzamy ten proces 7 razy na próbkę, tak aby nasz reprezentatywny pomiar prawej komory.

Pokażę Ci podsumowanie obecnych wyników. Jest to wstrzyknięcie PFOA do komórki jajowej przed inkubacją i można zauważyć, że wraz ze wzrostem stężenia LPF w surowicy skutecznie wzrosło. Zgodnie z demonstracją, skutecznością mikroiniekcji.

Widać, że A to kontrola, a B to miejsce, w którym wstrzyknięto białko q wyrażające się w doskonałej fluorescencji. Widać silną fluorescencję. I to jest demonstracja skuteczności naparu z nabłonka.

Widać, że po infuzji zaobserwowano dramatyczne zmiany światłowodowe w tkance mięśnia sercowego. Porządku. Widać też, że odstępy R-R kurczaków wylęgowych wynoszą 0, 1 i 2 tygodnie. Znacząco zmieniło się to również po infuzji ze spalinami z silników Diesla.

Wskazując, że bierzesz pod uwagę to, tę metodę. Tutaj również widać, że skuteczność naparu z nabłonka w tym przykładzie. można zauważyć, że prawa komora serca skutecznie zwiększyła się po nasyceniu aerozolem ze spalinami z silników Diesla.

I oczywiście również tutaj używamy metod histomorfometrycznych. Po prostu pokazujemy ci. Jest to dość skuteczne. Porządku.

To są wszystkie metody, które zamierzam Ci przedstawić. Mam nadzieję, że ułatwi to innym ludziom pracę z zarodkiem kurzym jako potężnym narzędziem badawczym w toksykologii rozwojowej. Miłego dnia.