Name: Techniki obchodzenia się w celu zmniejszenia stresu u myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-25T14:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: Poznaj technikę 3D-handling dla zmniejszenia stresu u myszy w badaniach naukowych. Ta metoda poprawia dobrostan zwierząt i zwiększa powtarzalność wyników w porównaniu do chwytania za ogon.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy dziękują Komitetowi ds. Opieki nad Zwierzętami CAMH za wsparcie tej pracy, a także opiekunom zwierząt CAMH, którzy dostarczyli obszernych informacji zwrotnych na temat użyteczności procedury, motywując do przeprowadzenia opisanych eksperymentów i przedłożenia szczegółowego protokołu innym użytkownikom. Praca ta została częściowo sfinansowana ze środków CAMH BreakThrough Challenge, przyznanego TP, oraz ze środków wewnętrznych CAMH.

<ol><li>Deacon, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Housing%2C+husbandry+and+handling+of+rodents+for+behavioral+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Housing, husbandry and handling of rodents for behavioral experiments.</a> Nature Protocols. 1 (2), 936(2006).</li>
<li>Bryda, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Mighty+Mouse%3A+the+impact+of+rodents+on+advances+in+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Missouri+Medicine%22%5BJournal%5D)">The Mighty Mouse: the impact of rodents on advances in biomedical research.</a> Missouri Medicine. 110 (3), 207-211 (2013).</li>
<li>Martic-Kehl, M., Ametamey, S., Alf, M., Schubiger, P., Honer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+inherent+variability+and+experimental+parameters+on+the+reliability+of+small+animal+PET+data%5BTitle%5D)+AND+%22EJNMMI+Research%22%5BJournal%5D)">Impact of inherent variability and experimental parameters on the reliability of small animal PET data.</a> EJNMMI Research. 2 (1), 26(2012).</li>
<li>Howard, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+Variability%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Control of Variability.</a> ILAR Journal. 43 (4), 194-201 (2002).</li>
<li>Toth, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+the+cage+environment+on+rodent+physiology+and+behavior%3A+Implications+for+reproducibility+of+pre-clinical+rodent+research%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">The influence of the cage environment on rodent physiology and behavior: Implications for reproducibility of pre-clinical rodent research.</a> Experimental Neurology. 270, 72-77 (2015).</li>
<li>Golini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Non-invasive+Digital+Biomarker+for+the+Detection+of+Rest+Disturbances+in+the+SOD1G93A+Mouse+Model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A Non-invasive Digital Biomarker for the Detection of Rest Disturbances in the SOD1G93A Mouse Model of ALS.</a> Frontiers in Neuroscience. 14 (896), (2020).</li>
<li>Singh, S., Bermudez-Contreras, E., Nazari, M., Sutherland, R. J., Mohajerani, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-cost+solution+for+rodent+home-cage+behaviour+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Low-cost solution for rodent home-cage behaviour monitoring.</a> PLoS One. 14 (8), 0220751(2019).</li>
<li>Stewart, K., Schroeder, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+Handling+and+Restraint+Techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Rodent Handling and Restraint Techniques.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2021).</li>
<li>Hurst, J. L., West, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taming+anxiety+in+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Taming anxiety in laboratory mice.</a> Nature Methods. 7 (10), 825-826 (2010).</li>
<li>Gouveia, K., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+practicality+of+using+non-aversive+handling+methods+to+reduce+background+stress+and+anxiety+in+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Improving the practicality of using non-aversive handling methods to reduce background stress and anxiety in laboratory mice.</a> Scientific Reports. 9 (1), 20305(2019).</li>
<li>Gouveia, K., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimising+reliability+of+mouse+performance+in+behavioural+testing%3A+the+major+role+of+non-aversive+handling%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Optimising reliability of mouse performance in behavioural testing: the major role of non-aversive handling.</a> Scientific Reports. 7, 44999(2017).</li>
<li>Ghosal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+handling+limits+the+impact+of+stress+on+metabolic+endpoints%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Mouse handling limits the impact of stress on metabolic endpoints.</a> Physiology & Behavior. 150, 31-37 (2015).</li>
<li>Wahlsten, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+data+from+different+labs%3A+lessons+from+studies+of+gene-environment+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Different data from different labs: lessons from studies of gene-environment interaction.</a> Journal of Neurobiology. 54 (1), 283-311 (2003).</li>
<li>Nature Neuroscience. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Troublesome+variability+in+mouse+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Troublesome variability in mouse studies.</a> Nature Neuroscience. 12 (9), 1075(2009).</li>
<li>Sensini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+handling+technique+and+handling+frequency+on+laboratory+mouse+welfare+is+sex-specific%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The impact of handling technique and handling frequency on laboratory mouse welfare is sex-specific.</a> Scientific Reports. 10 (1), 17281(2020).</li>
<li>Ghosal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+handling+limits+the+impact+of+stress+on+metabolic+endpoints%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Mouse handling limits the impact of stress on metabolic endpoints.</a> Physiology & Behavior. 150, 31-37 (2015).</li>
<li>Novak, J., Bailoo, J. D., Melotti, L., Rommen, J., Würbel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Exploration+Based+Cognitive+Bias+Test+for+Mice%3A+Effects+of+Handling+Method+and+Stereotypic+Behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">An Exploration Based Cognitive Bias Test for Mice: Effects of Handling Method and Stereotypic Behaviour.</a> PLoS One. 10 (7), 0130718(2015).</li>
<li>Gouveia, K., Waters, J., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Handling+Tutorial%5BTitle%5D)+AND+%22NC3Rs%22%5BJournal%5D)">Mouse Handling Tutorial.</a> NC3Rs. , (2016).</li>
<li>Gouveia, K., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+Mouse+Anxiety+during+Handling%3A+Effect+of+Experience+with+Handling+Tunnels%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Reducing Mouse Anxiety during Handling: Effect of Experience with Handling Tunnels.</a> PLoS One. 8 (6), 66401(2013).</li>
<li>Henderson, L. J., Smulders, T. V., Roughan, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+obstacles+preventing+the+uptake+of+tunnel+handling+methods+for+laboratory+mice%3A+An+international+thematic+survey%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Identifying obstacles preventing the uptake of tunnel handling methods for laboratory mice: An international thematic survey.</a> PLoS One. 15 (4), 0231454(2020).</li>
<li>Percie Du Sert, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ARRIVE+guidelines+2.0%3A+Updated+guidelines+for+reporting+animal+research%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Biology%22%5BJournal%5D)">The ARRIVE guidelines 2.0: Updated guidelines for reporting animal research.</a> PLOS Biology. 18 (7), 3000410(2020).</li>
<li>Golde, W. T., Gollobin, P., Rodriguez, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid%2C+simple%2C+and+humane+method+for+submandibular+bleeding+of+mice+using+a+lancet%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">A rapid, simple, and humane method for submandibular bleeding of mice using a lancet.</a> Lab Animal. 34 (9), 39-43 (2005).</li>
<li>Guilloux, J. P., Seney, M., Edgar, N., Sibille, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+behavioral+z-scoring+increases+the+sensitivity+and+reliability+of+behavioral+phenotyping+in+mice%3A+relevance+to+emotionality+and+sex%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Integrated behavioral z-scoring increases the sensitivity and reliability of behavioral phenotyping in mice: relevance to emotionality and sex.</a> Journal of Neuroscience Methods. 197 (1), 21-31 (2011).</li>
<li>LaFollette, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Animal+Welfare+Meets+Human+Welfare%3A+A+Cross-Sectional+Study+of+Professional+Quality+of+Life%2C+Including+Compassion+Fatigue+in+Laboratory+Animal+Personnel%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Laboratory Animal Welfare Meets Human Welfare: A Cross-Sectional Study of Professional Quality of Life, Including Compassion Fatigue in Laboratory Animal Personnel.</a> Frontiers in Veterinary Science. 7 (114), (2020).</li>
<li>Sorge, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+exposure+to+males%2C+including+men%2C+causes+stress+and+related+analgesia+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents.</a> Nature Methods. 11 (6), 629-632 (2014).</li>
<li>Bailoo, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Cage+Enrichment+on+Behavior%2C+Welfare+and+Outcome+Variability+in+Female+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Effects of Cage Enrichment on Behavior, Welfare and Outcome Variability in Female Mice.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 12, (2018).</li>
<li>Spangenberg, E. M., Keeling, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+welfare+of+laboratory+mice+in+their+home+environment+using+animal-based+measures+-+a+benchmarking+tool%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Assessing the welfare of laboratory mice in their home environment using animal-based measures - a benchmarking tool.</a> Laboratory Animals. 50 (1), 30-38 (2016).</li>
<li>Theil, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+fighting+in+group-housed+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of fighting in group-housed laboratory mice.</a> Scientific Reports. 10 (1), 16649(2020).</li>
<li>Weber, E. M., Dallaire, J. A., Gaskill, B. N., Pritchett-Corning, K. R., Garner, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggression+in+group-housed+laboratory+mice%3A+why+can%27t+we+solve+the+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Aggression in group-housed laboratory mice: why can't we solve the problem.</a> Lab Animal. 46 (4), 157-161 (2017).</li>
<li>Cloutier, S., Baker, C., Wahl, K., Panksepp, J., Newberry, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Playful+handling+as+social+enrichment+for+individually-+and+group-housed+laboratory+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Animal+Behaviour+Science%22%5BJournal%5D)">Playful handling as social enrichment for individually- and group-housed laboratory rats.</a> Applied Animal Behaviour Science. 143 (2), 85-95 (2013).</li>
<li>Panksepp, J., Burgdorf, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((50-kHz+chirping+%28laughter%3F%29+in+response+to+conditioned+and+unconditioned+tickle-induced+reward+in+rats%3A+effects+of+social+housing+and+genetic+variables%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">50-kHz chirping (laughter?) in response to conditioned and unconditioned tickle-induced reward in rats: effects of social housing and genetic variables.</a> Behavioural Brain Research. 115 (1), 25-38 (2000).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do ujawnienia konfliktu interesów.

To badanie i opracowanie metody opierają się na obserwacji, że techniki obchodzenia się z myszami są nadal pomijane przez społeczność naukową, a niektóre laboratoria nadal niechętnie wdrażają techniki habituacji lub obchodzenia się z nimi w celu zmniejszenia stresu i reaktywności zwierząt przed eksperymentami. Obchodzenie się ze zwierzętami wiąże się z pewnym nakładem czasu, ale zapewnia im korzystne skutki, które mogą przyczynić się do powodzenia przeprowadzanych doświadczeń, i zapobiega konieczności wielokrotnego przep...

Myszy i szczury są niezbędnymi zasobami do badań przedklinicznych1,2 do wielu celów, w tym badań endokrynologicznych, fizjologicznych, farmakologicznych lub behawioralnych2. Z rosnącej liczby badań na zwierzętach wynika, że niekontrolowane zmienne środowiskowe, w tym interakcja z człowiekiem, wpływają na różne wyniki badań biomedycznych3,4,5. Jest to odpowiedzialne za znaczną zmienność obserwowaną w eksperymentach i laboratoriach badawczych4,5, co stanowi poważne zastrzeżenie w badaniach na zwierzętach.
Różne podejścia zostały wdrożone w celu ograniczenia wpływu stresorów środowiskowych i zmniejszenia reaktywności na interakcje międzyludzkie. Na przykład, aby ograniczyć wpływ stresorów środowiskowych, we wszystkich laboratoriach wdrożono standaryzację warunków mieszkaniowych i zautomatyzowane systemy utrzymania6,7. Jeśli chodzi o interakcje z ludźmi, powszechnie stosowane podejścia do obchodzenia się ze zwierzętami i transportu nie uwzględniały dyskomfortu i stresu zwierząt. Na przykład, podnoszenie zwierząt za ogon lub używanie kleszczy8 zwiększa lęk w linii bazowej9,10,11, zmniejsza eksplorację9,12 i znacznie przyczynia się do zmienności międzyosobniczej w obrębie i między badaniami13,14. W rezultacie opracowano inne podejścia, takie jak technika obchodzenia się z kubkiem, która ma zastosowanie do myszy i szczurów. W tym podejściu zwierzęta są "wyjmowane" z klatki i trzymane przez eksperymentatorów rękami tworzącymi cup9,10,11. Inną przydatną alternatywą dla obsługi ogona jest użycie tunelu poliwęglanowego do przenoszenia myszy9,10,15. Takie podejście eliminuje bezpośrednią interakcję między myszą a eksperymentatorem. Zarówno podejście kubkowe, jak i tunelowe wykazało skuteczność w zmniejszaniu zachowań podobnych do lęku i strachu przed eksperymentatorem, które mogą być wyolbrzymione przez awersyjne techniki obsługi, takie jak podnoszenie ogona/obsługa ogona9,10.
Dlatego też, coraz więcej dowodów wskazuje na przydatność właściwej obsługi myszy do zmniejszania zmienności między osobami9,11, oraz poprawy dobrostanu zwierząt10. Jednak wymienione powyżej techniki nadal napotykają na ograniczenia. Technika obchodzenia się z kubkiem została wdrożona z harmonogramami od 10 dni (10 sesji w ciągu 2 tygodni16) do 15 tygodni17, co jest znaczną ilością czasu dla personelu placówki i eksperymentatorów. Dodatkowo, skuteczność obsługi kubka różni się w zależności od strain9, a konwencjonalne obchodzenie się z kubkiem w otwartych dłoniach może prowadzić do tego, że naiwne myszy lub szczególnie nerwowe szczepy będą skakać z ręka9,18. Obsługa tunelu skutkuje bardziej spójnymi i ogólnie szybszymi wynikami w gentling19. Tunele są również wykorzystywane jako wzbogacenie klatek domowych. Pomagają zwierzętom szybko przyzwyczaić się do obchodzenia się z nimi i zapewniają dodatkowe korzyści płynące z wzbogacenia. Obsługa tunelowa ma jednak ograniczenia w przenoszeniu zwierząt między urządzeniami. Co ciekawe, Hurst i West9, oraz Henderson et al.20 wykazali, że stosowanie delikatnego i krótkiego ręcznego obchodzenia się z zwierzętami z tunelu do aparatury nie wpływa na ich fenotyp.
Aby zapewnić alternatywę dla istniejących metod, z osiągalnym przyzwyczajeniem w krótkim czasie, ten artykuł opisuje nową technikę, która rozszerza technikę obsługi kubków, nie wymagając więc specjalnego sprzętu. Podejście to wykorzystuje kamienie milowe do oceny poziomu komfortu, jaki myszy mają w procesie obsługi. Wykazuje skuteczność w zmniejszaniu reaktywności myszy i stresu (na poziomie behawioralnym i hormonalnym), ułatwia rutynowe obchodzenie się z nią i przyczynia się do zmniejszenia zmienności między zwierzętami. Szczegóły tej techniki znajdują się tutaj, a jej skuteczność w zmniejszaniu zachowań podobnych do lęku, poprawie interakcji z eksperymentatorami i ograniczaniu uwalniania obwodowego hormonu stresu (kortykosteronu) wykazano w dwóch oddzielnych badaniach (samce i samice myszy), w porównaniu z technikami obsługi tunelowej (kontrola pozytywna) i technikami obsługi ogona (kontrola negatywna).

<table><tbody><tr><td>23 G x 1 cal BD PrecisionGlide sterylna igła podskórna ogólnego zastosowania. Regularny typ ściany i regularna faza.</td><td>BD</td><td>2546-CABD305145</td><td>Igły do pobierania krwi</td></tr><tr><td>BD Vacutainer&reg; Probówki EDTA do pobierania krwi żylnej z lawendą BD Hemogard&handel; zamknięcie, 2.0ml (13x75mm), 100/pk</td><td>BD</td><td>367841</td><td>EDTA Powlekane probówki do pobierania krwi</td></tr><tr><td>Łóżko" o kolby i frac14; &rdquo; Ściółka laboratoryjna dla zwierząt z kolb kukurydzy</td><td>Bed-O-Cobs</td><td>BEDO1/4</td><td>Nowatorska ściółka do karmienia z tłumieniem nowości</td></tr><tr><td>Wirówka</td><td>Eppendorf</td><td>Wirówka 5424 R</td><td>Do wirowania krwi.</td></tr><tr><td>Zestaw ELISA kortykosteronu</td><td>Testy trzpieniowe</td><td>K003-H1W</td><td></td></tr><tr><td>Aparat cyfrowy</td><td>Panasonic</td><td>HC-V770</td><td>Kamera do nagrywania interakcji EPM / Eksperymentator</td></tr><tr><td>Elevated Plus Maze</td><td>Home Made</td><td>n/a</td><td>Niestandardowy labirynt wykonany z czterech czarnych ramion z pleksiglasu (dwa otwarte ramiona (29 cm długości i 7 cm szerokości) i dwa zamknięte ramiona (29 cm długości x 7 cm szerokości ze ściankami o wysokości 16 cm)) które tworzą kształt krzyża z dwoma otwartymi ramionami naprzeciwko siebie trzymany 55 cm nad podłogą</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Medstore House Marka</td><td>39753-P016-EA95</td><td>Rozcieńczyć do 70% wodą destylowaną, do czyszczenia</td></tr><tr><td>Ethovision XT 15</td><td>Noldus</td><td>n/a</td><td>Oprogramowanie do automatycznego śledzenia zwierząt</td></tr><tr><td>Laboratorium Dieta dla gryzoni</td><td>LabDiet</td><td>Rodent Diet 5001</td><td>Standardowa dieta dla gryzoni</td></tr><tr><td>Karta pamięci</td><td>Kingstone Technology</td><td>SDA3/64GB</td><td>Do nagrywania wideo i transfer plików</td></tr><tr><td>Nowość Tłumiona komora karmienia</td><td>Home Made</td><td>nie dotyczy</td><td>Niestandardowa komora testowa z pleksi z przezroczystymi podłogami i ścianami o długości 62 cm, szerokości 31 cm i wysokości 40 cm.</td></tr><tr><td>Rurki Parlycarbonate Home</td><td>Made</td><td>n/a</td> o <td>długości 13 cm i średnicy 5 cm</td></tr><tr><td>Purina Yesterday' s aktualności Pościel z gazet z recyklingu</td><td>Purina n</td><td>/a</td><td>Standardowa pościel</td></tr><tr><td>Spektrofotometr</td><td>Biotek</td><td>Epoch Microplate Reader</td><td></td></tr></tbody></table>

techniki obchodzenia się w celu zmniejszenia stresu u myszy

Handling Techniques to Reduce Stress in Mice

Zwierzęta laboratoryjne są poddawane wielokrotnym manipulacjom przez naukowców lub opiekunów zwierząt. Wywoływany przez to stres może mieć głęboki wpływ na dobrostan zwierząt, a także może być czynnikiem zakłócającym zmienne eksperymentalne, takie jak miary lęku. Z biegiem lat opracowano techniki obchodzenia się ze zwierzętami, które minimalizują stres związany z obchodzeniem się z nimi, ze szczególnym naciskiem na szczury, a niewielką uwagą na myszy. Wykazano jednak, że myszy mogą być przyzwyczajone do manipulacji za pomocą technik obchodzenia się. Przyzwyczajenie myszy do obchodzenia się z nimi zmniejsza stres, ułatwia rutynowe obchodzenie się z nimi, poprawia dobrostan zwierząt, zmniejsza zmienność danych i poprawia wiarygodność eksperymentów. Pomimo korzystnych efektów obsługi, podejście polegające na podnoszeniu ogona, które jest szczególnie stresujące, jest nadal szeroko stosowane. Niniejszy artykuł zawiera szczegółowy opis i demonstrację nowo opracowanej techniki posługiwania się myszą, mającej na celu zminimalizowanie stresu doświadczanego przez zwierzę podczas interakcji z człowiekiem. Ta ręczna technika jest wykonywana przez 3 dni (technika obsługi 3D) i koncentruje się na zdolności zwierzęcia do przyzwyczajenia się do eksperymentatora. Badanie to pokazuje również wpływ wcześniej ustalonych technik obsługi tunelowej (przy użyciu tunelu poliwęglanowego) oraz techniki podnoszenia ogona. W szczególności badany jest ich wpływ na zachowania podobne do lęku, za pomocą testów behawioralnych (Elevated-Plus Maze i Novelty Suppressed Feeding), dobrowolnej interakcji z eksperymentatorami i pomiarów fizjologicznych (poziom kortykosteronu). Technika obsługi 3D i technika obsługi tunelowej zmniejszyły fenotypy podobne do lęku. W pierwszym eksperymencie, w którym wykorzystano 6-miesięczne samce myszy, technika obsługi 3D znacznie poprawiła interakcję z eksperymentatorem. W drugim eksperymencie, z udziałem 2,5-miesięcznej samiczki, obniżono poziom kortykosteronu. W związku z tym obsługa 3D jest użytecznym podejściem w scenariuszach, w których wymagana lub preferowana jest interakcja z eksperymentatorem, lub w których obsługa tunelowa może nie być możliwa podczas eksperymentu.

Przeprowadzono dwa oddzielne badania z wykorzystaniem myszy C57BL/6. Badanie nr 1 objęło 6-miesięczne samce, a badanie nr 2 objęło 2,5-miesięczne samice (N=36/badanie) z Jackson Laboratories (Cat #000664). Myszy trafiły do ośrodka w wieku 2 miesięcy. Podczas gdy samice z badania nr 2 były poddawane zabiegom i testom dwa tygodnie po przybyciu, samce z badania nr 1 były poddawane zabiegom i testom dopiero w wieku 6 miesięcy (opóźnienie spowodowane globalnym lockdownem pandemicznym). W tym czasie jedna mysz z badania nr 2 p...

Ten artykuł opisuje technikę obsługi u myszy, technikę obsługi 3D, która ułatwia rutynowe obchodzenie się poprzez redukcję zachowań podobnych do lęku i przedstawia szczegóły dotyczące dwóch istniejących powiązanych technik (obsługa tunelu i ogona).

Techniki obchodzenia się w celu zmniejszenia stresu u myszy

Laboratory animals are subjected to multiple manipulations by scientists or animal care providers. The stress this causes can have profound effects ...

Nazywam się Dr. Thomas Prevot. Jestem naukowcem w Centrum Uzależnień i Zdrowia Psychicznego (Center for Addiction and Mental Health, CAMH) oraz adiunktem na Wydziale Psychiatrii Uniwersytetu w Toronto. Moja grupa jest szczególnie zainteresowana zmniejszeniem wyjściowego lęku i reaktywności u myszy w celu zmniejszenia zmienności danych i poprawy dobrostanu zwierząt.Myszy okazały się nieocenionymi zasobami w naukach podstawowych i badaniach przedklinicznych, jednak bardzo niewiele laboratoriów na całym świecie kontroluje wyjściowy lęk i reaktywność swoich zwierząt laboratoryjnych, co komplikuje powielanie danych między laboratoriami. Głównym czynnikiem przyczyniającym się do wyjściowego lęku są niekontrolowane zmienne środowiskowe, takie jak warunki mieszkaniowe, wzbogacenie środowiska i narażenie na stres. Podczas gdy standaryzacja warunków przetrzymywania i wzbogacania pomogły poprawić ten problem, narażenie na stres podczas interakcji z eksperymentatorami jest nadal w dużej mierze nierozwiązane u myszy.Posługiwanie się ogonem, proces podnoszenia myszy za ogon, jest nadal powszechnie stosowaną techniką obsługi myszy, mimo że jest szczególnie stresujący. Chociaż pojawiły się alternatywy dla obsługi ogona, w tym obsługa tunelowa i obsługa kubków. Wdrażanie tych technik było powolne.W tym miejscu opisujemy nowatorską technikę, podobną do obsługi kubka, którą można wdrożyć już po trzech dniach przyzwyczajenia lub obsługi 3D. Poprzez stopniowe zwiększanie stopnia i złożoności interakcji oraz postęp w odpowiedzi na reaktywność myszy na określone kamienie milowe obsługi, możemy zmniejszyć stres i ułatwić rutynową obsługę. Oceniamy skuteczność obsługi 3D u myszy w testach behawioralnych, oceniając zachowania podobne do lęku, interakcję z eksperymentatorami i poziomy hormonu stresu obwodowego, kortykosteronu, a także porównujemy techniki obsługi tunelu i obsługi ogona.Delikatnie otwórz klatkę i umieść pokrywę z boku. Przyłóż rękę w rękawiczce do klatki domowej przed próbą podniesienia myszy. Pozwól myszy przyzwyczaić się do obecności dłoni przez około 30 sekund.Następnie spróbuj podnieść mysz w złożone dłonie. Jeśli myszy nie można łatwo podnieść, złóż obie ręce razem i użyj ich, aby poprowadzić mysz do rogu klatki. Następnie użyj obu rąk, aby podnieść mysz.Po wyjęciu myszy z klatki trzymaj ręce tak płasko i otwarcie, jak to tylko możliwe. Pozwól myszy na swobodną eksplorację. Zapewnia to płaską platformę, na którą mysz może nadepnąć i ogranicza ryzyko ugryzienia.Trzymaj dłoń otwartą i płaską, dłonią do góry. Umieść drugą rękę obok myszy i pozwól myszy swobodnie poruszać się z ręki na rękę, bez żadnych ograniczeń. Po minucie obsługi płaskimi rękami rozluźnij dłoń i delikatnie przyłóż mysz do głowy, a następnie delikatnie przełóż mysz między dłońmi.Kontynuuj przez cztery minuty, na przemian delikatnie przetaczając się między rękami i swobodnie eksplorując otwarte dłonie. W ciągu ostatnich dwóch minut wykonaj test schronienia. Pozwól myszy przesunąć się na krawędź dłoni i zbliż obie ręce do siebie.Bardzo powoli złóż dłonie tak, aby mysz zmieściła się w schronieniu utworzonym przez dłonie. Upewnij się, że zostawiłeś otwór, aby mysz mogła uciec w razie potrzeby. Staraj się trzymać mysz w schronieniu przez pięć do 10 sekund bez żadnych ograniczeń.Powtórz test schronienia trzy do czterech razy w ciągu ostatnich dwóch minut. Nie spiesz się z procesem. Jeśli mysz wydaje się zestresowana tym, że jest uwięziona w dłoni, kontynuuj turlanie się między rękami i swobodną eksplorację przez 30 sekund, a następnie spróbuj ponownie wykonać test schronienia.Pozwól na swobodną eksplorację w rękach przez 30 sekund, a następnie delikatnie umieść mysz w klatce. Oczyść blat stołu z kału i moczu za pomocą 70% etanolu lub odpowiedniego roztworu czyszczącego. W razie potrzeby oczyść rękawice z kału i moczu, a podczas zmiany na nową klatkę spłucz rękawice 70% etanolem lub zmień rękawice.Już drugiego dnia powinno być możliwe wyjęcie myszy z klatki w złożonych dłoniach. Jeśli mysz wydaje się reaktywna, wykonuj płaską rękę i swobodną eksplorację otwartych głów przez 30 sekund do minuty. W przeciwnym razie przejdź do rolki między rękami i testu schronienia.Wykonuj rolę między rękami i stopniami schronienia od pierwszego dnia przez dwie do trzech minut. Wykonaj każdy krok kilka razy. Jeśli mysz wydaje się być spokojna w teście schronienia, spróbuj pogłaskać ją po plecach i głowie.Jeśli mysz nie próbuje uciec przed kontaktem, przejdź do szturchnięcia nosa. Delikatnie dotknij myszą czubka pyska. Jeśli nie gryzie ani nie próbuje odwrócić głowy, jest to dobry znak przyzwyczajenia.W przypadku testu pieszczot i szturchania nosa nie spiesz się z tym procesem. Jeśli mysz wydaje się zestresowana zamknięciem w dłoniach lub nie chce być dotykana, kontynuuj toczenie między rękami przez kilka minut, a następnie spróbuj ponownie. Przerwij tę sesję po około trzech minutach obchodzenia się, jeśli zwierzę dobrze reaguje na schronienie, głaskanie głowy i szturchanie nosa.A jeśli zwierzę wydaje się być chętne do eksploracji twoich rąk bez żadnych oznak stresu, takich jak próby ucieczki, skakanie z rąk lub unikanie kontaktu z rękami. Jeśli mysz nadal wykazuje oznaki stresu lub nie reaguje dobrze na test schronienia lub test szturchnięcia nosem, kontynuuj sesję, aż osiągnie pięć minut, jak w pierwszym dniu. Włóż mysz do klatki i wyczyść blat stołu oraz rękawice.Trzeciego dnia wykonaj te same kroki, co drugiego dnia. Podnieś mysz w dłoni. Przenieś mysz między rękami.Delikatnie trzymaj mysz w złożonych dłoniach. Jeśli mysz dobrze reaguje na te kroki, spróbuj pogłaskać mysz i spróbować wykonać test szturchnięcia nosa. Trzeciego dnia mysz powinna być na tyle zrelaksowana, aby usiąść w dłoni bez ruszania się, a Ty powinieneś być w stanie przejść przez te kroki w ciągu około dwóch do trzech minut.Włóż mysz do klatki, wyczyść blat stołu i rękawice. Trzeciego dnia. Jeśli zwierzę będzie skrępowane do celów eksperymentalnych, takich jak zgłębnik doustny lub wstrzyknięcie dootrzewnowe, myszy można poddać testowi szczypania szyi.Chwyć mysz za kark, między kciukiem a palcem wskazującym i unieś mysz pięć centymetrów nad dłoń na dwie do trzech sekund. Jest to zwykle niewygodna pozycja dla dorosłych myszy, a jeśli myszy pozostają prawie nieruchome, są dobrze przyzwyczajone do obsługi i łatwo będzie je powstrzymać do wstrzyknięć. Umieść mysz z powrotem na płaskiej dłoni i pozwól jej swobodnie eksplorować przez minutę.Zwierzęta były testowane pod kątem ich gotowości do dobrowolnej interakcji z eksperymentatorem i łatwości obsługi w kontekście eksperymentalnym. W pierwszym badaniu myszy obsługiwane przez rurkę lub obsługę 3D były mniej skłonne do ucieczki, gdy eksperymentator próbował podnieść mysz. Dodatkowo, badane myszy obsługiwane przy użyciu techniki 3D spędzały więcej czasu w tym samym kwadrancie co ręka eksperymentatora, co wskazuje na zwiększoną gotowość do interakcji z eksperymentatorem.W drugim badaniu myszy obsługiwane przez rurkę lub obsługę 3D były mniej skłonne do ucieczki, gdy eksperymentator próbował podnieść mysz, w porównaniu z myszami z ogonem. Jednak w drugim badaniu technika posługiwania się nie wpłynęła znacząco na czas spędzony w tym samym kwadrancie co ręka eksperymentatora. Efekt 3D i obsługi tunelowej porównano z obsługą ogona w dwóch testach zachowań podobnych do lęku, teście stłumionego karmienia nowości i labiryncie podwyższonym plus.W pierwszym badaniu, w teście karmienia z tłumieniem nowości, zaobserwowano tendencję do zmniejszania lęku u myszy z obsługą tunelową i 3D. W labiryncie podwyższonym plus nie było ogólnego efektu obsługi. Podsumowując jako wynik Z, zaobserwowano znaczne zmniejszenie ogólnego lęku u myszy obsługiwanych tunelowo i 3D w porównaniu z myszami obsługiwanymi ogonem.W drugim badaniu nie stwierdzono ogólnego wpływu obchodzenia się z labiryntem na miary lęku w teście karmienia z tłumikiem nowości lub labiryncie podwyższonym plus. Podsumowując jako wynik Z, technika radzenia sobie nie miała ogólnego wpływu na lęk. Jako fizjologiczną miarę stresu pobraliśmy surowicę od myszy trzymanych na ogonie, 3D i tunelowych 15 minut po krótkiej sesji obsługi i zbadaliśmy poziom kortykosteronu.Nie stwierdzono ogólnego wpływu obchodzenia się z produktem leczniczym w pierwszym badaniu. W drugim badaniu obsługa 3D znacznie obniżyła poziom kortykosteronu w porównaniu z obsługą ogona. Opierając się na obserwacjach, że techniki obchodzenia się z myszami nie są powszechnie uznawane przez społeczność naukową, opisaliśmy zastosowanie nowatorskiej techniki obsługi.W obu prezentowanych badaniach obsługa tunelowa i 3D zmniejszyła liczbę prób ucieczki myszy po podniesieniu, co potencjalnie ułatwiło rutynowe obchodzenie się z nimi. Dodatkowo, u starszych samców myszy, technika ta zmniejszyła zachowania podobne do lęku i zwiększyła interakcję z eksperymentatorem. U młodych samic.Technika ta zmniejszała stężenie kortykosteronu obserwowane w odpowiedzi na leczenie. Wdrożenie tej techniki może potencjalnie zmniejszyć zmienność danych, poprawić dobrostan zwierząt i ułatwić rutynowe obchodzenie się z nimi.

handling-techniques-to-reduce-stress-in-mice

Research

JoVE Journal

Behavior

Zachowanie

Ten film pokazuje metodę wywoływania przewlekłego stresu u myszy poprzez wielokrotne unieruchomienie, prowadzące do uwalniania kortykosteronu i zmniejszonej aktywności receptora glutaminianu w neuronach, co skutkuje zachowaniem podobnym do depresji.

Wywoływanie zachowań podobnych do depresji u myszy poprzez stres związany z unieruchomieniem

Protokół nieprzewidywalnego chronicznego łagodnego stresu (UCMS) jest sprawdzoną metodą badania zmian behawioralnych i fizjologicznych związanych z przewlekłym stresem i objawami depresyjnymi. Osiem tygodni od nałożenia protokołu UCMS wywołuje zmiany w zachowaniu i złe wyniki zdrowotne u gryzoni obu płci.

Nieprzewidywalny protokół przewlekłego łagodnego stresu w celu wywołania objawów depresyjnych, zmian w zachowaniu i negatywnych skutków zdrowotnych u gryzoni

Tutaj prezentujemy nieprzewidywalny protokół chronicznego łagodnego stresu u myszy. Protokół ten indukuje długoterminowy fenotyp podobny do depresji i umożliwia ocenę skuteczności przypuszczalnych leków przeciwdepresyjnych w odwracaniu behawioralnych i neuromolekularnych deficytów depresyjnych.

Nieprzewidywalny protokół przewlekłego łagodnego stresu do wywoływania anhedonii u myszy

Ten artykuł dostarcza uproszczony i ustandaryzowany protokół indukcji zachowań depresyjnych u myszy chronicznie unieruchomionych za pomocą ogranicznika. Ponadto wyjaśniono zachowanie i techniki fizjologiczne w celu weryfikacji indukcji depresji.

Protokół przewlekłego stresu unieruchamiającego w celu wywołania zachowań podobnych do depresji u myszy

Zadanie bariery labiryntu Y to test zachowania, który bada motywację do wydatkowania wysiłku na nagrodę. W tym miejscu omawiamy testowanie wielu dobrze zweryfikowanych przewlekłych stresorów, w tym przewlekłego kortykosteronu i stresu porażki społecznej z tym zachowaniem, a także nowego przewlekłego niedyskryminującego stresu porażki społecznej (CNSDS), który jest skuteczny u kobiet.

Przewlekły stres zmienia zachowania związane z wysiłkiem w zadaniu bariery Y-Maze u myszy

Opracowaliśmy model przyspieszonego stresu związanego z porażką społeczną dla dorastających myszy C57BL/6, który działa zarówno u samców, jak i samic i umożliwia ekspozycję podczas dyskretnych okresów dojrzewania. Ekspozycja na ten model indukuje unikanie społeczne, ale tylko w podgrupie pokonanych samców i samic myszy.

Model stresu porażki społecznej dla dorastających samców i samic myszy C57BL/6

Większość eksperymentów behawioralnych dla gryzoni została pierwotnie opracowana dla szczurów. Ze względu na różnice behawioralne między szczurami a myszami, czasami wymagane są modyfikacje dla myszy. Przedstawiamy metodę badania przestrzennej pamięci roboczej u myszy, minimalizującą stres podczas zadania pamięci roboczej.

Zadanie związane z przestrzenną pamięcią roboczą dla myszy w półautomatycznym 8-ramiennym labiryncie promieniowym, zmniejszające skojarzenia pamięci lękliwej w labiryncie

Poprzez integrację czterech codziennych stresorów społecznych, niniejsze badanie opisuje model wielokrotnego zintegrowanego stresu społecznego (MISS) dla zaburzeń psychicznych u samic myszy C57BL/6J. Po dziesięciu dniach powtarzającej się ekspozycji na MISS myszy rozwinęły fenotypy podobne do depresji i lęku, zapewniając w ten sposób naturalny, oparty na etiologii model zwierzęcy do badania zaburzeń psychicznych u kobiet.

Wieloraki zintegrowany model stresu społecznego dla zaburzeń psychicznych u samic myszy C57BL/6J

Ten artykuł omawia procedury wywoływania reakcji stresowych za pomocą fizycznego stresu powściągliwości u myszy i szczurów. Omówiono dodatkowe kwestie, które należy wziąć pod uwagę przy wyborze i stosowaniu naprężenia utwierdzenia w modelach gryzoni.

Powściągliwość w wywoływaniu stresu u myszy i szczurów

Ten artykuł opisuje wykorzystanie chronicznego stresu społecznego intruza jako etologicznie istotnego paradygmatu do modelowania depresji poporodowej i lęku u gryzoni w okresie laktacji.

Wykorzystanie przewlekłego stresu społecznego do modelowania depresji poporodowej u gryzoni w okresie laktacji

Poznaj technikę 3D-handling dla zmniejszenia stresu u myszy w badaniach naukowych. Ta metoda poprawia dobrostan zwierząt i zwiększa powtarzalność wyników w porównaniu do chwytania za ogon.

Techniki obchodzenia się w celu zmniejszenia stresu u myszy

Przeglądaj więcej filmów