Name: Pobieranie próbek ludzkiej podskórnej tkanki tłuszczowej techniką mini liposukcji (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 59 s
Description: Naucz się techniki mini liposukcji do pobierania próbek ludzkiej tkanki tłuszczowej z okolicy pępka. Ta metoda jest bezpieczna, mało bolesna i pozwala na wielokrotne biopsje u tego samego uczestnika w jednym dniu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy nie mają żadnych funduszy do zadeklarowania.

UWAGA: Komitet ds. Badań Inwazyjnych lub Klinicznych Uniwersytetu w Stirling zatwierdził procedurę biopsji opisaną poniżej. Wszystkie badania naukowe z zastosowaniem tej procedury muszą zostać zatwierdzone przez odpowiednią niezależną komisję etyczną. Osoba wykonująca biopsję musi ukończyć formalne szkolenie w zakresie opisanej techniki zgodnie z wymaganiami swojej instytucji. Zazwyczaj wiąże się to z obserwacją demonstracji opisanej techniki biopsji tkanki tłuszczowej przez certyfikowanego lekarza, a następnie nadzorowaną praktyką. Gdy stażysta wykona 10 próbnych biopsji tkanki tłuszczowej na ochotnikach pod nadzorem, zostaną oni zbadani przez certyfikowanego lekarza, aby zapewnić dobrą wiedzę i praktykę procedury. Następnie certyfikowany lekarz przekazuje osobie podpisany formularz badania.
1. Przygotowanie pomieszczenia laboratoryjnego
<ol>
	<li>Upewnij się, że laboratorium ma odpowiednio prywatne pomieszczenie z czystymi, nieporowatymi powierzchniami, które można wycierać, oraz czystym, wygodnym (najlepiej nieporowatym) łóżkiem, na którym uczestnik może leżeć na wznak. Oczyść wszystkie wymagane powierzchnie do procedury biopsji za pomocą sprayu 70% etanolu i czystych ręczników papierowych. W razie potrzeby zapewnij czyste poduszki lub poduszki, aby podeprzeć uczestnika.</li>
	<li>Odpowiednie pojemniki na ostre przedmioty i worki na odpady stanowiące zagrożenie biologiczne należy przechowywać w łatwo dostępnym miejscu miejsca, w którym wykonywana jest biopsja, oraz w łatwym zasięgu osoby wykonującej biopsję.</li>
	<li>Przygotuj sprzęt wymagany do zabiegu i ustaw go na świeżo wyczyszczonym wózku medycznym przed przybyciem uczestnika do laboratorium (<silna klasa="xfig">Rysunek 1). Pełna lista wymaganych materiałów eksploatacyjnych znajduje się w tabeli materiałów.</li>
</ol>
2. Przygotowanie uczestników
<ol>
	<li>Należy dopilnować, aby wszyscy uczestnicy wyrazili pisemną świadomą zgodę przed poddaniem się procedurze zgodnie z protokołami wymaganymi przez niezależną komisję etyczną instytucji. Dodatkowo poproś uczestników o wypełnienie pisemnego kwestionariusza, aby upewnić się, że nie są uczuleni na żadne materiały użyte podczas zabiegu (a mianowicie nikiel, chrom, środek znieczulający miejscowo, jod, skorupiaki i plastry).</li>
	<li>Potwierdź tożsamość uczestnika. Upewnij się, że uczestnik rozumie procedurę, która ma zostać przeprowadzona, i potencjalne skutki uboczne, w tym siniaki, ból i infekcję (Tabela 1). Zbierz ustną zgodę oprócz wcześniej uzyskanej pisemnej świadomej zgody.</li>
	<li>Opisz uczestnikowi, w jaki sposób zostanie przeprowadzona procedura, z naciskiem na to, jak będzie się czuło podanie środka znieczulającego i sama biopsja. Upewnij się, że uczestnik czuje się komfortowo z kontynuacją. 
	UWAGA: Miejscowe znieczulenie podskórne spowoduje uczucie pieczenia, podobne do krótkotrwałego użądlenia pszczoły. Wielu uczestników zgłasza podanie środka znieczulającego jako najbardziej nieprzyjemną część techniki. Gdy znieczulenie zacznie działać, uczestnik powinien odczuwać nie więcej niż lekkie uczucie szarpania podczas biopsji.</li>
	<li>Upewnij się, że uczestnik nie ma alergii na środek znieczulający miejscowo (szczególnie z rodzaju aminoamidu, jeśli używasz lidokainy lub podobnego), niektórych metali (niklu i chromu) i skorupiaków (jeśli używasz roztworów na bazie jodu). Dodatkowo upewnij się, że uczestnicy nie przyjmują żadnych leków przeciwzakrzepowych.</li>
	<li>Zapewnij uczestnikowi możliwość opróżnienia pęcherza, jeśli jest to wymagane, aby upewnić się, że nie musi przerywać procedury ani odczuwać nadmiernego dyskomfortu w kroku 4.1.</li>
</ol>
3. Procedura biopsji - instrukcje dla osoby wykonującej biopsję
<ol>
	<li>Gdy uczestnik leży w pozycji leżącej, zidentyfikuj miejsce biopsji około 5-10 cm z boku pępka. 
	UWAGA: Jeśli uczestnik ma przejść wiele biopsji tego samego dnia, zidentyfikuj miejsca biopsji po przeciwnych stronach pępka dla każdej biopsji. Zapewni to maksymalną odległość między każdym miejscem biopsji.</li>
	<li>Umyj ręce mydłem i ciepłą wodą zgodnie ze standardowymi wytycznymi medycznymi4.</li>
	<li>Umieść sterylny arkusz na oczyszczonym wózku lub obszarze roboczym, uważając, aby dotykać tylko zewnętrznych krawędzi arkusza.</li>
	<li>Załóż sterylne rękawice chirurgiczne, stosując odpowiednią technikę aseptyczną. Poproś asystenta, aby otworzył resztę sprzętu w taki sposób, aby upuścił go na przygotowany sterylny arkusz bez dotykania/zanieczyszczania sprzętu. Upewnij się, że asystent uważa, aby nie dotykać przedmiotów podczas wyjmowania narzędzi ze sterylnego opakowania.</li>
	<li>Poinstruuj asystenta, aby dozował niewielką ilość roztworu na bazie jodu na sterylną gazę (bez nadmiernego nasycania gazy) na powierzchni roboczej.</li>
	<li>Wysterylizuj około 5-10cm2 wokół wybranego miejsca biopsji za pomocą sterylnej gazy i roztworu na bazie jodu. Upewnij się, że skóra jest oczyszczona ruchem spiralnym, przesuwając się na zewnątrz od proponowanego miejsca biopsji. Powtórz procedurę czyszczenia skóry dwukrotnie. Usuń nadmiar płynu (np. spływający ze sterylnego obszaru), wycierając świeżą sterylną gazą.</li>
	<li>Wraz z asystentem potwierdź ustnie zawartość fiolki ze środkiem do znieczulenia miejscowego (2% lidokainy w tym protokole) i czy mieści się ona w upływie terminu ważności. Poinstruuj asystenta, aby trzymał otwartą fiolkę do góry dnem i nabrał 5 ml znieczulenia miejscowego do strzykawki za pomocą igły 21 G. Wyrzucić igłę do pojemnika na ostre przedmioty i upewnić się, że strzykawka jest wolna od pęcherzyków powietrza.</li>
	<li>Przyłożyć igłę 26 G do strzykawki i usunąć pęcherzyki powietrza. Delikatnie uszczypnij skórę brzucha i tkankę tłuszczową, odsuwając ją od ściany brzucha. Następnie wprowadzić igłę poziomo do tkanki podskórnej pod kątem nie większym niż 10° w stosunku do powierzchni skóry.
	<ol>
		<li>Pobrać tłok strzykawki o dodatkowe 0,5 ml (aby upewnić się, że igła nie znajduje się w naczyniu krwionośnym). Jeśli w strzykawce pojawi się krew, należy wyjąć igłę i ponownie wprowadzić ją pod innym kątem.</li>
		<li>Podnieś pęcherzyk o średnicy 2-4 mm, aby znieczulić obszar wprowadzania.</li>
		<li>Wsuń igłę do tkanki podskórnej i podaj ~1 ml lidokainy w kształcie wachlarza (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 2), uważając, aby wyjąć tłok za każdym razem przed wstrzyknięciem środka znieczulającego.</li>
		<li>Wyjmij i wyrzuć igłę 26 G, przyłóż igłę 21 G do strzykawki, usuń wszelkie pęcherzyki powietrza i podaj pozostałe ~4 ml lidokainy w kształcie wachlarza (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 2), uważając, aby wyjąć tłok za każdym razem przed wstrzyknięciem środka znieczulającego.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Odczekaj około 5 minut, aż zacznie działać znieczulenie miejscowe. Użyj sterylnego skalpela, aby delikatnie szturchnąć obszar biopsji, aby i) upewnić się, że znieczulenie miejscowe zadziałało i ii) zidentyfikować granice znieczulonego obszaru. W razie potrzeby odczekaj dodatkową minutę lub dwie i ponownie oceń.</li>
	<li>Po upewnieniu się, że znieczulenie miejscowe działa, delikatnie uszczypnij skórę i tkankę tłuszczową (jak w kroku 3.8) i użyj sterylnego skalpela, aby wykonać małe 1-2 mm nakłucie w skórze. 
	UWAGA: Musi być tylko wystarczająco duża, aby ułatwić wprowadzenie igły 14 G i musi być na tyle mała, aby nie był wymagany szew do jej zamknięcia. Od tego momentu często dochodzi do krwawienia, które można opanować za pomocą kawałka sterylnej gazy.</li>
	<li>Najpierw przyłóż igłę 14 G do strzykawki o pojemności 5 lub 10 ml. Następnie, delikatnie ściskając skórę i tkankę tłuszczową, stopniowo wprowadzać igłę przez nakłucie w tkankę tłuszczową mniej więcej centralnie w obszarze znieczulanym i pod kątem nie większym niż 10° w stosunku do powierzchni skóry. 
	UWAGA: We wszystkich przypadkach przesunięcia igły w kroku 3.11 należy zachować kąt strzykawki nie większy niż 10°.
	<ol>
		<li>Zastosować ssanie, wycofując tłok do oznaczenia około 2,5 ml. Wykonaj biopsję, przesuwając igłę szybkim ruchem do tyłu i do przodu, aby przeciąć fragmenty tkanki tłuszczowej. Po około 30 sekundach przekręcić igłę i strzykawkę pod kątem 90° i powtórzyć tę procedurę, aby rozbić fragmenty tkanki tłuszczowej, które są następnie odsysane do strzykawki przez odsysanie. 
		UWAGA: Można używać strzykawek o innych rozmiarach. Istotne jest, aby badacz wybrał rozmiar strzykawki, który pozwala zarówno na dobry chwyt strzykawki, jak i na wygodne utrzymanie chowania tłoka w celu utrzymania podciśnienia. Dostępne są strzykawki blokujące, które utrzymują podciśnienie, co może poprawić kontrolę igły i zmniejszyć odczuwalną trudność dla biopsysty 5.</li>
		<li>Po około 45-60 s kroku 3.11.1 wyjąć igłę i opróżnić zawartość strzykawki na warstwę gazy przykrywającą łódkę wagową. Upewnij się, że światło igły jest skierowane w dół, aby uniknąć potencjalnego rozpryskiwania krwi.</li>
		<li>Powtórz kroki 3.11.1 i 3.11.2 maksymalnie 3 razy. Sprawdź, czy uczestnik jest zadowolony z kontynuowania przed każdym powtórzeniem powyższej procedury.</li>
		<li>Wykonując czynności 3.11.1 i 3.11.2, poinstruuj asystenta, aby przetworzył i przygotował próbki do analizy/przechowywania (patrz sekcja 5).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Procedura po biopsji
<ol>
	<li>Po uzyskaniu zadowalającej próbki (tj. ~200 mg) tkanki tłuszczowej, umieść 1-2 warstwy sterylnej gazy na ranie kłutej, a następnie umieść na nich okład z lodu i mocno uciskaj przez około 10 minut, aby wywołać hemostazę.</li>
	<li>Po wystąpieniu hemostazy należy zetrzeć roztwór jodu/zaschniętą krew jałową gazą i przykleić do miejsca nałożenie adhezyjnego opatrunku z wkładką chłonną. Sprawdź, czy uczestnik czuje się dobrze i przekaż ustne i pisemne instrukcje dotyczące opieki nad pacjentem w miejscu biopsji.
	<ol>
		<li>Podkreśl, że uczestnicy prawdopodobnie będą wykazywać siniaki przez kilka następnych dni. Poinformuj ich, że może to być znaczne, chociaż jest zminimalizowane przez okład lodowy w kroku 4.1 i ustąpi bez trwałych skutków.</li>
		<li>Zalecić, aby w przypadku odczuwania dyskomfortu/bólu po ustąpieniu znieczulenia, uczestnicy przyjmowali leki przeciwbólowe, takie jak paracetamol, postępując zgodnie z instrukcjami na opakowaniu, ale powstrzymali się od przyjmowania leków przeciwbólowych, które mają działanie przeciwzakrzepowe (np. ibuprofen lub aspiryna).</li>
		<li>Wyjaśnij, że obrzęk, zaczerwienienie lub wydzielina z miejsca biopsji wskazują na zakażenie. W mało prawdopodobnym przypadku wystąpienia tych oznak lub objawów, poinstruuj uczestnika, aby pilnie zasięgnął porady lekarza lub lokalnej jednostki pogotowia ratunkowego. Poinformuj uczestnika, że jeśli zwróci się o poradę lekarską, musi również powiadomić o tym zespół badawczy. 
		UWAGA: Jako personel badawczy ani osoba wykonująca biopsję, ani asystent nie mogą udzielać porad medycznych ani leczenia; Ważne jest jednak, aby zespół badawczy był świadomy i rejestrował wszystkie przypadki powikłań wynikających z procedury biopsji.</li>
		<li>Zaleca, aby uczestnicy unikali pływania lub nadmiernie forsownej aktywności przez 48 godzin, aż do zamknięcia miejsca nacięcia.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wszelkie zużyte ostre przedmioty i zanieczyszczone materiały należy usunąć do wyznaczonych pojemników na ostre przedmioty i/lub pojemniki na odpady kliniczne.</li>
	<li>Oczyść wszystkie powierzchnie używane w procedurze biopsji za pomocą sprayu 70% etanolu i czystych ręczników papierowych. Jednorazowe i jednorazowe elementy pościeli należy umieścić odpowiednio w odpowiednich torbach klinicznych do utylizacji lub czyszczenia.</li>
</ol>
5. Przetwarzanie próbek - instrukcje dla asystenta
<ol>
	<li>Użyj sterylnej pęsety i 0,9% soli fizjologicznej, aby spłukać próbkę tkanki tłuszczowej w celu usunięcia widocznych zanieczyszczeń (tj. krwi, naczyń krwionośnych). Następnie należy zważyć próbki tkanki tłuszczowej za pomocą wagi cyfrowej. Podziel tkankę na kawałki o odpowiedniej wielkości do dalszej analizy i umieść je w odpowiednich probówkach do przechowywania za pomocą sterylnej pęsety. Zanurzyć probówki zawierające biopsje tkanki tłuszczowej w ciekłym azocie w temperaturze -190 °C w celu błyskawicznego zamrożenia do momentu, gdy próbki będą przechowywane w temperaturze -80 °C. 
	UWAGA: Asystent musi zakończyć przetwarzanie próbki tak szybko, jak to możliwe, zwykle w ciągu 3 minut od aspiracji próbki, aby zminimalizować potencjalną degradację próbki.</li>
</ol>

<ol><li>Beynen, A. C., Katan, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+sampling+and+long-term+storage+of+subcutaneous+adipose-tissue+biopsies+for+determination+of+fatty+acid+composition%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Clinical+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Rapid sampling and long-term storage of subcutaneous adipose-tissue biopsies for determination of fatty acid composition.</a> American Journal of Clinical Nutrition. 42 (2), 317-322 (1985).</li>
<li>Moran, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+diabetes+family+history+and+exercise+training+on+the+expression+of+adiponectin+and+leptin+and+their+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolism%22%5BJournal%5D)">Effects of diabetes family history and exercise training on the expression of adiponectin and leptin and their receptors.</a> Metabolism. 60 (2), 206-214 (2011).</li>
<li>Jialal, I., Devaraj, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+adipose+tissue+biology+in+metabolic+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Hormone+Molecular+Biology+and+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous adipose tissue biology in metabolic syndrome.</a> Hormone Molecular Biology and Clinical Investigation. 33 (1), (2018).</li>
<li>WHO Guidelines on hand hygiene in health care: a summary. World Health Organization. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.who.int/gpsc/5may/tools/who_guidelines-handhygiene_summary.pdf">https://www.who.int/gpsc/5may/tools/who_guidelines-handhygiene_summary.pdf</a> (2009).</li>
<li>Kettwich, L. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+device+technologies+for+subcutaneous+fat+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22Amyloid%22%5BJournal%5D)">New device technologies for subcutaneous fat biopsy.</a> Amyloid. 19 (2), 66-73 (2012).</li>
<li>Preston, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aseptic+technique%3A+evidence-based+approach+for+patient+safety%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Nursing%22%5BJournal%5D)">Aseptic technique: evidence-based approach for patient safety.</a> British Journal of Nursing. 14 (10), 540-546 (2005).</li>
<li>Handiyani, H., Meily Kurniawidjaja, L., Irawaty, D., Damayanti, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effective+needle+stick+injury+prevention+strategies+for+nursing+students+in+the+clinical+settings%3A+a+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22Enfermeria+Clinica%22%5BJournal%5D)">The effective needle stick injury prevention strategies for nursing students in the clinical settings: a literature review.</a> Enfermeria Clinica. 28, Suppl 1 167-171 (2018).</li>
<li>Raggio, B. S., Barton, B. M., Kandil, E., Friedlander, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+continued+preoperative+aspirin+use+and+bleeding+complications+in+patients+undergoing+thyroid+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Otolaryngology-Head+%26+Neck+Surgery%22%5BJournal%5D)">Association of continued preoperative aspirin use and bleeding complications in patients undergoing thyroid surgery.</a> JAMA Otolaryngology-Head & Neck Surgery. 144, 335(2018).</li>
<li>Cartwright, I. J., Pockley, A. G., Galloway, J. H., Greaves, M., Preston, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+dietary+omega-3+polyunsaturated+fatty+acids+on+erythrocyte+membrane+phospholipids%2C+erythrocyte+deformability+and+blood+viscosity+in+healthy+volunteers%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">The effects of dietary omega-3 polyunsaturated fatty acids on erythrocyte membrane phospholipids, erythrocyte deformability and blood viscosity in healthy volunteers.</a> Atherosclerosis. 55 (3), 267-281 (1985).</li>
<li>Hemmrich, K., Denecke, B., Paul, N. E., Hoffmeister, D., Pallua, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+isolation+from+adipose+tissue%3A+an+optimized+procedure+for+high+RNA+yield+and+integrity%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">RNA isolation from adipose tissue: an optimized procedure for high RNA yield and integrity.</a> Laboratory Medicine. 41 (2), 104-106 (2010).</li>
<li>Chachopoulos, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+subcutaneous+abdominal+adipose+tissue+biopsy+via+a+non-diathermy+method%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visual+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">A technique for subcutaneous abdominal adipose tissue biopsy via a non-diathermy method.</a> Journal of Visual Experiments: JoVE. (127), e55593(2017).</li>
<li>Civelek, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+regulation+of+human+adipose+microRNA+expression+and+its+consequences+for+metabolic+traits%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic regulation of human adipose microRNA expression and its consequences for metabolic traits.</a> Human Molecular Genetics. 22 (15), 3023-3037 (2013).</li>
<li>Chen, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeding+influences+adipose+tissue+responses+to+exercise+in+overweight+men%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Endocrinology+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Feeding influences adipose tissue responses to exercise in overweight men.</a> American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 313 (1), 84-93 (2017).</li>
<li>Mendham, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise+training+results+in+depot-specific+adaptations+to+adipose+tissue+mitochondrial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Exercise training results in depot-specific adaptations to adipose tissue mitochondrial function.</a> Scientific Reports. 10 (1), 3785(2020).</li>
<li>Carswell, K. A., Lee, M. J., Fried, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+isolated+human+adipocytes+and+isolated+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Culture of isolated human adipocytes and isolated adipose tissue.</a> Methods in Molecular Biology. 806, 203-214 (2012).</li>
<li>Arner, P., Andersson, D. P., Backdahl, J., Dahlman, I., Ryden, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Weight+gain+and+impaired+glucose+metabolism+in+women+are+predicted+by+inefficient+subcutaneous+fat+cell+lipolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Weight gain and impaired glucose metabolism in women are predicted by inefficient subcutaneous fat cell lipolysis.</a> Cell Metabolism. 28 (1), 45-54 (2018).</li>
<li>Mutter, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+frozen+and+RNALater+solid+tissue+storage+methods+for+use+in+RNA+expression+microarrays%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+genomics%22%5BJournal%5D)">Comparison of frozen and RNALater solid tissue storage methods for use in RNA expression microarrays.</a> BMC genomics. 5, 88(2004).</li>
<li>Coleman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+fat+grafting%3A+more+than+a+permanent+filler%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Structural fat grafting: more than a permanent filler.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 118, Suppl 3 108-120 (2018).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do zadeklarowania konfliktu interesów.

Opisany protokół i towarzyszący mu film zawierają przegląd krok po kroku techniki mini-liposukcji w celu uzyskania podskórnych próbek tkanki tłuszczowej z okolicy brzucha. Ta grupa badawcza wykonała łącznie 124 biopsje w ciągu 19 miesięcy, bez żadnych działań niepożądanych u uczestników. Procedura jest bezpieczna i wiąże się z minimalnym ryzykiem dla uczestników lub zespołu biopsyjnego, pod warunkiem przestrzegania opisanych środków bezpieczeństwa. Technika aseptyczna (w tym otwieranie i wydawanie sterylnego sprzętu bez ...

Tkanka tłuszczowa może dostarczyć użytecznych informacji na temat funkcji metabolicznych człowieka. Ludzka podskórna tkanka tłuszczowa jest łatwo dostępna. Technika podskórnego usuwania tkanki tłuszczowej została po raz pierwszy opisana w połowie lat 80. XX wieku1; Od tego czasu początkowy protokół został ulepszony w celu zwiększenia wydajności i poprawy tolerancji uczestników badania. Podskórną tkankę tłuszczową można pozyskać z wielu miejsc, najczęściej z glutei1 oraz brzucha2. Próbki z tych ostatnich mogą być bardziej pożądane, ponieważ dostarczają cenniejszych informacji w kontekstach związanych z chorobami metabolicznymi3.
Podskórna biopsja tkanki tłuszczowej przy użyciu metody mini-liposukcji może być bezpiecznie i efektywnie przeprowadzona w warunkach nieklinicznych. Po odpowiednim przeszkoleniu przez certyfikowanego lekarza i zastosowaniu ścisłej techniki aseptyki, badacze mogą rutynowo wykonywać te biopsje przy minimalnym ryzyku zarówno dla uczestnika, jak i badaczy. Zespół biopsyjny musi składać się z co najmniej 2 osób: osoby, która będzie wykonywać biopsję i asystenta.
Osoba odpowiedzialna za biopsję ma za zadanie potwierdzić tożsamość uczestnika, sprawdzić, czy uczestnik może bezpiecznie przejść procedurę (zobacz kroki protokołu 2.1-2.4 poniżej), upewnić się, że uczestnik czuje się komfortowo przez cały czas trwania procedury, zapewnić utrzymanie sterylności techniki przez cały czas trwania zabiegu, przeprowadzić procedurę oraz zapewnić uczestnikowi ustne i pisemne procedury po zabiegu. Rolą asystenta jest obsługa i szybkie przetwarzanie uzyskanej tkanki tłuszczowej do późniejszej analizy i/lub przechowywania. Asystent pomaga również, będąc "niesterylnymi rękami" i dbając o to, aby uczestnik czuł się swobodnie przez cały czas trwania zabiegu. Celem tego filmu i artykułu jest opisanie procedury biopsji krok po kroku w celu bezpiecznego pobrania podskórnej tkanki tłuszczowej z okolicy brzucha.

<table><tbody><tr><td>Pozycja: Igła 14 G 14 G x 3 1/8" 210 mm x 80 mm</td><td>B Braun</td><td>4665473</td><td>Na biopsję: 1</td></tr><tr><td>Pozycja: Igła 21 G 21 G x 1 1/2" 0,8 mm x 38 mm</td><td>Terumo</td><td>AN*2138R1</td><td>Na biopsję: 2</td></tr><tr><td>Pozycja: 26 G&nbsp; igła 26 G x 1/2" igła mikrolance 0,45 mm x 13 mm</td><td>BD</td><td>303800</td><td>Na biopsję: 2</td></tr><tr><td>Pozycja: 5 ml strzykawka 5 ml luer</td><td>DB plastipak</td><td>302187</td><td>Na biopsję: 2</td></tr><tr><td>Pozycja: Adhezyjny opatrunek na rany Opsite Opatrunek pooperacyjny 9,5 x 8,5</td><td>Smith & Siostrzeniec</td><td>6600709</td><td>Na biopsję: 1</td></tr><tr><td>Pozycja: Jednorazowy sterylny skalpel Jednorazowy sterylny skalpel Ostrze nr 10</td><td>Swann Morton</td><td>/0501</td><td>Na biopsję: 1</td></tr><tr><td>Pozycja: Icepack BlueDot Opakowanie wielokrotnego użytku na gorąco / na zimno 26,5 cm x 13,0 cm</td><td>NuCare</td><td>F711</td><td>Na biopsję: 1</td></tr><tr><td>Pozycja: Antyseptyczny środek antyseptyczny na bazie jodu Roztwór antyseptyczny Videne</td><td>Ecolab Videne</td><td>3030440</td><td>Per biopsja: q.s</td></tr><tr><td>Pozycja: Lidokaina 2% bez epinefryny Lidokaina 2% do wstrzyknięcia 5 ml</td><td>B Braun</td><td>3558553</td><td>Na biopsję: 5 ml</td></tr><tr><td>Pozycja: Rękawiczki niesterylne Wrażliwe bezpudrowe rękawice nitrylowe Starguard</td><td></td><td>SG-N-S</td><td>Na biopsję: para</td></tr><tr><td>Pozycja: Chlorek sodu 0,9% Chlride sodu 0,9% w/v wlew dożylny BP</td><td>BBraun</td><td>S8004-5384</td><td>Na biopsję: q.s.</td></tr><tr><td>Pozycja: Roztwór stabilizacyjny* Roztwór stabilizujący RNAlater</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>AM7020</td><td>Na biopsję: q.s</td></tr><tr><td>Pozycja: Sterylne kleszcze Sterylne kleszczyki</td><td>Rocialle</td><td>RML109-006</td><td>Na biopsję: 1</td></tr><tr><td>Pozycja: Sterylne waciki z gazy Waciki włókninowe sterylne 7,5 x 7,5 cm</td><td>Prestige</td><td>1860</td><td>Na biopsję: 5</td></tr><tr><td>Pozycja: Sterylne rękawice Prestiżowe sterylne bezpudrowe rękawice medyczne z miękkiego winylu</td><td>Prestige</td><td>S: P4301 M:P3302 L:P3301</td><td>Na biopsję: para</td></tr><tr><td>Pozycja: Sterylne probówki do mikrowirówek 1,5 ml sterylne probówki do mikrowirówek</td><td>StarLab</td><td>I1415-5510</td><td>Na biopsję: q.s</td></tr><tr><td>Pozycja: Sterylny arkusz Papier zwykły biały 90 x 90 cm</td><td>Rocialle</td><td>RML 126-216</td><td>Na biopsję: 1</td></tr><tr><td>Pozycja: Łódź do ważenia Łodzie do ważenia w kształcie rombu</td><td>Heathrow Scientific</td><td>HS1427C</td><td>Na biopsję: 1</td></tr> <tr><td>* oznacza materiały</td><td></td><td></td><td></td> opcjonalne</tr></tbody></table>

pobieranie próbek ludzkiej podskórnej tkanki tłuszczowej techniką mini liposukcji

Human Subcutaneous Adipose Tissue Sampling Using a Mini-Liposuction Technique

Badania nad tkanką tłuszczową są przydatne w zrozumieniu zaburzeń metabolicznych i innych. Dostępna jest ludzka podskórna tkanka tłuszczowa. Dzięki odpowiedniemu przeszkoleniu i ścisłemu przestrzeganiu techniki aseptycznej, podskórne próbki tkanki tłuszczowej mogą być bezpiecznie i skutecznie pozyskiwane przez naukowców w warunkach nieklinicznych. Po podaniu znieczulenia miejscowego bocznie do pępka, przez skórę do tkanki podskórnej wprowadza się igłę o sile 14 G przymocowaną do strzykawki o pojemności 5 lub 10 ml. Pod wpływem zasysania strzykawka jest przesuwana ruchem posuwisto-zwrotnym, tnącym w celu wyizolowania fragmentów tkanki tłuszczowej. Wycofanie tłoka wystarczy, aby fragmenty tkanki tłuszczowej zostały zassane przez igłę do strzykawki. Z pojedynczej biopsji można pobrać około 200 mg tkanki. Ta technika biopsji jest bardzo bezpieczna zarówno dla uczestników, jak i personelu badawczego. Po biopsji uczestnicy mogą wznowić większość codziennych czynności, chociaż powinni unikać pływania i nadmiernie forsownych czynności przez 48 godzin, aby uniknąć nadmiernego krwawienia. Uczestnicy mogą bezpiecznie przejść 2 biopsje w ciągu jednego dnia, co oznacza, że technika ta może być stosowana w badaniach przed i po ostrej interwencji.

Opisana procedura biopsji tkanki tłuszczowej jest wydajną i niskoryzykowną techniką pozyskiwania próbek podskórnej tkanki tłuszczowej od ochotników. Zastosowano tę procedurę do wykonania 39 biopsji podskórnej tkanki tłuszczowej u 11 zdrowych kobiet o prawidłowej masie ciała (wiek 27,4 ± 3,3 lat; wskaźnik masy ciała (BMI) 22,6 ± 1,5 kg.m2). Wszystkie uczestniczki zgłosiły się do laboratorium między godziną 07:00 a 10:00 po 8–12 h postu. Masa uzyskanych próbek przy zastosowaniu tej procedury biopsji tkanki tłusz...

Rękopis i związane z nim wideo demonstrują technikę biopsji przezskórnej w celu uzyskania próbek podskórnej tkanki tłuszczowej z obszarów otaczających pępek. Metoda ta jest mało ryzykownym i skutecznym sposobem badania szeregu parametrów (np. ekspresji genów lub białek, aktywności enzymów, zawartości lipidów) w tkance tłuszczowej.

Pobieranie próbek ludzkiej podskórnej tkanki tłuszczowej techniką mini liposukcji

Studies on adipose tissue are useful in understanding metabolic and other conditions. Human subcutaneous adipose tissue is accessible. With appropriate ...

Technika ta jest szczególnie odpowiednia dla każdego badania, które wdraża projekt badania przed i po lub chce scharakteryzować określoną populację i nie wymaga nadmiernej ilości tkanki ciała po badaniu. Główną zaletą jest to, że technika jest stosunkowo opłacalna i prawie bezbolesna. Możesz wykonać wiele biopsji tego samego uczestnika tego samego dnia.Technika ta może pomóc w zrozumieniu fizjologii tkanki tłuszczowej, w szczególności w zrozumieniu choroby i funkcji metabolicznych. Na początek upewnij się, że laboratorium ma odpowiednio prywatny pokój z czystymi, nieporowatymi powierzchniami, które można wycierać, oraz czystym, wygodnym łóżkiem, na którym uczestnik może leżeć w pozycji leżącej. Następnie za pomocą sprayu 70% etanolu i czystych ręczników papierowych wyczyść wszystkie wymagane powierzchnie do procedury biopsji.Następnie umieść odpowiednie jednorazowe pojemniki na ostre narzędzia i saszetki biologiczne w zasięgu miejsca, w którym zostanie wykonana biopsja i osoby wykonującej biopsję. Zanim uczestnik dotrze do laboratorium, należy ustawić sprzęt niezbędny do zabiegu na świeżo wyczyszczonym wózku medycznym. Po uzyskaniu pisemnej świadomej zgody poproś uczestnika o wypełnienie pisemnego kwestionariusza, aby upewnić się, że nie jest uczulony na żadne materiały użyte w tej procedurze.Po ustnym potwierdzeniu tożsamości uczestnika upewnij się, że uczestnik rozumie procedurę, która ma zostać przeprowadzona, oraz potencjalne wtórne skutki uboczne, w tym siniaki, ból i infekcję. Oprócz pisemnej świadomej zgody należy również uzyskać ustną zgodę od uczestnika. Następnie opisz uczestnikowi procedurę, podkreślając, jak może wyglądać podanie środka znieczulającego i biopsja.Upewnij się również, że uczestnik czuje się komfortowo z kontynuowaniem. Ponownie upewnij się, że uczestnik nie ma alergii na środek znieczulający miejscowo, niektóre metale i skorupiaki oraz że uczestnik nie przyjmuje żadnych leków przeciwzakrzepowych. Gdy uczestnik leży w pozycji leżącej, zidentyfikuj miejsce biopsji około pięciu do 10 centymetrów w bok od pępka.Następnie umyj ręce mydłem i ciepłą wodą zgodnie ze standardowymi wytycznymi medycznymi. I umieść sterylne prześcieradło na czystym wózku lub obszarze roboczym, uważając, aby dotykać tylko zewnętrznych krawędzi arkusza. Załóż sterylne rękawice chirurgiczne, stosując odpowiednią technikę aseptyczną.Następnie poproś asystenta, aby otworzył resztę sprzętu tak, aby spadł na przygotowany sterylny arkusz bez dotykania lub zanieczyszczania. Upewnij się, że asystent nie dotyka przedmiotów podczas wyjmowania ich ze sterylnego opakowania. Następnie poinstruuj asystenta, aby dozował niewielką ilość roztworu na bazie jodu na sterylną gazę.Następnie zdezynfekuj skórę ruchem spiralnym, przesuwając się na zewnątrz od proponowanego miejsca biopsji. Usuń nadmiar płynu, jeśli występuje, wycierając świeżą sterylną gazą. Ustnie potwierdzić zawartość i datę ważności fiolki ze środkiem do znieczulenia miejscowego z asystentem.Następnie poinstruuj asystenta, aby trzymał otwartą fiolkę do góry nogami. Za pomocą igły o rozmiarze 21 narysuj pięć mililitrów środka znieczulającego miejscowo do strzykawki. Wrzucić igłę do ostrego wiru i upewnić się, że strzykawka jest wolna od pęcherzyków powietrza.Następnie przyłożyć igłę o rozmiarze 26 do strzykawki i usunąć wszelkie pęcherzyki powietrza. Następnie delikatnie uszczypnij skórę brzucha i tkankę tłuszczową, odsuwając ją od ściany brzucha i wprowadź igłę poziomo w tkankę podskórną pod kątem nie większym niż 10 stopni w stosunku do powierzchni skóry. Następnie należy wyjąć tłok strzykawki i dodatkowe 0,5 mililitra.Jeśli w strzykawce pojawi się krew, wyjmij igłę i ponownie włóż ją pod innym kątem, a następnie podnieś pęcherzyk o średnicy od dwóch do czterech milimetrów, aby znieczulić obszar wprowadzenia. Wsuń igłę w tkankę podskórną i podaj jeden mililitr lidokainy w kształcie wachlarza. Wyjąć i wyrzucić igłę o rozmiarze 26.Następnie przyłóż igłę o rozmiarze 21 do strzykawki i podaj pozostałe cztery mililitry lidokainy w kształcie wachlarza. Po pięciu minutach za pomocą sterylnego skalpela delikatnie szturchnij obszar biopsji, aby upewnić się, że znieczulenie miejscowe zadziałało i określ granice znieczulonego obszaru. Następnie odczekaj dodatkową minutę lub dwie i ponownie oceń.Po upewnieniu się, że znieczulenie działa, delikatnie uszczypnij skórę i tkankę tłuszczową i wykonaj małe nakłucie w skórze o średnicy od jednego do dwóch milimetrów. Następnie przyłóż igłę o rozmiarze 14 do strzykawki o pojemności 5 lub 10 mililitrów. Następnie, delikatnie ściskając skórę i tkankę tłuszczową, delikatnie wprowadzić igłę przez nakłucie w tkankę tłuszczową mniej więcej centralnie w znieczulanym obszarze pod kątem nie większym niż 10 stopni w stosunku do powierzchni skóry.Zastosuj ssanie, wycofując tłok do około 2.5 mililitra. Następnie należy pobrać biopsję, przesuwając igłę szybkim, ruchem do tyłu i do przodu, aby przeciąć fragmenty tkanki tłuszczowej. Po 30 sekundach przekręć igłę i strzykawkę o 90 stopni i powtórz tę procedurę, aby rozbić fragmenty tkanki tłuszczowej, które są następnie odsysane do strzykawki przez odsysanie.Po około jednej minucie wyjąć igłę i opróżnić zawartość strzykawki na warstwę gazy przykrywającą ubytek łódki, upewniając się, że światło igły jest skierowane w dół, aby uniknąć potencjalnego rozpryskiwania krwi. Powtórz procedurę pobierania biopsji maksymalnie trzy razy, jak pokazano, i sprawdź, czy uczestnik jest zadowolony z kontynuowania przed powtórzeniem procedury za każdym razem. Podczas pobierania dodatkowych próbek należy poinstruować asystenta, aby przetworzył i przygotował wcześniej pobrane próbki do analizy lub przechowywania.Po pobraniu zadowalających próbek umieścić jedną lub dwie warstwy sterylnej gazy na ranie kłutej. Następnie umieść okład z lodu i mocno naciskaj przez około 10 minut, aby wywołać homeostazę. Po osiągnięciu homeostazy zetrzyj roztwór jodu lub zaschniętą krew sterylną gazą, nałóż na miejsce adhezyjny opatrunek z chłonnym wkładem.Po sprawdzeniu, czy uczestnik czuje się dobrze, przekaż ustne i pisemne instrukcje dotyczące opieki nad miejscem biopsji, podkreślając, że uczestnicy prawdopodobnie będą wykazywać siniaki przez kilka następnych dni. Zużyte ostre przedmioty i zanieczyszczone materiały należy usunąć do wyznaczonych pojemników na ostre przedmioty lub odpady kliniczne, a następnie oczyścić wszystkie powierzchnie użyte w procedurze biopsji przy użyciu 70% etanolu i umieścić jednorazowe i jednorazowe elementy pościeli w odpowiednich torbach klinicznych lub odpowiednio utylizować lub czyścić. W badaniu wykonano 39 podskórnych biopsji tkanki tłuszczowej u 11 zdrowych kobiet o prawidłowej masie ciała.Stosując tę procedurę, uzyskano średnio 192 miligramy próbki. Wybór miejsca biopsji zbyt blisko pępka może prowadzić do niepotrzebnie rozległych siniaków. Lista powikłań, których doświadczają uczestnicy po biopsji tkanki tłuszczowej, znajduje się tutaj.Upewnij się, że skóra jest ściśnięta przez cały czas, aby uniknąć perforacji głębszej warstwy mięśni lub perforacji igły po drugiej stronie skóry. Praktyka czyni mistrza, upewnij się, że szkolenie jest wykonywane przez przeszkolonego lekarza przed wypróbowaniem go na rzeczywistych uczestnikach. A podczas wprowadzania igły w celu rozbicia tkanki tłuszczowej upewnij się, że osoba wykonująca biopsję jest wystarczająco pewna, że rozbije próbkę.

human-subcutaneous-adipose-tissue-sampling-using-mini-liposuction

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Ze względu na drastyczny i negatywny związek między otyłością a innymi chorobami współistniejącymi, uzasadnione są badania nad rolą tłuszczu w chorobach i ogólnym zdrowiu. Przedstawiamy protokół izolacji i wycinania magazynów tłuszczowych pozwalający na badanie tkanki tłuszczowej metodami in situ i in vitro.

Lokalizacja, identyfikacja i wycięcie mysich magazynów tłuszczu

Prezentujemy techniki wymagane do wyizolowania zrębowej frakcji naczyniowej (SVF) z mysich pachwinowych (podskórnych) i okołogonadalnych (trzewnych) magazynów tkanki tłuszczowej w celu oceny ich ekspresji genów i aktywności kolagenolitycznej. Metoda ta obejmuje wzbogacanie komórek macierzystych owysokiej zawartości tkanki tłuszczowej (ASC) Sca1 za pomocą immunomagnetycznej separacji komórek.

Immunomagnetyczna separacja komórek macierzystych owysokiej zawartości tkanki tłuszczowej (ASC) Sca1 specyficznych dla Fat Depot

Ustandaryzowaliśmy biopsję tkanki tłuszczowej jamy brzusznej metodą bez diatermii wykonywaną w znieczuleniu miejscowym. Wystąpiły trzy przypadki nadmiernego krwawienia pooperacyjnego na 115 operacji (2,61%). Stwierdzamy, że biopsja chirurgiczna tkanki tłuszczowej jamy brzusznej metodą bez diatermii może być bezpiecznie stosowana u zdrowych mężczyzn.

Technika podskórnej biopsji tkanki tłuszczowej jamy brzusznej metodą bez diatermii

Celem tego artykułu jest przedstawienie krok po kroku procedury pobierania różnych białych tkanek tłuszczowych od myszy, przetwarzania próbek tłuszczu i ekstrakcji RNA.

Pobieranie i przetwarzanie tkanki tłuszczowej myszy do analizy RNA

Odróżnienie białych i beżowych adipocytów od komórek progenitorowych naczyń tkanki tłuszczowej niesie ze sobą potencjał do metabolicznej poprawy otyłości. Opisujemy protokoły izolacji komórek śródbłonka CD34 + CD31 + z ludzkiego tłuszczu oraz późniejszej ekspansji i różnicowania in vitro do białych i beżowych adipocytów. Omówiono kilka dalszych zastosowań.

Izolacja, ekspansja i indukcja adipogenna komórek śródbłonka CD34+CD31+ z ludzkiej tkanki tłuszczowej i podskórnej

Tutaj prezentujemy mikrofragmentację ludzkiej tkanki tłuszczowej bez enzymów przy użyciu urządzenia systemu zamkniętego. Ta nowa metoda pozwala na uzyskanie submilimetrowych skupisk tkanki tłuszczowej nadających się do przeszczepu in vivo, hodowli in vitro oraz dalszej izolacji i charakterystyki komórek.

Mikrofragmentacja ludzkiej tkanki tłuszczowej do fenotypowania komórek i charakterystyki sekretomu

Obecny protokół opisuje ulepszoną metodologię izolacji ADSC, co skutkuje ogromną wydajnością komórkową z zyskiem czasu w porównaniu z literaturą. Badanie to dostarcza również prostej metody uzyskiwania stosunkowo dużej liczby żywotnych komórek po długotrwałej krioprezerwacji.

Technika otrzymywania mezenchymalnych komórek macierzystych z tkanki tłuszczowej i charakterystyka frakcji naczyniowej zrębu w długoterminowej kriokonserwacji

Tutaj prezentujemy szczegółowy protokół opisujący wykorzystanie fragmentów mikronaczyniowych wyizolowanych z gryzoni lub ludzkiej tkanki tłuszczowej jako prostego podejścia do inżynierii funkcjonalnej, unaczynionej beżowej tkanki tłuszczowej.

Trójwymiarowa hodowla unaczynionej termogenicznej tkanki tłuszczowej z fragmentów mikronaczyniowych

Tutaj prezentujemy protokół, który może przekształcić autologiczną tkankę tłuszczową w różne substancje składowe tkanki tłuszczowej o różnych właściwościach i funkcjach fizykochemicznych.

Innowacyjne frakcjonowanie tkanki tłuszczowej do przekształcania tłuszczu w specjalistyczne składniki

W tym raporcie wideo pokazujemy zastosowanie obrazowania luminescencyjnego Cerenkov (CLI) do międzyłopatkowej brązowej tkanki tłuszczowej u myszy w warunkach aktywowanych i depresyjnych.

Obrazowanie luminescencyjne Carenkowa brązowej tkanki tłuszczowej między łopatkami

Naucz się techniki mini liposukcji do pobierania próbek ludzkiej tkanki tłuszczowej z okolicy pępka. Ta metoda jest bezpieczna, mało bolesna i pozwala na wielokrotne biopsje u tego samego uczestnika w jednym dniu.

Pobieranie próbek ludzkiej podskórnej tkanki tłuszczowej techniką mini liposukcji

Przeglądaj więcej filmów