Przeszczep nabłonka barwnikowego siatkówki w modelu naczelnych innych niż człowiek w chorobach zwyrodnieniowych siatkówki

Uraz dołka podczas przeszczepu nabłonka barwnikowego siatkówki może skutkować słabymi wynikami wizualnymi. Ta proponowana metoda może zmniejszyć prawdopodobieństwo rozdarcia dołka w porównaniu z konwencjonalnymi technikami. Proponowana metoda uwzględnia wiele czynników przyczyniających się do urazu dołka, w tym uwolnienie zrostów podsiatkówkowych, lepszą wizualizację warstw siatkówki i styczne siły ścinające podczas tworzenia pęcherzyków.

Ta technika, która obejmuje wstępną obróbkę plazminogenu doszklistkowego, zintegrowane z mikroskopem tworzenie pęcherzyków siatkówki pod kontrolą OCT oraz tamponadę ciała szklistego z płynnym perfluorowęglowodorem przy użyciu kaniuli z podwójnym otworem, zwiększa prawdopodobieństwo urazu dołka przy łagodniejszej procedurze. Procedurę zademonstrują dr Zenping Liu, starszy pracownik naukowy, oraz pan Daniel Soo Lin Wong, asystent naukowy, obaj z laboratorium. Profesor Gopal Lingam, starszy konsultant, również zademonstruje procedury operacyjne.

Na początek użyj nożyczek Vannas do nacięcia spojówki w pobliżu rąbka w celu wykonania pertomii spojówki o 360 stopni i wykonaj rozwarstwienie, aby powiększyć peritomię. Użyj mikroostrza szklistkowo-siatkówkowego o rozmiarze 25, aby wykonać trzymilimetrowe nacięcie w twardówce na godzinie ósmej w prawym oku lub na godzinie czwartej w lewym oku. Włóż niestandardową kaniulę infuzyjną z bocznym portem o rozmiarze 25 G i zszyj za pomocą szwu 7-0 Vicryl.

Po potwierdzeniu lokalizacji doszklistkowej rozpocznij zbilansowany wlew roztworu soli i ustaw system tak, aby utrzymywał ciśnienie wewnątrzgałkowe 20 mililitrów rtęci. Użyj trokara z płaską główką o rozmiarze 25, aby naciąć twardówkę na godzinie drugiej w prawym oku lub na godzinie 10 w lewym oku. Włóż żyrandol o rozmiarze 25 do trokaru z płaską głowicą i zabezpiecz światło taśmą klejącą.

Ustaw źródło światła na około 60%Wykonaj kolejną sklerotomię na godzinie 10 dla prawego oka lub na godzinie drugiej dla lewego oka, jak pokazano. Umieść szew Vicryl 7-0 w kształcie litery U wokół sklerotomii bez wiązania węzłów. Wprowadzić trokar witrektomii przez sklerotomię.

Wykonać witrektomię wokół portu wejściowego, a następnie krótką witrektomię rdzeniową z maksymalną liczbą 5 000 cięć na minutę i maksymalną aspiracją przy 400 milimetrach słupa rtęci. Wstrzyknij od 20 do 50 mikrolitrów triamcynolonu, aby uzyskać lepszą wizualizację ciała szklistego. Oddziel ciało szkliste od siatkówki, aby wywołać tylne odwarstwienie ciała szklistego.

Umieść wirektor nad tarczą nerwu wzrokowego, aby umożliwić delikatną indukcję tylnego odwarstwienia ciała szklistego. Żykorder należy przechowywać tylko podczas aspiracji przy maksymalnej wilgotności 400 milimetrów słupa rtęci bez konieczności cięcia. W razie potrzeby użyj kleszczy wewnątrzgałkowych o rozmiarze 25, aby rozerwać korę ciała szklistego, aby ułatwić odwarstwienie.

Otwórz tylną błonę szklistą za pomocą noża i usuń oderwaną osłonę ciała szklistego aż do podstawy ciała szklistego. Odessać pozostały triamcynolon na powierzchni siatkówki. Wstrzyknij od jednego do dwóch mililitrów płynu perfluorowęglowego, aby pokryć tylny biegun aż do przedniej i środkowej siatkówki obwodowej.

Wprowadzić do oka za pomocą kaniuli do wstrzykiwań podsiatkówkowych. Użyj niestandardowej dwuotworowej kaniuli do wstrzykiwań podsiatkówkowych o wymiarach 25 na 41 lub kaniuli do wstrzykiwań podsiatkówkowych o wymiarach 25 na 38 podłączonej do strzykawki o pojemności 250 mikrolitrów do wstrzykiwań podsiatkówkowych. Ustaw ciśnienie wewnątrzgałkowe na zero do czterech milimetrów słupa rtęci.

Delikatnie wykonaj podsiatkówkowe wstrzyknięcie BSS, aby wywołać miejscowe odwarstwienie siatkówki. Gdy pęcherzyk przekroczy dołek centralny, należy przerwać wstrzykiwanie BSS. Utwórz drugi bleb z innego kierunku.

Połącz oba pęcherzyki, aby całkowicie odłączyć dołek środkowy. Włącz funkcję śródoperacyjnej optycznej koherentnej tomografii w celu wizualizacji powstawania pęcherzyków, zapewniając, że skany linii i sześcianu są w trybie wysokiej rozdzielczości, aby uzyskać obraz w dołku środkowym. Powiększ nacięcie siatkówki do 1,5 milimetra za pomocą pary pionowych nożyczek witreoretinalnych o rozmiarze 25, aby umożliwić dostęp do przestrzeni podsiatkówkowej w celu przeszczepu.

Ustaw ciśnienie wewnątrzgałkowe na 50 milimetrów słupa rtęci. Użyj szczotkowanej silikonowej kaniuli, aby usunąć płyn perfluorowęglowy. Użyj noża do nacinania o średnicy 1,4 milimetra, aby przedłużyć sklerotomię.

Wprowadź instrument z rozszerzalną pętlą o rozmiarze 20 i usuń podplamkowy nabłonek barwnikowy siatkówki gospodarza przez skrobanie. Przełóż końcówkę urządzenia strzeleckiego przez sklerotomię i przejdź przez jamę ciała szklistego przy ciśnieniu wewnątrzgałkowym 20 milimetrów słupa rtęci. Wstrzyknąć implant w kierunku przestrzeni podsiatkówkowej przez krawędź retinotomii utworzoną z powierzchni siatkówki, stroną nośnika komórek skierowaną w stronę błony Brooksa, a ksenoprzeszczep skierowany w stronę fotoreceptorów.

Wizualizacja lokalizacji implantu poprzez włączenie funkcji śródoperacyjnej optycznej koherentnej tomografii. Dostosuj pozycję implantu za pomocą kaniuli do wstrzykiwań podsiatkówkowych lub zakrzywionych nożyczek wewnątrzgałkowych o rozmiarze 25, aby upewnić się, że implant spoczywa płasko na membranie Brooksa w przestrzeni podsiatkówkowej z nienaruszoną siatkówką leżącą nad siatkówką, a także znajduje się w odległości od utworzonej retinotomii i nie uderza w miejsce siatkówki. Użyj szczotkowanej silikonowej kaniuli końcówki do wymiany płyn-powietrze i delikatnie odessaj płyn podsiatkówkowy z odwarstwienia siatkówki pęcherzyka i przyłączenia krawędzi retinotomii, aż siatkówka zostanie ponownie przymocowana do implantu.

Następnie, aby zakończyć operację, zamknij roboczą sklerotomię portu za pomocą wstępnie założonego szwu 7-0 Vicryl. Podawać 0,05 mililitra na dwa miligramy triamcynolonu doszklistkowego bez konserwantów podczas sklerotomii o ósmej. Wyjmij żyrandol i kaniulę infuzyjną.

Zamknij te sklerotomie szwami Vicryl. Zbadaj palpacyjnie oko, aby upewnić się, że ciśnienie wewnątrzgałkowe mieści się w dopuszczalnym zakresie. W razie potrzeby wstrzyknąć przefiltrowane powietrze lub BSS za pomocą igły o rozmiarze 30.

Obrazowanie in vivo przeszczepu nabłonka barwnikowego podplamkowego siatkówki w lewym oku za pomocą różnych metod obrazowania prowadzono przez okres do trzech miesięcy. Fotografia dna oka wykazała, że przeszczepiony przeszczep w dołku centralnym nie migrował z czasem. Obrazowanie autofluorescencji dna oka wykazało minimalne zmiany w hiperautofluorescencji nakładającej się na przeszczep nabłonka barwnikowego siatkówki.

Angiografia fluoresceinowa dna oka we wczesnej i późnej fazie nie wykazała żadnego przecieku wokół przeszczepu. Obrazy z optycznej koherentnej tomografii plamki żółtej wykazały zachowanie zewnętrznych warstw siatkówki nad przeszczepem w miarę upływu czasu, co sugeruje funkcjonalność komórek nabłonka barwnikowego siatkówki. Barwienie HE wykazało nienaruszone warstwy siatkówki bez śladów mikro rozdarć.

Śródoperacyjna optyczna koherentna tomografia pozwala na śródoperacyjną wizualizację wymiarów pęcherzyków i potencjalnego rozerwania dołka podczas odwarstwienia dołka. Obecność łez może zakłócać tworzenie się pęcherzyków. O powodzeniu prawidłowego tworzenia pęcherzyków wspomagał brak rozdarcia.

W celu oceny funkcjonalnej siatkówki przeprowadzono pełną ocenę elektroretinogramu oka ksenoprzeszczepowanego nabłonkiem barwnikowym siatkówki. Brak znaczącego pogorszenia przebiegów elektroretinogramu sugeruje, że funkcja zarówno fotoreceptorów pręcikowych, jak i czopków została zachowana w przypadku ksenoprzeszczepów. Podczas tworzenia zlokalizowanego pęcherzyka siatkówki rób to bardzo delikatnie, ponieważ każda nagła zmiana prędkości strumienia może prowadzić do rozdarcia dołka.

Powolne wykonywanie tego kroku jest kluczem do zmniejszenia uszkodzenia dołka. Obrazowanie multimodalne, w tym autofluorescencja dna oka, angiografia fluoresceinowa i optyczna koherentna tomografia wraz z badaniami elektrofizjologii, może zapewnić lepszy wgląd w przeżywalność przeszczepu i czynniki, które na niego wpływają.