Name: Różnicowanie i polaryzacja makrofagów do fenotypu podobnego do M2 przy użyciu ludzkiej linii komórkowej białaczki THP-1 podobnej do monocytów (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Poznaj protokół różnicowania i polaryzacji komórek THP-1 do makrofagów M2 w ciągu 14 dni. Ta metoda umożliwia badanie mechanizmów przeciwzapalnych w mikrośrodowisku nowotworowym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Instytut Badań Chirurgicznych Price, University of Louisville, jest wspierany finansowo przez John W. Price and Barbara Thruston Atwood Price Trust. Źródła finansowania nie odegrały żadnej roli w projektowaniu i prowadzeniu badania, a także w gromadzeniu, zarządzaniu, analizie i interpretacji danych.

UWAGA: Przegląd kroków opisanych w tym protokole jest pokazany w Rysunek 1. Zakupiono ludzką linię komórkową białaczki podobnej do monocytów THP-1. Przeprowadzono analizę krótkich powtórzeń tandemowych w celu uwierzytelnienia linii komórkowej THP-1. Wszystkie kroki wykonuj w sterylnych warunkach. Monocytowa linia komórkowa THP-1 rośnie w zawiesinie i nie przyczepia się do powierzchni hodowli komórkowych. Adherencja może być wywołana przez różnicowanie monocytów w komórki podobne do makrofagów, np. poprzez stres mechaniczny lub specyficzne leczenie PMA.
1. Hodowla i utrzymanie komórek monocytów THP-1
<ol>
	<li>Ustaw minutnik na 150 s. Wyjmij zamrożoną fiolkę zawierającą linię komórkową THP-1 (tabela materiałów) z ciekłego azotu i natychmiast rozmrozić ją w łaźni czystej wody (37 °C). Uruchom stoper, gdy tylko fiolka zostanie umieszczona w łaźni wodnej. Poluzuj nakrętkę, aby uwolnić ciśnienie, które narasta w wyniku procesu rozmrażania, ale upewnij się, że otwór rurki nie styka się z wodą, aby uniknąć zanieczyszczenia. Optymalny okres rozmrażania komórek wynosi 120-150 s. Kontynuować rozmrażanie zawiesiny komórkowej do momentu, gdy w fiolce pozostanie odłamek lodu o wielkości około 4 mm; Następnie natychmiast przejdź do następnego kroku.</li>
	<li>Przenieść fazę ciekłą zawiesiny komórek do probówki o pojemności 15 ml zawierającej 9 ml ciepłej (37 °C) pożywki wzrostowej (tabela materiałów). Następnie przenieść 1 ml ciepłej zawiesiny średniokomórkowej do fiolki THP-1 i z powrotem do probówki o pojemności 15 ml, aby stopić pozostały wiór lodowy i przepłukać fiolkę, aby upewnić się, że nie pozostały żadne komórki.</li>
	<li>Zawiesinę należy delikatnie wymieszać, pipetując w górę i w dół za pomocą pipety o pojemności 1000 μl. Pobrać małą próbkę (około 10 μl) w celu policzenia komórek pod kątem żywotności (przy użyciu błękitu trypanowego w celu wykluczenia) podczas ich wirowania. Odkręcać zawiesinę z ciepłymi komórkami o sile 200 x g przez 7 minut w temperaturze 37 °C.</li>
	<li>Całkowicie usunąć supernatant i ponownie zawiesić z pewną objętością ciepłej pożywki wzrostowej, aby uzyskać gęstość komórek 5 x 105/ml. Delikatnie wymieszać zawiesinę i przenieść 22 ml objętości do kolb do hodowli komórek T-75 (tabela materiałów). Kolby przechowywać w pozycji pionowej w inkubatorze w temperaturze 37 °C o stężeniu 5% dwutlenku węgla (CO2 ). Wymieniaj pożywki wzrostowe co 3-4 dni.</li>
</ol>
2. Wysiewanie komórek THP-1 i różnicowanie do makrofagów M0
<ol>
	<li>Przygotować komórkę zawierającą pożywkę wzrostową o odpowiedniej gęstości komórek do wysiewu komórek o gęstości 3 x 105/ml/studzienkę na 24-dołkowe płytki do hodowli komórkowych (tabela materiałów). Delikatnie wymieszać podłoże i przygotować porcje po 26 ml, z których każda powinna zostać przelana do probówki o pojemności 50 ml. Użyj każdej podwielokrotności 26 ml do wysiewu komórek na odpowiednią płytkę.</li>
	<li>Przenieść 1 ml pożywki zawierającej komórki do każdego dołka 24-dołkowej płytki. Delikatnie wymieszać pożywkę, pipetując w górę i w dół między transferami.</li>
	<li>Przygotować roztwór podstawowy PMA (rozpuścić 1 mg PMA w 100 μl dimetylosulfotlenku (DMSO) = ~16 mM roztworu PMA w DMSO) i rozcieńczyć go zimnym roztworem soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS) do końcowego stężenia roboczego 10 ng / μL tuż przed leczeniem komórek (Tabela materiałów). Roztwór należy przechowywać na lodzie i natychmiast zużyć. Nie zamrażaj ponownie. Dodać 100 ng PMA na studzienkę. Pozostawić każdą płytkę komórkową w inkubatorze bez dalszego leczenia przez 72 godziny.</li>
	<li>Po 72 godzinach usuń pożywkę wzrostową i zastąp ją 1 ml świeżej pożywki. Nie dotykaj dna studzienek końcówkami pipet. Pozostaw komórki na kolejne 96 godzin w inkubatorze.</li>
	<li>Po 96 godzinach powtórz krok 2.4 (zmiana pożywki) i pozwól komórkom odpoczywać przez kolejne 24 godziny. 
	UWAGA: Makrofagi M0 są teraz gotowe do użycia w eksperymentach (<silna klasa="xfig">Rysunek 2). Bezpośrednio przed traktowaniem komórek w ramach dalszych eksperymentów, należy rozważyć zmianę pożywki tylko za pomocą RPMI (Tabela materiałów), ponieważ suplementy pożywek wzrostowych mogą powodować zakłócenia z odczynnikami, które są dodawane do leczenia komórek. W przypadku, gdy potrzebne są makrofagi podobne do M2, przejdź do sekcji 3.</li>
</ol>
3. Polaryzacja makrofagów M0 na makrofagi podobne do M2
<ol>
	<li>Przygotować roztwór podstawowy IL-4 i IL-13 (rozpuścić 20 μg IL-4 lub IL-13 w 200 μl wody wolnej od nukleaz) i rozcieńczyć go do końcowego stężenia roboczego 2 ng/μl za pomocą PBS bezpośrednio przed poddawaniem działaniu komórek roztworu PBS. Roztwór należy przechowywać na lodzie i natychmiast zużyć. Nie zamrażaj ponownie.</li>
	<li>Usuń pożywkę wzrostową i zastąp ją 1 ml świeżej pożywki. Dodać 20 ng interleukiny 4 (IL-4) i 20 ng interleukiny 13 (IL-13) do studzienki. Pozostaw komórki na 48 godzin w inkubatorze.</li>
	<li>Po 48 godzinach powtórz krok 3.2. Pozostaw komórki na kolejne 48 godzin w inkubatorze.</li>
	<li>Usuń pożywkę wzrostową i zastąp ją 1 ml świeżej pożywki. Pozostaw komórki na 48 godzin w inkubatorze. 
	UWAGA: Makrofagi podobne do M2 są teraz gotowe do użycia w eksperymentach (<silna klasa="xfig">Rysunek 2). Bezpośrednio przed traktowaniem komórek w ramach dalszych eksperymentów, należy rozważyć zmianę pożywki tylko za pomocą RPMI (Tabela materiałów), ponieważ suplementy pożywek wzrostowych mogą powodować zakłócenia.</li>
</ol>
4. Odłączanie i zbieranie makrofagów do cytometrii przepływowej
UWAGA: Użyj metody mechanicznej łączącej szokowanie na zimno i skrobanie komórek, aby odłączyć i zebrać spolaryzowane makrofagi z płytek do cytometrii przepływowej.
<ol>
	<li>Usuń ciepłe podłoże komórkowe i zastąp je mieszaniną lodowatego PBS (bez wapnia i magnezu) i 5% płodowej surowicy bydlęcej (FBS), 1 ml na studzienkę. Natychmiast po tym umieść płytkę komórkową na lodzie na 45 minut. Nie umieszczaj płytki komórkowej na lodzie przed usunięciem ciepłego podłoża komórkowego, ponieważ znacznie zmniejszy to żywotność komórek. Utrzymuj komórki na lodzie tylko po wywołaniu szoku zimnego lodowatą mieszaniną PBS/5% FBS.</li>
	<li>Po 45 minutach na lodzie zeskrobać komórki za pomocą mini skrobaków do komórek (tabela materiałów). Delikatnie przenieś oderwane makrofagi w zimnym PBS/5% FBS do probówki o pojemności 15 ml. Trzymaj probówkę na lodzie przez cały czas, aż komórki zostaną poplamione. 
	UWAGA: Połącz osiem dołków komórek, aby osiągnąć odpowiednią liczbę komórek do barwienia.</li>
</ol>

<ol><li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-associated+fibroblasts+enhance+tumor-associated+macrophages+enrichment+and+suppress+NK+cells+function+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+and+Disease%22%5BJournal%5D)">Cancer-associated fibroblasts enhance tumor-associated macrophages enrichment and suppress NK cells function in colorectal cancer.</a> Cell Death and Disease. 10 (4), 273(2019).</li>
<li>Wang, J., Li, D., Cang, H., Guo, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosstalk+between+cancer+and+immune+cells%3A+Role+of+tumor-associated+macrophages+in+the+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Medicine%22%5BJournal%5D)">Crosstalk between cancer and immune cells: Role of tumor-associated macrophages in the tumor microenvironment.</a> Cancer Medicine. 8 (10), 4709-4721 (2019).</li>
<li>Soncin, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tumor+microenvironment+creates+a+niche+for+the+self-renewal+of+tumor-promoting+macrophages+in+colon+adenoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">The tumor microenvironment creates a niche for the self-renewal of tumor-promoting macrophages in colon adenoma.</a> Nature Communications. 9 (1), 582(2018).</li>
<li>Mosser, D. M., Edwards, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+the+full+spectrum+of+macrophage+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Exploring the full spectrum of macrophage activation.</a> Nature Reviews Immunology. 8 (12), 958-969 (2008).</li>
<li>Mazzone, M., Menga, A., Castegna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+and+TAM+functions-it+takes+two+to+tango%5BTitle%5D)+AND+%22Federation+of+European+Biochemical+Societies+Journal%22%5BJournal%5D)">Metabolism and TAM functions-it takes two to tango.</a> Federation of European Biochemical Societies Journal. 285 (4), 700-716 (2018).</li>
<li>Eum, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-promoting+macrophages+prevail+in+malignant+ascites+of+advanced+gastric+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Tumor-promoting macrophages prevail in malignant ascites of advanced gastric cancer.</a> Experimental and Molecular Medicine. 52 (12), 1976-1988 (2020).</li>
<li>Qian, B. Z., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+diversity+enhances+tumor+progression+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Macrophage diversity enhances tumor progression and metastasis.</a> Cell. 141 (1), 39-51 (2010).</li>
<li>Scheurlen, K. M., Billeter, A. T., O'Brien, S. J., Galandiuk, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+dysfunction+and+early-onset+colorectal+cancer+-+how+macrophages+build+the+bridge%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Medicine%22%5BJournal%5D)">Metabolic dysfunction and early-onset colorectal cancer - how macrophages build the bridge.</a> Cancer Medicine. 9 (18), 6679-6693 (2020).</li>
<li>Bosshart, H., Heinzelmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((THP-1+cells+as+a+model+for+human+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">THP-1 cells as a model for human monocytes.</a> Annals of Translational Medicine. 4 (21), 438(2016).</li>
<li>The American Type Culture Collection (ATCC). , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.atcc.org/products/all/TIB-202.aspx#generalinformation">https://www.atcc.org/products/all/TIB-202.aspx#generalinformation</a> (2021).</li>
<li>Baxter, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardized+protocols+for+differentiation+of+THP-1+cells+to+macrophages+with+distinct+M%28IFNgamma%2BLPS%29%2C+M%28IL-4%29%2C+and+M%28IL-10%29+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Standardized protocols for differentiation of THP-1 cells to macrophages with distinct M(IFNgamma+LPS), M(IL-4), and M(IL-10) phenotypes.</a> Journal of Immunological Methods. 478, 112721(2020).</li>
<li>Genin, M., Clement, F., Fattaccioli, A., Raes, M., Michiels, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M1+and+M2+macrophages+derived+from+THP-1+cells+differentially+modulate+the+response+of+cancer+cells+to+etoposide%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">M1 and M2 macrophages derived from THP-1 cells differentially modulate the response of cancer cells to etoposide.</a> BMC Cancer. 15, 577(2015).</li>
<li>Starr, T., Bauler, T. J., Malik-Kale, P., Steele-Mortimer, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+phorbol+12-myristate-13-acetate+differentiation+protocol+is+critical+to+the+interaction+of+THP-1+macrophages+with+Salmonella+Typhimurium%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The phorbol 12-myristate-13-acetate differentiation protocol is critical to the interaction of THP-1 macrophages with Salmonella Typhimurium.</a> PLoS One. 13 (3), 0193601(2018).</li>
<li>Lund, M. E., To, J., O'Brien, B. A., Donnelly, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+choice+of+phorbol+12-myristate+13-acetate+differentiation+protocol+influences+the+response+of+THP-1+macrophages+to+a+pro-inflammatory+stimulus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">The choice of phorbol 12-myristate 13-acetate differentiation protocol influences the response of THP-1 macrophages to a pro-inflammatory stimulus.</a> Journal of Immunological Methods. 430, 64-70 (2016).</li>
<li>Yin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-6%2FSTAT3+pathway+intermediates+M1%2FM2+macrophage+polarization+during+the+development+of+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">IL-6/STAT3 pathway intermediates M1/M2 macrophage polarization during the development of hepatocellular carcinoma.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 119 (11), 9419-9432 (2018).</li>
<li>O'Neill, L. A. J., Artyomov, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Itaconate%3A+the+poster+child+of+metabolic+reprogramming+in+macrophage+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Itaconate: the poster child of metabolic reprogramming in macrophage function.</a> Nature Reviews Immunology. 19 (5), 273-281 (2019).</li>
<li>Luig, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation-induced+IL-6+functions+as+a+natural+brake+on+macrophages+and+limits+gn%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Inflammation-induced IL-6 functions as a natural brake on macrophages and limits gn.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 26 (7), 1597-1607 (2015).</li>
<li>Maruyama, K., Nemoto, E., Yamada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+regulation+of+macrophage+function+-+cyclic+tensile+force+inhibits+NLRP3+inflammasome-dependent+IL-1beta+secretion+in+murine+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation+and+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Mechanical regulation of macrophage function - cyclic tensile force inhibits NLRP3 inflammasome-dependent IL-1beta secretion in murine macrophages.</a> Inflammation and Regeneration. 39, 3(2019).</li>
<li>Gatto, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PMA-Induced+THP-1+Macrophage+Differentiation+is+Not+Impaired+by+Citrate-Coated+Platinum+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomaterials+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">PMA-Induced THP-1 Macrophage Differentiation is Not Impaired by Citrate-Coated Platinum Nanoparticles.</a> Nanomaterials (Basel). 7 (10), (2017).</li>
<li>Maess, M. B., Wittig, B., Cignarella, A., Lorkowski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+PMA+enhances+the+responsiveness+of+transfected+THP-1+macrophages+to+polarizing+stimuli%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Reduced PMA enhances the responsiveness of transfected THP-1 macrophages to polarizing stimuli.</a> Journal of Immunological Methods. 402 (1-2), 76-81 (2014).</li>
<li>Daigneault, M., Preston, J. A., Marriott, H. M., Whyte, M. K., Dockrell, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+identification+of+markers+of+macrophage+differentiation+in+PMA-stimulated+THP-1+cells+and+monocyte-derived+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The identification of markers of macrophage differentiation in PMA-stimulated THP-1 cells and monocyte-derived macrophages.</a> PLoS One. 5 (1), 8668(2010).</li>
<li>Raggi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+human+macrophage+M1-M2+polarization+balance+by+hypoxia+and+the+triggering+receptor+expressed+on+myeloid+cells-1%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Regulation of human macrophage M1-M2 polarization balance by hypoxia and the triggering receptor expressed on myeloid cells-1.</a> Frontiers in Immunology. 8, 11097(2017).</li>
<li>Neutelings, T., Lambert, C. A., Nusgens, B. V., Colige, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+mild+cold+shock+%2825+degrees+C%29+followed+by+warming+up+at+37+degrees+C+on+the+cellular+stress+response%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Effects of mild cold shock (25 degrees C) followed by warming up at 37 degrees C on the cellular stress response.</a> PLoS One. 8 (7), 69687(2013).</li>
<li>Kurashina, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzyme-free+release+of+adhered+cells+from+standard+culture+dishes+using+intermittent+ultrasonic+traveling+waves%5BTitle%5D)+AND+%22Communications+Biology%22%5BJournal%5D)">Enzyme-free release of adhered cells from standard culture dishes using intermittent ultrasonic traveling waves.</a> Communications Biology. 2, 393(2019).</li>
<li>Chen, S., So, E. C., Strome, S. E., Zhang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Detachment+Methods+on+M2+Macrophage+Phenotype+and+Function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Impact of Detachment Methods on M2 Macrophage Phenotype and Function.</a> Journal of Immunological Methods. 426, 56-61 (2015).</li>
<li>Bailey, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+murine+bone+marrow-derived+macrophages+for+nitric+oxide+and+redox+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of murine bone marrow-derived macrophages for nitric oxide and redox biology.</a> Nitric Oxide. 100-101, 17-29 (2020).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak potencjalnych konfliktów interesów.

Ten protokół różnicowania i polaryzacji komórek podobnych do monocytów THP-1 w ciągu 14 dni zapewnia metodę otrzymywania makrofagów o wyraźnym fenotypie podobnym do M2 dzięki długiej inkubacji komórek po leczeniu z odpowiednimi okresami spoczynku między etapami.
Niektóre kroki mają kluczowe znaczenie dla tego protokołu. Czas podwajania monocytów THP-1 wynosi około 26 godzin. Komórki można dzielić o gęstości komórek 9 x 105 / ml i należy je wysiewać o gęstości 3 x 105 / ml...

Makrofagi związane z nowotworami (TAM) i ich rola w przewlekłym zapaleniu, początkach raka i rozwoju nowotworów są ważnymi celami w ostatnich badaniach1,2. Monocyty krwi obwodowej, które są rekrutowane do mikrośrodowiska tkankowego rozwijającego się nowotworu, różnicują się w makrofagi i mogą być spolaryzowane na dwa główne podtypy makrofagów3. Klasycznie aktywowany makrofag reprezentuje przede wszystkim prozapalny fenotyp podobny do M1, a alternatywnie aktywowany podtyp podobny do M2 wykazuje głównie cechy przeciwzapalne4. Makrofagi mogą dynamicznie przełączać się między tymi dwoma głównymi fenotypami w zależności od ich metabolizmu komórkowego, przy czym podtypy pośrednie mają zarówno atrybuty zapalne, jak i przeciwzapalne5. TAM reprezentuje niejednorodną populację obu fenotypów. Funkcja sprzyjająca nowotworom i złe rokowanie w różnych typach nowotworów jest jednak szczególnie związane z makrofagami podobnymi do M26,7,8.
Profile funkcjonalne makrofagów i ich interakcja z innymi komórkami w mikrośrodowisku guza są skomplikowane i trudne do uchwycenia w ciągle zmieniającym się środowisku podczas trwającego rozwoju guza. Linie komórkowe mogą zapewnić jednorodną populację komórek o stabilnej żywotności w hodowli, co może ułatwić proces demonstracji zdefiniowanych mechanizmów komórkowych i międzykomórkowych. Monocytopodobna linia komórkowa THP-1 jest legalnym systemem modelowym dla pierwotnych ludzkich monocytów9. Ta spontanicznie unieśmiertelniona linia komórkowa została uzyskana z krwi obwodowej rocznego niemowlęcia z ostrą białaczką monocytową9,10. Różnicowanie i polaryzacja komórek THP-1 zostały zgłoszone w kilku badaniach i zostały przeprowadzone na wiele różnych sposobów11,12,13,14. Po aktywacji, a tym samym polaryzacji makrofagów do fenotypu podobnego do M1, następuje kompensacyjny przeciwzapalny mechanizm odbicia, promujący fenotyp podobny do M2 poprzez cytokiny wytwarzane przez makrofagi zapalne, takie jak interleukina 6 (IL-6) lub itakonian15,16. Może to służyć jako mechanizm przerywający w celu osłabienia przestrzelonej reakcji zapalnej po aktywacji komórki17. Procesowi różnicowania i polaryzacji monocytów i komórek podobnych do monocytów THP-1 w przeciwzapalny fenotyp podobny do M2 towarzyszą również bodźce prozapalne, które należy pokonać. Odpowiedź cytokin zapalnych może być spowodowana stresem mechanicznym18, takim jak zmiana pożywki w celu ponownego odżywienia komórek lub dodanie związków chemicznych w celu różnicowania komórek THP-1, takich jak 12-mirystynian forbolu 13-octan (PMA) i indukowanie produkcji czynnika martwicy nowotworu α (TNFα), interleukiny 1β (IL-1β) lub IL-619. Ten zmieniony profil ekspresji cytokin w odpowiedzi na PMA może wpływać i zapobiegać późniejszej polaryzacji makrofagów20. Odpowiednie okresy spoczynku, jak zgłoszono przed leczeniem PMA, pozwalają tym reakcjom zapalnym zmniejszyć się i ułatwić polaryzację komórek do wyraźnego fenotypu podobnego do M221.
Ten protokół demonstruje metodę różnicowania i polaryzacji komórek podobnych do monocytów THP-1 w fenotyp podobny do M2 makrofagów w ciągu 14 dni.

<table><tbody><tr><td>0,4% błękit trypanowy</td><td>VWR, Radnor, Stany Zjednoczone</td><td>152-5061</td><td></td></tr><tr><td>Probówka mikrowirówkowa 1,5 ml</td><td>USA Scientific, Ocala, USA</td><td>1615-5510</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta serologiczna 10 ml</td><td>VWR, Radnor, Stany Zjednoczone&</td><td>nbsp; 89130-898</td><td></td></tr><tr><td>1000 &mu; L Końcówki do pipet TipOne</td><td>USA Scientific, Ocala, USA</td><td>1111-2821</td><td></td></tr><tr><td>15 mL&nbsp; Probówka wirówkowa</td><td>VWR, Radnor, USA</td><td>89039-664</td><td></td></tr><tr><td>20 &mu; L Końcówki do pipet TipOne</td><td>USA Scientific, Ocala, USA</td><td>1120-1810</td><td></td></tr><tr><td>200 &mu; L Końcówki do pipet TipOne</td><td>USA Scientific, Ocala, USA</td><td>1120-8810</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta serologiczna 25 ml</td><td>VWR, Radnor, Stany Zjednoczone</td><td>&nbsp; 89130-900</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta serologiczna 5 ml</td><td>VWR, Radnor, Stany Zjednoczone&</td><td>nbsp; 89130-896</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Probówka wirówkowa</td><td>VWR, Radnor, Stany Zjednoczone</td><td>89039-662</td><td></td></tr><tr><td>Roztwór Accutazy 500 ml</td><td>Sigma, St. Louis, USA</td><td>A6964</td><td></td></tr><tr><td>Antybiotykowy roztwór przeciwgrzybiczy (100x), stabilizowany</td><td>Sigma, St. Louis, USA</td><td>A5955-100 ml</td><td>z 10 000 jednostek penicyliny, 10 mg streptomycyny i 25 &mu; g amfoterycyny B na ml, sterylnie filtrowany, Bioodczynnik, odpowiedni do hodowli komórkowych</td></tr><tr><td>Inkubator CO2 Binder</td><td>VWR, Radnor, USA</td><td>C170-ULE3</td><td></td></tr><tr><td>Kolba CytoOne T-75cm z nasadką filtrującą</td><td>USA Scientific, Ocala, USA</td><td>CC7682-4875</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS)</td><td>Sigma, St. Louis, USA</td><td>Należy stosować D8537-500 mL</td><td>PBS bez chlorku wapnia i chlorku magnezu, ponieważ oba mogą zmieniać polaryzację makrofagów</td></tr><tr><td>Wirówka Eppendorf 5804 R (chłodzona)</td><td>Eppendorf, Enfield, USA-Alkohol</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>etylowy (70%)</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>FACSCalibur cytometr przepływowy</td><td>BD Biosciences, San Diego, USA-</td><td></td><td>Cytometr przepływowy współpracuje z oprogramowaniem CellQuest (BD Biosciences)</td></tr><tr><td>Falcon 24-dołkowa płytka</td><td>VWR, Radnor, USA</td><td>353504</td><td></td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca (FBS)</td><td>ATCC, Manassas, USA</td><td>30-2020</td><td></td></tr><tr><td>FITC Mouse Anti-Human CD14</td><td>BD Biosciences, San Diego, USA</td><td>555397</td><td>Cytometria przepływowa, marker komórek szpikowych (100 testów)</td></tr><tr><td>FITC Mouse Anti-Human CD80</td><td>BD Pharmingen, San Diego, USA</td><td>557226</td><td>Cytometria przepływowa, marker M1 (100 testów)</td></tr><tr><td>FITC Mysz IgG1 &kappa; Isotype Control</td><td>BD Pharmingen, San Diego, USA</td><td>555748</td><td>Cytometria przepływowa, kontrola izotypu dla CD80 (100 testów)</td></tr><tr><td>FITC Mouse IgG2a, &kappa; Kontrola izotypu</td><td>BD Biosciences, San Diego, USA</td><td>553456</td><td>Cytometria przepływowa, kontrola izotypu dla CD14 (100 testów)</td></tr><tr><td>Ludzki blok BD Fc BD</td><td>Biosciences, San Diego, USA</td><td>564220</td><td>Cytometria przepływowa, blok Fc (0,25 mg)</td></tr><tr><td>Ludzka interleukina 13 (IL-13)</td><td>R& D, Minneapolis, USA</td><td>IL-771-10 &mu; g</td><td></td></tr><tr><td>Ludzka interleukina 4 (IL-4)</td><td>R& D, Minneapolis, Stany</td><td>Zjednoczone SRP3093-20 &mu; g</td><td></td></tr><tr><td>Szafa bezpieczeństwa biologicznego Labconco (seria Delta 36212/36213)</td><td>Labconco, Kansas City, USA-Roztwór</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>L-glutaminy, 200 mM</td><td>ATCC, Manassas, USA</td><td>30-2214</td><td></td></tr><tr><td>Lipopolisacharyd (LPS) z E. coli 0111:B4</td><td>Sigma, St. Louis, USA</td><td>L2630-100 mg</td><td></td></tr><tr><td>Mini skrobaki do komórek</td><td>Biotium, Fremont, USA</td><td>22003</td><td></td></tr><tr><td>Neubauer hemocytometr</td><td>Fisher Scientific, Waltham, USA</td><td>02-671-5</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop odwrócony Nikon Eclipse TS100</td><td></td> <td>Nikon, Melville, USA-Woda</td><td></td></tr> <tr><td>wolna od nukleaz</td><td>Invitrogen, Carlsbad, USA</td><td>AM9937</td><td></td></tr><tr><td>Olympus Light Microscope RH-2</td><td>Mikroskop centralny, Feasterville, USA</td><td>40888</td><td></td></tr><tr><td>Zmienna pipeta P10 - Gilson</td><td>VWR, Radnor, USA</td><td>76180-014</td><td></td></tr><tr><td>Zmienna pipeta P1000-Gilson</td><td>VWR, Radnor, USA</td><td>76177-990</td><td></td></tr><tr><td>Zmienna pipeta P200- Gilson</td><td>VWR, Radnor, USA</td><td>76177-988</td><td></td></tr><tr><td>PE Mysz anty-ludzka CD11b</td><td>BD Biosciences, San Diego, USA</td><td>555388</td><td>Cytometria przepływowa, marker komórek szpikowych (100 testów)</td></tr><tr><td>PE Mysz IgG1 i kappa; Kontrola izotypu</td><td>BD Biosciences, San Diego, USA</td><td>555749</td><td>Cytometria przepływowa, kontrola izotypu dla CD11b (100 testów)</td></tr><tr><td>PE-Cy 5 Mysz anty-ludzka CD206</td><td>BD Pharmingen, San Diego, USA</td><td>551136</td><td>Cytometria przepływowa, marker M2 (100 testów)</td></tr><tr><td>PE-Cy 5 Mysz IgG1 &kappa; Kontrola izotypu</td><td>BD Pharmingen, San Diego, USA</td><td>555750</td><td>Cytometria przepływowa, kontrola izotypu dla CD206 (100 testów)</td></tr><tr><td>12-mirystynian 13-octanu Phorbol (PMA)</td><td>Sigma, St. Louis, USA</td><td>P8139</td><td></td></tr><tr><td>Pipipeta Powerpette Plus</td><td>VWR, Radnor, USA</td><td>75856-448</td><td></td></tr><tr><td>Precyzyjna kąpiel wodna (model 183)</td><td>Precision Scientific, Chicago, USA</td><td>66551</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 Medium</td><td>ATCC, Manassas, USA</td><td>30-2001</td><td></td></tr><tr><td>Linia komórkowa THP-1, American Type Culture Collection (ATCC)</td><td>ATCC, Manassas, USA</td><td>TIB-202</td><td></td></tr></tbody></table>

różnicowanie i polaryzacja makrofagów do fenotypu podobnego do m2 przy użyciu ludzkiej linii komórkowej białaczki thp-1 podobnej do monocytów

Macrophage Differentiation and Polarization into an M2-Like Phenotype using a Human Monocyte-Like THP-1 Leukemia Cell Line

Makrofagi związane z nowotworem (TAM) mogą zmieniać swoją ekspresję i profil cytokin w zależności od bodźców zewnętrznych. Ta niezwykła plastyczność umożliwia TAM przystosowanie się do zachodzących zmian w mikrośrodowisku guza. Makrofagi mogą mieć przede wszystkim właściwości prozapalne (podobne do M1) lub przeciwzapalne (podobne do M2) i mogą stale przełączać się między tymi dwoma głównymi stanami. Makrofagi podobne do M2 w środowisku guza są związane z progresją raka i złym rokowaniem w kilku typach raka. Wiele różnych metod indukowania różnicowania i polaryzacji komórek THP-1 jest wykorzystywanych do badania mechanizmów komórkowych i międzykomórkowych oraz wpływu TAM w mikrośrodowisku nowotworów. Obecnie nie ma ustalonego modelu polaryzacji makrofagów podobnych do M2 przy użyciu linii komórkowej THP-1, a wyniki ekspresji i profili cytokin makrofagów spowodowanych pewnymi bodźcami in vitro różnią się w zależności od badania. Protokół ten służy jako szczegółowe wytyczne do różnicowania komórek podobnych do monocytów THP-1 w makrofagi M0 i dalszej polaryzacji komórek do fenotypu podobnego do M2 w ciągu 14 dni. Pokazujemy zmiany morfologiczne komórek podobnych do monocytów THP-1, zróżnicowanych makrofagów i spolaryzowanych makrofagów podobnych do M2 za pomocą mikroskopii świetlnej. Model ten jest podstawą dla modeli linii komórkowych badających przeciwzapalne działanie TAM i ich interakcje z innymi populacjami komórek mikrośrodowiska guza.

Przeprowadzono charakterystykę makrofagów typu M2, a polaryzację M2 potwierdzono za pomocą cytometrii przepływowej z wykorzystaniem markerów klastrów różnicowania (CD): CD14, CD11b, CD80 (marker typu M1) oraz CD206 (marker typu M2). Barwienie cytometryczne wykonano zgodnie z instrukcjami producenta. Makrofagi przemyto PBS/5% FBS i inkubowano z blokiem receptorów Fcγ, aby uniknąć niespecyficznego wiązania. Następnie komórki barwiono przez 30 min w temperaturze 4 °C przeciwciałami mysimi anty-ludzkimi CD14 i CD80 sprzężony...

Makrofagi podobne do M2 związane z nowotworami (TAM) są związane z progresją guza i złym rokowaniem w raku. Protokół ten służy jako szczegółowy przewodnik do powtarzalnego różnicowania i polaryzacji komórek podobnych do monocytów THP-1 w makrofagi podobne do M2 w ciągu 14 dni. Model ten jest podstawą do badania przeciwzapalnego działania TAM w mikrośrodowisku guza.

Różnicowanie i polaryzacja makrofagów do fenotypu podobnego do M2 przy użyciu ludzkiej linii komórkowej białaczki THP-1 podobnej do monocytów

Tumor-associated macrophages (TAM) can switch their expression and cytokine profile according to external stimuli. This remarkable plasticity enables TAM ...

Makrofagi związane z nowotworami przeciwzapalnymi są związane z progresją i złym rokowaniem w przypadku raka. Protokół ten jest przewodnikiem po różnicowaniu i polaryzacji komórek podobnych do monocytów THP-1 w makrofagi podobne do M2 w ciągu 14 dni. Obecnie nie ma ustalonego modelu przeciwzapalnej polaryzacji THP-1.Protokół ten wykorzystuje odpowiednie okresy spoczynku i przedłużony proces polaryzacji, aby stworzyć odrębny podtyp makrofagów podobny do M2. Rozwój guza, na przykład w raku jelita grubego i przebudowie tkanek, jest kontrolowany przez makrofagi przeciwzapalne. Wśród badań badających ich funkcję, standaryzowane tworzenie odrębnego podtypu podobnego do M2 zapewnia powtarzalne wyniki.Zacznij od ustawienia timera na 150 sekund. Wyjąć zamrożoną fiolkę zawierającą linię komórkową THP-1 z ciekłego azotu i natychmiast rozmrozić fiolkę w temperaturze 37 stopni Celsjusza w łaźni wodnej, uruchamiając stoper zaraz po włożeniu fiolki do łaźni wodnej. Poluzuj nakrętkę, aby uwolnić ciśnienie powstałe w wyniku procesu rozmrażania, upewniając się, że otwór rurki nie styka się z wodą, aby uniknąć zanieczyszczenia.Rozmrozić zawiesinę komórkową, aż w fiolce pozostanie odłamek lodu o wielkości około czterech milimetrów i natychmiast przejść do następnego kroku. Przenieś fazę ciekłą zawiesiny komórek do 15-mililitrowej probówki zawierającej dziewięć mililitrów ciepłej pożywki wzrostowej. Następnie przenieś jeden mililitr tej ciepłej zawiesiny komórek do fiolki THP-1 i z powrotem do 15-mililitrowej probówki, aby stopić pozostały wiór lodowy i przepłukać fiolkę, aby upewnić się, że żadne komórki nie zostały pozostawione.Zawiesinę należy delikatnie wymieszać, pipetując ją w górę i w dół za pomocą pipety o pojemności jednego mililitra. Usunąć około 10 mikrolitrów próbki, aby policzyć komórki pod kątem żywotności za pomocą błękitu trypanowego. Komórki z czystą cytoplazmą są żywotne, niebieska cytoplazma wskazuje na śmierć komórki.Podczas liczenia odkręcaj zawiesinę ciepłych komórek w temperaturze 200 razy G przez siedem minut w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Całkowicie usunąć supernatant i ponownie zawiesić komórki w pożywce wzrostowej, aby osiągnąć gęstość komórek 500 000 komórek na mililitr. Delikatnie wymieszaj zawiesinę i przenieś po 22 mililitry do kolb do kultur komórkowych T75 każda.Przechowuj kolby pionowo w inkubatorze w temperaturze 37 stopni Celsjusza przy stężeniu 5% dwutlenku węgla i wymieniaj pożywkę wzrostową co trzy do czterech dni. Przygotuj zawiesinę komórkową, aby wysiać komórki o gęstości 300 000 na mililitr na studzienkę na 24-dołkowe płytki do hodowli komórkowych. Delikatnie wymieszaj podłoże i przygotuj porcje po 26 mililitrów w 50-mililitrowych probówkach.Przenieś jeden mililitr pożywki zawierającej komórki do każdego dołka 24-dołkowej płytki. Delikatnie wymieszać pożywkę, pipetując ją w górę i w dół między transferami. Trzymaj świeżo przygotowany roztwór roboczy PMA na lodzie i dodaj 100 nanogramów PMA do dołka.Inkubować płytki w inkubatorze bez dalszej obróbki przez 72 godziny. Po 72 godzinach usuń pożywkę wzrostową i zastąp ją jednym mililitrem świeżej pożywki wzrostowej, uważając, aby nie dotykać dna studzienek końcówkami pipet. Pozostaw komórki na kolejne 96 godzin w inkubatorze.Usuń pożywkę wzrostową i zastąp ją jednym mililitrem świeżego podłoża wzrostowego. Dodać 20 nanogramów interleukiny 4 i 20 nanogramów interleukiny 13 na studzienkę. Następnie pozwól komórkom odpoczywać przez 48 godzin w inkubatorze.Powtórz cały proces po 48 godzinach i pozwól komórkom odpoczywać przez kolejne 48 godzin w inkubatorze. Usuń pożywkę wzrostową i zastąp ją jednym mililitrem świeżego podłoża wzrostowego. Następnie pozwól komórkom odpoczywać przez 48 godzin w inkubatorze.Usuń ciepłe podłoże komórkowe z każdej studzienki i zastąp je jednomililitrową mieszaniną lodowatego PBS bez wapnia i magnezu oraz 5% FBS. Następnie natychmiast umieść płytkę komórkową na lodzie na 45 minut. Po 45 minutach na lodzie zeskrob komórki za pomocą mini skrobaków do komórek.Delikatnie przenieś oderwane makrofagi do zimnego PBS i 5% FBS w 15-mililitrowej probówce trzymanej na lodzie. Makrofagi pochodzące z metody polaryzacji wykazują ekspresję markerów CD14, a także CD11b. Markery monocytów i makrofagów CD14 i CD11b ulegały ekspresji odpowiednio w 70,9% i 74,7% komórek.Komórki wykazywały niskie poziomy powierzchniowe markera podobnego do M1 CD80 w 0,2% komórek i wysokie poziomy powierzchniowe markera podobnego do M2 CD206 w 62,6% komórek. Ponieważ komórki THP-1 w pożywce mają tendencję do opadania na dno fiolki i są łatwe do aktywacji przez naprężenia mechaniczne, ważne jest delikatne mieszanie i obchodzenie się z komórkami. Makrofagi podobne do M2 są tworzone w sposób powtarzalny i zostały scharakteryzowane za pomocą QR-TPCR, ELISA i cytometrii przepływowej.Jest to podstawa do badania mechanizmów przeciwzapalnych w rozwoju nowotworów lub przebudowie tkanek.

macrophage-differentiation-polarization-into-an-m2-like-phenotype

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

W tym filmie demonstrujemy procedurę indukowania różnicowania i polaryzacji monocytów pochodzących z krwi obwodowej na makrofagi M1 lub M2. Inkubacja z czynnikiem stymulującym tworzenie kolonii granulocytów-makrofagów, lipopolisacharydem i interferonem-gamma daje prozapalne makrofagi M1, podczas gdy inkubacja z czynnikiem stymulującym tworzenie kolonii makrofagów i interleukiną-4 indukuje przeciwzapalną produkcję makrofagów M2.

Różnicowanie i polaryzacja komórek pochodzących z monocytów w komórki podobne do makrofagów

Artykuł opisuje łatwy w użyciu adaptacyjny model in vitro do badania polaryzacji makrofagów. W obecności GM-CSF/M-CSF krwiotwórcze komórki macierzyste/progenitorowe ze szpiku kostnego są kierowane do różnicowania monocytowego, a następnie stymulacji M1 lub M2. Stan aktywacji można śledzić za pomocą zmian w antygenach powierzchniowych komórki, ekspresji genów i szlakach sygnalizacji komórkowej.

Badanie polaryzacji makrofagów przy użyciu makrofagów pochodzących ze szpiku kostnego

Makrofagi pochodzące z monocytów są ważnymi komórkami wrodzonego układu odpornościowego. W tym miejscu opisujemy łatwy w użyciu model in vitro do generowania tych komórek. Korzystając z wirowania gradientowego, izolacji ujemnych kulek i określonych warunków hodowli komórek, można wygenerować makrofagi pochodzące z monocytów do badań fenotypowych i funkcjonalnych.

Model in vitro do badania heterogeniczności różnicowania i polaryzacji ludzkich makrofagów

Prezentujemy prosty i skuteczny protokół do generowania ludzkich makrofagów. Płaszcze kożuchowe są przetwarzane przez wirowanie gradientowe o podwójnej gęstości, a izolowane monocyty są następnie różnicowane do makrofagów w workach do hodowli komórkowych pokrytych teflonem. Maksymalizuje to wydajność makrofagów i ułatwia pobieranie komórek do kolejnych eksperymentów.

Izolacja ludzkich monocytów przez wirowanie z podwójnym gradientem i ich różnicowanie do makrofagów w workach do hodowli komórkowych pokrytych teflonem

Przedstawiono protokół dla hodowli komórkowej makrofagów makrofagów stymulujących tworzenie kolonii (M-CSF) zróżnicowanych ludzkich makrocytów pochodzących z monocytów. Protokół wykorzystuje krioprezerwację monocytów w połączeniu z ich masowym różnicowaniem do makrofagów. Następnie zebrane makrofagi można następnie wysiać w studzienkach hodowlanych o wymaganej gęstości komórek do przeprowadzenia eksperymentów.

Posiew czynnika stymulującego tworzenie kolonii makrofagów Zróżnicowane ludzkie makrofagi pochodzące z monocytów

Przedstawiamy protokół uzyskiwania sygnatur proteomicznych ludzkich makrofagów i stosowania go do określania wpływu środowiska o niskiej zawartości tlenu na polaryzację makrofagów.

Analiza proteomiczna polaryzacji ludzkich makrofagów w środowisku o niskiej zawartości tlenu

Ten protokół dostarcza metodę badania zakażenia Mycobacterium tuberculosis w ludzkich makrofagach spolaryzowanych M1 lub M2 w oparciu o różnicowanie monocytów krwi obwodowej do komórek podobnych do makrofagów, które są zakażone znakowanym przez GFP wirulentnym szczepem H37Rv, i analizowane za pomocą cytometrii przepływowej przy użyciu 10-kolorowego panelu, w tym ekspresji wybranych markerów M1/M2.

Polaryzacja ludzkich komórek pochodzących z monocytów M1 i M2 oraz analiza za pomocą cytometrii przepływowej po zakażeniu Mycobacterium tuberculosis

Tutaj prezentujemy szczegółowy protokół oceny potencjału immunomodulacyjnego powierzchni implantów in vitro, mający na celu poprawę wiarygodności i odtwarzalności obecnych protokołów oraz promowanie dalszych badań. Profile cytokin wydzielniczych, ekspresję mRNA i markery powierzchni komórek monitorowano za pomocą makrofagów pochodzących z monocytów krwi w celu zbadania polaryzacji makrofagów hodowanych na tytanie.

Polaryzacja i charakterystyka ludzkich makrofagów pochodzących z monocytów typu M1 i M2 na powierzchniach implantów

Monocyty i makrofagi to bardzo plastyczne i reprogramowalne komórki odpornościowe, kluczowe dla zdrowia i choroby. Wyczuwają i reagują na szeroki zakres bodźców, przyjmując określone programy różnicowania i fenotypy. Ustandaryzowaliśmy model in vitro do badania polaryzacji i przeprogramowania makrofagów, zapewniając cenne narzędzie do badań.

Przeprogramowanie modelu ludzkich makrofagów pochodzących z monocytów do testów in vitro

Opracowaliśmy ulepszenia i zaktualizowane metody dla istniejącego testu monocytytowo-monowarstwowego (MMA), w którym makrofagi są używane do lepszego przewidywania klinicznego znaczenia alloprzeciwciał krwinek czerwonych w medycynie transfuzjologicznej i immunologii. Ten test nazywa się testem monocytów-makrofagów (M-MA).

Przewidywanie znaczenia przeciwciał przeciwko krwinkom czerwonym za pomocą testu monocytów-makrofagów

Poznaj protokół różnicowania i polaryzacji komórek THP-1 do makrofagów M2 w ciągu 14 dni. Ta metoda umożliwia badanie mechanizmów przeciwzapalnych w mikrośrodowisku nowotworowym.

Różnicowanie i polaryzacja makrofagów do fenotypu podobnego do M2 przy użyciu ludzkiej linii komórkowej białaczki THP-1 podobnej do monocytów (Wideo) | JoVE Journal

Różnicowanie i polaryzacja makrofagów do fenotypu podobnego do M2 przy użyciu ludzkiej linii komórkowej białaczki THP-1 podobnej do monocytów

Przeglądaj więcej filmów