Name: Definiowanie funkcji genów w nowotworzeniu poprzez ablację ex vivo floksowanych alleli w złośliwych komórkach nowotworowych osłonki nerwów obwodowych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Poznaj metodę ablacji genów letalnych dla embrionu w nowotworach osłonki nerwów obwodowych przy użyciu modeli mysich. Technika ta umożliwia badanie funkcji genów in vivo w kontekście onkologicznym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ta praca była wspierana przez granty z National Institute of Neurological Diseases and Stroke (R01 NS048353, R01 NS109655), National Cancer Institute (R01 CA122804), Departamentu Obrony (X81XWH-09-1-0086, W81XWH-11-1-0498, W81XWH-12-1-0164, W81XWH-14-1-0073 i W81XWH-15-1-0193) oraz The Children's Tumor Foundation (2014-04-001 i 2015-05-007).

<ol><li>Ricciuti, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody-drug+conjugates+for+lung+cancer+in+the+era+of+personalized+oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Cancer+Biology%22%5BJournal%5D)">Antibody-drug conjugates for lung cancer in the era of personalized oncology.</a> Seminars in Cancer Biology. 69, 268-278 (2019).</li>
<li>Litak, J., Mazurek, M., Grochowski, C., Kamieniak, P., Rolinski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD-L1%2FPD-1+axis+in+glioblastoma+multiforme%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">PD-L1/PD-1 axis in glioblastoma multiforme.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (21), 5347(2019).</li>
<li>Roskoski, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+of+FDA-approved+small+molecule+protein+kinase+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">Properties of FDA-approved small molecule protein kinase inhibitors.</a> Pharmacological Research. 144, 19-50 (2019).</li>
<li>Heffner, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supporting+conditional+mouse+mutagenesis+with+a+comprehensive+cre+characterization+resource%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Supporting conditional mouse mutagenesis with a comprehensive cre characterization resource.</a> Nature Communications. 3, 1218(2012).</li>
<li>Longo, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ErbB4+promotes+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+pathogenesis+via+Ras-independent+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Communication+and+Signaling%22%5BJournal%5D)">ErbB4 promotes malignant peripheral nerve sheath tumor pathogenesis via Ras-independent mechanisms.</a> Cell Communication and Signaling. 17 (1), 74(2019).</li>
<li>Kazmi, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mice+overexpressing+neuregulin-1+model+neurofibroma-malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+progression+and+implicate+specific+chromosomal+copy+number+variations+in+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Transgenic mice overexpressing neuregulin-1 model neurofibroma-malignant peripheral nerve sheath tumor progression and implicate specific chromosomal copy number variations in tumorigenesis.</a> American Journal of Pathology. 182 (3), 646-667 (2013).</li>
<li>Brosius, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuregulin-1+overexpression+and+Trp53+haploinsufficiency+cooperatively+promote+de+novo+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropatholica%22%5BJournal%5D)">Neuregulin-1 overexpression and Trp53 haploinsufficiency cooperatively promote de novo malignant peripheral nerve sheath tumor pathogenesis.</a> Acta Neuropatholica. 127 (4), 573-591 (2014).</li>
<li>Ducatman, B. S., Scheithauer, B. W., Piepgras, D. G., Reiman, H. M., Ilstrup, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors.+A+clinicopathologic+study+of+120+cases%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Malignant peripheral nerve sheath tumors. A clinicopathologic study of 120 cases.</a> Cancer. 57 (10), 2006-2021 (1986).</li>
<li>Gassmann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aberrant+neural+and+cardiac+development+in+mice+lacking+the+ErbB4+neuregulin+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Aberrant neural and cardiac development in mice lacking the ErbB4 neuregulin receptor.</a> Nature. 378 (6555), 390-394 (1995).</li>
<li>Tidcombe, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+and+mammary+gland+defects+in+ErbB4+knockout+mice+genetically+rescued+from+embryonic+lethality%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Nationall+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Neural and mammary gland defects in ErbB4 knockout mice genetically rescued from embryonic lethality.</a> Proceedings of the Nationall Academy of Sciences of the United States of America. 100 (14), 8281-8286 (2003).</li>
<li>Golub, M. S., Germann, S. L., Lloyd, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+characteristics+of+a+nervous+system-specific+erbB4+knock-out+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Behavioral characteristics of a nervous system-specific erbB4 knock-out mouse.</a> Behavioral Brain Research. 153 (1), 159-170 (2004).</li>
<li>Huijbregts, R. P., Roth, K. A., Schmidt, R. E., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertrophic+neuropathies+and+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors+in+transgenic+mice+overexpressing+glial+growth+factor+beta3+in+myelinating+Schwann+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Hypertrophic neuropathies and malignant peripheral nerve sheath tumors in transgenic mice overexpressing glial growth factor beta3 in myelinating Schwann cells.</a> Journal of Neuroscience. 23 (19), 7269-7280 (2003).</li>
<li>Jackson-Fisher, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+Neu%2FErbB2-induced+mammary+tumors+is+unaffected+by+loss+of+ErbB4%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Formation of Neu/ErbB2-induced mammary tumors is unaffected by loss of ErbB4.</a> Oncogene. 25 (41), 5664-5672 (2006).</li>
<li>Byer, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tamoxifen+inhibits+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+growth+in+an+estrogen+receptor-independent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-oncology%22%5BJournal%5D)">Tamoxifen inhibits malignant peripheral nerve sheath tumor growth in an estrogen receptor-independent manner.</a> Neuro-oncology. 13 (1), 28-41 (2011).</li>
<li>Kang, Y., Pekmezci, M., Folpe, A. L., Ersen, A., Horvai, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+utility+of+SOX10+to+distinguish+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+from+synovial+sarcoma%2C+including+intraneural+synovial+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Modern+Pathology%22%5BJournal%5D)">Diagnostic utility of SOX10 to distinguish malignant peripheral nerve sheath tumor from synovial sarcoma, including intraneural synovial sarcoma.</a> Modern Pathology. 27 (1), 55-61 (2014).</li>
<li>Longo, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+genomic+characterization+of+a+sporadic+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Establishment and genomic characterization of a sporadic malignant peripheral nerve sheath tumor cell line.</a> Scientific Reports. 11 (1), 5690(2021).</li>
<li>Chomczynski, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reagent+for+the+single-step+simultaneous+isolation+of+RNA%2C+DNA+and+proteins+from+cell+and+tissue+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples.</a> Biotechniques. 15 (3), 532-537 (1993).</li>
<li>Bolger, A. M., Lohse, M., Usadel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trimmomatic%3A+a+flexible+trimmer+for+Illumina+sequence+data%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Trimmomatic: a flexible trimmer for Illumina sequence data.</a> Bioinformatics. 30 (15), 2114-2120 (2014).</li>
<li>Grozdanov, P. N., Li, J., Yu, P., Yan, W., MacDonald, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cstf2t+regulates+expression+of+histones+and+histone-like+proteins+in+male+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Andrology%22%5BJournal%5D)">Cstf2t regulates expression of histones and histone-like proteins in male germ cells.</a> Andrology. 6 (4), 605-615 (2018).</li>
<li>Kaur, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD63%2C+MHC+class+1%2C+and+CD47+identify+subsets+of+extracellular+vesicles+containing+distinct+populations+of+noncoding+RNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">CD63, MHC class 1, and CD47 identify subsets of extracellular vesicles containing distinct populations of noncoding RNAs.</a> Scientific Reports. 8 (1), 2577(2018).</li>
<li>Avraham, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Satellite+glial+cells+promote+regenerative+growth+in+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Satellite glial cells promote regenerative growth in sensory neurons.</a> Nature Communications. 11 (1), 4891(2020).</li>
<li>Love, M. I., Huber, W., Anders, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moderated+estimation+of+fold+change+and+dispersion+for+RNA-seq+data+with+DESeq2%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biology%22%5BJournal%5D)">Moderated estimation of fold change and dispersion for RNA-seq data with DESeq2.</a> Genome Biology. 15 (12), 550(2014).</li>
<li>Lin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+normalization+and+differential+expression+analyses+using+RNA-Seq+data+from+726+individual+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Comparison of normalization and differential expression analyses using RNA-Seq data from 726 individual Drosophila melanogaster.</a> BMC Genomics. 17, 28(2016).</li>
<li>Eden, E., Navon, R., Steinfeld, I., Lipson, D., Yakhini, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GOrilla%3A+a+tool+for+discovery+and+visualization+of+enriched+GO+terms+in+ranked+gene+lists%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">GOrilla: a tool for discovery and visualization of enriched GO terms in ranked gene lists.</a> BMC Bioinformatics. 10, 48(2009).</li>
<li>Huang, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+DAVID+Gene+Functional+Classification+Tool%3A+a+novel+biological+module-centric+algorithm+to+functionally+analyze+large+gene+lists%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biology%22%5BJournal%5D)">The DAVID Gene Functional Classification Tool: a novel biological module-centric algorithm to functionally analyze large gene lists.</a> Genome Biology. 8 (9), 183(2007).</li>
<li>Mi, H., Muruganujan, A., Casagrande, J. T., Thomas, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+gene+function+analysis+with+the+PANTHER+classification+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Large-scale gene function analysis with the PANTHER classification system.</a> Nature Protocols. 8 (8), 1551-1566 (2013).</li>
<li>Subramanian, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+set+enrichment+analysis%3A+a+knowledge-based+approach+for+interpreting+genome-wide+expression+profiles%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Nationall+Academy+of+the+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Gene set enrichment analysis: a knowledge-based approach for interpreting genome-wide expression profiles.</a> Proceedings of the Nationall Academy of the Sciences of the United States of America. 102 (43), 15545-15550 (2005).</li>
<li>Merico, D., Isserlin, R., Stueker, O., Emili, A., Bader, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enrichment+map%3A+a+network-based+method+for+gene-set+enrichment+visualization+and+interpretation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Enrichment map: a network-based method for gene-set enrichment visualization and interpretation.</a> PLoS One. 5 (11), 13984(2010).</li>
<li>Yoon, S., Kim, S. Y., Nam, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+gene-set+enrichment+analysis+of+RNA-Seq+data+with+small+replicates%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Improving gene-set enrichment analysis of RNA-Seq data with small replicates.</a> PLoS One. 11 (11), 0165919(2016).</li>
<li>Koch, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+beginner%27s+guide+to+analysis+of+RNA+sequencing+data%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+Cell+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">A beginner's guide to analysis of RNA sequencing data.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 59 (2), 145-157 (2018).</li>
<li>Turk, A. N., Byer, S. J., Zinn, K. R., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+xenografting+of+human+luciferase-tagged+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cells+for+in+vivo+testing+of+candidate+therapeutic+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Orthotopic xenografting of human luciferase-tagged malignant peripheral nerve sheath tumor cells for in vivo testing of candidate therapeutic agents.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (49), e2558(2011).</li>
<li>Faul, F. E., Lang, A. G., Buchner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((G%2APower+3%3A+a+flexible+statistical+power+analysis+program+for+the+social%2C+behavioral%2C+and+biomedical+sciences%5BTitle%5D)+AND+%22Behavior+Research+Methods%22%5BJournal%5D)">G*Power 3: a flexible statistical power analysis program for the social, behavioral, and biomedical sciences.</a> Behavior Research Methods. 39 (2), 175(2007).</li>
<li>Chen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+of+origin+in+the+embryonic+nerve+roots+for+NF1-associated+plexiform+neurofibroma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Cells of origin in the embryonic nerve roots for NF1-associated plexiform neurofibroma.</a> Cancer Cell. 26 (5), 695-706 (2014).</li>
<li>Mo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+neurofibroma+model+from+induced+pluripotent+stem+cells+delineates+tumor+pathogenesis+and+developmental+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Humanized neurofibroma model from induced pluripotent stem cells delineates tumor pathogenesis and developmental origins.</a> Journal of Clinical Investigation. 131 (1), 139807(2021).</li>
<li>Chau, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+therapeutic+efficacy+of+a+novel+pharmacologic+inducer+of+apoptosis+in+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Preclinical therapeutic efficacy of a novel pharmacologic inducer of apoptosis in malignant peripheral nerve sheath tumors.</a> Cancer Research. 74 (2), 586-597 (2014).</li>
<li>Dodd, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NF1%28%2B%2F-%29+Hematopoietic+cells+accelerate+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+development+without+altering+chemotherapy+response%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">NF1(+/-) Hematopoietic cells accelerate malignant peripheral nerve sheath tumor development without altering chemotherapy response.</a> Cancer Research. 77 (16), 4486-4497 (2017).</li>
<li>Eckert, J. M., Byer, S. J., Clodfelder-Miller, B. J., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuregulin-1+beta+and+neuregulin-1+alpha+differentially+affect+the+migration+and+invasion+of+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Neuregulin-1 beta and neuregulin-1 alpha differentially affect the migration and invasion of malignant peripheral nerve sheath tumor cells.</a> Glia. 57 (14), 1501-1520 (2009).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.

Przedstawione tu szczegółowe metody zostały opracowane z wykorzystaniem modelu GEM MPNST. Jeśli jednak interesująca nas tkanka nowotworowa może zostać rozproszona na pojedyncze komórki, metodologie te można łatwo dostosować do różnych typów nowotworów powstających w GEM. Ważne jest, aby upewnić się, że floksowany allel nie powoduje i) zmniejszonego przeżycia, co może utrudnić uzyskanie wystarczającej liczby myszy do badań przesiewowych w kierunku nowotworów, lub ii) zwiększonej latencji guza, która może utrudnić uzyskani...

Przed ostatnimi dwoma dekadami, leczenie ludzkich nowotworów opierało się głównie na radioterapii i chemioterapeutykach, które były szeroko ukierunkowane na szybko rozprzestrzeniające się populacje komórkowe poprzez uszkadzanie DNA lub hamowanie syntezy DNA. Chociaż metody te hamowały wzrost komórek rakowych, miały również szkodliwe skutki uboczne dla normalnych, szybko proliferujących typów komórek, takich jak komórki nabłonka jelitowego i komórki mieszków włosowych. Niedawno terapia nowotworów zaczęła wykorzystywać chemioterapeutyki, które precyzyjnie celują w białka w szlakach sygnałowych, które są krytycznie ważne dla wzrostu nowotworu u danego pacjenta. Podejście to, powszechnie określane jako "medycyna precyzyjna", doprowadziło do opracowania stale poszerzającego się repertuaru przeciwciał monoklonalnych i inhibitorów małocząsteczkowych. Środki te skutecznie hamują proliferację i przeżycie komórek nowotworowych, unikając jednocześnie szkodliwych skutków ubocznych dla normalnych typów komórek, obserwowanych w przypadku konwencjonalnych chemioterapeutyków i radioterapii. Przeciwciała monoklonalne stosowane w leczeniu nowotworów u ludzi najczęściej celują w cząsteczki powierzchniowe komórek, takie jak receptory czynnika wzrostu1 (np. duża rodzina receptorowych kinaz tyrozynowych obejmujących błonę) i modulatory odpowiedzi immunologicznej2 (np. białko programowanej śmierci komórki 1, ligand programowanej śmierci 1). Małe inhibitory molekularne mogą hamować zarówno białka powierzchniowe komórki, jak i białka sygnałowe, które znajdują się wewnątrzkomórkowo3. Jednak, aby skutecznie zastosować te nowe środki terapeutyczne, należy ustalić, że dany nowotwór jest zależny od cząsteczki, która jest celem potencjalnego środka terapeutycznego.
Chociaż te nowe środki terapeutyczne mają bardziej skoncentrowane działanie, wiele z nich nadal hamuje działanie więcej niż jednego białka. Ponadto często dostępnych jest wiele środków o różnej skuteczności i swoistości, które są ukierunkowane na określone białko. W związku z tym podczas badań przedklinicznych rozsądne jest stosowanie dodatkowych podejść, takich jak ablacja genetyczna, w celu walidacji białka kandydującego jako celu terapeutycznego. Jednym ze szczególnie użytecznych podejść do walidacji białka jako celu terapeutycznego jest ablacja genu kodującego białko kandydujące w genetycznie zmodyfikowanym modelu zwierzęcym, który rozwija określony typ nowotworu będący przedmiotem zainteresowania. Podejście to może być stosunkowo proste, jeśli dostępne są myszy z mutacją zerową (albo mutacją naturalną, genetycznie modyfikowaną mutacją zerową ("nokaut"], lub mutacją zerową wprowadzoną przez pułapkę genową), a myszy są zdolne do dorosłości. Niestety, myszy z mutacją zerową, które spełniają te kryteria, często nie są dostępne, zazwyczaj dlatego, że mutacja zerowa powoduje śmierć zarodkową lub w pierwszych dniach życia pourodzeniowego. W tej sytuacji myszy podatne na rozwój nowotworu mogą zamiast tego zostać skrzyżowane z myszami, u których kluczowe segmenty genu będącego przedmiotem zainteresowania są otoczone miejscami loxP ("floxed"), co pozwala na ablację genu poprzez wprowadzenie transgenu wyrażającego rekombinazę Cre do komórek nowotworowych (warunkowy nokaut). Takie podejście ma kilka zalet. Po pierwsze, jeśli dostępny jest sterownik Cre, który ulega ekspresji w guzie, ale nie w typie komórki, który doprowadził do śmierci w konwencjonalnych nokautach, takie podejście może potencjalnie zweryfikować kandydata na cel terapeutyczny. Po drugie, ablacja genu kodującego białko kandydujące w komórkach nowotworowych, ale nie w innych elementach wewnątrznowotworowych, takich jak fibroblasty związane z nowotworem lub komórki odpornościowe, pozwala badaczowi na rozróżnienie między autonomicznymi i nieautonomicznymi komórkami efektami celu terapeutycznego. Wreszcie, indukowany tamoksyfenem sterownik Cre (CreERT2) pozwala badaczowi usunąć gen będący przedmiotem zainteresowania na różnych etapach rozwoju guza i określić okno, w którym kandydat na środek terapeutyczny z największym prawdopodobieństwem będzie skuteczny.
Niestety, istnieją również problemy techniczne, które mogą ograniczać stosowanie warunkowych nokautów w nowotworach powstających w modelach GEM. Na przykład czynnik Cre, który ulega ekspresji w komórkach nowotworowych i pozwala uniknąć delecji genu w normalnych komórkach niezbędnych do życia, może nie być dostępny. Inną kwestią, która może być niedoceniana, jest to, że czynniki napędzające Cre i CreERT2 często zmiennie ablują floksowane allele u myszy, co skutkuje mozaicyzmem mutacji zerowej w raku GEM. Kiedy tak się stanie, komórki nowotworowe, w których docelowy gen nie został poddany ablacji, będą nadal szybko się namnażać, przerastając komórki nowotworowe allelami, którym uległa ablacja. Mozaicyzm w liniach napędowych Cre może wystąpić z powodu niewszechobecnej ekspresji Cre w docelowej linii oraz przez nieudaną rekombinację w poszczególnych komórkach niezależnie od wyrażenia Cre4. Jest to znane zjawisko czynników napędzających Cre, które jest zależne od typu komórki i powinno być brane pod uwagę podczas projektowania eksperymentalnego i interpretacji danych. Mozaicyzm może maskować efekt nokautu i prowadzić badacza do błędnego wniosku, że gen będący przedmiotem zainteresowania nie jest niezbędny do proliferacji komórek nowotworowych i/lub przeżycia, a zatem nie jest ważnym celem terapeutycznym.
Kilka z tych problemów napotkano w poprzednim badaniu, które próbowało ustalić, czy receptorowa kinaza tyrozynowa erbB4 jest potencjalnym celem terapeutycznym w komórkach MPNST5. W tych badaniach wykorzystano myszy, które wyrażają transgen kodujący izoform glejowego czynnika wzrostu neureguliny-1 (NRG1) β3 (GGFβ3) pod kontrolą promotora zerowego białka mieliny specyficznego dla komórek Schwanna (myszy P 0-GGFβ3). Myszy P 0-GGFβ3 rozwijają mnogie nerwiakowłókniaki splotowate, które postępują, aby przekształcić się w MPNST w procesie, który podsumowuje procesy patogenezy nerwiakowłókniaka i progresję nerwiakowłókniaka splotowatego-MPNST obserwowaną u pacjentów z autosomalnym dominującym zespołem podatności na nowotwór nerwiakowłókniakowatość typu 1 (NF1)6. Po skrzyżowaniu z myszami z mutacją zerową Trp53, powstały P 0-GGFβ3; Myszy Trp53 +/- rozwijają MPNST de novo, jak widać w cis-Nf1 +/-; Trp53 +/- myszy.
Te MPNST podsumowują postęp od II stopnia Światowej Organizacji Zdrowia (WHO) do IV stopnia zmian obserwowanych u ludzi7. U myszy P 0-GGFβ3 MPNST powstają w istniejących wcześniej nerwiakowłókniakach splotowatych w nerwie trójdzielnym (58%) i rdzeniowych korzeniach nerwów grzbietowych (68%)7; MPNST powstające w P 0-GGFβ3; Myszy Trp53 +/- mają bardzo podobny rozkład. U ludzi MPNST najczęściej powstają w nerwie kulszowym, a następnie w splocie ramiennym, korzeniach nerwów rdzeniowych, błędnym, udowym, środkowym, splocie krzyżowym, zasłonie podkolanowej oraz tylnym nerwie piszczelowym i łokciowym8. Ten rozkład guza w tych modelach GEM różni się nieco od tego, co obserwuje się u ludzi. Jednak MPNST, które powstają w P 0-GGFβ3 i P0-GGFβ3; Myszy Trp53 +/- są histologicznie identyczne z ludzkimi MPNST, przenoszą wiele tych samych mutacji, które obserwuje się w ludzkich MPNST i podsumowują proces progresji nerwiakowłókniaka-MPNST obserwowany u pacjentów z NF1. Generowanie P 0-GGFβ3 lub P0-GGFβ3; Myszy Trp53 +/- z Erbb4-/- nie były wykonalne, ponieważ myszy z dwoma allelami zerowymi Erbb4 umierają w macicy w 10,5 dniu embrionalnym, wtórnym do wad serca9. Ponieważ uratowanie ekspresji Erbb4 w sercu poprzez wprowadzenie specyficznego dla serca transgenu Erbb4 (łańcuch ciężki α-miozyny (MHC)-Erbb4) skutkuje żywotnymi Erbb4-/- myszy10, generacja myszy ze skomplikowanym P 0-GGFβ3; Trp53+/-; α-MHC-ERBB4; Podjęto próbę zbadania genotypu Erbb4-/-.
Jednak kojarzenia nie dały myszy w oczekiwanych proporcjach mendlowskich, co wskazuje, że pożądany genotyp był szkodliwy. W związku z tym generowanie P 0-GGFβ3; Myszy Trp53 +/- z floksowanymi allelami Erbb4 < klasa sup = "xref">11 i sterownik CreERT2 zostały podjęte w celu umożliwienia usunięcia Erbb4 w MPNST powstających u tych myszy. U tych zwierząt nadal obecne były liczne komórki nowotworowe z nienaruszonymi allelami Erbb4 (mozaikowość). Zaobserwowana mozaicyzm może wynikać z nieefektywnego dostarczania tamoksyfenu, co skutkowało różnicami w skuteczności rekombinacji w tkance. Możliwość spontanicznych mechanizmów kompensacyjnych może dodatkowo przyczynić się do mozaicyzmu w rekombinacji za pośrednictwem tamoksyfenu, omijając wymóg ekspresji Erbb4. Możliwe jest, że utrata Trp53 sprawia, że komórki nowotworowe są podatne na dodatkowe spontaniczne "permisywne" mutacje, które mogą zmylić interpretację danych. Ponieważ wydawało się prawdopodobne, że nienaruszone komórki MPNST Erbb4 zamaskują konsekwencje ablacji Erbb4 w innych komórkach nowotworowych, podejście to zostało porzucone.
Te przeszkody doprowadziły do opracowania metodologii ablacji Erbb4 w bardzo wczesnych komórkach MPNST za pomocą adenowirusa eksprymującego rekombinazę Cre i eGFP. Komórki te można oddzielić od komórek niezakażonych za pomocą FACS, co znacznie zmniejsza mozaicyzm dla ablowanego genu Erbb4. Poniżej opisano metody stosowane w tym celu, wraz z metodami stosowanymi do oceny skutków ablacji genów in vitro i in vivo. Poniższy protokół jest przykładem produkcji myszy z nowotworem, które dają guzy zawierające floksowane allele embrionalnych genów letalnych będących przedmiotem zainteresowania do wycięcia ex vivo przed oceną wzrostu guza przeszczepu allogenicznego in vivo. Obejmuje to opis podejść zastosowanych do analizy wpływu, jaki ablacja Erbb4 wywiera na proliferację komórek nowotworowych, przeżycie i ekspresję genów in vitro oraz proliferację, przeżycie i angiogenezę w ortotopowych alloprzeszczepach.

<table><tbody><tr><td>Ad5CMV-eGFP</td><td>Rdzeń wektora transferu genów, Univ of Iowa</td><td>VVC-U of Iowa-4</td><td></td></tr><tr><td>Ad5CMVCre-eGFP</td><td>Gene Transfer Vector Core, Univ of Iowa</td><td>VVC-U of Iowa-1174</td><td></td></tr><tr><td>Alexa 568 Przeciwciało wtórne</td><td>Thermo/Fisher</td><td>GaR A11036</td><td></td></tr><tr><td>Bioconductor Open Source Software dla Bioconductor Bioninformatics</td><td></td><td>http://www.bioconductor.org</td><td>alternatywne narzędzie do analizy statystycznej używane w kroku 4.4</td></tr><tr><td>CD31</td><td>Abcam</td><td>ab28364</td><td></td></tr><tr><td>Celigo Image Cytometer</td><td>Nexcelom Bioscience</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cell Stripper</td><td>Corning</td><td>25-056-Cl</td><td>mieszanina chelatorów</td></tr><tr><td>Zestaw do barwienia DAB</td><td>Vector Labs</td><td>MP-7800</td><td></td></tr><tr><td>DAVID (baza danych do adnotacji, wizualizacji i zintegrowanego odkrywania)</td><td>Oprogramowanie DAVID</td><td>https://david.ncifcrf.gov</td> do <td>analizy wzbogacenia funkcjonalnego używane w kroku 4.5</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Corning</td><td>15-013-Cl</td><td></td></tr><tr><td>DreamTaq i bufor (genotypowanie PCR)</td> <td>Przeciwciała Thermo/Fisher</td><td>EP0701 i K1072</td><td></td></tr><tr><td>erbB4</td> Santa <td>Cruz</td><td>sc-284</td><td></td></tr><tr><td>erbB4</td><td>Abcam</td><td>ab35374</td><td></td></tr><tr><td>erbB4 przeciwciała</td><td>Millipore</td><td>HFR1: 05-1133</td><td></td></tr><tr><td>FACS Sorter</td><td>BD Biosciences</td><td>Aria II</td><td></td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>Sigma</td><td>F6886</td><td></td></tr><tr><td>GenomeSpace Narzędzia i źródła danych</td><td>GenomeSpace</td><td>https://genomespace.org/support/tools/</td> <td>ogólne źródło dla kilku rodzajów narzędzi bioinformatycznych typu open source dla kroku 4.5</td></tr><tr><td>Glutamina</td><td>Corning</td><td>25-005- </td><td></td>Narzędzie</tr> do <tr><td>analizy i wizualizacji genów Cl Gorilla Gene Ontology</td><td>Gorilla</td><td>N/A,</td><td>oprogramowanie do analizy wzbogacenia funkcjonalnego http://cbl-gorilla.cs.technion.ac.il używane w kroku 4.5</td></tr><tr><td>GSEA Gene Set Enrichment Analysis</td><td>Broad Institute</td><td>N/A,</td><td>oprogramowanie do analizy wzbogacenia funkcjonalnego https://www.gsea-msigdb.org/gsea/index.jsp używane w kroku 4.5</td></tr><tr><td>HSD: myszy Athymic Nude-FOxn1nu</td><td>Envigo (wcześniej Harlan Labs)</td><td>69</td><td></td></tr><tr><td>Illumina HiSeq2500 (sekwencer DNA nowej generacji)</td><td>Sekwencer DNA Illumina</td><td>Hi Seq 2500</td><td>używany w kroku 4.2</td></tr><tr><td>Lasergene: ArrayStar Analiza ekspresji i wariantów genów</td><td>DNAStar LaserGene Oprogramowanie</td><td>N/A</td><td>Analiza statystyczna i normalizacyjna używana w kroku 4.4</td></tr><tr><td>Lasergene: Montaż</td> <td>wyrównania sekwencji SeqMan NGenwyrównanie oprogramowania używane w kroku 4.3</td><td>Nie dotyczy Wyrównanie</td><td>programowe używane w kroku 4.3</td></tr><tr><td>Matrigel, matryca błony podstawnej o niskim współczynniku wzrostu</td><td>Corning</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>NRG1-beta</td><td>We własnym zakresie</td><td>Generowane przez SLC, dostępne również na rynku przez R & Systemy D (396-HB-050 / CF).</td><td></td></tr><tr><td>Plama jądrowa Hoeschst 33342</td><td>Thermo</td><td>62249</td><td></td></tr><tr><td>System klasyfikacji ontologii genów Panther</td><td>Oprogramowanie</td><td></td> do <td>analizy wzbogacenia funkcjonalnego http://pantherdb.org używane w kroku 4.5</td></tr><tr><td>Partek (nakładki i analizatory BWA)</td> <td>Partek, Ver 7</td><td>Wyrównanie oprogramowania N/A</td><td>i statystyczna/normalizacja używane w kroku 4.3</td></tr><tr><td>Pen/Strep</td><td>Corning</td><td>30-002-Cl</td><td></td></tr><tr><td>Podkład 1: 5&prime;-CAAATGCTCTCTCTCTGTTCTTTGT GTCTG- 3&prime;</td><td>Eurofins Genomics</td><td>Primer 1 + 2: 250&thinsp; bp ErbB4 produkt zerowy i 350&thinsp; bp Floxowany produkt ErbB4;</td><td></td></tr><tr><td>Podstawa 2: 5&prime;-TTTTGCCAAGTTCTAATTCCATC AGAAGC-3&prime;</td><td>Eurofins Genomics</td><td>Primer 1 + 2: 250&thinsp; bp ErbB4 produkt zerowy i 350&thinsp; bp Floxowany produkt ErbB4;</td><td></td></tr><tr><td> Primer 3: 5&prime;-TATTGTGTTCATCTATCATTGCA ACCCAG-3&prime; </td><td>Eurofins Genomics</td><td>Primer 1 + 3: 350&thinsp; bp Produkt ErbB4 typu dzikiego.</td><td></td></tr><tr><td>Propidium Jodine</td><td>Fisher</td><td>51-351-0</td><td></td></tr><tr><td>Proteom Profiler Matryce Fosfokinazy</td><td>R& D Systems</td><td>ARY003B</td><td></td></tr><tr><td>Test żywotności komórek bioluminescencyjnych</td>glo <td>Promega</td><td>G9712</td> w<td>czasie rzeczywistym</td></tr><tr><td>Pakiet ToppGene Oprogramowanie</td> do <td>analizy wzbogacenia funkcjonalnego ToppGene https://toppgene.cchmc.org używane w kroku 4.5</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trizol (odczynnik na bazie kwasu-kwas i fenolu i choloroformu)</td> Zestaw <td></td> do wzmacniania sygnału tyramidowego 15596026 <td></td><td>Invitrogen</td></tr><tr><td></td><td>Perkin Elmer</td><td>NEL721001EA</td><td></td></tr></tbody></table>

definiowanie funkcji genów w nowotworzeniu poprzez ablację ex vivo floksowanych alleli w złośliwych komórkach nowotworowych osłonki nerwów obwodowych

Defining Gene Functions in Tumorigenesis by Ex vivo Ablation of Floxed Alleles in Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells

Rozwój nowych leków, które precyzyjnie celują w kluczowe białka w ludzkich nowotworach, fundamentalnie zmienia terapie przeciwnowotworowe. Zanim jednak leki te będą mogły być stosowane, ich docelowe białka muszą zostać zatwierdzone jako cele terapeutyczne w określonych typach raka. Walidacja ta jest często przeprowadzana poprzez wyeliminowanie genu kodującego potencjalny cel terapeutyczny w genetycznie zmodyfikowanym mysim modelu raka (GEM) i określenie, jaki wpływ ma to na wzrost guza. Niestety, kwestie techniczne, takie jak śmiertelność zarodka w przypadku konwencjonalnych nokautów i mozaikowatość w przypadku nokautów warunkowych, często ograniczają to podejście. Aby przezwyciężyć te ograniczenia, opracowano metodę ablacji zarodkowego genu letalnego, który jest przedmiotem zainteresowania w krótkoterminowych hodowlach złośliwych guzów osłonki nerwów obwodowych (MPNST) wygenerowanych w modelu GEM.
Ten artykuł opisuje, jak stworzyć model myszy z odpowiednim genotypem, uzyskać krótkoterminowe hodowle nowotworów od tych zwierząt, a następnie dokonać ablacji zarodkowego genu letalnego za pomocą wektora adenowirusowego, który wyraża rekombinazę Cre i wzmocnione białko zielonej fluorescencji (eGFP). Następnie szczegółowo opisano oczyszczanie komórek transdukowanych adenowirusem za pomocą sortowania komórek aktywowanych fluorescencją (FACS) oraz ilościowe określenie wpływu ablacji genów na proliferację komórek, żywotność, transkryptom i ortotopowy wzrost alloprzeszczepu. Metodologie te zapewniają skuteczne i uogólnione podejście do identyfikacji i walidacji celów terapeutycznych in vitro i in vivo. Podejścia te zapewniają również odnawialne źródło komórek pochodzących z guza o niskim pasażu ze zredukowanymi artefaktami wzrostu in vitro. Pozwala to na badanie biologicznej roli docelowego genu w różnych procesach biologicznych, takich jak migracja, inwazja, przerzuty i komunikacja międzykomórkowa, w której pośredniczy sekretom.

Rysunek 4 przedstawia typowy wynik uzyskany podczas transdukcji komórek MPNST P0-GGFβ3;Trp53-/+;Erbb4fl/fl za pomocą adenowirusa Ad5CMV-eGFP lub adenowirusa Ad5CMV-Cre/eGFP (Rysunek 4A). Hodowle analizuje się za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej w celu zidentyfikowania komórek wykazujących ekspresję eGFP oraz za pomocą mikroskopii fazokontrastowej w celu określenia całkowitej liczby komórek obecnych w tym samy...

Tutaj prezentujemy protokół przeprowadzania nokautów genów, które są embrionalne śmiertelne in vivo w genetycznie modyfikowanych mysich modelach nowotworów, a następnie oceniamy wpływ nokautu na wzrost, proliferację, przeżycie, migrację, inwazję i transkryptom in vitro i in vivo.

Definiowanie funkcji genów w nowotworzeniu poprzez ablację ex vivo floksowanych alleli w złośliwych komórkach nowotworowych osłonki nerwów obwodowych

The development of new drugs that precisely target key proteins in human cancers is fundamentally altering cancer therapeutics. However, before these ...

Protokół ten stanowi alternatywną metodę in vivo do badania roli zarodkowego śmiertelnego nokautu genu we wzroście nowotworu. Zaletą tej metody jest to, że nokauty genów, które normalnie są śmiertelne dla zarodka, można przeprowadzić w guzach pochodzących z genetycznie zmodyfikowanego modelu myszy w celu zbadania ich skutków utraty funkcji in vivo. Technika ta może być stosowana w chorobach, które wymagają zbadania in vivo roli embrionalnych genów niezbędnych do osiągnięcia w tradycyjnych modelach myszy z nokautem genów.Wygenerowanie modelu zwierzęcego wymaga czasu i wymagane są badania empiryczne w celu określenia optymalnego MOI dla infekcji adenowirusowej, aby zapewnić odpowiednią rekombinację. Na początek zidentyfikuj mysz z pożądanym genotypem. Kiedy mysz z guzem osiągnie humanitarny punkt końcowy, poddaj ją eutanazji i użyj sterylnego noża skalpela, aby usunąć guz.Rozbioruj guz na trzy sekcje w kawałkach przypominających bochenek chleba za pomocą noża skalpela, aby wygenerować segmenty tkanki do wiązania formaliny, osadzania parafiny, wczesnego pasażowania, generowania kultur i błyskawicznego zamrażania do analiz analitycznych. Utrwalony w formalinie, zatopiony w parafinie wy

defining-gene-functions-tumorigenesis-ex-vivo-ablation-floxed-alleles

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Badania nad rakiem

Opisano metodę niezawodnego przeszczepiania ludzkich komórek złośliwego guza pochewki nerwów obwodowych znakowanych lucyferazą do nerwu kulszowego myszy z niedoborem odporności. Omówiono również wykorzystanie obrazowania bioluminescencyjnego do wykazania prawidłowego przyjęcia przeszczepów nowotworowych oraz kryteria losowego przydziału zwierząt do grup badawczych.

Ortotopowe ksenoprzeszczepy ludzkich komórek złośliwego guza osłonki nerwów obwodowych znakowanych lucyferazą do testowania potencjalnych środków terapeutycznych in vivo

Fenotypowo dzikie astrocyty i nerwowe komórki macierzyste pobrane od myszy zmodyfikowanych za pomocą floksowanych, warunkowo onkogennych alleli i przekształconych za pomocą wirusowej rekombinacji za pośrednictwem Cre mogą być używane do modelowania patogenezy gwiaździaka in vitro i in vivo poprzez ortotopowe wstrzykiwanie przekształconych komórek do mózgów syngenetycznych, immunologicznie kompetentnych rodzeństwa z miotu.

Modelowanie patogenezy gwiaździaka in vitro i in vivo przy użyciu astrocytów korowych lub nerwowych komórek macierzystych od warunkowych, genetycznie zmodyfikowanych myszy

Analiza klonów mozaiki w nabłonku dysku imaginalnego Drosophila to potężny system modelowy do badania genetycznych i komórkowych mechanizmów nowotworzenia. W tym miejscu opisujemy protokół indukcji guzów w dyskach imaginalnych skrzydeł Drosophila za pomocą systemu GAL4-UAS i wprowadzamy metodę diagnozy w celu klasyfikacji fenotypów guza.

Indukcja i diagnostyka nowotworów w nabłonku dysku wyobrażeniowego Drosophila

Opracowaliśmy międzygatunkowe porównawcze podejście onkogenomiczne, wykorzystując analizy genomiczne i funkcjonalne badania genomowe do identyfikacji i porównania celów terapeutycznych w nowotworach powstających w genetycznie modyfikowanych modelach mysich i odpowiadającym im typie nowotworu ludzkiego.

Profilowanie genetyczne i badania przesiewowe w skali genomu w celu identyfikacji celów terapeutycznych w mysich modelach złośliwego guza osłonki nerwów obwodowych

Opracowaliśmy metodologię oceny, czy nowotwory układu nerwowego u genetycznie modyfikowanych myszy dokładnie odwzorowują patologię ich ludzkich odpowiedników. Tutaj stosujemy te techniki histologiczne, zdefiniowane kryteria patologiczne i metodologie hodowli do nerwiakowłókniaków i złośliwych guzów osłonki nerwów obwodowych powstających w mysim modelu P 0-GGFβ3.

Identyfikacja, diagnozowanie i ocena złośliwych guzów osłonki nerwów obwodowych w genetycznie modyfikowanych modelach myszy

Neurofibromoza typu 1 (NF1) prowadzi do łagodnych guzów osłonki nerwowej obwodowej (neurofibromów), które wymagają specyficznego mikrośrodowiska nerwowego do wzrostu. Opracowano zoptymalizowany model ksenotransplanttu ortotopowego, wykorzystujący intraneuralne wstrzykiwanie ludzkich komórek Schwanna do myszy NSG. Model ten przypomina ludzkie neurofibromy i stanowi cenną platformę do oceny strategii terapeutycznych.

Ortotopowy ksenoprzeszczep nerwu kulszowego dla neurofibromozy typu 1

Ten protokół pokazuje, jak generować fluorescencyjnie oznaczone, genetycznie zdefiniowane guzy klonalne w oku/czułkach Drosophila imaginal discs (EAD). Opisuje, jak rozdzielić EAD i mózg od larw trzeciego stadium rozwojowego i jak je przetworzyć w celu wizualizacji i ilościowego określenia zmian ekspresji genów i inwazyjności guza.

Model guza dysku imaginalnego Drosophila: wizualizacja i kwantyfikacja ekspresji genów i inwazyjności guza za pomocą mozaik genetycznych

Ten protokół opisuje metodę obrazowania rezydentnych komórek T CD8 infiltrujących nowotwór, oznaczonych fluorescencyjnie sprzężonymi przeciwciałami w wycinkach ludzkiego guza płuc. Technika ta umożliwia analizę migracji limfocytów T CD8 w czasie rzeczywistym przy użyciu mikroskopii konfokalnej.

Ex vivo Obrazowanie rezydentnych limfocytów T CD8 w wycinkach ludzkiego guza płuc za pomocą mikroskopii konfokalnej

Rezonans paramagnetyczny elektronów o niskim polu (pasmo L, 1,2 GHz) przy użyciu rozpuszczalnych sond nitroksylowych i trytylowych jest demonstrowany do oceny fizjologicznie ważnych parametrów w mikrośrodowisku guza w mysich modelach raka piersi.

In vivo (in vivo) Ocena EPR pH, pO2, stanu redoks oraz stężeń fosforanów i glutationu w mikrośrodowisku guza

Ten protokół opisuje szczegółowy proces generowania i charakterystyki ex vivo wirusów onkolitycznych do ekspresji immunomodulatorów, używając jako przykładu wirusów odry kodujących bispecyficzne aktywatory limfocytów T. Zastosowanie i adaptacja do innych platform wektorowych i transgenów przyspieszy rozwój nowych immunowirusoterapeutyków do translacji klinicznej.

Paramyksowirusy w immunomodulacji ukierunkowanej na nowotwór: projektowanie i ocena ex vivo

Poznaj metodę ablacji genów letalnych dla embrionu w nowotworach osłonki nerwów obwodowych przy użyciu modeli mysich. Technika ta umożliwia badanie funkcji genów in vivo w kontekście onkologicznym.

Definiowanie funkcji genów w nowotworzeniu poprzez ablację ex vivo floksowanych alleli w złośliwych komórkach nowotworowych osłonki nerwów obwodowych (Wideo) | JoVE Journal

Definiowanie funkcji genów w nowotworzeniu poprzez ablację ex vivo floksowanych alleli w złośliwych komórkach nowotworowych osłonki nerwów obwodowych

Przeglądaj więcej filmów