Duży model zwierzęcy do oceny skuteczności terapii genowej w chorobie niedokrwiennej serca

Terapia genowa mięśnia sercowego w chorobie niedokrwiennej serca jest bardzo obiecująca dla przyszłych terapii. W tym miejscu przedstawiamy duży model zwierzęcy do oceny skuteczności terapii genowej w niedokrwiennym sercu.

Metody i metody obrazowania zastosowane w tym protokole stanowią doskonały obraz bezpieczeństwa i skuteczności terapii genowej w chorobie niedokrwiennej serca przed przystąpieniem do badań klinicznych. Głównymi zaletami tej techniki jest niska inwazyjność modelu niedokrwienia, ale także precyzyjne ukierunkowanie terapii genowej na hipokinetyczne, ale wciąż żywotne obszary serca. Zacznij od wykonania echokardiografii przezklatkowej przed operacją niedokrwienia, transferem genów i eutanazją, aby ocenić wykrywalny płyn osierdziowy i określić szczep mięśnia sercowego.

Umieść przetwornik w trzeciej lub czwartej przestrzeni międzyżebrowej pod pachą świni ze znacznikiem skierowanym na mostek świni, aby uzyskać dostęp do krótkich widoków przymostkowych na poziomie zastawki mitralnej, mięśnia brodawkowatego i poziomu wierzchołkowego. Następnie naciśnij przycisk Acquire, aby zapisać klip. Do wykonania koronarografii bezpośrednio przed operacją niedokrwienia należy użyć cewnika 6-F pod kontrolą fluoroskopową z jodowym środkiem kontrastowym, aby zobrazować prawą tętnicę wieńcową, lewą wstępującą tętnicę wieńcową i lewą przednią tętnicę zstępującą.

W przypadku obrazowania kinowego w automatycznym wstrzykiwaczu ustaw czas trwania bolusa na trzy sekundy, a całkowitą objętość na 21 mililitrów, a następnie naciśnij pojedynczy i tak, aby podać jodowy środek kontrastowy do lewej komory przez cewnik warkoczowy 5-F. Wykonaj obrazowanie filmowe zwierzęcia w spoczynku, a następnie podawaj dobutaminę dożylnie i zwiększając dawki w celu indukcji stresu. Po osiągnięciu docelowego tętna wynoszącego 160 uderzeń na minutę wykonuje obrazowanie filmowe i usuwa cewnik warkoczowy.

Aby obliczyć frakcję wyrzutową, otwórz oprogramowanie pomiarowe, wybierz analizę komorową danego obrazu. Przewiń obraz, aby wybrać przedział czasowy, jeden w rozkurczu i jeden w skurczu, a następnie wybierz narzędzie do rysowania konturów komór dla każdego przedziału czasu. W celu wywołania przewlekłego niedokrwienia mięśnia sercowego, 14 dni przed transferem genów należy umieścić cewkę w lewej tętnicy wieńcowej i wsunąć stent z wąskiej szyjki do lewej tętnicy wieńcowej, a następnie umieścić stent dystalnie do pierwszej przekątnej.

Napompuj stent do nominalnego ciśnienia w tętnicy, używając indeflatora o stosunku stentu do światła 1,3 w celu zakotwiczenia wąskiego gardła na miejscu. Po dodatkowych 15 sekundach należy opróżnić stent, wycofać sprzęt z tętnicy i zapewnić prawidłowe umieszczenie stentu z wąskim gardłem za pomocą angiografii. Po angiografii i pomiarach funkcjonalnych pod kontrolą fluoroskopową wprowadzić cewnik mapujący do lewej komory przez osłonkę kości udowej w celu mapowania elektroanatomicznego i zebrać co najmniej 100 punktów z lewej komory, a następnie kliknąć przycisk akceptacji, aby zatwierdzić punkt.

Na ostatniej mapie, aby zapewnić żywotność, jako kryterium należy użyć jednobiegunowego napięcia powyżej pięciu miliwoltów. A w przypadku hipokinezji wybierz lokalne skrócenie liniowe tak niskie, jak to możliwe, co najmniej tak niskie, jak 12%, ale najlepiej poniżej 6%Po eutanazji zwierzęcia zbierz serce z jamy klatki piersiowej. Po wypłukaniu pobranego serca umieść igłę o rozmiarze 18 nad zastawką aortalną i przymocuj igłę do pompy perfuzyjnej.

Perfekować serce 750 mililitrami 1% paraformaldehydu. Użyj ostrego noża, aby pokroić serce na plastry o grubości jednego centymetra i zbierz próbki z obszaru transferu genów do 4% paraformaldehydu i ciekłego azotu. Przechowuj próbki do barwienia w 4% paraformaldehydzie przez 48 godzin w temperaturze czterech stopni Celsjusza.

Skuteczność terapii genowej analizowano, mierząc napięcie obwodowe, frakcję wyrzutową i perfuzję mięśnia sercowego za pomocą skanu PET 15O-woda. Próbki tkanek można pobrać bezpośrednio z obszaru transferu genów, porównując serce z mapą elektroanatomiczną. Ekspresję transgenu i angiogenezę terapeutyczną oceniano za pomocą immunologicznej analizy histologicznej, analizując liczbę komórek dodatnich po barwieniu beta-galaktozydazą oraz analizując obszar naczyń włosowatych mięśnia sercowego, po barwieniu cząsteczką adhezyjną płytek krwi/komórek śródbłonka-1.

Ważne jest, aby potwierdzić umieszczenie stentu z wąskim gardłem za pomocą angiogramu i pobrania próbki z obszaru transferu genów, co można potwierdzić, porównując serce z mapą elektroanatomiczną. Ogólnie rzecz biorąc, ważne jest, aby wszystkie pomiary były wykonywane w jak najbardziej powtarzalny sposób.