Monitorowanie cyklu rujowego gryzoni za pomocą płukania pochwy: nie ma czegoś takiego jak normalny cykl

Protokół ten jest istotny, ponieważ zapewnia zarówno kompleksową, jak i tanią technikę efektywną czasowo. Odpowiada na kluczowe elementy badań translacyjnych i kategoryzuje dane składowe zarówno na poziomie indywidualnym, jak i grupowym. Technika ta jest korzystna ze względu na całkowitą ilość informacji, które można uzyskać na temat ogólnego profilu zwierzęcia.

Obejmuje to elementy kategoryzujące i wynikające z nich wnioski. Technika ta może zapewnić wgląd w szeroki zakres obszarów badawczych, w tym kardiologię, neurologię i farmakologię. Technika ta ma zastosowanie nie tylko w badaniach nad rozrodczością.

Zacznij od obchodzenia się ze szczurem w sposób odpowiedni do wieku, taki jak chwyt w stylu kompresji dla dorastających szczurów, umieszczając obiekt w górnej części klatki piersiowej z nosem skierowanym w dół na ziemię. Odsłoń kanał pochwy pacjentki, delikatnie zginając ogon przed włożeniem strzykawki. Trzymając strzykawkę stabilnie palcem wskazującym i środkowym, włożyć końcówkę strzykawki do kanału pochwy pod kątem równoległym do niego, powoli wydalić chlorek sodu do kanału, wciskając tłok do środka kciukiem.

Usunąć chlorek sodu z kanału pochwy, odciągając tłok strzykawki od błony śluzowej nabłonka. Użyj kryteriów dla każdego typu komórek, aby scharakteryzować komórki obecne w próbce i zapisać wyniki. Jądrzaste, zrogowaciałe komórki nabłonkowe lub ilościowo oznaczone komórki nabłonkowe będą wyglądać na postrzępione lub kanciaste.

Pomimo braku jąder, może pokazywać jasne okrągłe obszary w komórce reprezentujące miejsca, w których kiedyś znajdowało się jądro, zwane jądrami duchów. Duże jądrzaste komórki nabłonkowe lub LNE są zwykle okrągłe lub wielokątne komórki otoczone nieregularnymi, postrzępionymi lub kanciastymi obwódkami. Ich jądra mogą wahać się od nienaruszonych do zdegenerowanych lub piknotycznych związanych z nieodwracalną kondensacją chromatyny w jądrze komórki ulegającej śmierci lub degradacji.

Jądra zajmują mniej miejsca niż cytoplazma w komórce, przy niższym stosunku jądra do cytoplazmy niż małe komórki nabłonkowe. Leukocyty to zwarte kuliste komórki. Najmniejszy w porównaniu ze wszystkimi innymi opisanymi typami komórek.

Komórki SNE to niezrogowaciałe komórki z okrągłymi jądrami, które zajmują większą przestrzeń niż cytoplazma wewnątrz komórki, tworząc wyższy stosunek jądra do cytoplazmy w stosunku do dużych komórek nabłonkowych. Użyj dolnego uprzedmiotowienia, takiego jak cztery X, aby uzyskać reprezentatywny widok ogólnego układu komórek. Zapisz, czy komórki są zlepione razem, równomiernie rozproszone czy losowo rozproszone, i zwróć uwagę na specyficzną organizację każdego typu komórek.

Następnie wizualnie oszacuj i zapisz całkowitą liczbę komórek, jako niewielką, umiarkowaną lub liczbę, a liczbę poszczególnych komórek jako procent każdego obecnego typu komórek. Po połączeniu tych elementów kategoryzacji określ, który etap cyklu rujowego jest prezentowany. W stadium diestrus można zauważyć, że leukocyty są dominującym lub jedynym typem komórek.

Są one zwykle ułożone w zbitki na początku, ale bardziej rozproszone w późniejszych stadiach. Całkowita ilość komórek może być stosunkowo niska, najczęściej w późniejszych stadiach okresu diestrus w drugim lub trzecim dniu. Skoncentrowane nici leukocytów można zaobserwować ze względu na dużą ilość śluzu, który może być obecny na tym etapie.

Małe skupiska nici komórkowych komórek SNE towarzyszące leukocytom można zaobserwować w późnych fazach przejścia w rrę. Płyn pochwowy podczas przechodzenia do diestrus, pełnego przejścia i wyjścia z diestrus, wydaje się lepki i nieprzezroczysty. W fazie rui komórki SNE są komórkami dominującymi, podczas gdy leukocyty, komórki LNE i AKE można znaleźć w niewielkiej liczbie.

Na tym etapie komórki SNE są zwykle ułożone w klastry, arkusze lub pasma i mają ziarnisty wygląd, który można zaobserwować przy większym powiększeniu. Płyn pochwowy staje się nielepki i przezroczysty, gdy pacjentka w pełni przejdzie w fazę rujową. Komórki AKE dominują w fazie rujowej, ze spadkiem liczby komórek SNE i ogólnym wzrostem liczby i wielkości komórek w miarę trwania rui.

Komórki AKE są często zgrupowane w postaci pasków keratynowych. Mogą również zawierać jądra duchów, które mogą stać się bardziej rozproszone w przejściu od proestrus do metestrus. Płyn pochwowy nie jest lepki i przezroczysty, gdy szczury przechodzą w ruję, w pełni przechodzą i z niej

Gdy szczury przechodzą w metestrus, szukaj wszystkich typów komórek, chociaż często występuje większa liczba komórek SNE i LNE w porównaniu z LEU. Większą ilość szczątków obserwuje się podczas metestrus i przejść spowodowanych rozpadem komórek nabłonkowych po rui. Na tym etapie brakuje spójnego rozmieszczenia, ponieważ widoczne są wszystkie typy komórek i to w różnych ilościach.

Jednak leukocyty, które są upakowane w pobliżu komórek nabłonka w początkowych stadiach, mogą powrócić do zbitego układu podczas przejścia w diestrus. Płyn pochwowy wydaje się nielepki i przezroczysty na etapie. I zmienia się na bardziej lepki i nieprzezroczysty wygląd podczas przechodzenia do diestrus.

W obrębie każdego etapu można zaobserwować wiele wariantów, na przykład w stadium diestrus zaobserwowano zarówno komórki nabłonkowe, jak i leukocyty. W układach obserwowano również zlepione pasma śluzu, złożone z leukocytów i początkowe zlepianie leukocytów, a później losowe lub nawet rozchodzenie się. Podczas pobierania próbki płynu z pochwy nie znaleziono reprezentatywnych kolekcji, które uzasadniały powtórne płukanie, które obejmowało ekstrakcję komórek płaskonabłonkowych ze ściany kanału pochwy z powodu nieprawidłowego wprowadzenia strzykawki.

Zbiór samych szczątków, liczba komórek, która była zbyt niska, aby ją skategoryzować, i te, które były nieostre. Powszechne jest przedstawianie postępów etapów na wykresach słupkowych, co pozwala naukowcom zbadać ogólny wzorzec cyklu i zidentyfikować a-cykliczność. Próbki mogą być następnie analizowane pod kątem długości cyklu i wzorca progresji etapu.

Profile cyklu rujowego można tworzyć za pomocą skumulowanego wykresu słupkowego, śledzącego postęp etapu na szczura lub na kohortę. Gdzie składniki kategoryzujące dla każdego dnia są przedstawiane na wykresie dla każdego dnia lub dla każdego etapu. Kategoryzujące dane komponentów można również organizować numerycznie w celu tworzenia ustandaryzowanych zakresów i zbierania statystyk.

Przećwicz technikę, aby była minimalnie inwazyjna i zeskanuj szkiełko mikroskopowe w poszukiwaniu reprezentatywnych próbek, aby zmniejszyć błąd selekcji. Ogólnie rzecz biorąc, pamiętaj, że nie ma czegoś takiego jak normalny cykl. Zgodnie z tą procedurą można wprowadzić zmienne eksperymentalne, takie jak paradygmaty ćwiczeń i zachowania.

Pozwoliłoby to na wcześniejsze ustalenie wyjściowych cykli zwierząt i wykrycie reakcji hormonalnych na określone interwencje po ich zakończeniu. Ta metoda pozwala naukowcom zbadać związek między hormonami steroidowymi płci a innymi układami organizmu. Przykładem tego jest to, w jaki sposób receptory sercowe dla steroidowych hormonów płciowych odnoszą się do funkcjonalności systemu.