-1::1
Simple Hit Counter
Skip to content

Products

Solutions

×
×
Sign In

PL

EN - EnglishCN - 简体中文DE - DeutschES - EspañolKR - 한국어IT - ItalianoFR - FrançaisPT - Português do BrasilPL - PolskiHE - עִבְרִיתRU - РусскийJA - 日本語TR - TürkçeAR - العربية
Sign In Start Free Trial

RESEARCH

JoVE Journal

Peer reviewed scientific video journal

Behavior
Biochemistry
Bioengineering
Biology
Cancer Research
Chemistry
Developmental Biology
View All
JoVE Encyclopedia of Experiments

Video encyclopedia of advanced research methods

Biological Techniques
Biology
Cancer Research
Immunology
Neuroscience
Microbiology
JoVE Visualize

Visualizing science through experiment videos

EDUCATION

JoVE Core

Video textbooks for undergraduate courses

Analytical Chemistry
Anatomy and Physiology
Biology
Calculus
Cell Biology
Chemistry
Civil Engineering
Electrical Engineering
View All
JoVE Science Education

Visual demonstrations of key scientific experiments

Advanced Biology
Basic Biology
Chemistry
View All
JoVE Lab Manual

Videos of experiments for undergraduate lab courses

Biology
Chemistry

BUSINESS

JoVE Business

Video textbooks for business education

Accounting
Finance
Macroeconomics
Marketing
Microeconomics

OTHERS

JoVE Quiz

Interactive video based quizzes for formative assessments

Authors

Teaching Faculty

Librarians

K12 Schools

Biopharma

Products

RESEARCH

JoVE Journal

Peer reviewed scientific video journal

JoVE Encyclopedia of Experiments

Video encyclopedia of advanced research methods

JoVE Visualize

Visualizing science through experiment videos

EDUCATION

JoVE Core

Video textbooks for undergraduates

JoVE Science Education

Visual demonstrations of key scientific experiments

JoVE Lab Manual

Videos of experiments for undergraduate lab courses

BUSINESS

JoVE Business

Video textbooks for business education

OTHERS

JoVE Quiz

Interactive video based quizzes for formative assessments

Solutions

Authors
Teaching Faculty
Librarians
K12 Schools
Biopharma

Language

pl_PL

EN

English

CN

简体中文

DE

Deutsch

ES

Español

KR

한국어

IT

Italiano

FR

Français

PT

Português do Brasil

PL

Polski

HE

עִבְרִית

RU

Русский

JA

日本語

TR

Türkçe

AR

العربية

    Menu

    JoVE Journal

    Behavior

    Biochemistry

    Bioengineering

    Biology

    Cancer Research

    Chemistry

    Developmental Biology

    Engineering

    Environment

    Genetics

    Immunology and Infection

    Medicine

    Neuroscience

    Menu

    JoVE Encyclopedia of Experiments

    Biological Techniques

    Biology

    Cancer Research

    Immunology

    Neuroscience

    Microbiology

    Menu

    JoVE Core

    Analytical Chemistry

    Anatomy and Physiology

    Biology

    Calculus

    Cell Biology

    Chemistry

    Civil Engineering

    Electrical Engineering

    Introduction to Psychology

    Mechanical Engineering

    Medical-Surgical Nursing

    View All

    Menu

    JoVE Science Education

    Advanced Biology

    Basic Biology

    Chemistry

    Clinical Skills

    Engineering

    Environmental Sciences

    Physics

    Psychology

    View All

    Menu

    JoVE Lab Manual

    Biology

    Chemistry

    Menu

    JoVE Business

    Accounting

    Finance

    Macroeconomics

    Marketing

    Microeconomics

Start Free Trial
Loading...
Home
JoVE Journal
Biology
Pomiar strumienia substratu mitochondrialnego w rekombinowanych komórkach perfringolizyny O-perme...
Pomiar strumienia substratu mitochondrialnego w rekombinowanych komórkach perfringolizyny O-perme...
JoVE Journal
Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Biology
Measuring Mitochondrial Substrate Flux in Recombinant Perfringolysin O-Permeabilized Cells

Pomiar strumienia substratu mitochondrialnego w rekombinowanych komórkach perfringolizyny O-permeabilizowanej

Full Text
2,810 Views
06:17 min
August 13, 2021

DOI: 10.3791/62902-v

Moustafa Elkalaf1,2, Karolína Vaněčková1,2, Pavla Staňková1, Zuzana Červinková1, Jan Polák*2,3, Otto Kučera*1

1Department of Physiology, Faculty of Medicine in Hradec Králové,Charles University, 2Department of Pathophysiology, Third Faculty of Medicine,Charles University, 3Department of Internal Medicine,University Hospital Kralovske Vinohrady

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a modified protocol for assessing mitochondrial respiratory substrate flux using recombinant perfringolysin O in conjunction with microplate-based respirometry. The research highlights the impact of metformin on mitochondrial respiration across two distinct tumor cell lines, A549 and Hep G2.

Key Study Components

Research Area

  • Mitochondrial metabolism
  • Cellular response to pharmacological treatments
  • Oncology and cancer research

Background

  • The importance of mitochondrial function in various pathologies
  • How drugs like metformin influence cancer cell metabolism
  • Previous methods to assess mitochondrial respiration

Methods Used

  • Microplate-based respirometry
  • A549 and Hep G2 tumor cell lines
  • Recombinant perfringolysin O for permeabilization

Main Results

  • Metformin treatment increased succinate-induced respiration in A549 cells compared to Hep G2 cells.
  • Similar enhancements observed in pyruvate malate and glutamate malate induced respiration.
  • The findings validate the potential of utilizing mitochondrial respiration assays to explore drug impacts in cancer research.

Conclusions

  • The study demonstrates a novel method for evaluating drug effects on mitochondrial function in cancer cells.
  • This could facilitate further research into metabolic targeting in oncology.

Frequently Asked Questions

What are the advantages of using microplate respirometry?
Microplate respirometry allows for high-throughput screening, requiring minimal samples while providing reliable data on mitochondrial function.
How does metformin affect mitochondrial respiration?
Metformin alters mitochondrial respiration, which can reveal important insights into the metabolic adaptation of cancer cells.
What cell lines were used in this study?
A549 and Hep G2 tumor cell lines were analyzed for their mitochondrial respiration responses to metformin treatment.
Why is recombinant perfringolysin O important in this protocol?
Recombinant perfringolysin O is used to permeabilize cell membranes, facilitating the assessment of mitochondrial function without the interference of cellular metabolic processes.
What was a key finding regarding mitochondrial respiration between the two cell lines?
A549 cells exhibited a higher rate of mitochondrial respiration induced by succinate when compared to Hep G2 cells.
Can this method be applied to other types of cancer research?
Yes, this method is versatile and can be adapted to study various cancer types and other conditions affecting mitochondrial metabolism.
How is the assay prepared before measurement?
The assay involves cell seeding, treatment with substrates, and calibration of the respirometry analyzer to ensure accurate results.

W tej pracy opisujemy zmodyfikowany protokół badania strumienia mitochondrialnego substratu oddechowego za pomocą rekombinowanej perfringolizyny O w połączeniu z respirometrią opartą na mikropłytkach. Dzięki temu protokołowi pokazujemy, jak metformina wpływa na oddychanie mitochondrialne dwóch różnych linii komórek nowotworowych.

Ponieważ testuje strumień substratów mitochondriów, na które mogą wpływać różne patologie lub zabiegi. Na przykład, dzisiaj użyjemy go do ujawnienia odpowiedzi komórek rakowych na leczenie metforminą. Wymaga minimalnej liczby komórek, a jednocześnie wystarczającej liczby powtórzeń i odpowiedniej kontroli dla każdego odrębnego materiału.

Analizator jest przeznaczony wyłącznie do celów badawczych. Technika ta może identyfikować błędy w metabolizmie mitochondrialnym i może być stosowana do oceny leków wojowników wpływających na mitochondria. Procedurę zademonstruje Karolina Vaneckova, studentka studiów licencjackich i technik badawczy z mojego laboratorium.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos

Sign In Start Free Trial

Explore More Videos

Strumień substratu mitochondrialnego rekombinowana perfringolizyna O komórki A549 leczenie metforminą hodowla komórkowa płytka Seahorse XF 96 metabolizm mitochondriów akwizycja danych strategie iniekcji protokół testu oligomycyna FCCP mieszanina rotenonu i antymycyny A Calibrant

Related Videos

Wieloparametrowy pomiar przepuszczalności otworu porów przejściowych w izolowanych mitochondriach serca myszy

13:42

Wieloparametrowy pomiar przepuszczalności otworu porów przejściowych w izolowanych mitochondriach serca myszy

Related Videos

22.1K Views

Pomiary strumienia tlenu w celu oceny oddychania mitochondrialnego w żywych i przepuszczalnych komórkach

05:44

Pomiary strumienia tlenu w celu oceny oddychania mitochondrialnego w żywych i przepuszczalnych komórkach

Related Videos

415 Views

Wykorzystanie izolowanych mitochondriów z minimalnych ilości mięśni szkieletowych myszy do wysokoprzepustowych pomiarów oddechowych na mikropłytkach

10:39

Wykorzystanie izolowanych mitochondriów z minimalnych ilości mięśni szkieletowych myszy do wysokoprzepustowych pomiarów oddechowych na mikropłytkach

Related Videos

14.3K Views

Respirometria o wysokiej rozdzielczości do oceny funkcji mitochondriów w przepuszczalnych i nienaruszonych komórkach

08:33

Respirometria o wysokiej rozdzielczości do oceny funkcji mitochondriów w przepuszczalnych i nienaruszonych komórkach

Related Videos

42.8K Views

Pomiar mitochondrialnego zużycia tlenu w przepuszczalnych włóknach Drosophila przy użyciu minimalnych ilości tkanki

14:55

Pomiar mitochondrialnego zużycia tlenu w przepuszczalnych włóknach Drosophila przy użyciu minimalnych ilości tkanki

Related Videos

12.4K Views

Ocena funkcji mitochondriów w nerwie kulszowym za pomocą respirometrii o wysokiej rozdzielczości

08:19

Ocena funkcji mitochondriów w nerwie kulszowym za pomocą respirometrii o wysokiej rozdzielczości

Related Videos

2.9K Views

Pomiar w czasie rzeczywistym mitochondrialnego profilu bioenergetycznego neutrofili

09:39

Pomiar w czasie rzeczywistym mitochondrialnego profilu bioenergetycznego neutrofili

Related Videos

2.6K Views

Testy niezależne od tlenu do pomiaru funkcji mitochondriów u ssaków

05:59

Testy niezależne od tlenu do pomiaru funkcji mitochondriów u ssaków

Related Videos

3.5K Views

Pomiar oddychania mitochondrialnego we włóknach mięśni szkieletowych ludzi i myszy za pomocą respirometrii o wysokiej rozdzielczości

08:12

Pomiar oddychania mitochondrialnego we włóknach mięśni szkieletowych ludzi i myszy za pomocą respirometrii o wysokiej rozdzielczości

Related Videos

2.3K Views

Fluorespirometria o wysokiej rozdzielczości do oceny dynamicznych zmian potencjału błony mitochondrialnej w ludzkich komórkach odpornościowych

07:18

Fluorespirometria o wysokiej rozdzielczości do oceny dynamicznych zmian potencjału błony mitochondrialnej w ludzkich komórkach odpornościowych

Related Videos

1.7K Views

JoVE logo
Contact Us Recommend to Library
Research
  • JoVE Journal
  • JoVE Encyclopedia of Experiments
  • JoVE Visualize
Business
  • JoVE Business
Education
  • JoVE Core
  • JoVE Science Education
  • JoVE Lab Manual
  • JoVE Quizzes
Solutions
  • Authors
  • Teaching Faculty
  • Librarians
  • K12 Schools
  • Biopharma
About JoVE
  • Overview
  • Leadership
Others
  • JoVE Newsletters
  • JoVE Help Center
  • Blogs
  • JoVE Newsroom
  • Site Maps
Contact Us Recommend to Library
JoVE logo

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. All rights reserved

Privacy Terms of Use Policies
WeChat QR code