October 7th, 2021
Tutaj opisujemy metodę wizualizacji i kwantyfikacji naczyń mysich kończyn tylnych za pomocą mikrorentgenowskiej tomografii komputerowej.
Możliwe jest wykonanie zdjęć CT naczyń krwionośnych kończyn dolnych i narządów jamy brzusznej przy użyciu protokołu krokowego. Metoda umożliwia kompleksową ocenę całych naczyń krwionośnych. Ponadto możliwa jest ocena samych tętnic lub jednocześnie tętnic i żył.
Bardzo ważne jest, aby zapobiegać powstawaniu zakrzepów krwi, wyciekom lub studni krwi oraz unikać pęcherzyków powietrza. Przed operacją należy wstrzyknąć 1 jednostkę/gram heparyny w PBS do jamy dootrzewnowej myszy. Po 30 minutach wykonaj nacięcie w linii środkowej mostka myszy poddanej eutanazji i przymocuj otwartą klatkę piersiową za pomocą szpilek.
Przetnij aortę wstępującą przed usunięciem serca, a następnie usuń płuco, aby odsłonić aortę zstępującą. Przetnij aortę zstępującą po przekątnej, aby odsłonić przekrój naczynia. Następnie wprowadź cewnik o rozmiarze 22 do aorty zstępującej, jednocześnie uruchamiając bufor rozszerzający naczynia krwionośne.
Przypnij korzeń cewnika i zawiąż węzeł, aby zapobiec wyciekowi z powodu przepływu wstecznego. Po zakończeniu rozpocznij perfuzję podgrzanym roztworem rozszerzającym naczynia krwionośne pod stałym ciśnieniem od 13 do 15 kilopaskalów. Po trzech minutach perfuzjuj roztwór 4% paraformaldehydu w PBS przez 3 minuty.
Zatrzymać perfuzję i napełnić rurkę przedłużającą podłączoną do cewnika 2 ml świeżo przygotowanego środka kontrastowego rozcieńczonego w stosunku 1:1 do perfuzji w ustalonym ciśnieniu od 13 do 15 kilopaskalów. Aby uwidocznić tętnice, sprawdź paznokieć u nogi jamy ustnej, aby upewnić się, że środek kontrastowy dotarł do tętnicy. W ten sam sposób sprawdź żyłę główną dolną przepony, aby potwierdzić pełne krążenie środka kontrastowego i uwidocznić wszystkie naczynia.
Jeśli krążenie środka kontrastowego jest zakończone, zamknij zawór trójdrogowy i wyjmij rurkę. Próbkę inkubować przez noc w temperaturze 4 stopni Celsjusza. W tym protokole uwidoczniono wszystkie naczynia w kończynach dolnych myszy.
Wyniki badania modelu niedokrwienia kończyn tylnych potwierdziły, że niepodwiązana tętnica udowa biegła równolegle do żyły udowej. Przerwa w podawaniu środków kontrastowych ułatwiła również obserwację podwiązanej tętnicy udowej i rozwój naczyń pobocznych. Można było zobaczyć kilka naczyń wypełnionych środkiem kontrastowym.
Z drugiej strony zauważono również zakłócenia w działaniu środków kontrastowych spowodowane mieszaniem się środków niekontrastowych lub niedostateczną perfuzją. Niemożliwe było oglądnięcie tętnic na powierzchni ciała za pomocą obserwacji mikroskopowej lub stereomikroskopowej środka kontrastowego, co ułatwiało ocenę ubytków w układzie naczyniowym. Bardzo ważne jest, aby podczas wprowadzania cewnika unikać pęcherzyków powietrza.
Ponieważ ich narządy jamy brzusznej są również rozluźnione, możliwe jest wyjęcie z narządów i wykonanie tomografii komputerowej. Dzięki zastosowaniu tej metody udało nam się zidentyfikować nową ćwiartkę nasycenia.
Ten artykuł opisuje metodę wizualizacji i ilościowego określania naczyń tylnych kończyn u myszy z wykorzystaniem mikro-RTG komputerowej tomografii. Technika ta pozwala na kompleksową ocenę naczyń krwionośnych w kończynach dolnych i narządach jamy brzusznej.
This method enables comprehensive 3D visualization of murine vascular networks, supporting preclinical assessment of angiogenic responses and vascular pathology. By providing quantitative structural data from hind-limb and abdominal organ vasculature, it enhances target validation in vascular biology and ischemic disease models. The technique improves predictive confidence in lead identification by reducing reliance on 2D sectioning and enabling direct observation of vascular architecture and collateral formation.
The method fits within the discovery-to-preclinical continuum, particularly in target validation and lead optimization stages where vascular phenotypes are critical readouts.