Przygotowanie próbki do trójwymiarowej wizualizacji naczyń kończyn tylnych myszy w oparciu o tomografię komputerową

Możliwe jest wykonanie zdjęć CT naczyń krwionośnych kończyn dolnych i narządów jamy brzusznej przy użyciu protokołu krokowego. Metoda umożliwia kompleksową ocenę całych naczyń krwionośnych. Ponadto możliwa jest ocena samych tętnic lub jednocześnie tętnic i żył.

Bardzo ważne jest, aby zapobiegać powstawaniu zakrzepów krwi, wyciekom lub studni krwi oraz unikać pęcherzyków powietrza. Przed operacją należy wstrzyknąć 1 jednostkę/gram heparyny w PBS do jamy dootrzewnowej myszy. Po 30 minutach wykonaj nacięcie w linii środkowej mostka myszy poddanej eutanazji i przymocuj otwartą klatkę piersiową za pomocą szpilek.

Przetnij aortę wstępującą przed usunięciem serca, a następnie usuń płuco, aby odsłonić aortę zstępującą. Przetnij aortę zstępującą po przekątnej, aby odsłonić przekrój naczynia. Następnie wprowadź cewnik o rozmiarze 22 do aorty zstępującej, jednocześnie uruchamiając bufor rozszerzający naczynia krwionośne.

Przypnij korzeń cewnika i zawiąż węzeł, aby zapobiec wyciekowi z powodu przepływu wstecznego. Po zakończeniu rozpocznij perfuzję podgrzanym roztworem rozszerzającym naczynia krwionośne pod stałym ciśnieniem od 13 do 15 kilopaskalów. Po trzech minutach perfuzjuj roztwór 4% paraformaldehydu w PBS przez 3 minuty.

Zatrzymać perfuzję i napełnić rurkę przedłużającą podłączoną do cewnika 2 ml świeżo przygotowanego środka kontrastowego rozcieńczonego w stosunku 1:1 do perfuzji w ustalonym ciśnieniu od 13 do 15 kilopaskalów. Aby uwidocznić tętnice, sprawdź paznokieć u nogi jamy ustnej, aby upewnić się, że środek kontrastowy dotarł do tętnicy. W ten sam sposób sprawdź żyłę główną dolną przepony, aby potwierdzić pełne krążenie środka kontrastowego i uwidocznić wszystkie naczynia.

Jeśli krążenie środka kontrastowego jest zakończone, zamknij zawór trójdrogowy i wyjmij rurkę. Próbkę inkubować przez noc w temperaturze 4 stopni Celsjusza. W tym protokole uwidoczniono wszystkie naczynia w kończynach dolnych myszy.

Wyniki badania modelu niedokrwienia kończyn tylnych potwierdziły, że niepodwiązana tętnica udowa biegła równolegle do żyły udowej. Przerwa w podawaniu środków kontrastowych ułatwiła również obserwację podwiązanej tętnicy udowej i rozwój naczyń pobocznych. Można było zobaczyć kilka naczyń wypełnionych środkiem kontrastowym.

Z drugiej strony zauważono również zakłócenia w działaniu środków kontrastowych spowodowane mieszaniem się środków niekontrastowych lub niedostateczną perfuzją. Niemożliwe było oglądnięcie tętnic na powierzchni ciała za pomocą obserwacji mikroskopowej lub stereomikroskopowej środka kontrastowego, co ułatwiało ocenę ubytków w układzie naczyniowym. Bardzo ważne jest, aby podczas wprowadzania cewnika unikać pęcherzyków powietrza.

Ponieważ ich narządy jamy brzusznej są również rozluźnione, możliwe jest wyjęcie z narządów i wykonanie tomografii komputerowej. Dzięki zastosowaniu tej metody udało nam się zidentyfikować nową ćwiartkę nasycenia.