Name: Radiosynteza 1-(2- 18F fluoroetylo)-L-tryptofanu przy użyciu jednogarnkowego, dwuetapowego protokołu (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-21T14:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 33 s
Description: Poznaj radiosyntezę znacznika PET z tryptofanu znakowanego F18 przy użyciu jednogarnkowej, dwuetapowej metody. Technika ta umożliwia obrazowanie metabolizmu tryptofanu w mózgu z zastosowaniem przyjaznych dla środowiska faz oczyszczania.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ta praca była wspierana przez Centrum Diagnostyki i Badań PET/MRI oraz przez Departamenty Badań Biomedycznych i Radiologii w Nemours/Alfred I. duPont Hospital for Children.

UWAGA: Protokół dotyczy materiałów radioaktywnych. Każda dodatkowa dawka materiałów radioaktywnych może prowadzić do proporcjonalnego wzrostu ryzyka wystąpienia niepożądanych skutków zdrowotnych, takich jak rak. Badacze muszą postępować zgodnie z praktykami "tak niskimi, jak rozsądnie osiągalne" dawkami (ALARA), aby kierować protokołem radiosyntezy z odpowiednią ochroną w gorącej komórce lub ołowianym kapturze. Niezbędne jest zminimalizowanie czasu bezpośredniego kontaktu, użycie ołowianej osłony i zachowanie maksymalnej odległości dla każdego etapu ekspozycji na promieniowanie w procesie radiosyntezy. Noś plakietkę dozymetryczną promieniowania i pierścienie do monitorowania dłoni przez cały czas trwania eksperymentu i często monitoruj potencjalnie skażone powierzchnie, takie jak rękawice, rękawy i stopy. Należy przestrzegać przepisów Komisji Dozoru Jądrowego (NRC), lokalnych i instytucjonalnych dotyczących użytkowania, transportu i utylizacji wszelkich materiałów radioaktywnych.
1. Wstępne przygotowania
<ol>
	<li>Przygotować 10% etanol w 50 mM octanu sodu/kwasie octowym fazy ruchomej do półpreparatywnej wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC).
	<ol>
		<li>Umieścić 3 ml lodowatego kwasu octowego w czystej kolbie pomiarowej o pojemności 1000 ml. Dodać 900 ml ultraczystej wody (rezystywność 18 milionów omów-cm w temperaturze 25 °C) do kolby miarowej; dodać około 8 ml 6 M roztworu wodorotlenku sodu i dostosować pH do 5,5 za pomocą skalibrowanego pH-metru i paska pH. Po ostygnięciu roztworu do temperatury pokojowej uzupełnić objętość do 1000 ml ultraczystą wodą, aby przygotować 50 mM roztwór octanu sodu/kwasu octowego (pH 5,5).</li>
		<li>Przefiltruj próżniowo roztwór przez filtr membranowy 0,2 μm i przenieś roztwór do dwóch butelek z rozpuszczalnikiem o pojemności 500 ml.</li>
		<li>Umieścić około 250 ml powyższego buforu w kolbie miarowej o pojemności 500 ml. Za pomocą cylindra z podziałką odmierzyć 50 ml etanolu z Farmakopei Stanów Zjednoczonych (USP) i dodać etanol do kolby miarowej. Uzupełnić objętość do 500 ml 50 mM octanu sodu/kwasu octowego i zmierzyć wartość pH za pomocą paska pH.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przygotowanie rozwiązań kontroli jakości (QC) do testu przydatności systemu.
	<ol>
		<li>Napełnij butelki z rozpuszczalnikiem HPLC świeżą ultraczystą wodą (rozpuszczalnik A) i etanolem (rozpuszczalnik B). Zalać pompę HPLC i załadować program HPLC natężeniem przepływu 1 ml/min składającym się z 30% rozpuszczalnika A i 70% rozpuszczalnika B (v/v).</li>
		<li>Przygotuj roztwór kontrolny (roztwór ślepy) do kontroli jakości. Dodać 5 ml 0,9% chlorku sodu do szklanej fiolki o pojemności 20 ml. Dodać 0,15 ml 23,4% chlorku sodu do powyższego roztworu. Dodać 6 ml półpreparatywnej fazy ruchomej HPLC przygotowanej w kroku 1.1.3 (10% etanolu w 50 mM octanu sodu/kwasu octowego, pH 5,5) do szklanej fiolki.</li>
		<li>Przygotować 1 μg/ml nieznakowanego radioizotopowo L-FETrp i 5 μg/ml racemicznych mieszanin L-FETrp i D-FETrp (roztwory wzorcowe).</li>
		<li>Zbuduj krzywą kalibracyjną przy użyciu standardowych roztworów L-FETrp (0,1 μg/ml, 0,5 μg/ml, 1,0 μg/ml, 10 μg/mL, 100 μg/mL).</li>
		<li>Skonfiguruj sekwencję HPLC. Należy upewnić się, że sekwencja obejmuje jeden przebieg roztworu próbki ślepej, dwa przebiegi wzorcowego L-FETrp (1 μg/ml), jeden przebieg racemicznych mieszanin L-FETrp i D-FETrp (5 μg/ml) oraz jeden przebieg końcowego preparatu promieniotwórczego.</li>
		<li>Uruchomić częściową sekwencję HPLC w celu przetestowania przydatności systemu przed analizą próbek promieniotwórczych przy użyciu analitycznej kolumny HPLC (250 x 4,6 mm).
		<ol>
			<li>Uruchomić jedną próbkę ślepą i upewnić się, że chromatogram próbki ślepej nie wykazuje żadnych pików lub wykazuje one nieznaczne piki między objętością pustej przestrzeni a 10 minutami chromatogramu.</li>
			<li>Przeprowadzić dwie kontrpróby roztworu wzorcowego (zawiera 1 μg/ml L-FETrp). Upewnij się, że obszary L-FETrp w dwóch kontrpróbach mieszczą się w zakresie ±5 % wartości średniej.</li>
			<li>Uruchomić jedną próbkę mieszanin L-FETrp i D-FETrp (odpowiednio 5 μg/ml L-FETrp i D-EFTrp). Upewnij się, że L-FETrp i D-FETrp mogą być zidentyfikowane na chromatogramie i rozwiązane na linii podstawowej.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przygotować roztwory do znakowania radioaktywnego i inne materiały.
	<ol>
		<li>Dodaj następujące roztwory odpowiednio do pięciu fiolek w kształcie litery V o pojemności 1,5 ml. Fiolka 1: 1 ml roztworu węglanu potasu (K2CO3)/K222 (5 mg/ml K222 i 1 mg/mlK2CO3 w roztworze wody/acetonitrylu, 1/99, v/v) do elucji [18F]fluorku; Fiolka 2: 0,4 ml bezwodnego acetonitrylu do suszenia [18F]fluorkiem; Fiolka 3: prekursor znakowania radioaktywnego w bezwodnym acetonitrylu (1-2 mg w 0,5 ml bezwodnego acetonitrylu) do włączenia [18F]fluorku; Fiolka 4: kwas solny (2 M, 0,25 ml) w acetonitrylu (0,25 ml) do kwasolizy; Fiolka 5: 2 M wodorotlenek sodu (0,25 ml) do neutralizacji mieszanin reakcyjnych.</li>
		<li>Aktywować czwartorzędowy wkład świetlny z metyloamonem (QMA), przepuszczając najpierw przez 10 ml nasyconego roztworu wodorowęglanu sodu, a następnie 10 ml ultraczystej wody, a następnie przepłukać wkład strumieniem azotu. Kondycjonuj lekki wkład C8 i neutralny wkład z tlenku glinu, przepuszczając przez 10 ml etanolu, a następnie 10 ml ultraczystej wody.</li>
		<li>Dodać 0,15 ml 23,4% chlorku sodu i 5 ml 0,9% chlorku sodu do sterylnej fiolki z preparatem o pojemności 30 ml w celu dostosowania toniczności i rozcieńczenia frakcji HPLC.</li>
		<li>Przygotować roztwór (1 ml octanu sodu/buforu kwasu octowego, 50 mM, pH = 5,5 przygotowanego w kroku 1.1.1, 1 ml etanolu i 0,5 ml wody [łącznie 2,5 ml]) w strzykawce do przepłukania naczynia reakcyjnego; załadować do sterylnej fiolki o pojemności 10 ml.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Zbierz materiały do radioznakowania i zsyntetyzuj radiomagnetycznie L-[18F]FETrp
<ol>
	<li>Zmontuj materiały do znakowania radioaktywnego.
	<ol>
		<li>Włącz zasilanie modułu, dwutlenek węgla, sprężone powietrze, przewody argonowe i zasilanie programowalnego sterownika logicznego (PLC). Kliknij przycisk mod_pscf18, aby aktywować program systemu syntezy radiochemicznej. Zainicjuj MVP wejścia, wyjścia i receptury i upewnij się, że MVP znajdują się odpowiednio na pozycjach 4, 1, 1.</li>
		<li>Upewnij się, że pętla HPLC znajduje się w pozycji wstrzykiwania, a wkład świetlny QMA w pozycji wychwytywania fluorku [18F].</li>
		<li>Zainstalować półpreparatywną butelkę z fazą ruchomą HPLC (zawierającą roztwór przygotowany w kroku 1.1.3). Zrównoważyć system HPLC, przepuszczając fazę ruchomą przez chiralną kolumnę HPLC (250 x 10 mm) i kolumnę C18 (100 x 10 mm) przy natężeniu przepływu 2 ml/min przez co najmniej 30 minut, a następnie przełączyć zawór przekierowujący, pozwolić mobilnej HPLC przejść tylko przez chiralną kolumnę HPLC i zwiększyć natężenie przepływu do 3 ml / min.</li>
		<li>Zainstaluj wkład świetlny QMA w linii wychwytywania/uwalniania fluorku [18F]. Zainstalować ułożone w stos wkłady z tlenku glinu/C8 między wejściową pozycją MVP 6 a fiolką pośrednią, która jest fiolką o pojemności 10 ml w kształcie litery V podłączoną do pętli próbki HPLC. Zainstalować pustą fiolkę o pojemności 10 ml (fiolkę odpowietrzającą) do wyjściowej pozycji MVP 4 z kolejną igłą przymocowaną do fiolki jako odpowietrznik. Zainstaluj fiolki z odczynnikami 1-5 odpowiednio w pozycjach wejściowych MVP 1-5.</li>
		<li>Umieścić fiolkę zawierającą roztwór płuczący przygotowany w kroku 1.3.4 w pozycji wyjściowej MVP 6.</li>
		<li>Zainstalować butelkę na odpady o pojemności 500 ml (w celu zebrania odpadów HPLC przechodzących zarówno przez kolumnę chiralną, jak i C18) w pozycji MVP preparatu 1. Zainstalować kolejną butelkę na odpady o pojemności 500 ml (w celu zebrania odpadów HPLC przechodzących przez kolumnę chiralną) do końca pojemnika na odpady czteroportowego zaworu dwupozycyjnego.</li>
		<li>Połączyć fiolkę z frakcją (roztwór wstępnie napełniony przygotowany w kroku 1.3.3) do pozycji 2 MVP preparatu. Podłącz wyjściową pozycję MVP 3 (linia gazowa) i linię dostarczania produktu końcowego do fiolek pozycji 2 MVP preparatu, aby odzyskać produkt końcowy. Zainstalować pustą sterylną fiolkę o pojemności 10 ml w pozycji MVP 3 preparatu, która będzie używana jako fiolka zapasowa do zbierania frakcji docelowej.</li>
		<li>Zamontuj krótką kolumnę C18 między czteroportowym, dwupozycyjnym zaworem przekierowującym a preparatem MVP. 
		UWAGA: Podczas instalacji fiolek z odczynnikiem i preparatem należy upewnić się, że dopływ argonu w panelu sterowania jest wyłączony, a ciśnienie argonu wynosi zero, aby uniknąć nieoczekiwanego przeniesienia cieczy podczas montażu fiolki. Dokładnie sprawdź wszystkie połączenia igieł, pozycje fiolek i pozycje MVP w celu uzyskania powtarzalnej radiosyntezy.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Radiosynteza L-[18F]FETrp
	<ol>
		<li>Otrzymaj i zbadaj [18F] fluorek.
		<ol>
			<li>Otrzymując roztwór fluorku [18F] (15 ± 3 gigabekerel (GBq) na początku syntezy, patrz Tabela materiałów), należy zbadać ołowianą skrzynkę na powierzchni i w odległości 1 m, aby zarejestrować maksymalne wskaźniki narażenia na promieniowanie. Wykonaj test wycierania, aby upewnić się, że pudełko wysyłkowe nie jest zanieczyszczone. Zapisz dawkę [18F] fluorku i czas.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Przenieś [18F] fluorek.
		<ol>
			<li>Przenieść radioaktywność do systemu syntezy radiochemicznej.</li>
			<li>Połączyć linię argonu z krótką igłą, a linię transferu fluorku [18F] z długą igłą z fiolką z fluorkiem [18F]. Zamknij szklane drzwiczki z gorącymi komórkami i drzwiczki ołowiane. 
			UWAGA: Użyj długiego zacisku, aby wcisnąć obie igły; upewnić się, że długa końcówka igły znajduje się na dnie fiolki z fluorkiem [18F], tak aby można było przenieść cały fluorek [18F]. Zazwyczaj do podawania [18F] fluorku wymagana jest fiolka w kształcie litery V.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Wychwytuj, eluuj i azeotropowo susz [18F]fluorku.
		<ol>
			<li>Kliknij Ar Supply, aby włączyć przewód doprowadzający argon, zwiększyć ciśnienie argonu, włączyć przewód do przepychania fluorku [18F] i przepchnąć wodny fluorek [18F] przez wkład świetlny QMA. Po tym, jak cała radioaktywność zostanie uwięziona we wkładzie świetlnym QMA, a odczyt detektora radioaktywności będzie stały, zwiększ ciśnienie argonu i wdmuchuj argon przez wkład przez kolejne 5 minut, aby usunąć nadmiar wody.</li>
			<li>Wyłącz przewód do wypychania fluorku [18F], zmniejsz ciśnienie argonu do zera, przełącz sześcioportowy zawór dwupozycyjny z pozycji wychwytywania fluorku [18F] do pozycji elucji. Otwórz fiolkę reakcyjną, włącz wejściową linię argonową MVP w pozycji 1, wepchnij roztwór K222/K2CO3 do wejściowej fiolki MVP w pozycji 1 przez wkład świetlny QMA, aby wymyć radioaktywność do fiolki reakcyjnej. Przełącz pozycję elucji fluorku [18F] na pozycję pułapki.</li>
			<li>Kliknij przycisk Podgrzewanie, aby podgrzać reaktor do temperatury 110 °C, włączyć linię argonową MVP w pozycji 4 (linia zamiatania), która łączy się z reaktorem, i odparować rozpuszczalnik do wyjściowej fiolki MVP w pozycji 4</li>.
			<li>Kliknij przycisk Chłodzenie, aby schłodzić reaktor do temperatury pokojowej za pomocą sprężonego dwutlenku węgla, wyłącz linię zamiatania, przełącz pozycję wejściową MVP 1 na pozycję 2 i dodaj bezwodny acetonitryl do fiolki 2. Włącz zamiataczkę i grzałkę, aby wysuszyć azeotropowo [18F] fluorek w temperaturze 110 °C.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Dodać prekursor znakowania promieniotwórczego i dodać [18F]fluorek.
		<ol>
			<li>Schłodzić reaktor do temperatury pokojowej, wyłączyć linię zamiatania, przełączyć pozycję wejściową MVP 2 na pozycję 3 i dodać prekursor znakowania radioaktywnego tosylanu do fiolki 3. Zamknąć reaktor i podgrzewać mieszaniny reakcyjne w temperaturze 100 °C przez 10 minut.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Odparować rozpuszczalnik reakcyjny i zakwasić.
		<ol>
			<li>Schłodzić i otworzyć reaktor, włączyć linię zamiatania i odparować rozpuszczalnik reakcyjny w temperaturze 100 °C.</li>
			<li>Schłodzić reaktor, wyłączyć linię zamiatania, przełączyć pozycję wejściową MVP 3 na pozycję 4 i dodać mieszaninę kwasu solnego i acetonitrylu (0,5 ml, 1/1, v/v). Podgrzewać reakcję w temperaturze 100 °C przez 10 minut w celu deochrony grup chroniących przed tert-butylem i tert-butyloksykarbonylem w prekursorze znakowania promieniotwórczego.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Zneutralizuj reakcję.
		<ol>
			<li>Schłodzić reaktor do temperatury pokojowej i przełączyć pozycję wejściową MVP 4 na pozycję 5, aby dodać 2 M wodorotlenek sodu w celu zobojętnienia mieszaniny reakcyjnej. Wyłącz wejściową linię argonową MVP.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Przenieść mieszaninę reakcyjną do fiolki pośredniej.
		<ol>
			<li>Kliknij przycisk F w wyjściowym MVP, aby przełączyć wyjściowy MVP z pozycji wentylacji 4 na pozycję 5, a następnie kliknij przycisk F w wejściowym MVP, aby przełączyć wejściowy MVP z pozycji 5 na pozycję 6. Włącz wyjściową linię argonową MVP. Przepchnąć mieszaninę reakcyjną przez ułożone w stos neutralne wkłady z tlenkiem glinu i C8 do fiolki pośredniej zainstalowanej przed pętlą próbki HPLC.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Przepłukać reaktor i przenieść roztwór.
		<ol>
			<li>Przełączyć wyjście MVP w pozycji 5 na pozycję 6, przepchnąć kolejno roztwór płuczący w fiolce wyjściowej pozycji MVP 6 przez fiolkę reakcyjną, a następnie wkłady do fiolki pośredniej. Należy pamiętać, że objętość połączonej mieszaniny wynosi około 3,5 ml. Zamknąć naczynie reakcyjne.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Załadować połączoną mieszaninę do pętli HPLC i oczyścić mieszaninę.
		<ol>
			<li>Przełącz pętlę HPLC z pozycji wtrysku do pozycji obciążenia, włącz wejściową linię argonową MVP i załaduj mieszaniny do pętli HPLC o pojemności 5 ml. Po zakończeniu ładowania przełącz przycisk obciążenia na wstrzyknięcie i kliknij Wstrzyknij HPLC, aby rozpocząć chromatogram HPLC przy natężeniu przepływu 3 ml/min. Kliknij przycisk monitora HPLC, aby uzyskać dostęp do chromatogramu HPLC w czasie rzeczywistym.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Przekieruj frakcję docelową do kolumny C18.
		<ol>
			<li>Kliknij przycisk MVP przekierowania, aby przekierować docelową frakcję HPLC do krótkiej kolumny C18 po około 12 minutach.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Przepłukać chiralną kolumnę HPLC i oczyścić frakcję w kolumnie C18.
		<ol>
			<li>Po zebraniu docelowej promieniotwórczości w kolumnie C18 (i przepływie fazy ruchomej HPLC do butelki na odpady w pozycji 1 preparatu), należy przełączyć czteroportowy dwupozycyjny zawór przekierowujący do pozycji odbioru odpadów. Przepłukać kolumnę chiralną z prędkością 4 ml/min przez 6 minut, aby usunąć niewielki enancjomer D-[18F]FETrp i inne zanieczyszczenia ultrafioletowe (UV).</li>
			<li>Kliknij przycisk MVP przekierowania, aby przekierować fazę ruchomą HPLC z powrotem do pozycji 1 MVP preparatu przy natężeniu przepływu 3 ml / min. Obserwuj, że faza ruchoma przechodzi przez kolumnę chiralną i kolumnę C18 w celu oczyszczenia L-[18F] FETrp zatrzymanego w kolumnie C18.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Zbierz frakcję docelową.
		<ol>
			<li>Zebrać eluent po około 32-34 minutach do fiolki z pozycją 2 preparatu. 
			UWAGA: Zazwyczaj zbiera się 2-minutową frakcję HPLC, a całkowita objętość wraz z wstępnie napełnionym roztworem chlorku sodu wynosi 8-15 ml.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Dostarczyć dawkę do sterylnej fiolki z produktem końcowym.
		<ol>
			<li>Przepchnąć roztwór z fiolki z preparem MVP w pozycji 2 przez przewód doprowadzający i sterylny filtr do fiolki z ostatnią dawką (za pomocą fabrycznie zainstalowanej sterylnej igły filtra odpowietrzającego). 
			UWAGA: Kroki protokołu 2.2.9-2.2.13 są etapami stosowanymi do oczyszczania L-[18F]FETrp metodą HPLC.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Oznaczyć radioaktywność i objętość dawki.
		<ol>
			<li>Wyjąć sterylny filtr i oznaczyć ostateczną dawkę, aktywność i objętość.</li>
			<li>Przepłukać system ultraczystą wodą, a następnie etanolem w ilości 4 ml/min przez co najmniej 15 minut. Wyłącz pompę HPLC i skrzynkę PLC; zamknij program; wyłączyć przewód sprężonego powietrza, przewód argonu i przewód dwutlenku węgla; i wyłącz główne zasilanie modułu.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Pobrać dawkę kontroli jakości i uruchomić próbki kontroli jakości.
		<ol>
			<li>Pobrać około 0,1 ml ostatniej dawki do 0,2 ml wkładki fiolki z kontrolą jakości. Uruchom gorącą próbkę jako program "częściowej sekwencji" zgodnie z testem przydatności systemu opisanym w kroku 1.2.6 .</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Przeanalizuj dane QC i uwolnij dawkę.
		<ol>
			<li>Obliczyć czystość chemiczną i radiochemiczną, wartość nadmiaru enancjomerycznego i aktywność molową; określić wartość pH.</li>
			<li>Zwolnić dawkę, jeśli wszystkie wyniki badań mieszczą się w dopuszczalnym zakresie.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Czyszczenie systemu po uruchomieniu
<ol>
	<li>Zbadaj moduł znakowania radioaktywnego za pomocą miernika Geigera-Muellera (GM), aby upewnić się, że radioaktywność jest odpowiednio rozłożona (co najmniej 24 godziny) przed czyszczeniem systemu.</li>
	<li>Włączyć zasilanie modułu znakowania radiologicznego i zasilanie skrzynki PLC; aktywować program systemu syntezy radiochemicznej i zainicjować MVP wejścia, MVP wyjścia i MVP formulacji. Przełącz selektor kolumn w pozycję obejścia.</li>
	<li>Odłącz wkłady QMA light, tlenku glinu i C8.</li>
	<li>Najpierw przepłucz wszystkie fiolki i przewody ultraczystą wodą, a następnie etanolem. Wysuszyć fiolki i żyłki argonem o wysokiej czystości.</li>
	<li>Uszczelnij każdy otwór wentylacyjny za pomocą sterylnej igły z nasadką. Zastąp fiolki z odczynnikiem i naczynie reakcyjne odpowiednio fiolkami spalonymi w piecu i naczyniem reakcyjnym.</li>
	<li>Wyłącz pompę HPLC i skrzynkę PLC, zamknij program, wyłącz przewód sprężonego powietrza, przewód argonu i przewód dwutlenku węgla oraz wyłącz główne zasilanie modułu.</li>
</ol>

Autorzy oświadczają, że nie istnieją konkurencyjne interesy finansowe.

Tryptofan jest aminokwasem niezbędnym dla ludzi. Odgrywa ważną rolę w regulacji nastroju, funkcji poznawczych i zachowania. Znakowane radioaktywnie pochodne tryptofanu, w szczególności znakowany węglem 11AMT, były szeroko badane ze względu na ich unikalną rolę w mapowaniu syntezy serotoniny38,39, wykrywaniu i klasyfikowaniu nowotworów40, kierowaniu chirurgią padaczki41,42</sup...

U ludzi tryptofan jest niezbędnym składnikiem codziennej diety. Tryptofan jest metabolizowany głównie przez szlak kinureninowy (KP). KP jest katalizowany przez dwa enzymy ograniczające szybkość, 2,3-dioksygenazę indoloaminy (IDO) i 2,3-dioksygenazę tryptofanu (TDO). Ponad 95% tryptofanu jest przekształcane w kinureninę i jej dalsze metabolity, ostatecznie wytwarzając dinukleotyd nikotynamidoadeninowy, który jest niezbędny do transdukcji energii komórkowej. KP jest kluczowym regulatorem układu odpornościowego oraz ważnym regulatorem neuroplastyczności i efektów neurotoksycznych1,2. Nieprawidłowy metabolizm tryptofanu jest związany z różnymi zaburzeniami neurologicznymi, onkologicznymi, psychiatrycznymi i metabolicznymi; W związku z tym znakowane radioaktywnie analogi tryptofanu są szeroko stosowane w badaniach klinicznych. Dwa najczęściej badane klinicznie radioznaczniki tryptofanu to 11C-α-metylo-L-tryptofan ([11C]AMT) i 11C-5-hydroksytryptofan (11C-5-HTP)3.
W latach dziewięćdziesiątych 11C-5-HTP był używany do wizualizacji guzów neuroendokrynnych wydzielających serotoninę4 oraz do diagnozowania i monitorowania terapii opornego na hormony gruczolakoraka gruczołu krokowego z przerzutami5. Później był używany jako narzędzie do obrazowania do ilościowego oznaczania układu serotoninergicznego w endokrynologicznej trzustce6. 11C-5-HTP jest również obiecującym znacznikiem do nieinwazyjnego wykrywania żywotnych wysp trzustkowych w przeszczepie wysp trzustkowych wewnątrzwrotnych i cukrzycy typu 27,8. W ciągu ostatnich dwóch dekad wiele aminokwasów znakowanych radioaktywnie przeszło do badań klinicznych9,10. W szczególności analog tryptofanu znakowany węglem-11 [11C] AMT zyskał dużą uwagę do mapowania syntezy serotoniny w mózgu11,12,13,14 oraz do lokalizacji ognisk padaczkowych, guzów padaczkowych, zespołu stwardnienia guzowatego, glejaków i raka piersi15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26. [11kategorii]AMT ma również wysoki wychwyt w różnych nowotworach o niskim i wysokim stopniu złośliwości u dzieci27. Ponadto, kinetyczna analiza znacznikowa [11C]AMT u ludzi została wykorzystana do różnicowania i klasyfikowania różnych nowotworów oraz różnicowania glejaka od uszkodzenia tkanek wywołanego promieniowaniem15. [11kategorii]Obrazowanie pod kontrolą AMT wykazuje znaczące korzyści kliniczne w zaburzeniach mózgu3,25. Jednak ze względu na krótki okres połowicznego rozpadu węgla-11 (20 min) i pracochłonne procedury radiosyntezy, stosowanie [11C] AMT jest ograniczone do kilku ośrodków PET z cyklotronem i radiochemią.
Fluor-18 ma korzystny okres półtrwania wynoszący 109,8 min, w porównaniu do 20-minutowego okresu połowicznego rozpadu węgla-11. Coraz częściej wysiłki koncentrują się na opracowaniu znakowanych fluorem-18 radioznaczników do metabolizmu tryptofanu3,28. W sumie zgłoszono 15 unikalnych radioznaczników tryptofanu znakowanych radioizotopanem fluorem-18 pod względem znakowania radioaktywnego, mechanizmów transportu, stabilności in vitro i in vivo, biodystrybucji i wychwytu guza w ksenoprzeszczepach. Jednak szybką defluorację in vivo zaobserwowano dla kilku znaczników, w tym 4-, 5- i 6-[18F]fluorotryptofanu, co uniemożliwiło dalszą translację kliniczną29. 5-[18F]fluoro-α-metylotryptofan (5-[18F]FAMT) i 1-(2-[18F]fluoroetylo)-L-tryptofan (L-[18F]FETrp, znany również jako kwas (S)-2-amino-3-(1-(2-[18F]fluoroetylo)-1 H-indol-3-ylo)propanowy, masa cząsteczkowa 249,28 g/mol), to dwa najbardziej obiecujące radioznaczniki o korzystnej kinetyce in vivo w modelach zwierzęcych i dużym potencjale do przekroczenia [11C]AMT do oceny stanów klinicznych z rozregulowanym metabolizmem tryptofanu28. 5-[18F]FAMT wykazał wysoki wychwyt w ksenoprzeszczepach guza IDO1-dodatnich myszy z obniżoną odpornością i jest bardziej specyficzny do obrazowania KP niż [11C] AMT28,30. Jednak stabilność in vivo 5-[18F]FAMT pozostaje potencjalnym problemem, ponieważ nie zgłoszono żadnych danych dotyczących defluorowania in vivo po upływie 30 minut od wstrzyknięcia znacznika30.
Badanie przedkliniczne na genetycznie zmodyfikowanym mysim modelu rdzeniaka zarodkowego wykazało, że w porównaniu z 18F-fluorodeoksyglukozą (18F-FDG), L-[18F]FETrp miał wysoką akumulację w guzach mózgu, znikomą defluorację in vivo i niski pobór tła, wykazując lepszy stosunek celu do niedocelowego31,32. Badania dozymetrii promieniowania na myszach wykazały, że L-[18F]FETrp miał około 20% niższą ekspozycję na korzystną dozymetrię niż kliniczny 18F-FDG PET tracer33. Zgodnie z ustaleniami innych badaczy, dane z badań przedklinicznych dostarczają istotnych dowodów na poparcie klinicznego tłumaczenia L-[18F]FETrp do badania nieprawidłowego metabolizmu tryptofanu u ludzi z zaburzeniami mózgu, takimi jak padaczka, neuroonkologia, autyzm i stwardnienie guzowate28,31,32,33,34,35,36. Ogólne porównanie trzech najszerzej badanych znaczników metabolizmu tryptofanu, 11C-5-HTP, [11C] AMT i L-[18F]FETrp, przedstawiono w tabeli 1. Zarówno 11C-5-HTP, jak i [11C]AMT mają krótki okres półtrwania i pracochłonne procedury znakowania radioaktywnego. Opisano tutaj protokół radiosyntezy L-[18F]FETrp przy użyciu jednoetapowego, dwuetapowego podejścia. Protokół obejmuje użycie niewielkiej ilości prekursora znakowania radioaktywnego, małej objętości rozpuszczalników reakcyjnych, niskiego obciążenia toksycznym K222 oraz przyjaznej dla środowiska i nadającej się do wstrzykiwania fazy ruchomej w celu oczyszczenia i łatwego formułowania.

<table><tbody><tr><td>[18F]Fluor w [18O]H2O</td><td>PETNET Solutions Inc.</td><td>Nie dotyczy</td><td></td></tr><tr><td>4,7,13,16,21,24-heksaoksa-1,10-diazabicyklo[8.8.8]heksakozana</td><td>ACROS</td><td>291950010</td><td>Kryptofix 222 lub K222, 98%</td></tr><tr><td>Kwas octowy</td><td>ACROS</td><td>222142500</td><td>99,8%</td></tr><tr><td>Acetonitryl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>271004</td><td>bezwodny, 99,8%</td></tr><tr><td>System HPLC Agilent 1260</td><td>Technologie Agilent</td><td>1260</td><td>Seria</td></tr> <tr>Agilent 1260<td>Analityczna chiralna kolumna HPLC</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>12024AST</td><td>Astec CHIROBIOTIC T, 25 cm i czasy; 4,6 mm</td></tr><tr><td>Dwutlenek węgla, 60 LBS</td><td>Airgas</td><td>REFR744R200S</td><td>99,99%</td></tr><tr><td>D-FETrp standardowe odniesienie</td><td>Affinity Research Chemicals Inc</td><td>Nie dotyczy</td><td>Niestandardowa synteza</td></tr><tr><td>Pusta sterylna fiolka</td><td>Jubilant HollisterStier</td><td>7515</td><td>20 mm zamknięcie, 10 ml</td></tr><tr><td>etanolu</td><td>Decon Labs</td><td>2716</td><td>200 proof, klasa USP. &ge; 99,9%</td></tr><tr><td>Filtr strzykawkowy Fisherbrand 13 mm, 0,22 i mikro; m, PVDF, sterylne</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-720-3</td><td></td></tr><tr><td>Kwas solny</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>30721</td><td>&ge; 37%</td></tr><tr><td>Izopropanol</td><td>Decon Labs</td><td>8316</td><td>70%, sterylny</td></tr><tr><td>L-[18F]FETrp prekursor znakowania radioaktywnego</td><td>Affinity Research Chemicals Inc</td><td>N/A</td><td>Niestandardowa synteza</td></tr><tr><td>L-FETrp odniesienie do standardu</td><td>Affinity Research Chemicals Inc</td><td>N/A</td><td>Niestandardowa synteza</td></tr><tr><td>Lekki wkład C8</td><td>Wody</td><td>WAT036770</td><td>Sep-Pak&nbsp; Igła z lekkim wkładem C8 plus</td></tr><tr><td>, 20 G x 1</td><td>Becton-Dickinson & Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>305175 Igła, 20 G x 1 & frac12;</td><td>Becton-Dickinson & Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>305176 Igła, 21 G x 2</td><td>Becton-Dickinson & Co.</td><td></td><td></td>305129</tr><tr><td>Neutralny tlenek glinu</td><td>Wody</td><td>WAT023561</td><td>Sep-Pak tlenek glinu N plus lekka</td></tr><tr><td>membrana nylonowa (0,20 &mikro; m )</td><td>MilliPore</td><td>GNWP04700</td><td>47 mm</td></tr><tr><td>Sterylny filtr strzykawkowy Pall Acrodisc 25 mm</td><td>Pall Corporation</td><td>4907</td><td></td></tr><tr><td>System syntezy radiochemicznej PETCHEM PETCHEM</td><td>Solutions Inc. Pinckney, MI</td><td>N/A</td><td>Radiosyntezator</td></tr><tr><td>Paski pH 2,0 - 9,0</td><td>EMD Millipore</td><td>1.09584.0001</td><td></td></tr><tr><td>Węglan potasu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>367877</td><td>99,995%</td></tr><tr><td>Czwartorzędowy wkład świetlny metyloamonowy</td><td>Wody</td><td>186004051</td><td>Sep-Pak QMA light</td></tr><tr><td>Półpreparatywna kolumna C18 HPLC</td><td>Phenomenex</td><td>00D-4253-N0</td><td>100 & razy; 10 mm</td></tr><tr><td>Półpreparatywna chiralna kolumna HPLC</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>12034AST</td><td>Astec CHIROBIOTIC T, 25 cm & razy; 10 mm</td></tr><tr><td>Chlorek sodu do wstrzykiwań 23.4%</td><td>APP Pharmaceutical, LLC</td><td>18730</td><td>Klasa USP</td></tr><tr><td>Chlorek sodu do wstrzykiwań 0,9%</td> <td>Hospira</td><td>NDC 0409-4888-10</td><td></td></tr><tr><td>Wodorotlenek sodu</td> klasy USP <td>Honeywell</td><td>306576</td><td>99,99%</td></tr> <tr><td>Igła do rdzenia, 20 G x 3 i frac12;</td><td>Becton-Dickinson & Co.</td><td></td><td></td>405182</tr><tr><td>Sterylne podkładki nasączone alkoholem</td><td>BioMed Resource Inc.</td><td>PC661</td><td></td></tr><tr><td>Sterylne puste fiolki, 2 ml</td><td>Hollister Stier</td><td>7505ZA</td><td>13 mm zamknięcie</td></tr><tr><td>Sterylne puste fiolki, 30 ml</td><td>Jubilant HollisterStier</td><td>7520ZA</td><td>20 mm zamknięcie</td></tr><tr><td>Strzykawka PP/PE, 3 mL, Luer Lock</td><td>Air-Tite</td><td>4020-X00V0</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka PP/PE, 5 mL, Luer Lock</td><td>Becton-Dickinson & Co.</td><td></td><td></td>309646</tr><tr><td>Strzykawka,&nbsp; PP/PE, 10 mL, NORM-JECT</td><td>Air-Tite</td><td>4100-000V0</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka, 1 mL, Luer Slip</td><td>Becton-Dickinson & Co.</td><td></td><td></td>309659</tr><tr><td>Strzykawka, 3 ml, Luer-Lock</td><td>Becton-Dickinson & Co.</td><td></td><td></td>309657</tr><tr><td>Argon o ultra wysokiej czystości</td><td>Airgas</td><td>AR UHP300</td><td>99,999%</td></tr> <tr><td>Ultraczysta woda</td><td>MilliporeSigma</td><td>ZRQSVP300</td><td>Direct-Q 3 kran do systemu oczyszczania czystej i ultraczystej wody</td></tr></tbody></table>

radiosynteza 1-(2-[18f]fluoroetylo)-l-tryptofanu przy użyciu jednogarnkowego, dwuetapowego protokołu

Radiosynthesis of 1-(2-[18F]Fluoroethyl)-L-Tryptophan using a One-pot, Two-step Protocol

Szlak kinureninowy (KP) jest główną drogą metabolizmu tryptofanu. Dowody silnie sugerują, że metabolity KP odgrywają istotną rolę w proliferacji guza, epilepsji, chorobach neurodegeneracyjnych i chorobach psychicznych ze względu na ich działanie immunomodulujące, neuromodulujące i neurotoksyczne. Najszerzej stosowany środek pozytonowej tomografii emisyjnej (PET) do mapowania metabolizmu tryptofanu, α-[11C]metylo-L-tryptofan ([11C]AMT), ma krótki okres półtrwania wynoszący 20 minut przy pracochłonnych procedurach radiosyntezy. Do radiosyntezy [11C]AMT wymagany jest cyklotron na miejscu. Tylko ograniczona liczba ośrodków wytwarza [11C]AMT do badań przedklinicznych i badań klinicznych. W związku z tym pilnie potrzebne jest opracowanie alternatywnego środka do obrazowania, który ma dłuższy okres półtrwania, korzystną kinetykę in vivo i jest łatwy do zautomatyzowania. Użyteczność i wartość 1-(2-[18F]fluoroetylo)-L-tryptofanu, analogu tryptofanu znakowanego fluorem-18, została zgłoszona w zastosowaniach przedklinicznych w ksenoprzeszczepach pochodzących z linii komórkowych, ksenoprzeszczepach pochodzących od pacjentów i transgenicznych modelach nowotworów.
Ten artykuł przedstawia protokół radiosyntezy 1-(2-[18F]fluoroetylo)-L-tryptofanu przy użyciu jednoetapowej, dwuetapowej strategii. Korzystając z tego protokołu, radioznacznik może być wytwarzany z wydajnością radiochemiczną 20 ± 5% (rozpad skorygowany na końcu syntezy, n > 20), zarówno przy czystości radiochemicznej, jak i nadmiarze enancjomerycznym powyżej 95%. Protokół zawiera niewielką ilość prekursora z nie więcej niż 0,5 ml rozpuszczalnika reakcyjnego na każdym etapie, niskie obciążenie potencjalnie toksycznym 4,7,13,16,21,24-heksaoksa-1,10-diazabicyklo[8.8.8]heksakozanem (K222) oraz przyjazną dla środowiska i nadającą się do wstrzykiwań fazę ruchomą do oczyszczania. Protokół można łatwo skonfigurować do produkcji 1-(2-[18F]fluoroetylo)-L-tryptofanu do badań klinicznych w dostępnym na rynku module.

Schemat reakcji przedstawiono na Rysunku 1. Radiomarkowanie obejmuje dwa następujące etapy: 1) reakcja prekursora radiomarkowania z tosylanem z [18F]fluorkiem prowadzi do otrzymania produktu pośredniego znakowanego 18F, a 2) depreccja grup ochronnych tert-butyloxykarbonylowej i tert-butylowej w produkcie pośrednim pozwala uzyskać produkt końcowy L-[18F]FETrp. Oba etapy reakcji przebiegają w temperaturze 100 °C przez 10 min.
<p class="jov...

Tutaj opisujemy radiosyntezę 1-(2-[18F]Fluoroetylo)-L-tryptofanu, środka do obrazowania metodą pozytonowej tomografii emisyjnej do badania metabolizmu tryptofanu, przy użyciu jednogarnkowej, dwuetapowej strategii w systemie syntezy radiochemicznej o dobrych wydajnościach radiochemicznych, wysokim nadmiarze enancjomerycznym i wysokiej niezawodności.

Radiosynteza 1-(2-[18F]fluoroetylo)-L-tryptofanu przy użyciu jednogarnkowego, dwuetapowego protokołu

The kynurenine pathway (KP) is a primary route for tryptophan metabolism. Evidence strongly suggests that metabolites of the KP play a vital role in tumor ...

Ogólnym celem tego protokołu jest radiosynteza znakowanego radioaktywnie znacznika tryptofanu F18 za pomocą jednoetapowego, dwuetapowego podejścia. Radioznacznik może znaleźć szerokie zastosowanie w obrazowaniu metabolizmu tryptofanu. Technika ta wykorzystuje radioizotop o dłuższym okresie półtrwania, mniejszym prekursorze reakcji i mniejszej objętości reakcji oraz fazie przyjaznej dla środowiska do oczyszczania.Radioznacznik może być stosowany w diagnostyce różnych zaburzeń wpływających na mózg, w tym między innymi padaczki, zaburzeń neuropsychiatrycznych i neuroonkologii. Metoda ta może być stosowana do innych dostępnych na rynku modułów znakowania promieniami. Po otrzymaniu roztworu fluorku F18 należy rozpocząć od zbadania ołowianego pudełka na powierzchni i z odległości jednego metra zarejestrować maksymalne wskaźniki narażenia na promieniowanie.Po wykonaniu testu wycierania, aby upewnić się, że pudełko wysyłkowe nie jest zanieczyszczone, zapisz dawkę fluoru F18 i czas. Przenieść roztwór fluorku F18 do układu syntezy radiochemicznej. Połącz linię argonu z krótką igłą, a linię transferu fluoru F18 z długą igłą z fiolką z fluorkiem F18.Następnie zamknij szklane drzwi z gorącymi komórkami i drzwi ołowiane. Włącz linię doprowadzającą argon, klikając opcję Argon Supply (Zasilanie argonem). Zwiększ ciśnienie argonu i włącz linię do wypychania fluorku F18, aby przepchnąć wodny fluorek F18 przez wkład świetlny QMA.Gdy cała radioaktywność zostanie uwięziona we wkładzie świetlnym QMA, a odczyt detektora radioaktywności jest stały, zwiększ ciśnienie argonu i przedmuchuj argon przez wkład przez kolejne pięć minut, aby usunąć nadmiar wody. Po wyłączeniu przewodu do wytłaczania fluorku F18 należy zmniejszyć ciśnienie argonu do zera i przełączyć sześcioportowy zawór dwupozycyjny z pozycji wychwytywania fluorku F18 do pozycji elucji. Otwórz fiolkę reakcyjną, włącz pozycję wejściową MVP jedną linię argonu i wepchnij K222 i roztwór węglanu potasu do wejściowej pozycji MVP jedną fiolkę przez wkład świetlny QMA, aby wymyć radioaktywność do fiolki reakcyjnej.Przełącz pozycję elucji fluorku F18 na pozycję pułapki. Kliknij przycisk Podgrzewanie, aby podgrzać reaktor do 110 stopni Celsjusza, włącz wyjściową linię argonu MVP w pozycji czwartej, która łączy się z reaktorem, i odparuj rozpuszczalnik do wyjściowej fiolki MVP w pozycji czwartej. Kliknij przycisk Chłodzenie, aby schłodzić reaktor do temperatury pokojowej za pomocą sprężonego dwutlenku węgla.Wyłączyć linię zamiatania, przełączyć wejściową pozycję MVP pierwszą na pozycję drugą i dodać bezwodny acetonitryl do fiolki drugiej. Dwa włączają linię zamiatającą i grzałkę, aby azeotropowo wysuszyć fluorek F18 w temperaturze 110 stopni Celsjusza. Gdy reaktor osiągnie temperaturę pokojową, wyłącz linię zamiatania, zmień pozycję wejściową MVP drugą na pozycję trzecią i dodaj prekursor znakowania radioaktywnego tosylanu do fiolki trzeciej.Zamknąć reaktor i podgrzewać mieszaniny reakcyjne w temperaturze 100 stopni Celsjusza przez 10 minut. Aby odparować rozpuszczalnik reakcyjny, gdy reaktor ostygnie, włącz linię zamiatania i odparuj rozpuszczalnik reakcyjny w temperaturze 100 stopni Celsjusza. Gdy reaktor ostygnie, wyłącz linię zamiatania i przełącz wejście MVP w pozycji trzeciej na pozycję czwartą.Po dodaniu mieszaniny acetonitrylu kwasu solnego podgrzać reakcję w temperaturze 100 stopni Celsjusza przez 10 minut, aby usunąć ochronę grup ochronnych tert-butylu i tert-butyloksykarbonylu w prekursorze znakowania promieniotwórczego. Aby zneutralizować reakcję, gdy reaktor osiągnie temperaturę pokojową, należy przełączyć wejście MVP w pozycję czwartą na pozycję piątą i dodać dwa molowe wodorotlenki sodu do mieszaniny reakcyjnej i wyłączyć wejściową linię argonową MVP. Następnie rozpocznij przenoszenie mieszaniny reakcyjnej do pliku pośredniego, klikając przycisk F w wyjściowym MVP, aby przełączyć wyjściowy MVP z pozycji odpowietrzania czwartej na pozycję piątą, a następnie klikając przycisk F w wejściowym MVP, aby przełączyć wejściowe MVP z pozycji piątej na pozycję szóstą.Po włączeniu wyjściowej linii argonowej MVP, przepchnąć mieszaninę reakcyjną przez ułożone w stos neutralne wkłady z tlenkiem glinu i C8 do fiolki pośredniej zainstalowanej przed pętlą próbki HPLC. W celu przepłukania reaktora należy przełączyć wyjściową pozycję MVP piątą na pozycję szóstą, przepchnąć kolejno roztwór płuczący w fiolce wyjściowej pozycji MVP szóstej przez fiolkę reakcyjną, wkłady i fiolkę pośrednią. Następnie należy rozpocząć oczyszczanie mieszaniny, przełączając pętlę HPLC z pozycji wtrysku do pozycji obciążenia i włączając wejściową linię argonową MVP.Gdy mieszanina zostanie załadowana do pięciomililitrowej pętli HPLC, przełącz przycisk Ładowanie na Wstrzyknij, kliknij Wstrzyknij HPLC, aby uruchomić chromatogram HPLC przy natężeniu przepływu trzech mililitrów na minutę, a następnie kliknij przycisk Monitor HPLC, aby uzyskać dostęp do chromatogramu HPLC w czasie rzeczywistym. Kliknij przycisk Przekierowanie MVP, aby przekierować docelową frakcję HPLC do krótkiej kolumny C18 po około 12 minutach. Po zebraniu docelowej radioaktywności w kolumnie C18 należy przełączyć czteroportowy dwupozycyjny zawór przekierowujący do pozycji zbierania odpadów i przepłukać kolumnę chiralną z szybkością czterech mililitrów na minutę przez sześć minut, aby usunąć niewielki enancjomer D F18 FETrp i inne zanieczyszczenia ultrafioletowe.Kliknij przycisk Przekierowanie MVP, aby przekierować fazę ruchomą HPLC z powrotem do pozycji MVP preparatu jeden przy trzech mililitrach na minutę. Obserwuj, że faza ruchoma przechodzi przez kolumnę chiralną i kolumnę C18 w celu oczyszczenia L-F18 FETrp zatrzymanego w kolumnie C18. Po około 32 do 34 minutach należy zebrać frakcję docelową do fiolki z pozycją drugą preparatu MVP.Następnie przepchnąć roztwór z fiolki z drugiej pozycji MVP przez linię dozującą i sterylny filtr do fiolki z ostatnią dawką. Oznaczyć ostateczną dawkę, aktywność i objętość po wyjęciu sterylnego filtra. Przepłucz system ultra czystą wodą, a następnie etanolem o natężeniu przepływu czterech mililitrów na minutę przez co najmniej 15 minut na pranie.Wyłącz pompę HPLC i skrzynkę PLC, zamknij program, wyłącz przewód sprężonego powietrza, przewód argonowy, przewód dwutlenku węgla i główne zasilanie modułu. Pobrać około 0,1 mililitra ostatniej dawki do 0,2-mililitrowej wkładki fiolki z kontrolą jakości. Uruchom gorącą próbkę, tak jak program sekwencji częściowej jest opisany w rękopisie tekstowym.Przeanalizuj dane QC, obliczając czystość chemiczną i radiochemiczną wartości nadmiaru enancjomerycznego i aktywności molowej. Po ustaleniu wartości pH należy zwolnić dawkę, jeśli wszystkie wyniki badań przejdą dopuszczalny zakres. Pokazane są reprezentatywne chromatogramy HPLC dla kontroli jakości.Nieznaczne piki między objętością pustki w ciągu 10 minut programu wykryto w chromatogramie ślepej próby. Nieznakowany radioizotopowo wzorcowy L-fluoroetylo-trytofan wykazał obecność pojedynczego izomeru dobrze oddzielonego od wzorcowego odniesienia jego D-odpowiednika. Ostatnia dawka tryptofanu L-F18 wykazała wysoką czystość chemiczną i radiochemiczną.Badanie stabilności produktu końcowego przy najwyższym stężeniu dawki przez okres do ośmiu godzin wykazało, że tryptofan L-F18 był stabilny pod względem czystości chemicznej, czystości radiochemicznej, nadmiaru enancjomerycznego i wartości pH. Czystość chemiczna i radiochemiczna większa niż 95% została osiągnięta przy użyciu tego protokołu. Dwie kolumny służą do oczyszczania znacznika.Pamiętaj, aby przełączyć się na kolumnę C18 w celu usunięcia zanieczyszczeń chemicznych. Możemy szybko dostosować tę metodę do klinicznej produkcji radioznacznika tryptofanu znakowanego fluorem-18.

radiosynthesis-1-2-18ffluoroethyl-l-tryptophan-using-one-pot-two-step

Research

JoVE Journal

Chemistry

Chemia

Opracowano prostą, jednoetapową syntezę N-sukcynimidylo-4-[18F]fluorobenzoesanu ([18F]SFB) w oparciu o beznawodny, trzyetapowy proces radiochemiczny. Dzięki zastosowaniu ogrzewania mikrofalowego całą procedurę można przeprowadzić w czasie krótszym niż 30 min, lub w 60 min w przypadku dodatkowego oczyszczania za pomocą preparatywnej HPLC. Skorygowane o czas rozpadu wydajności radiochemiczne (RCYs) wynosiły 35-5% (n &gt; 30).

Synteza jednoputowa z wykorzystaniem mikrofal N-succinimidylo-4-[18F]fluorobenzoesanu ([18F]SFB)

Analogi trehalozy stają się ważnymi cząsteczkami do zastosowań bio(technicznych)logicznych i biomedycznych. Opisujemy zoptymalizowany protokół enzymatycznej syntezy i oczyszczania analogów trehalozy, który jest prosty, wydajny, szybki i przyjazny dla środowiska. Wykazano jego zastosowanie do szybkiej produkcji i podawania sondy do wykrywania prątków.

Szybka jednoetapowa synteza enzymatyczna i całkowicie wodne oczyszczanie analogów trehalozy

Demonstrujemy półautomatyczną syntezę radiochemiczną [18F]3F4AP i procedury kontroli jakości.

Zautomatyzowana synteza radiochemiczna [18F]3F4AP: nowy znacznik PET do obrazowania chorób demielinizacyjnych

Miejsca obrazowania pozytonowej tomografii emisyjnej (PET), które biorą udział w wielu wczesnych badaniach klinicznych, wymagają solidnych i wszechstronnych możliwości produkcji radioznaczników. Na przykładzie radioznacznika [18F] Klofarabiny ilustrujemy, jak zautomatyzować syntezę radioznacznika za pomocą elastycznego radiosyntezatora opartego na kasecie i zwalidować syntezę do użytku klinicznego.

Automatyzacja protokołu syntezy radioznacznika metodą pozytonowej tomografii emisyjnej (PET) do produkcji klinicznej

Informujemy o skutecznej technice radioznakowania węglem-11 w celu wytworzenia klinicznie istotnych znaczników dla pozytonowej tomografii emisyjnej (PET) przy użyciu wkładów do ekstrakcji do fazy stałej. 11Czynnik metylujący C przepuszcza się przez kartridż, który jest wstępnie załadowany prekursorem, a następująca po nim elucja za pomocą wodnego roztworu etanolu dostarcza chemicznie i radiochemicznie czyste znaczniki PET o wysokiej wydajności radiochemicznej.

Metylacja C w fazie stałej 11, oczyszczanie i formulacja do produkcji znaczników PET

Synteza radiofarmaceutyków znakowanych fluorem-18 (18F) do pozytonowej tomografii emisyjnej zazwyczaj wymaga miesięcy doświadczenia. Po włączeniu do radioznacznika, motyw akceptora krzemowo-fluorkowego (SiFA) umożliwia prosty protokół znakowania 18F, który jest niezależny od kosztownego sprzętu i szkolenia przygotowawczego, przy jednoczesnym zmniejszeniu ilości potrzebnego prekursora i wykorzystaniu łagodniejszych warunków reakcji.

Rozdział 18Znakowanie F radioznaczników funkcjonalizowanych akceptorem fluorku krzemu (SiFA) do pozytonowej tomografii emisyjnej

Ta metoda opisuje użycie nowatorskiej metodologii wysokoprzepustowej, opartej na reakcjach chemicznych kropelk, do szybkiej i ekonomicznej optymalizacji radiofarmaceutyków przy użyciu nanomolowych ilości odczynników.

Optymalizacja reakcji radiochemicznych z wykorzystaniem matryc kropelkowych

Opisany jest prosty protokół do określania neutralnej zawartości lipidów w komórkach glonów za pomocą procedury barwienia czerwienią Nilu. Ta oszczędzająca czas technika stanowi alternatywę dla tradycyjnych protokołów kwantyfikacji lipidów opartych na grawimetrii. Został zaprojektowany z myślą o konkretnym zastosowaniu monitorowania wydajności bioprocesów.

Prosty i szybki protokół pomiaru neutralnych lipidów w komórkach glonów za pomocą fluorescencji

Ze względu na swój wielodniowy okres półtrwania radioaktywnego i korzystne właściwości rozpadu, emitujący pozytony radiometal 89Zr doskonale nadaje się do stosowania w radiofarmaceutykach opartych na przeciwciałach do obrazowania PET. W tym protokole opisana zostanie biokoniugacja, radiosynteza i przedkliniczne zastosowanie przeciwciał znakowanych 89Zr.

Biokoniugacja i radiosynteza 89przeciwciał znakowanych Zr-DFO

Ten artykuł przedstawia protokół produkcji nanocząsteczek na bazie białek, który zmienia hydrofobową powierzchnię na hydrofilową. Wyprodukowana nanocząstka jest zespołem kopolimerów diblokowych gliadyny i cyjanoakrylanu. Natryskiwanie wytworzonej nanocząstki zmienia powierzchnię materiału docelowego na powierzchnię hydrofilową.

Protokół wytwarzania nanocząstek gliadyny-cyjanoakrylanu do powlekania hydrofilowego

Poznaj radiosyntezę znacznika PET z tryptofanu znakowanego F18 przy użyciu jednogarnkowej, dwuetapowej metody. Technika ta umożliwia obrazowanie metabolizmu tryptofanu w mózgu z zastosowaniem przyjaznych dla środowiska faz oczyszczania.

Radiosynteza 1-(2-[¹⁸F]fluoroetylo)-L-tryptofanu przy użyciu jednogarnkowego, dwuetapowego protokołu

Przeglądaj więcej filmów