Name: Utrzymanie laboratoryjnych kultur Gryllus bimaculatus, wszechstronnego modelu prostoskrzydłego do hodowli owadów i fizjologii bezkręgowców (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-06-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
Description: Poznaj metody hodowli Gryllus bimaculatus w warunkach laboratoryjnych dla badań nad alternatywnymi źródłami białka i fizjologią owadów. Standardowe techniki zapewniają powtarzalność wyników w nauce.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Finansowanie tego projektu było możliwe dzięki wewnętrznym grantom University of Wisconsin-Madison. Najszczersze podziękowania dla Kevina Bachhubera z Bachhuber Consulting Inc. za dostęp do jego niepublikowanego przewodnika po komercyjnej hodowli krykieta oraz dla Michaela Bartletta Smitha za pomoc w udoskonalaniu i rozwiązywaniu problemów z tymi metodami.

<ol><li>Hales, K. G., Korey, C. A., Larracuente, A. M., Roberts, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+on+the+fly%3A+a+primer+on+the+Drosophila+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetics on the fly: a primer on the Drosophila model system.</a> Genetics. 201 (3), 815-842 (2015).</li>
<li>Merkel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+temperature+and+food+quality+on+the+larval+development+of+Gryllus+bimaculatus+%28Orthoptera%2C+Gryllidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Oecologia%22%5BJournal%5D)">The effects of temperature and food quality on the larval development of Gryllus bimaculatus (Orthoptera, Gryllidae).</a> Oecologia. 30 (2), 129-140 (1977).</li>
<li>Bateman, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mate+preference+for+novel+partners+in+the+cricket+Gryllus+bimaculatus%5BTitle%5D)+AND+%22Ecological+Entomology%22%5BJournal%5D)">Mate preference for novel partners in the cricket Gryllus bimaculatus.</a> Ecological Entomology. 23 (4), 473-475 (1998).</li>
<li>Mito, T., Noji, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+two-spotted+cricket+Gryllus+bimaculatus%3A+An+emerging+model+for+developmental+and+regeneration+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">The two-spotted cricket Gryllus bimaculatus: An emerging model for developmental and regeneration studies.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li>
<li>Ylla, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cricket+genomes%3A+the+genomes+of+future+food%5BTitle%5D)+AND+%22BioRxiv%22%5BJournal%5D)">Cricket genomes: the genomes of future food.</a> BioRxiv. , (2020).</li>
<li>Hanboonsong, Y., Jamjanya, T., Durst, P. B. Six-legged livestock: edible insect farming, collecting, and marketing in Thailand. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.fao.org/docrep/017/i3246e00.htm">http://www.fao.org/docrep/017/i3246e00.htm</a> (2013).</li>
<li>Halloran, A., Roos, N., Hanboonsong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cricket+farming+as+a+livelihood+strategy+in+Thailand%5BTitle%5D)+AND+%22Geographical+Journal%22%5BJournal%5D)">Cricket farming as a livelihood strategy in Thailand.</a> Geographical Journal. 183 (1), 112-124 (2017).</li>
<li>Wade, M., Hoelle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+edible+insect+industrialization%3A+scales+of+production+and+implications+for+sustainability%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Research+Letters%22%5BJournal%5D)">A review of edible insect industrialization: scales of production and implications for sustainability.</a> Environmental Research Letters. 15, 123013(2020).</li>
<li>EL-Damanhouri, H. I. H. Studies on the influence of different diets and rearing conditions on the development and growth of the two-spotted cricket Gryllus bimaculatus de Greer. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://epub.uni-bayreuth.de/310/1/Diss.pdf">https://epub.uni-bayreuth.de/310/1/Diss.pdf</a> (2011).</li>
<li>Ngonga, C. A., Gor, C. O., Okuto, E. A., Ayieko, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+performance+of+Acheta+domesticus+and+Gryllus+bimaculatus+production+reared+under+improvised+cage+system+for+increased+returns+and+food+security%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insects+as+Food+and+Feed%22%5BJournal%5D)">Growth performance of Acheta domesticus and Gryllus bimaculatus production reared under improvised cage system for increased returns and food security.</a> Journal of Insects as Food and Feed. 7, 301-310 (2021).</li>
<li>Behrens, W., Hoffmann, K. -H., Kempa, S., Gäßler, S., Merkel-Wallner, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+diurnal+thermoperiods+and+quickly+oscillating+temperatures+on+the+development+and+reproduction+of+crickets%2C+Gryllus+bimaculatus%5BTitle%5D)+AND+%22Oecologia%22%5BJournal%5D)">Effects of diurnal thermoperiods and quickly oscillating temperatures on the development and reproduction of crickets, Gryllus bimaculatus.</a> Oecologia. 59 (2-3), 279-287 (1983).</li>
<li>Collavo, A., et al. Housecricket smallscale farming. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCollavo%2C+A+%22Ecological+implications+of+minilivestock.+Potential+of+insects%2C+rodents%2C+frogs+and+snails%22">Ecological implications of minilivestock. Potential of insects, rodents, frogs and snails</a>. Paoletti, M. G. , Science Publishers. Enfield, N.H., USA. Chapter 27 (2005).</li>
<li>Simmons, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Competition+between+larvae+of+the+field+cricket%2C+Gryllus+bimaculatus+%28Orthoptera%3A+Gryllidae%29+and+its+effects+on+some+life-history+components+of+fitness%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Animal+Ecology%22%5BJournal%5D)">Competition between larvae of the field cricket, Gryllus bimaculatus (Orthoptera: Gryllidae) and its effects on some life-history components of fitness.</a> Journal of Animal Ecology. 56, 1015-1027 (1987).</li>
<li>Sorjonen, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plant-based+by-product+diets+for+the+mass-rearing+of+Acheta+domesticus+and+Gryllus+bimaculatus%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">The plant-based by-product diets for the mass-rearing of Acheta domesticus and Gryllus bimaculatus.</a> PLOS ONE. 14 (6), 0218830(2019).</li>
<li>Maciel-Vergara, G., Jensen, A. B., Lecocq, A., Eilenberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diseases+in+edible+insect+rearing+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insects+as+Food+and+Feed%22%5BJournal%5D)">Diseases in edible insect rearing systems.</a> Journal of Insects as Food and Feed. 7 (5), 1-18 (2021).</li>
<li>Alexander, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggressiveness%2C+territoriality%2C+and+sexual+behavior+in+field+crickets+%28Orthoptera%3A+Gryllidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Behaviour%22%5BJournal%5D)">Aggressiveness, territoriality, and sexual behavior in field crickets (Orthoptera: Gryllidae).</a> Behaviour. , 130-223 (1961).</li>
<li>Pet food, fish bait, and animal feed. USDA APHIS. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.aphis.usda.gov/aphis/ourfocus/planhealth/import-information/permits/plant-pests/sa_animalfeed/ct_petfood_fishbait_animalfeed">https://www.aphis.usda.gov/aphis/ourfocus/planhealth/import-information/permits/plant-pests/sa_animalfeed/ct_petfood_fishbait_animalfeed</a> (2022).</li>
<li>Donoughe, S., Extavour, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+development+of+the+cricket+Gryllus+bimaculatus%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Embryonic development of the cricket Gryllus bimaculatus.</a> Developmental Biology. 411 (1), 140-156 (2016).</li>
<li>Dobermann, D., Michaelson, L., Field, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+an+initial+high-quality+feeding+regime+on+the+survival+of+Gryllus+bimaculatus+%28black+cricket%29+on+bio-waste%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insects+as+Food+and+Feed%22%5BJournal%5D)">The effect of an initial high-quality feeding regime on the survival of Gryllus bimaculatus (black cricket) on bio-waste.</a> Journal of Insects as Food and Feed. 5 (2), 1-8 (2018).</li>
<li>Lundy, M. E., Parrella, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crickets+are+not+a+free+lunch%3A+Protein+capture+from+scalable+organic+side-streams+via+high-density+populations+of+Acheta+domesticus%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Crickets are not a free lunch: Protein capture from scalable organic side-streams via high-density populations of Acheta domesticus.</a> PLOS ONE. 10, 0118785(2015).</li>
<li>Mazaya, G., Karseno, K., Yanto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+and+phytochemical+activity+of+coconut+shell+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Turkish+Journal+of+Agriculture+-+Food+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial and phytochemical activity of coconut shell extracts.</a> Turkish Journal of Agriculture - Food Science and Technology. 8 (5), 1090-1097 (2020).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do zadeklarowania konfliktu interesów.

Prostota tego podejścia do hodowli świerszczy może przynieść korzyści w wielu obszarach badawczych i stanowi ogólny szablon udanej hodowli świerszczy, który można łatwo dostosować do różnych potrzeb eksperymentalnych. W porównaniu z kilkoma innymi badaniami G. bimaculatus, rozmiar dorosłego osobnika jest mniejszy, a dojrzewanie jest wolniejsze14, co przypisujemy nieoptymalnej temperaturze chowu narzuconej nam przez okoliczności. Opisane powyżej metody były stosowane i udoskonalane przez 2...

Jak to jest typowe dla kultowego owada, muszki owocowej Drosophila melanogaster, wykorzystanie owadów jako laboratoryjnych organizmów modelowych zapewnia wyraźne korzyści dla badań z zakresu genetyki, toksykologii i fizjologii1. Niewielki rozmiar owadów zmniejsza przestrzeń potrzebną na kultury oraz ilość wymaganej paszy i materiałów eksploatacyjnych. Wiele owadów rozmnaża się szybko, co czyni je wyjątkowo przystosowanymi do tworzenia wyspecjalizowanych linii genetycznych i badań wymagających oceny wielu kolejnych pokoleń.
Wiele badań skupia się na holometabolicznych owadach, takich jak Drosophila, które wykazują całkowitą metamorfozę i przepoczwarzanie. Dostępne są jednak inne modele, w tym Gryllus bimaculatus (De Geer), świerszcz polowy z dwiema plamkami. G. bimaculatus jest owadem paurometabolicznym, który przechodzi od 7 do 11 nimfalnych stadium rozwoju, zanim osiągnie dojrzałość płciową2. Ten świerszcz wykazuje szeroki zakres zachowań związanych z doborem płciowym, w tym stridulację, pokazy terytorialne i ochronę partnera3. Niedojrzałe świerszcze różnią się od larw holometabolicznych gatunków owadów tym, że podobnie jak wiele młodych osobników paurometabolicznych, są w stanie zregenerować utracone i uszkodzone kończyny podczas ekdyzyzy4. Dodatkowo w pełni zsekwencjonowany genom G. bimaculatus został opublikowany w 20215. Te cechy sprawiają, że świerszcze te są atrakcyjne jako cel badań podstawowych.
Świerszcze polne dwuplamiste są powszechnie hodowane na pokarm dla ludzi i paszę dla zwierząt. Skala tych operacji jest często znacznie większa niż w przypadku badań laboratoryjnych6,7. Pomimo różnicy w skali, wyzwania, przed którymi stoją naukowcy, w dużym stopniu pokrywają się z tymi, z którymi borykają się komercyjni hodowcy świerszczy. Rozważania te zbiegają się w kontekście badań laboratoryjnych mających na celu poprawę produkcji jadalnych owadów. Ponieważ branża jadalnych owadów wciąż ewoluuje i rośnie, optymalizacja nakładów paszowych i niezliczonych innych aspektów produkcji jest głównym celem8. Badania laboratoryjne wykazujące zmierzoną poprawę wydajności chowu, przeżywalności lub czasu pokolenia u tych świerszczy mogą potencjalnie pomóc w długoterminowym zwiększeniu rentowności hodowli świerszczy.
Standaryzowane protokoły hodowlane umożliwiają bliższe porównanie badań nad optymalizacją chowu. Do tej pory opublikowano kilka szczegółowych protokołów hodowli G. bimaculatus w laboratorium. Idealny protokół odzwierciedlałby warunki występujące w rzeczywistych operacjach hodowli świerszczy, przy jednoczesnym utrzymaniu ściśle kontrolowanych warunków niezbędnych do dokładnego pomiaru zmian w wydajności wzrostu wynikających z eksperymentalnych zabiegów i podkreślenia strategii ograniczania ryzyka. Metody opisane w tym artykule zostały opracowane w oparciu o opublikowane protokoły, techniki i aparaturę używaną do hodowli różnych gatunków świerszczy w szerokim zakresie laboratoryjnych i komercyjnych skali produkcyjnych2,9,10,11,12. Metody te są również oparte na kilku nierecenzowanych źródłach, w tym niepublikowanych biuletynach technicznych i osobistej komunikacji z komercyjnymi hodowcami krykieta w Ameryce Północnej. Protokół ten został opracowany z zamiarem ułatwienia tworzenia laboratoryjnych kultur G. bimaculatus specjalnie do wykorzystania w badaniach związanych z hodowlą owadów.

<table><tbody><tr><td>31-qt (29,3 l) Pojemnik na śmieci z pokrywą zatrzaskową</td><td>HOMZ</td><td>3430CLBL</td><td>Służy do trzymania stada hodowlanego</td></tr><tr><td>3-poziomowy/12-tacowy stojak na lampy do uprawy Pojemnik</td><td>na śmieci Fischer Scientific NC1938548</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 galonów (189,27 l) z pokrywą</td><td>Sterilite</td><td>#14796603</td><td>Używany jako dodatkowa osłona podczas obchodzenia się ze świerszczami</td></tr><tr><td>50 ml polipropylenowy cylinder z podziałką</td><td>Fischer Scientific</td><td>S95171</td><td></td></tr><tr><td>7,5-qt (7,1 l) pojemnik na śmieci z pokrywą z pokrywą</td><td>HOMZ</td><td>3410CLBL</td><td>Służy do przechowywania zapasów</td></tr> wtórnych <tr><td>Accuris 500 g x 0,01 g Balance</td><td>Wyprodukowane przez Accuris, spółkę zależną Benchmark Scientific</td><td>W3300-500</td><td>Zakupione od Dot Scientific za pośrednictwem usługi zakupu systemu University of Wisconsin "ShopUW+"</td></tr><tr><td>Ace Premier 1-calowa płaska szczotka do wiórów</td><td>Ace Hardware&nbsp;</td><td>#1803261</td><td></td></tr><tr><td>Bel-Art SP Scienceware dejonizowana butelka do mycia wody</td><td>Fischer Scientific</td><td>03-421-160&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Jasna aluminiowa osłona okienna&nbsp;</td><td>Phifer</td><td>UNSPSC# 11162108</td><td>Rozmiar oczek 18 x 16 "</td></tr><tr><td>Przezroczyste jednorazowe plastikowe kubki na porcje 5,5 uncji z pokrywkami</td><td>Wal-Mart</td><td>Nie dotyczy wody</td><td></td></tr><tr><td>dejonizowanej</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diablo 4-4/8" x 13 TPI Ultra Fine Finish Bi-metalowy brzeszczot do układanek Home</td><td>Depot</td><td>#313114935</td><td></td></tr><tr><td>Wypełniacz do jaj Flats-Paper, 12 x 12</td>" <td>Uline</td><td>S-5189</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Petri Szalki z przezroczystą pokrywką 100 x 15mm</td><td>Fischer Scientific</td><td>FB0875714</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Szalki Petriego z przezroczystą pokrywką 60 x 15mm</td><td>Fischer Scientific</td><td>FB0875713A</td><td></td></tr><tr><td>Georgia-Pacific Envision Brązowe ręczniki papierowe</td><td>Home Depot</td><td>#205675843</td><td></td></tr><tr><td>Infinity Tough Guy Wysokowydajny klej topliwy w sztyfcie</td><td>Infinity Bond</td><td>Infinity IM-Tough-Guy-12</td><td></td></tr><tr><td>Mazuri Cricket Diet</td><td>Land O' Lakes International</td><td>SKU#&nbsp; 3002219-105</td><td></td></tr><tr><td>Stanley TimeIt Twin 2-wylotowy uziemiony mechaniczny 24-godzinny timer</td><td>Wal-Mart</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Vermont Organics Rekultywacja gleby 11 funtów Coib Block</td><td>Home Depot</td><td>#300679904</td><td></td></tr></tbody></table>

utrzymanie laboratoryjnych kultur gryllus bimaculatus, wszechstronnego modelu prostoskrzydłego do hodowli owadów i fizjologii bezkręgowców

Maintaining Laboratory Cultures of Gryllus bimaculatus, a Versatile Orthopteran Model for Insect Agriculture and Invertebrate Physiology

Gryllus bimaculatus (De Geer) to świerszcz o dużych ciałach, rozpowszechniony w całej Afryce i południowej Eurazji, gdzie często jest dziko zbierany jako pokarm dla ludzi. Poza rodzimym zasięgiem hodowla G. bimaculatus jest możliwa ze względu na plastyczność diety, szybki cykl rozrodczy, brak wymogu diapauzy, tolerancję na hodowlę w dużym zagęszczeniu i odporność na patogeny. Tak więc G. bimaculatus może być wszechstronnym modelem do badań nad fizjologią, zachowaniem, embriologią lub genetyką owadów.
Parametry kulturowe, takie jak gęstość obsady, refugia w klatce, fotoperiod, temperatura, wilgotność względna i dieta, wszystkie wpływają na wzrost, zachowanie i ekspresję genów świerszczy i powinny być ustandaryzowane. W rozwijającej się literaturze na temat hodowli owadów przeznaczonych do spożycia przez ludzi, świerszcze te są często wykorzystywane do oceny potencjalnych domieszek paszowych pochodzących z resztek pożniwnych, produktów ubocznych przetwórstwa spożywczego i innych tanich strumieni odpadów.
Aby wesprzeć trwające eksperymenty oceniające wydajność wzrostu G. bimaculatus i jakość odżywczą w odpowiedzi na zmienne substraty paszowe, opracowano obszerny zestaw standardowych protokołów hodowli, utrzymania, obsługi, pomiarów i eutanazji w laboratorium, który jest prezentowany tutaj. Standardowa w branży pasza dla świerszczy okazała się odpowiednia pod względem odżywczym i funkcjonalnie odpowiednia do długoterminowego utrzymania stad hodowlanych świerszczy, a także do stosowania jako eksperymentalna pasza kontrolna. Hodowla tych świerszczy w gęstości 0,005 świerszczy/cm3 w klatkach polietylenowych o pojemności 29,3 l z ekranem w średniej temperaturze 27 °C w fotoperiodzie 12 jasnych (L)/12 ciemnych (D), z wilgotnym włóknem kokosowym służącym zarówno jako źródło nawodnienia, jak i podłoże do składania jaj, z powodzeniem utrzymała zdrowe świerszcze przez okres 2 lat. Stosując te metody, świerszcze w kontrolowanym eksperymencie uzyskały średnią masę 0,724 g 0,190 g podczas zbioru, przy 89% przeżywalności i 68,2% dojrzałości płciowej między zarybieniem (22 dni) a zbiorem (65 dni).

Dane wykazujące pomyślną hodowlę świerszczy od wyklucia do 65 dnia życia zostały zebrane podczas próby żywieniowej we wrześniu 2021 roku. Świerszcze hodowano z jaj zgodnie z krokami 1.1.1-2.6.1 niniejszych protokołów, a sześć klatek powtórzeń obsadzono 24 losowo wybranymi 22-dniowymi świerszczami (trzecie stadium larwalne) zgodnie z powyższym krokiem 2.7. Następnie świerszcze hodowano w warunkach otoczenia pomieszczenia; jednak ze względu na awarię jednostki uzdatniania powietrza w obiekcie, średnia temperatura w pomiesz...

Ten artykuł przedstawia podstawowe metody standaryzacji ważnych czynników, takich jak gęstość, dostępność paszy, źródło nawodnienia i kontrola środowiska dla długoterminowej hodowli laboratoryjnych jadalnego świerszcza, Gryllus bimaculatus.

Utrzymanie laboratoryjnych kultur Gryllus bimaculatus, wszechstronnego modelu prostoskrzydłego do hodowli owadów i fizjologii bezkręgowców

Gryllus bimaculatus (De Geer)&#160;is a large-bodied cricket distributed throughout Africa and Southern Eurasia where it is often wild-harvested as human ...

Techniki te przedstawiają praktyczne i sprawdzone metody hodowli Gryllus bimaculatus, kluczowego gatunku mini zwierząt gospodarskich hodowanego na paszę dla zwierząt i żywność dla ludzi oraz coraz ważniejszy alternatywny organizm modelowy. Te laboratoryjne metody hodowli Gryllus bimaculatus wywodzą się z technik powszechnych w całym przemyśle hodowli świerszczy w Ameryce Północnej i reprezentują laboratoryjną kopię operacji hodowli świerszczy. Na początek wytaruj czysty pojemnik na wadze i zważ masę suchego włókna kokosowego mniej więcej wielkości ludzkiej pięści.Następnie umieść włókno kokosowe w zamykanym, czystym pojemniku, który może pomieścić rozszerzanie się do sześciokrotności pierwotnej objętości. Czystymi rękami delikatnie rozbij grudki włókna kokosowego z kawałka wyjętego z większego bloku. Następnie, używając 250-mililitrowego cylindra z podziałką, zmierz odpowiednią objętość wody dejonizowanej, aby uzyskać stosunek pięciu do jednego masowo pięciu części wody na jedną część suchego włókna kokosowego i powoli dodawaj odmierzoną wodę dejonizowaną, równomiernie nawadniając wszystkie cząstki włókna kokosowego.Następnie ręcznie zmaceruj grudki, aby zapewnić równomierne nawodnienie, i ponownie staruj pojemnik, w którym wcześniej ważono włókno kokosowe. Odważ 75 gramów zwilżonego włókna kokosowego i przenieś je na szalkę Petriego o wymiarach 100 na 15 milimetrów za pomocą czystej, plastikowej łyżki, aby upewnić się, że włókno kokosowe jest równomiernie rozprowadzone na dnie naczynia i że nie ma grudek. Następnie oznacz bok szalki Petriego taśmą laboratoryjną z etykietą oznaczającą kolonię urodzeniową i datę pobrania jaj.Odmierz dodatkowe 45 mililitrów wody dejonizowanej do cylindra z podziałką i równomiernie dodaj wodę na powierzchni upakowanego włókna kokosowego na szalce Petriego, aby zapewnić równomierne nawodnienie. Po zapakowaniu szalki Petriego zamknij pozostałe zwilżone włókno kokosowe w hermetycznym naczyniu do przechowywania w temperaturze minus 20 stopni Celsjusza. Uwodniony substrat do składania jaj należy umieścić w klatkach zawierających pożądane stada rodzicielskie świerszczy jak najdalej od paszy i udokumentować datę i godzinę.Następnie umieść mały, autoklawowalny pojemnik na śmieci na powierzchni roboczej. Następnie umieść czystą, pustą plastikową klatkę o pojemności 29,3 litra na ławce obok pojemnika na śmieci. Umieść kolejną klatkę o pojemności 29,3 litra zawierającą rodzicielskie zapasy świerszczy i podłoże do składania jaj po przeciwnej stronie pojemnika na śmieci niż pusta klatka.Po 24 godzinach usuń podłoże do składania jaj z macierzystej klatki do krykieta i umieść je nad autoklawowalnym naczyniem na odpady. Sprawdź, czy górna część podłoża do składania jaj nie ma żadnych cząstek wiórów lub paszy, które świerszcze mogły kopnąć na powierzchnię włókna kokosowego. Następnie usuń zanieczyszczenia z włókna kokosowego do naczynia na odpady za pomocą czystej łyżki Scoopula lub plastikowej łyżki i umieść plastikową łyżkę w pojemniku na odpady.Następnie oczyszczone podłoże do składania jaj umieść w czystej klatce o pojemności 29,3 litra. Następnie umieść klatkę w inkubatorze ustawionym na 27 stopni Celsjusza przy 60% wilgotności względnej na 12-godzinnym ciemnym, 12-godzinnym fotoperiodze światła. Umieść klatkę zawierającą stado hodowlane w pierwotnym miejscu i usuń wszystkie przedmioty z powierzchni roboczej.Następnie umieść pojemnik na odpady w zamrażarce przeznaczonej do przechowywania przedmiotów potencjalnie skażonych jajami świerszczy. Następnie zdezynfekuj powierzchnię roboczą 10% roztworem wybielacza i pozostaw na 60 sekund. Wytrzyj powierzchnię roboczą do sucha czystym ręcznikiem papierowym.Po otwarciu zamrażarki wyrzuć ręcznik papierowy do pojemnika na odpady. Wybierz dwie nieużywane komercyjne płaskie kartony na jajka o wymiarach 30,8 cm na 30,8 cm. Za pomocą noża uniwersalnego lub mocnych nożyc pokrój je na sześć oddzielnych pasków o szerokości 10,1 cm i jednakowej wielkości.Następnie zetrzyj przycięte krawędzie rękami, aby usunąć zwisające cząstki tektury. Następnie umieść sześć pojedynczych kawałków kartonu o wymiarach 10,1 cm na 30,8 cm pionowo na dnie klatki, tak aby dłuższa oś kartonu obejmowała węższą oś poziomą klatki o pojemności 29,3 litra. Umieść siódmy kawałek kartonu płasko na górze sześciu pionowych kawałków.Po wybraniu trzech kawałków szorstkiego, brązowego ręcznika papierowego o wymiarach około 25 centymetrów na 25 centymetrów, złóż każdy na pół. Następnie umieść dwa tak, aby zakrywały górną część bliższej strony struktury kartonu, a jeden umieść nad stosem kartonów po dystalnej stronie. W 11 dniu po złożeniu jaj przenieś podłoże do składania jaj do bliższego prawego rogu klatki.Po zaobserwowaniu włazu spryskaj ręczniki papierowe umieszczone na wierzchu kartonów, aż zostaną zwilżone, ale nie będą aktywnie wylewać wody. Następnie dokładnie przetrzyj obie strony 100-milimetrowej pokrywki Petriego 70% etanolem i pozostaw do wyschnięcia. Następnie zgarnij 50 gramów paszy do 60-watowego blendera na jedną porcję i miel z prędkością 10 000 obr./min przez jedną minutę.Po odmierzeniu jednego grama karmy, wstrząśnij nią na pokrywie szalki Petriego w klatce. Używając czystej końcówki łyżki lub Scoopula, rozprowadź karmę tak równomiernie, jak to możliwe na dnie naczynia. Następnie wymieniaj paszę co dwa dni.Wyrzuć starą paszę do pojemnika na odpady, który można sterylizować w autoklawie. Monitoruj rozwój pleśni na paszy. A jeśli pasza zacznie wydawać się biała lub zielonkawa, wyrzuć szalkę Petriego i natychmiast nakarm.Po 14 dniach od złożenia jaj użyj pędzla o średnicy 2,54 cm, aby usunąć świerszcze przylegające do podłoża z włókna kokosowego, szczotkując wszystkie świerszcze z powierzchni włókna kokosowego i boków szalki Petriego do klatki. Następnie umieść usunięty substrat do składania jaj w pojemniku na odpady, który można sterylizować w autoklawie i przechowywać w zamrażarce do czasu autoklawowania. Następnie zastąp podłoże natalne świeżym naczyniem z włókna kokosowego w celu nawodnienia.Używając butelki do mycia wodą dejonizowaną, dolewaj wody, aż powierzchnia włókna kokosowego będzie błyszczeć, ale nie będzie się gromadzić. Świerszcze pochodziły z populacji o średniej masie 21 miligramów. Pod koniec eksperymentu średnia masa wszystkich łącznych młodych i dorosłych świerszczy wynosiła 0,724 grama.W wieku 65 dni, kiedy eksperyment się zakończył, obecnych było 30 dorosłych samców, a średnia masa wynosiła 0,721 grama, podczas gdy dla 58 dorosłych samic średnia masa wynosiła 0,841 grama. Przeżywalność między zarybianiem a zbiorem wynosiła 89% i była mierzona co tydzień za pomocą całkowitej liczby wszystkich pojedynczych świerszczy we wszystkich klatkach. W 65 dniu około 68% wszystkich świerszczy dotarło do dorosłego stadium rozwojowego.Unikaj tworzenia się kropel wody na dnie obudowy podczas podlewania lub zamgławiania. Umieszczenie ręcznika papierowego nad refugią pozwala na uzyskanie gradientu wilgotności i pochłania kropelki wody z zaparowania. Procedura ta służy jako szablon dla naukowców z wielu dziedzin nauk przyrodniczych do wyhodowania Gryllus bimaculatus jako organizmu modelowego.Do tej pory opublikowano niewiele formalnych protokołów hodowli Gryllus bimaculatus lub jakiegokolwiek innego paurometabolicznego organizmu modelowego. Kodyfikacja i standaryzacja metod chowu owadów stosowanych w hodowli owadów pozwoli na lepsze porównanie wyników między grupami badawczymi.

maintaining-laboratory-cultures-gryllus-bimaculatus-versatile

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Opisano doustną i wewnątrzhemokoliczną infekcję larw mchowca dużego Galleria mellonella. Owad ten może być wykorzystywany do badania czynników wirulencji bakterii entomopatogennych, a także oportunistycznych bakterii ssaków. Opisano hodowlę owadów, metody infekcji oraz przykłady analiz in vivo.

Owad Galleria mellonella jako potężny model infekcji do badania patogenezy bakteryjnej

Ten film demonstruje metodę tworzenia modelu infekcji Mycobacterium bovis u larw woskowej większej, Galleria mellonella. Bioluminescencyjny szczep Mycobacterium bovis BCG jest wstrzykiwany do hemolimfy larwy w celu wywołania infekcji, a bioluminescencja jest mierzona w określonych odstępach czasu w celu zbadania postępu infekcji.

Technika tworzenia modelu infekcji bakteryjnej u larw owadów

Przedstawiono procedurę hodowli much stajennych (Stomoxys calcitrans). W zabiegu wykorzystuje się lokalnie dostępne materiały do produkcji składników diety, sprzętu i materiałów.

Hodowla laboratoryjna much stajennych i innych muchówek muskoidalnych

Ogólnym celem tych procedur jest ustanowienie, utrzymanie i odświeżenie populacji Eristalis tenax w warunkach badawczych.

Hodowla i długotrwała hodowla bzygów Eristalis tenax do badań naukowych

Mszyca Aphis nerii kolonizuje dobrze chronione rośliny z rodziny psowatych (Apocyanaceae) i dostarcza licznych możliwości badania interakcji między roślinami a owadami. W tym miejscu przedstawiamy szereg protokołów dotyczących utrzymania kultur roślin i mszyc oraz generowania i analizy danych molekularnych i -omicznych dla A. nerii.

Utrzymywanie kultur biologicznych i pomiar ekspresji genów u Aphis nerii: niemodelowy system interakcji między roślinami a owadami

Tutaj przedstawiamy szczegółowy protokół dla modelu doustnego podawania z użyciem larw Galleria mellonella i jak scharakteryzować indukowane wrodzone reakcje immunologiczne. Korzystając z tego protokołu, naukowcy bez praktycznego doświadczenia będą mogli stosować metodę wymuszonego karmienia G. mellonella.

Model doustnego podawania Galleria mellonella do badania wrodzonych odpowiedzi immunologicznych wywołanych komensalem

Tutaj prezentujemy protokół wstrzykiwania jaj świerszczy, technikę, która służy jako podstawowa metoda w wielu eksperymentach na świerszczu, w tym, ale nie tylko, interferencji RNA i manipulacji genomem.

Wstrzykiwanie jaj Gryllus bimaculatus

Ten protokół jest używany do tworzenia i utrzymywania gnotobiotycznych karaluchów amerykańskich (Periplaneta americana) poprzez powierzchniową sterylizację jaj (oothecae) przed wykluciem. Te gnomiotyczne owady zawierają pionowo przenoszone endosymbionty Blattabacterium, ale mają akseniczne jelita.

Założenie i utrzymanie gnotobiotycznych karaluchów amerykańskich (Periplaneta americana)

Aby uzyskać aksenicznego owada, jego powierzchnia jaja jest sterylizowana, a wykluta larwa jest następnie hodowana za pomocą aksonicznych liści. Metoda ta zapewnia skuteczny sposób przygotowania owadów aksenowych bez podawania antybiotyków lub opracowywania sztucznej diety, którą można również zastosować do innych owadów żywiących się liśćmi.

Przygotowanie i hodowla owadów aksonowych z siewkami z hodowli tkankowej do badań interakcji mikrobioty gospodarz-jelito chrząszcza liściowego

Ten artykuł przedstawia laboratoryjne utrzymanie (w tym krycie i karmienie) muchówki niższej Bradysia (Sciara) coprophila.

Utrzymanie laboratoryjne muchówki dolnej Bradysia (Sciara) coprophila: nowy/stary wyłaniający się organizm modelowy

Poznaj metody hodowli Gryllus bimaculatus w warunkach laboratoryjnych dla badań nad alternatywnymi źródłami białka i fizjologią owadów. Standardowe techniki zapewniają powtarzalność wyników w nauce.

Utrzymanie laboratoryjnych kultur Gryllus bimaculatus, wszechstronnego modelu prostoskrzydłego do hodowli owadów i fizjologii bezkręgowców (Wideo) | JoVE Journal

Utrzymanie laboratoryjnych kultur Gryllus bimaculatus, wszechstronnego modelu prostoskrzydłego do hodowli owadów i fizjologii bezkręgowców

Przeglądaj więcej filmów