Name: Bezznacznikowe podejście do segmentacji w obrazowaniu przyżyciowym mikrośrodowiska guza sutka (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 39 s
Description: Poznaj bezznacznikową metodę obrazowania przyżyciowego mikrośrodowiska guza sutka wykorzystującą drugą harmoniczną generacji kolagenu i autofluorescencję NAD(P)H. Technika ta umożliwia segmentację guza, sromu i naczyń krwionośnych przy minimalnej ingerencji.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy pragną podziękować NCI R01 CA216248, CA206458 i CA179556 granty za sfinansowanie tej pracy. Chcielibyśmy również podziękować dr Kevinowi Eliceiri i jego grupie obrazowania za ich wiedzę techniczną we wczesnym rozwoju naszego programu intravital. Dziękujemy również dr Benowi Coxowi i innym członkom Grupy Produkcyjnej Eliceiri w Instytucie Badawczym Morgridge za ich niezbędny projekt techniczny we wczesnych fazach MIW. Dr Ellen Dobson pomogła w przydatnych rozmowach na temat narzędzia do segmentacji WEKA, które można trenować w ImageJ. Ponadto chcielibyśmy podziękować dr Melissie Skala i dr Alexie Barres-Heaton za terminowe użycie ich mikroskopu. Na koniec chcielibyśmy podziękować dr Brigitte Raabe, D.V.M., za wszystkie przemyślane dyskusje i porady dotyczące obchodzenia się z myszami i pielęgnacji.

Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.

Obrazowanie intravitalne 4D jest potężnym narzędziem do badania dynamicznych oddziaływań fizjologicznych w kontekście przestrzennym i czasowym natywnego mikrośrodowiska guza. Niniejszy artykuł przedstawia bardzo podstawowe i adaptowalne ramy operacyjne do wydzielania dynamicznych oddziaływań komórkowych w obrębie masy guza, sąsiedniego zrębu lub w pobliżu sieci naczyniowej, wykorzystując wyłącznie sygnały endogenne z generowania drugiej harmonicznej lub autofluorescencji NAD(P)H. Protokół ten dostarcza kompleksowej, krok...

Wiadomo, że macierz zewnątrzkomórkowa (ECM) w mikrośrodowisku guza jest dynamicznie odkładana i przebudowywana przez wiele typów komórek, aby jeszcze bardziej ułatwić postęp choroby1,2,3. Te zmiany w matrycy dostarczają zarówno mechanicznych, jak i biologicznych wskazówek, które zmieniają zachowanie komórki i często skutkują ciągłym cyklem przebudowy matrycy4. Badania nad dynamiczną, wzajemną interakcją między komórkami nowotworowymi a macierzą zewnątrzkomórkową są często prowadzone przy użyciu trójwymiarowych (3D) hodowli in vitro lub systemów mikroprzepływowych. Podczas gdy te oddolne podejścia wykazały mechanizmy przebudowy ECM5,6,7, zwiększona proliferacja8, przejście nabłonkowe do mezenchymalnego9,10,11,12, oraz migracja i inwazja komórek nowotworowych7, 13,14,15,16, skupili się przede wszystkim na kilku typach komórek (np. komórkach nowotworowych lub fibroblastach) w jednorodnej matrycy 3D w porównaniu z różnorodnością i niejednorodnością interakcji obecnych w tkance fizjologicznej. Oprócz systemów in vitro, histologia guza ex vivo może również dostarczyć pewnych informacji na temat tych interakcji komórka-komórka i komórka-ECM17. Immunohistochemia ma tę zaletę, że jest w stanie analizować wiele typów komórek w odniesieniu do przestrzennie heterogenicznego składu i architektury ECM, ale statyczne punkty końcowe utrwalonej tkanki nie oddają dynamicznej natury interakcji między komórkami a mikrośrodowiskiem. Obrazowanie przyżyciowe otworzyło drzwi do badania różnorodnych i dynamicznych interakcji w kontekście fizjologicznym natywnego mikrośrodowiska guza.
Możliwości obrazowania guzów w miejscu przyżyciowym szybko się rozwijają. Ulepszenia w projektowaniu okien obrazowania i technikach chirurgicznych do implantacji okien umożliwiły długoterminowe obrazowanie guza podłużnego w różnych lokalizacjach anatomicznych (tj. guz pierwotny, węzły chłonne, miejsca przerzutów18,19,20). Co więcej, zdolność oprzyrządowania optycznego do wizualizacji i gromadzenia danych w wielu wymiarach (tj. spektralnych, przestrzennych intensywności fluorescencji i czasie życia) oraz przy wysokiej rozdzielczości i szybkości (szybkość wideo) staje się coraz bardziej dostępna. Ulepszona technologia daje możliwość zbadania szybkich zmian w sygnalizacji komórkowej i dynamice fenotypowej w środowisku fizjologicznym. Wreszcie, ekspansja narzędzi optogenetycznych i szeroki wachlarz genetycznych konstruktów fluorescencyjnych pozwalają na znakowanie określonych typów komórek w celu uchwycenia migracji komórek w mikrośrodowisku guza lub śledzenia linii komórkowej podczas rozwoju lub progresji choroby21,22. Wykorzystanie tych narzędzi w połączeniu z technologią CRISPR/Cas9 daje naukowcom możliwość generowania unikalnych modeli zwierzęcych w odpowiednim czasie.
Chociaż wszystkie te postępy sprawiają, że obrazowanie przyżyciowe staje się coraz bardziej potężną metodą badania dynamicznych i fizjologicznych interakcji komórkowych, nadal istnieje ważna potrzeba opracowania strategii, które zapewnią przestrzenny, czasowy i strukturalny kontekst na poziomie tkankowym dla tych biologicznych interakcji. Obecnie wiele badań obrazowania przyżyciowego kompensuje brak wizualnych punktów orientacyjnych, takich jak naczynia krwionośne, poprzez wstrzykiwanie barwników fluorescencyjnych do naczyń krwionośnych lub wykorzystanie modeli mysich, które egzogennie eksprymują białka fluorescencyjne w celu określenia cech fizycznych. Barwniki i podłoża do wstrzykiwań, takie jak fluorescencyjny dextrans, są szeroko stosowane do skutecznego oznaczania naczyń krwionośnych w kolekcjach intravital 19, 23, 24. Takie podejście nie jest jednak pozbawione ograniczeń. Po pierwsze, wymaga dodatkowych manipulacji myszą, a jego użyteczność ogranicza się do krótkoterminowych eksperymentów. W przypadku badań podłużnych dekstran fluorescencyjny może być problematyczny, ponieważ obserwujemy akumulację dekstranu w komórkach fagocytarnych lub dyfuzję do otaczającej tkanki w czasie25. Włączenie egzogennych białek fluorescencyjnych do modelu mysiego zostało przedstawione jako alternatywa dla fluorescencyjnego dekstransu, ale ma swoje własne ograniczenia. Dostępność i różnorodność egzogennych fluoroforów w modelach mysich jest nadal ograniczona i kosztowna w tworzeniu. Ponadto w niektórych modelach, takich jak modele PDX, manipulacje genetyczne nie są pożądane ani możliwe. Wykazano również, że obecność białek fluorescencyjnych lub bioluminescencyjnych w komórkach jest rozpoznawana jako obca u myszy, a w immunokompetentnych modelach mysich zmniejsza to ilość przerzutów spowodowanych odpowiedzią układu odpornościowego gospodarza26,27. Wreszcie, egzogenne białka fluorescencyjne lub barwniki fluorescencyjne używane do kontekstu przestrzennego lub do segmentacji kolejnych danych często zajmują podstawowe zakresy widma światła, które w przeciwnym razie mogłyby być wykorzystane do badania interesujących interakcji fizjologicznych.
Wykorzystanie wewnętrznego sygnału z ECM lub endogennej fluorescencji z komórek w tkance stanowi potencjalny uniwersalny sposób segmentacji danych przyżyciowych dla bardziej dogłębnej analizy komórkowej i przestrzennej. Generacja drugiej harmonicznej (SHG) jest od dawna używana do wizualizacji klasy ECM<sup="xref">28. Wraz z późniejszym rozwojem ważnych narzędzi pomocnych w charakterystyce organizacji włókien29,30,31, możliwe jest scharakteryzowanie zachowania komórki w odniesieniu do lokalnej struktury ECM. Ponadto autofluorescencja endogennego metabolitu, NAD(P)H, stanowi kolejne bezznacznikowe narzędzie do podziału mikrośrodowiska guza in vivo. NAD(P)H fluoryzuje jasno w komórkach nowotworowych i może być używany do rozróżniania granic rosnącego gniazda guza od otaczającego go zrębu 21,32. Wreszcie, układ naczyniowy jest ważną strukturą fizjologiczną w mikrośrodowisku guza i miejscem kluczowych interakcji specyficznych dla typu komórki33,34,35. Wykazano, że wzbudzenie czerwonych krwinek (RBC) lub osocza krwi zostało wykorzystane do wizualizacji unaczynienia guza, a przy użyciu wzbudzenia dwu- lub trzyfotonowego (2P; 3P) wykazano, że możliwy jest pomiar szybkości przepływu krwi36. Jednak podczas gdy większe naczynia krwionośne można łatwo zidentyfikować na podstawie ich endogennych sygnatur fluorescencyjnych, identyfikacja subtelnych, zmiennych i mniej fluorescencyjnych małych naczyń krwionośnych wymaga większej wiedzy specjalistycznej. Te nieodłączne trudności utrudniają optymalną segmentację obrazu. Na szczęście te źródła endogennej fluorescencji (tj. czerwone krwinki i osocze krwi) mogą być również mierzone za pomocą obrazowania czasu życia fluorescencji37, co wykorzystuje unikalne właściwości fotofizyczne układu naczyniowego i stanowi użyteczny dodatek do rosnącego zestawu narzędzi przyżyciowych.
W tym protokole, proces segmentacji czterowymiarowego (4D) obrazowania przyżyciowego wyraźnie wykorzystującego sygnały wewnętrzne, takie jak endogeniczna fluorescencja i SHG, jest opisany od akwizycji do analizy. Protokół ten jest szczególnie istotny w przypadku badań podłużnych za pomocą okna obrazowania sutka, w których egzogenna fluorescencja może nie być praktyczna lub możliwa, jak ma to miejsce w przypadku modeli PDX. Przedstawione tutaj zasady segmentacji mają jednak szerokie zastosowanie dla użytkowników przyżyciowych badających biologię guza, rozwój tkanek, a nawet normalną fizjologię tkanek. Zgłoszony zestaw podejść analitycznych pozwoli użytkownikom różnicować zachowanie komórek między regionami wyrównanych lub losowych konfiguracji włókien kolagenowych, porównywać liczby lub zachowania komórek znajdujących się w określonych regionach mikrośrodowiska guza i mapować układ naczyniowy do mikrośrodowiska guza przy użyciu tylko sygnału bezznacznikowego lub wewnętrznego. Razem metody te tworzą ramy operacyjne dla maksymalizacji głębokości informacji uzyskanych z obrazowania przyżyciowego gruczołu sutkowego 4D, jednocześnie minimalizując potrzebę dodatkowych znaczników egzogennych.

<table><tbody><tr><td>#1.5 Okrągła szklana osłona 12 mm</td><td>Warner Instruments</td><td># 64-0712</td><td>Konstrukcja MIW</td></tr><tr><td>Strzykawka 1,0 ml do iniekcji SQ</td><td>Strzykawka</td><td>BD</td><td>309659</td></tr><tr><td>Obiektyw 20x</td><td>Zeiss</td><td>421452-988</td><td>Zanurzenie w wodzie</td></tr><tr><td>Igła 27G do wstrzykiwań SQ</td><td>Igła do 1188827012 Covidien</td><td></td><td></td></tr><tr><td>40x</td><td>obiektyw Nikon</td><td>MRD77410</td><td>Zanurzenie w wodzie</td></tr><tr><td>5-0 jedwabny szew pleciony</td><td>Ethicon</td><td>K870</td><td>Szew do implantacji MIW</td></tr><tr><td>Żel do sztucznych łez</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-162-35</td><td>Żel do oczu</td></tr><tr><td>Roztwór betadyny, 5%</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1558063</td><td>Surgery antyseptyczny</td></tr><tr><td>aplikator z bawełnianą końcówką</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-101</td><td></td></tr><tr><td>Klej cyjanoakrylowy</td><td>Loctite</td><td>1365882</td><td>MIW konstrukcja</td></tr><tr><td>fluorescencyjny dekstran</td><td>Sigma</td><td>T1287-50mg</td><td>dożylne znakowanie</td></tr><tr><td>kleszczyków</td> naczyniowych <td>Mckesson.com</td><td>Miltex&nbsp;#18-782</td><td>nierdzewna, 4-calowa, zakrzywiona</td></tr><tr><td>rurka fotopowielacza GaAsP</td><td>Hamamatsu&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>koc grzewczy</td><td>CARA 72 poduszka grzewcza</td><td>&nbsp; 038056000729</td><td>Komora</td></tr><tr><td>grzewcza</td> do wyboru temperatury <td>zbudowany</td><td></td><td></td>w domu</tr><tr><td>Podręcznik żywotności fluorescencji</td><td>Becker i Hickl</td><td></td><td>https://www.becker-hickl.com/literature/handbooks</td></tr><tr><td>odwrócona podstawa mikroskopu</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-106-01</td><td>Anestezjologia</td></tr><tr><td>Liqui-Nox</td><td>Fisher Scientific</td><td>16-000-125</td><td>MIW czyszczenie</td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>Norbrook</td><td>NDC 55529-040-10</td> Mikrowąż <td>przeciwbólowy</td></tr><tr><td></td><td>Scientific Commodities INC.</td><td>&nbsp; Wielofotonowa głowica skanująca BB31695-PE/1</td><td></td></tr><tr><td>Wieloteleskopowa</td><td>głowica skanująca Bruker Ultima II</td><td></td><td>i platforma obrazowania</td></tr><tr><td>Filtr NADH FLIM</td><td>Chroma</td><td>284994</td><td>ET 440/80 m-2P</td></tr><tr>Krem do depilacji<td>Nair</td><td>CVS</td><td>339826</td><td>Krem do depilacji</td></tr><tr><td>Podgrzewacz obiektywu</td><td>Tokai Hit</td><td>STRG-WELSX-SET</td><td></td></tr><tr><td>Filtr SHG/FAD</td><td>Chroma</td><td>320740</td><td>ET450/ 40m-2P</td></tr><tr><td>Sparkle płyn do mycia szkła</td><td>Amazon.com</td><td>B00814ME24</td><td>Płyn do mycia szkła do wszczepionej</td></tr><tr><td>płytki do liczenia fotonów MIW SPC-150</td> Lampa chirurgiczna <td>Becker i Hickl</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>FAJ</td><td>B06XV1VQVZ</td> Magnetyczne mikronożyczki chirurgiczne <td>LED na gęsiej szyi</td></tr><tr><td></td><td>Excelta</td><td>366</td><td>nierdzewna, 3-calowa</td></tr><tr><td>potrójna maść antybiotykowa</td><td>Actavis Pharma</td><td>NDC 0472-0179-34</td><td></td></tr><tr><td>Antybiotykowy cewnik telewizyjny</td><td>Niestandardowa</td><td>igła BD 30G: 305106</td><td>Cewnik do wstrzykiwań TV</td></tr><tr><td>Filtr dwufotonowy</td><td>Chroma</td><td>320282</td><td>ET585/65m-2P</td></tr><tr><td>laser dwufotonowy</td><td>Koherentny charmeleon</td><td></td><td>Przestrajalny wielofotonowy laserowy</td></tr><tr><td>żel ultradźwiękowy</td><td>Parker</td><td>PKR-03-02</td><td>Żel zanurzeniowy w wodzie</td></tr><tr><td>Mocznik kryształy</td><td>Sigma</td><td>U5128-5G</td><td>Opcjonalnie: FLIM IRF</td></tr></tbody></table>

bezznacznikowe podejście do segmentacji w obrazowaniu przyżyciowym mikrośrodowiska guza sutka

A Label-Free Segmentation Approach for Intravital Imaging of Mammary Tumor Microenvironment

Możliwość wizualizacji złożonych i dynamicznych interakcji fizjologicznych między wieloma typami komórek a macierzą zewnątrzkomórkową (ECM) w żywym mikrośrodowisku guza jest ważnym krokiem w kierunku zrozumienia mechanizmów regulujących progresję guza. Chociaż można to osiągnąć za pomocą obecnych technik obrazowania przyżyciowego, pozostaje to wyzwaniem ze względu na niejednorodny charakter tkanek i potrzebę kontekstu przestrzennego w obserwacji eksperymentalnej. W tym celu opracowaliśmy przepływ obrazowania przyżyciowego, który łączy obrazowanie drugiej harmonicznej kolagenu, endogenną fluorescencję z metabolicznego kofaktora NAD(P)H i mikroskopię obrazowania fluorescencji przez całe życie (FLIM) jako sposób na nieinwazyjny podział mikrośrodowiska guza na podstawowe domeny gniazda guza, otaczającego zrębu lub ECM i układu naczyniowego. Ten nieinwazyjny protokół szczegółowo opisuje proces krok po kroku, począwszy od pozyskiwania zdjęć poklatkowych modeli guza sutka po analizę post-processingu i segmentację obrazu. Główną zaletą tego przepływu pracy jest to, że wykorzystuje on sygnatury metaboliczne do kontekstualizacji dynamicznie zmieniającego się żywego mikrośrodowiska guza bez użycia egzogennych znaczników fluorescencyjnych, co czyni go korzystnym dla modeli ksenoprzeszczepów pochodzących od ludzkiego pacjenta (PDX) i przyszłych zastosowań klinicznych, w których fluorofory zewnętrzne nie są łatwo stosowane.

Instalacja okna obrazowego wewnątrz organizmu (MIW) oraz podstawowe planowanie eksperymentu stanowią pierwsze etapy tego procesu. Ta konkretna konstrukcja i protokół MIW są bardziej odpowiednie do badań podłużnych19 i zostały z powodzeniem zastosowane zarówno w mikroskopach prostych, jak i odwróconych. W tym przypadku wykorzystano mikroskop odwrócony, ponieważ zapewnił on większą stabilność obrazu gruczołu piersiowego przy mniejszej liczbie artefaktów oddechowych. Na Rysunku 1...

Opisana tutaj metoda obrazowania intravital wykorzystuje generowanie drugiej harmonii kolagenu i endogenną fluorescencję z metabolicznego kofaktora NAD(P)H do nieinwazyjnej segmentacji nieoznaczonego mikrośrodowiska guza na przedziały guza, zrębu i naczyń krwionośnych w celu dogłębnej analizy obrazów 4D intravital.

Bezznacznikowe podejście do segmentacji w obrazowaniu przyżyciowym mikrośrodowiska guza sutka

The ability to visualize complex and dynamic physiological interactions between numerous cell types and the extracellular matrix (ECM) within a live tumor ...

a-label-free-segmentation-approach-for-intravital-imaging-mammary

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Badania nad rakiem

Opisujemy metodę obrazowania odpowiedzi na leczenie przeciwnowotworowe in vivo i w rozdzielczości pojedynczej komórki.

Obrazowanie na żywo odpowiedzi na leki w mikrośrodowisku guza w mysich modelach raka piersi

Używając transgenicznych myszy reporterowych i wstrzykiwanych znaczników fluorescencyjnych, długoterminowa mikroskopia konfokalna z wirującym dyskiem umożliwia bezpośrednią wizualizację zachowania komórek szpikowych w gruczolaku jelitowym w modelu raka jelita grubego ApcMin/+.

Obrazowanie w czasie rzeczywistym dynamiki komórek szpikowych w guzach jelita ApcMin/+ za pomocą mikroskopii konfokalnej z wirującym dyskiem

Ten protokół opisuje użycie mikroskopii wielofotonowej do wykonywania rozszerzonego obrazowania poklatkowego interakcji wielokomórkowych w czasie rzeczywistym, in vivo w rozdzielczości pojedynczej komórki.

Rozszerzone poklatkowe obrazowanie przyżyciowe dynamiki wielokomórkowej w czasie rzeczywistym w mikrośrodowisku guza

Ten protokół opisuje obrazowanie intrażyciowe transgenicznych myszy wykazujących ekspresję specyficznych dla komórek markerów fluorescencyjnych. Obrazowanie przyżyciowe zapewnia nieinwazyjną metodę obserwacji w wysokiej rozdzielczości u żywych zwierząt za pomocą wszczepialnych okien, przez które możliwa jest mikroskopowa wizualizacja procesów. Ta metoda jest szczególnie przydatna do badania procesów podłużnych.

Mikroskopia przyżyciowa naczyń krwionośnych związanych z nowotworem przy użyciu zaawansowanych komór okiennych grzbietowych fałdów skórnych na transgenicznych myszach fluorescencyjnych

Opisujemy dwie metody oceny przejściowej przepuszczalności naczyń krwionośnych związanych z funkcją wejścia do mikrośrodowiska guza (TMEM) i wewnątrznaczynieniem komórek rakowych za pomocą dożylnego wstrzyknięcia dekstranu o wysokiej masie cząsteczkowej (155 kDa) u myszy. Metody te obejmują obrazowanie przyżyciowe u żywych zwierząt oraz analizę tkanek utrwalonych za pomocą immunofluorescencji.

Ocena mikrośrodowiska guza przepuszczalności naczyniowej za pośrednictwem drzwi z przerzutami związanych z rozsiewaniem komórek rakowych za pomocą obrazowania przyżyciowego i analizy tkanek stałych

Tutaj prezentujemy protokół przygotowania i hodowli mikrośrodowiska przerzutowego guza bariery krew-mózg, a następnie ilościowego określenia jego stanu za pomocą obrazowania konfokalnego i sztucznej inteligencji (uczenia maszynowego).

Kwantyfikacja mikrośrodowiska guza z przerzutami do mózgu za pomocą modelu 3D Organ-On-A Chip, uczenia maszynowego i tomografii konfokalnej

Ten protokół opisuje nowatorskie okno obrazowania sutka z wymienną pokrywą (R.MIW). Mikroskopia przyżyciowa po wszczepieniu R.MIW pozwala na podłużne i wielodniowe obrazowanie zdrowego i chorego gruczołu sutkowego z rozdzielczością komórkową na różnych etapach rozwoju.

Podłużna mikroskopia przyżyciowa z wykorzystaniem okienka do obrazowania sutkowego z wymienną pokrywą

Niniejszy protokół opisuje łatwą technikę obrazowania gruczołu sutkowego myszy w okresie laktacji za pomocą skaningu laserowego, mikroskopii konfokalnej i wielofotonowej.

Mikroskopia subkomórkowa przyżyciowych gruczołu sutkowego

Manuskrypt opisuje metodologię ustalania oraz monitorowania wzrostu podłużnego spontanicznych przerzutów do płuc z ortotopowo wstrzykiwanych guzów piersi, które mogą być interwencyjne na wszystkich etapach kaskady przerzutowej.

In vivo (in vivo) Obrazowanie w celu pomiaru spontanicznych przerzutów do płuc komórek guza piersi wstrzykniętych ortotopowo

Dostosowaliśmy przepuszczalną mikroporowatą wkładkę membranową do naśladowania mikrośrodowiska guza (TME). Model składa się z mieszanej hodowli komórek, pozwala na uproszczone generowanie wysoce wzbogaconych pojedynczych populacji komórek bez użycia znakowania fluorescencyjnego lub sortowania komórek oraz pozwala na badanie komunikacji międzykomórkowej w obrębie TME w warunkach normalnych lub stresowych.

Naśladownictwo mikrośrodowiska guza: prosta metoda generowania wzbogaconych populacji komórek i badania komunikacji międzykomórkowej

Poznaj bezznacznikową metodę obrazowania przyżyciowego mikrośrodowiska guza sutka wykorzystującą drugą harmoniczną generacji kolagenu i autofluorescencję NAD(P)H. Technika ta umożliwia segmentację guza, sromu i naczyń krwionośnych przy minimalnej ingerencji.

Bezznacznikowe podejście do segmentacji w obrazowaniu przyżyciowym mikrośrodowiska guza sutka

Przeglądaj więcej filmów