Name: Metoda podwójnego barwienia do wykrywania pektyn w interakcji roślina-grzyb (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: Poznaj metodę podwójnego barwienia do wykrywania pektyn w interakcjach roślina-grzyb przy użyciu mikroskopii świetlnej. Technika ta umożliwia identyfikację struktur grzybów i defektów polimerów ściany komórkowej patogenów bez konieczności stosowania drogiego sprzętu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy pragną podziękować Dr. Hudsonowi W. P. de Carvalho za wsparcie w rozwijaniu tej pracy. Autorzy są również wdzięczni Laboratorium Mikroskopii Elektronowej "Prof. Elliot Watanabe Kitajima" za udostępnienie urządzenia do mikroskopii świetlnej. Autorzy dziękują dr Flávii Rodrigues Alves Patrício za dostarczenie materiału roślinnego ze zmianami chorobowymi.

1. Przygotowanie roztworu buforowego i odczynników
<ol>
	<li>Przygotować 2 M bufor kakodylowy, dodając 4,28 g kakodylanu sodu do 100 ml wody destylowanej i dostosować pH do 7,25 za pomocą 0,2 N HCl.</li>
	<li>Przygotować 100 ml roztworu utrwalającego Karnovsky'ego, mieszając 10 ml 25% wodnego aldehydu glutarowego, 10 ml 10% wodnego roztworu formaldehydu, 25 ml 2 M buforu kakodylowego i 0,5 ml 0,5 M CaCl226. Uzupełnić objętość do 100 ml wodą destylowaną. 
	UWAGA: Roztwór można przechowywać w lodówce przez 6 miesięcy. 
	UWAGA: Roztwór buforujący kakodylan jest toksyczny; Dlatego roztwór utrwalający należy obchodzić się z wyciągiem lub na otwartej przestrzeni. Unikać wdychania oparów roztworu i nosić rękawice podczas obchodzenia się z roztworem.</li>
	<li>Przygotować wodny roztwór odżywczy Hoaglanda, mieszając następujące elementy: 3 mM Ca(NO3)2.4H 2O, 2 mM NH4H2PO4, 5 mM KH2PO4, 2 mM MgSO4.7H 2O, 9.07 mM MnSO4, 0.765 mM ZnSO4.7H 2O, 46.4 mM H3BO3, 0,09 mM na2MoO4. H2O, 0,01 mMCuSO4 i 36 mM FeSO 4,7H2 O jako żelazo-EDTA (kwas etylenodiaminotetraoctowy)<klasa sup="xref">27.</li>
</ol>
2. Próbki roślin i inokulacja grzybów
UWAGA: Do eksperymentów na liściach dotkniętych rdzą kawy, wyhodowano pięć 2-miesięcznych sadzonek Coffee arabica odmiany Catuaí i trzymano je w szklarni w Centrum Energii Jądrowej w Rolnictwie (CENA) Uniwersytetu w São Paulo, Piracicaba, stan São Paulo, Brazylia.
<ol>
	<li>Uprawiaj krzewy kawy w plastikowych doniczkach o pojemności 500 ml wypełnionych wodnym roztworem odżywczym Hoagland (pH ~5,5) przez 4 miesiące w komorze wzrostowej utrzymywanej w temperaturze 27 ± 3 °C z 12-godzinnym fotoperiodem utworzonym przez lampy LED przy strumieniu fotonów 250 μmol fotonów s-1 m-2. Pożywkę Hoagland należy wymieniać co tydzień przez 4 miesiące.</li>
	<li>Zaszczepić cztery ekspandowane liście z pięciu roślin na ich powierzchni aosijalnej za pomocą uredospor 1 x 103 H. vastatrix zgodnie z metodą opisaną w reference28. Po zaszczepieniu trzymaj rośliny przez 48 godzin w ciemności, przykrywając je czarną plastikową torbą. Zbierz zmiany chorobowe 30 dni po zaszczepieniu.</li>
	<li>Zbiory charakterystycznych zmian spowodowanych przez Cercospora coffeicola z Coffea arabica cv. Obatã rośliny zlokalizowane (współrzędne: -22.906506126269942, -47.015075902025266) w Instytucie Biologicznym, Campinas, stan São Paulo, Brazylia. Przed przetworzeniem próbki należy przeanalizować zmiany chorobowe w mikroskopie stereoskopowym, aby zweryfikować obecność kawy C. coffeicola conidia. Następnie zamontuj kilka slajdów z konidiami, aby potwierdzić etiologię choroby22.</li>
</ol>
3. Pobieranie próbek, utrwalanie i odwadnianie
<ol>
	<li>Za pomocą skalpela i pęsety zbierz próbkę liści o wielkości ~10 mm2 w środkowej części zmiany (żółte plamy; <silna klasa="xfig">Rysunek 1) i zanurz go w 30 ml roztworu utrwalającego Karnovsky'ego (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 1 i <silna klasa = "xfig" > Rysunek 2A). Etap utrwalania może odbywać się w lodówce przez 48 godzin.</li>
	<li>Co najmniej czterokrotnie należy poddać próbkę liści działaniu niskiej próżni (500-600 mBar) za pomocą pompy olejowej przez 15 minut każda, aby zwiększyć przepuszczalność roztworu utrwalającego w tkance liścia. Wykonaj ten krok z rotacją próbki (<silna klasa="xfig">Rysunek 1).</li>
	<li>Po utrwaleniu przemyć próbkę liści trzykrotnie w 0,5 M buforze kakodylowym (pH 7,2) rozcieńczonym w wodzie destylowanej przez 5 minut każdy, a następnie przenieść ją do stopniowanej serii etanolowej (30%, 50%, 70%, 90% (2x) i 100% (2x)) przez 15 minut przy każdym stężeniu etanolu (<silna klasa="xfig">Rysunek 1 i <silna klasa="xfig">Rysunek 2B).</li>
</ol>
4. Procedura osadzania Historesin
<ol>
	<li>Stopniowo przenoś próbki do metakrylanu glikolu (GMA) w trzech etapach, postępując zgodnie z instrukcjami producenta. Najpierw przygotuj roztwór A, mieszając proszek GMA (1 g) ze 100 ml żywicy zasadowej (zestaw himagazynin; Tabela materiałów) pod mieszaniem magnetycznym, a następnie wykonaj poniższe czynności.
	<ol>
		<li>Zanurz próbki w roztworze A w stosunku 1:2: 100% etanol na 3 godziny.</li>
		<li>Zanurz próbki w roztworze A w stosunku 1:1: 100% etanol na 3 godziny.</li>
		<li>Zanurz próbki w czystej żywicy zasadowej na 2-4 dni. Na tym etapie należy poddać próbki działaniu niskiej próżni co najmniej cztery razy dziennie przez 15 minut, a następnie obrócić.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. Polimeryzacja
UWAGA: Proces polimeryzacji wymaga 1,2 ml plastikowych form, podstawowej żywicy i utwardzacza (szczegóły dotyczące zestawu komercyjnego znajdują się w Tabeli Materiałów).
<ol>
	<li>Zmieszać 15 ml roztworu A (krok 4.1) z 1 ml utwardzacza w zlewce obracającej się przez 2 minuty, aby otrzymać roztwór polimeryzacyjny (roztwór B).</li>
	<li>Umieść 1,2 ml roztworu polimeryzacyjnego (roztwór B) w plastikowych foremkach. Za pomocą drewnianego kilofa przenieś uszkodzone próbki liści z czystej żywicy zasadowej do roztworu B (<silna klasa="xfig">Rysunek 2C). Unikaj używania pęsety, ponieważ może to spowodować zgniecenie tkanki.</li>
	<li>Upewnij się, że próbki liści są szybko ustawione prostopadle do plastikowych form, ponieważ roztwór B szybko staje się lepki w ciągu 5 minut. W jednej formie można umieścić więcej niż jedną próbkę liści z uszkodzeniami. 
	UWAGA: Zaleca się kilkukrotne przećwiczenie powyższego kroku przed złożeniem wniosku o wiele próbek. Gdy jest wiele próbek, czas polimeryzacji jest różny w zależności od formy, a prostopadła orientacja próbek liści może być trudna do osiągnięcia.</li>
	<li>Po osiągnięciu prostopadłej orientacji próbek liści odczekaj 30 minut, a następnie przenieś plastikową formę do plastikowej lub szklanej komory zawierającej żel krzemionkowy, aby zapobiec wilgoci. Poczekaj 2-3 godziny na polimeryzację.</li>
	<li>Gdy żywica i próbka liścia zostaną spolimeryzowane po okresie 2-3 godzin, odłącz powstały blok od plastikowej formy, szlifując podstawę bloku pilnikiem szlifierskim. Następnie przyklej klocek do kawałka drewna (<silna klasa="xfig">Rysunek 2D).</li>
</ol>
6. Podział na sekcje
<ol>
	<li>Za pomocą mikrotomu obrotowego wyposażonego w stalowe ostrza o średnicy 8 cm (<klasa silna="xfig">Rysunek 2E), pokrój blok na odcinki o grubości 5 μm. Umieść skrawki na szkiełkach pokrytych wodą destylowaną. Przenieść szkiełka z sekcjami unoszącymi się nad wodą na płytę grzejną w temperaturze 40 °C w celu wyschnięcia i zwiększenia przyczepności sekcji do szkiełek.</li>
	<li>Po wyschnięciu (<silna klasa="xfig">Rysunek 2F), oznacz szkiełka nazwą odniesienia do bloku i numerem slajdu.</li>
</ol>
7. Proces podwójnego barwienia
<ol>
	<li>Przykryj sekcje 2 ml 5% błękitu bawełnianego w laktofenolu (40% glicerolu, 20% fenolu i 20% kwasu mlekowego w wodzie) i podgrzej je na gorącej płycie w temperaturze 45 °C przez 5 minut (<klasa silna = "xfig">Rysunek 3A).</li>
	<li>Usuń nadmiar barwnika, myjąc szkiełko trzykrotnie w zlewce wypełnionej wodą destylowaną (<silna klasa="xfig">Rysunek 3B-D).</li>
	<li>Zabarwić 2 ml 0,01% czerwieni rutenowej w wodzie przez 1 minutę (<silna klasa = "xfig" >Rysunek 3E).</li>
	<li>Usuń nadmiar barwnika, myjąc szkiełko trzykrotnie w zlewce wypełnionej wodą destylowaną (<silna klasa="xfig">Rysunek 3F,G).</li>
	<li>Umieść kroplę wody destylowanej na skrawki i przykryj je szkiełkiem nakrywkowym o wymiarach 24 mm x 60 mm w celu przeprowadzenia analizy mikroskopowej w świetle.</li>
</ol>

<ol><li>deBary, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+on+the+development+of+some+parasitic+fungi%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Natural+Sciences.+Botany+and+Plant+Biology%22%5BJournal%5D)">Research on the development of some parasitic fungi.</a> Annals of Natural Sciences. Botany and Plant Biology. 20, 5(1863).</li>
<li>Mangin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+on+the+Peronospores%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+the+Natural+History+Society+of+Autun%22%5BJournal%5D)">Research on the Peronospores.</a> Bulletin of the Natural History Society of Autun. 8, 55-108 (1895).</li>
<li>Underwood, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plant+cell+wall%3A+a+dynamic+barrier+against+pathogen+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">The plant cell wall: a dynamic barrier against pathogen invasion.</a> Frontiers in Plant Science. 3 (85), 1-6 (2012).</li>
<li>Hückelhoven, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+wall-associated+mechanisms+of+disease+resistance+and+susceptibility%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Cell wall-associated mechanisms of disease resistance and susceptibility.</a> Annual Review of Phytopathology. 45, 101-127 (2007).</li>
<li>Voigt, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Callose-mediated+resistance+to+pathogenic+intruders+in+plant+defense-related+papillae%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Callose-mediated resistance to pathogenic intruders in plant defense-related papillae.</a> Frontiers in Plant Science. 5 (168), 1-6 (2014).</li>
<li>Chowdhury, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+accumulation+of+callose%2C+arabinoxylan+and+cellulose+in+nonpenetrated+versus+penetrated+papillae+on+leaves+of+barley+infected+with+Blumeria+graminis+f.+sp.+Hordei%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytologist%22%5BJournal%5D)">Differential accumulation of callose, arabinoxylan and cellulose in nonpenetrated versus penetrated papillae on leaves of barley infected with Blumeria graminis f. sp. Hordei.</a> New Phytologist. 204 (3), 650-660 (2014).</li>
<li>Marques, J. P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sugarcane+cell+wall-associated+defense+responses+to+infection+by+Sporisorium+scitamineum%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Sugarcane cell wall-associated defense responses to infection by Sporisorium scitamineum.</a> Frontiers in Plant Science. 9 (698), 1-14 (2018).</li>
<li>Caffall, K. H., Mohnen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure%2C+function%2C+and+biosynthesis+of+plant+cell+wall+pectic+polysaccharides%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohydrate+Research%22%5BJournal%5D)">The structure, function, and biosynthesis of plant cell wall pectic polysaccharides.</a> Carbohydrate Research. 344, 1879-1900 (2009).</li>
<li>Carpita, N. C., Ralph, J., McCann, M. C. The cell wall. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCarpita%2C+NC+%22Biochemistry+and+Molecular+Biology+of+Plants.%2C+2nd+Edition%22">Biochemistry and Molecular Biology of Plants., 2nd Edition</a>. , Wiley Blackwell. New York. 45(2015).</li>
<li>Lionetti, V., Cervone, F., Bellincampi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methyl+esterification+of+pectin+plays+a+role+during+plant-pathogen+interactions+and+affects+plant+resistance+to+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">Methyl esterification of pectin plays a role during plant-pathogen interactions and affects plant resistance to diseases.</a> Journal of Plant Physiology. 169 (16), 1623-1630 (2012).</li>
<li>Lionetti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pectoplate%3A+the+simultaneous+phenotyping+of+pectin+methylesterases%2C+pectinases%2C+and+oligogalacturonides+in+plants+during+biotic+stresses%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Pectoplate: the simultaneous phenotyping of pectin methylesterases, pectinases, and oligogalacturonides in plants during biotic stresses.</a> Frontiers in Plant Science. 6 (331), 1-8 (2015).</li>
<li>Lionetti, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+pectin+methylesterase+inhibitors+protect+cell+wall+integrity+for+Arabidopsis+immunity+to+Botrytis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">Three pectin methylesterase inhibitors protect cell wall integrity for Arabidopsis immunity to Botrytis.</a> Plant Physiology. 173 (3), 1844-1863 (2017).</li>
<li>Heath, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haustorium+sheath+formation+in+cowpea+leaves+immune+to+rust+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Haustorium sheath formation in cowpea leaves immune to rust infection.</a> Phytopathology. 61, 383-388 (1971).</li>
<li>Silva, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coffee+resistance+to+the+main+diseases%3A+leaf+rust+and+coffee+berry+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Journal+of+Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">Coffee resistance to the main diseases: leaf rust and coffee berry disease.</a> Brazilian Journal of Plant Physiology. 18 (1), 119-147 (2006).</li>
<li>An, P., Li, X., Zheng, Y., Eneji, A. E., Inanaga, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+effects+on+root+cell+wall+composition+and+ion+contents+in+two+soybean+cultivars+under+salinity+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Calcium effects on root cell wall composition and ion contents in two soybean cultivars under salinity stress.</a> Canadian Journal of Plant Science. 94 (4), 733-740 (2014).</li>
<li>Marques, J. P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sugarcane+smut%3A+shedding+light+on+the+development+of+the+whip-shaped+sorus%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Botany%22%5BJournal%5D)">Sugarcane smut: shedding light on the development of the whip-shaped sorus.</a> Annals of Botany. 119 (5), 815-827 (2017).</li>
<li>Delaye, L., García-Guzmán, G., Heil, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endophytes+versus+biotrophic+and+necrotrophic+pathogens-are+fungal+lifestyles+evolutionarily+stable+traits%5BTitle%5D)+AND+%22Fungal+Diversity%22%5BJournal%5D)">Endophytes versus biotrophic and necrotrophic pathogens-are fungal lifestyles evolutionarily stable traits.</a> Fungal Diversity. 60 (1), 125-135 (2013).</li>
<li>Avelino, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+coffee+rust+crises+in+Colombia+and+Central+America+%282008-2013%29%3A+impacts%2C+plausible+causes+and+proposed+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Security%22%5BJournal%5D)">The coffee rust crises in Colombia and Central America (2008-2013): impacts, plausible causes and proposed solutions.</a> Food Security. 7, 303-321 (2015).</li>
<li>Zambolim, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+status+and+management+of+coffee+leaf+rust+in+Brazil%5BTitle%5D)+AND+%22Tropical+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">Current status and management of coffee leaf rust in Brazil.</a> Tropical Plant Pathology. 41, 1-8 (2016).</li>
<li>Swiderska-Burek, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phytopathogenic+Cercosporoidfungi-from+taxonomy+to+modern+biochemistry+and+molecular+biology%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Phytopathogenic Cercosporoidfungi-from taxonomy to modern biochemistry and molecular biology.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (22), 8555(2020).</li>
<li>Andrade, C. C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection+process+and+defense+response+of+two+distinct+symptoms+of+Cercospora+leaf+spot+in+coffee+leaves%5BTitle%5D)+AND+%22Phytoparasitica%22%5BJournal%5D)">Infection process and defense response of two distinct symptoms of Cercospora leaf spot in coffee leaves.</a> Phytoparasitica. 49 (7), 727-737 (2021).</li>
<li>Zambolim, L. Coffee tree diseases. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZambolim%2C+L+%22Handbook+of+Phytopathology%3A+Diseases+of+cultivated+plants.+5th+ed%22">Handbook of Phytopathology: Diseases of cultivated plants. 5th ed</a>. , Agronômica Ceres Santana (in Portuguese). São Paulo. 810(2016).</li>
<li>Castaño, A. J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coffee+rust%5BTitle%5D)+AND+%22Informative+report+Cenicaf%C3%A9%22%5BJournal%5D)">Coffee rust.</a> Informative report Cenicafé. 82, 313-327 (1956).</li>
<li>Echandi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coffee+rust%2C+caused+by+the+fungus+Cercospora+coffeicola%5BTitle%5D)+AND+%22Turrialba%22%5BJournal%5D)">Coffee rust, caused by the fungus Cercospora coffeicola.</a> Turrialba. 9 (2), 54-67 (1959).</li>
<li>Souza, A. G. C., Rodrigues, F. A., Maffia, L. A., Mizubuti, E. S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection+process+of+Cercospora+coffeicola+on+coffee+leaf%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Infection process of Cercospora coffeicola on coffee leaf.</a> Journal of Phytopathology. 159 (1), 6-11 (2011).</li>
<li>Karnovsky, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+formaldehyde-glutaraldehyde+fixative+of+high+osmolality+for+use+in+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">A formaldehyde-glutaraldehyde fixative of high osmolality for use in electron microscopy.</a> Journal of Cell Biology. 27, 137-138 (1965).</li>
<li>Hoagland, D. R., Arnon, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+water-culture+method+for+growing+plants+without+soil%5BTitle%5D)+AND+%22College+of+Agriculture%2C+Agricultural+Experiment+Station%22%5BJournal%5D)">The water-culture method for growing plants without soil.</a> College of Agriculture, Agricultural Experiment Station. , University of California. Berkeley, California. 347(1950).</li>
<li>Eskes, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Coffee+rust%3A+epidemiology%2C+resistance+and+management%22%5BJournal%5D)">Resistance.</a> Coffee rust: epidemiology, resistance and management. 1, Boca Raton. 171(1989).</li>
<li>Silva, M. C., Nicole, M., Rijo, L., Geiger, J. P., Rodrigues, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytochemical+aspects+of+the+plant-rust+fungus+interface+during+the+compatible+interaction+Coffea+arabica+%28cv.+Caturra%29-Hemileia+vastatrix+%28race+III%29%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Plant+Sciences%22%5BJournal%5D)">Cytochemical aspects of the plant-rust fungus interface during the compatible interaction Coffea arabica (cv. Caturra)-Hemileia vastatrix (race III).</a> International Journal of Plant Sciences. 160 (1), 79-91 (1999).</li>
<li>Alves, R. F., Marques, J. P. R., Apezzato-da-Glória, B., Spósito, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Process+of+infection+and+colonization+of+Pseudocercospora+kaki+in+persimmon+leaves%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Process of infection and colonization of Pseudocercospora kaki in persimmon leaves.</a> Journal of Phytopathology. 169 (3), 168-175 (2020).</li>
<li>Hayat, M. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHayat%2C+MA+%22Principles+and+Techniques+of+Electron+Microscopy%3A+Biological+Applications%2C+Vol.+1%22">Principles and Techniques of Electron Microscopy: Biological Applications, Vol. 1</a>. , International Publishing. Berkeley Heights. 564(1981).</li>
<li>Paiva, E. A. S., Pinho, S. Z., Oliveira, D. M. T. Large plant samples: how to process for GMA embedding. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaiva%2C+EAS+%22Light+microscopy%3A+methods+and+protocols%22">Light microscopy: methods and protocols</a>. Chiarini-Garcia, H., Melo, R. C. N. 689, Humana Press. 37-49 (2011).</li>
<li>Marques, J. P. R., Soares, M. K. M., Appezzato-da-Glória, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+staining+technique+for+fungal-infected+plant+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Turkish+Journal+of+Botany%22%5BJournal%5D)">New staining technique for fungal-infected plant tissues.</a> Turkish Journal of Botany. 37 (4), 784-787 (2013).</li>
<li>Schuller, A., Ludwig-Müller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+methods+to+detect+the+clubroot+pathogen+Plasmodiophora+brassicae+during+its+complex+life+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">Histological methods to detect the clubroot pathogen Plasmodiophora brassicae during its complex life cycle.</a> Plant Pathology. 65 (8), 1223-1237 (2016).</li>
<li>Braga, Z. V., Santos, R. F., Amorim, L., Appezzato-da-Glória, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopathological+evidence+of+concomitant+sexual+and+asexual+reproduction+of+Elsino%C3%AB+ampelina+in+grapevine+under+subtropical+climate%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+and+Molecular+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">Histopathological evidence of concomitant sexual and asexual reproduction of Elsinoë ampelina in grapevine under subtropical climate.</a> Physiological and Molecular Plant Pathology. 111, 101517(2020).</li>
<li>Marques, J. P. R., Soares, M. K. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarques%2C+JPR+%22Manual+of+Techniques+Applied+to+Plant+Histopathology%22">Manual of Techniques Applied to Plant Histopathology</a>. Piracicaba, F. E. A. L. Q. , Santana. in Portuguese 140(2021).</li>
<li>Navarro, B. L., Marques, J. P. R., Appezzato-da-Glória, B., Spósito, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopathology+of+Phakopsora+euvitis+on+Vitis+vinifera%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">Histopathology of Phakopsora euvitis on Vitis vinifera.</a> European Journal of Plant Pathology. 154, 1185-1193 (2019).</li>
<li>Chesters, C. G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+methods+of+using+cotton+blue+as+a+mycological+stain%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Botany%22%5BJournal%5D)">Three methods of using cotton blue as a mycological stain.</a> Annals of Botany. 48 (3), 820-822 (1934).</li>
<li>Macedo, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+of+Techniques+in+Plant+Histology%5BTitle%5D)+AND+%22Feira+de+Santana%3A+State+University+of+Feira+de+Santana%22%5BJournal%5D)">Manual of Techniques in Plant Histology.</a> Feira de Santana: State University of Feira de Santana. , in Portuguese 68(1997).</li>
<li>Lecker, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+lactophenol+cotton+blue+slide+mounts%5BTitle%5D)+AND+%22Community+Eye+Health+Journal%22%5BJournal%5D)">Preparation of lactophenol cotton blue slide mounts.</a> Community Eye Health Journal. 12 (30), 24(1999).</li>
<li>Whitakaer, F. C. S., Denison, F. C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactic+acid+in+wool+dyeing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Society+of+Dyers+and+Colourists%22%5BJournal%5D)">Lactic acid in wool dyeing.</a> Journal of the Society of Dyers and Colourists. 98, 103(1895).</li>
<li>Chamberlain, C. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChamberlain%2C+CJ+%22Methods+in+Plant+Histology%22">Methods in Plant Histology</a>. , The University of Chicago Press. Chicago. 349(1932).</li>
<li>Sterling, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystal-structure+of+ruthenium+red+and+stereochemistry+of+its+pectin+stain%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Botany%22%5BJournal%5D)">Crystal-structure of ruthenium red and stereochemistry of its pectin stain.</a> American Journal of Botany. 57, 172-175 (1970).</li>
<li>Luft, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ruthenium+red+and+violet.+1.+Chemistry%2C+purification%2C+methods+of+use+for+electron+microscopy+and+mechanism+of+action%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Ruthenium red and violet. 1. Chemistry, purification, methods of use for electron microscopy and mechanism of action.</a> The Anatomical Record. 171 (3), 347-368 (1971).</li>
<li>Buckeridge, M. S., Cavalari, A. A., Silva, G. B. D. A. Cell Wall. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBuckeridge%2C+MS+%22Plant+Physiology%22">Plant Physiology</a>. Kerbauy, G. B. , Guanabara Koogan. Rio de Janeiro. in Portuguese 165-181 (2013).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

W niniejszej pracy przedstawiono alternatywny test histochemiczny z podwójnym barwieniem w celu zbadania składu pektyn ścian komórkowych otaczających haustorię w biotroficznym patosystemie. Celem jest również wykazanie skuteczności metody w wykrywaniu grzybów nekrotroficznych i wywołanych przez nich zmian w ścianie komórkowej. Tutaj pektyny ścian komórkowych miąższu kawy mogą otaczać zarówno szyję, jak i haustorium grzyba rdzy Hemileia vastatrix. Silva i wsp. opisali również enkapsulację przez celulozę i kalozę ...

Mechanizmy obronne ściany komórkowej u roślin są kluczowe dla powstrzymania infekcji grzybiczych. Badania wykazały zmiany w grubości i składzie ścian komórkowych od XIX wieku"xref">1,2. Zmiany te mogą być wywołane przez patogen grzybowy, który stymuluje tworzenie brodawki, która zapobiega przedostawaniu się grzybów do komórki lub może być wykorzystana do enkapsulacji strzępek w celu wyizolowania protoplastu komórki gospodarza od haustorii grzyba. Wytwarzanie dynamicznej bariery ściany komórkowej (tj. brodawek i całkowicie zamkniętego haustorium) jest ważne dla promowania odporności roślin3. Badania histopatologiczne nad chorobami związanymi z grzybami badały występowanie tych mechanizmów i opisały polimery ściany komórkowej, celulozę, hemicelulozę (arabinoksylany) i kallozę jako mechanizmy odporności na atak grzybów4,5,6,7.
Ściana komórkowa jest pierwszą barierą przed atakiem mikroorganizmów, utrudniając interakcję roślina-grzyb. Polisacharydy pektynowe tworzą ścianę komórkową i stanowią około 30% składu ściany komórkowej w pierwotnych komórkach roślin dwuliściennych, w których homogalakturonany są najliczniejszym polimerem (około 60%)<klasa sup = "xref">8. Golgi wydziela złożone związki pektynowe, które składają się na łańcuchy kwasu galakturonowego, które mogą, ale nie muszą być metylowane8,9. Od 2012 r. w literaturze zwraca się uwagę, że stopień estryfikacji metylowej pektyn ma kluczowe znaczenie dla określenia zgodności podczas infekcji przez mikrobiologiczne enzymy pektynowe10,11,12. W związku z tym wymagane są protokoły weryfikacji obecności i rozmieszczenia związków pektynowych w patosystemach roślinno-grzybowych.
Różne techniki zostały użyte do wykrycia enkapsulacji brodawek lub haustorii. Stosowanymi metodami referencyjnymi są transmisyjna mikroskopia elektronowa (TEM) tkanek utrwalonych oraz mikroskopia świetlna tkanek żywych i utrwalonych. Jeśli chodzi o TEM, kilka badań wykazało strukturalną rolę apozycji ściany komórkowej w odporności na grzyby13,14,15,16, oraz że stosowanie lektyn i przeciwciał jest skomplikowaną metodą lokalizacji polimerów węglowodanowych16. Jednak badania pokazują, że mikroskopia świetlna jest ważnym podejściem, a narzędzia histochemiczne i immunohistochemiczne pozwalają lepiej zrozumieć skład brodawek i powłoki haustorium6,7.
Grzyby chorobotwórcze prezentują dwa główne typy stylu życia: biotroficzny i nekrotroficzny. Grzyby biotroficzne są zależne od żywych komórek, podczas gdy grzyby nekrotroficzne zabijają komórki gospodarza, a następnie żyją w martwych tkankach17. W Ameryce Łacińskiej rdza liści kawy, wywoływana przez grzyba Hemileia vastatrix, jest ważną chorobą upraw kawy18,19. Hemileia vastatrix wykazuje zachowanie biotroficzne, a wśród zmian strukturalnych obserwowanych u odpornych gatunków lub odmian kawy odnotowano reakcję nadwrażliwości, odkładanie się modelozy, celulozy i ligniny na ścianach komórkowych, a także przerost komórek14. Według wiedzy autorów, w literaturze nie ma informacji na temat znaczenia pektyn w odporności kawy na rdzę. Z drugiej strony, grzyby nekrotroficzne, które powodują cerkospomoriozę, atakują pektyny za pośrednictwem zestawu enzymów związanych z degradacją ściany komórkowej, takich jak pektynazy i poligalakturonaza20. Cerkospomorze w kawie, wywoływana przez grzyba Cercospora coffeicola, jest również poważnym zagrożeniem dla upraw kawy21,22. Grzyb ten powoduje zmiany nekrotyczne zarówno w liściach, jak i jagodach. Po penetracji C. coffeicola kolonizuje tkanki roślinne poprzez szlaki wewnątrzkomórkowe i międzykomórkowe23,24,25.
Obecny protokół bada obecność struktur grzybowych i pektyn na ścianach komórkowych. Protokół ten jest przydatny do identyfikacji reakcji roślin związanej z pektyną (barwioną czerwonym barwnikiem rutenowym, który jest specyficzny dla kwaśnych grup kwasów poliuronowych pektyny), indukowaną przez gospodarza w biotroficznej interakcji z grzybem. Pomaga również zweryfikować wpływ grzybów nekrotroficznych na degradację pektynowych ścian komórkowych. Obecne wyniki wskazują, że metoda podwójnego barwienia jest skuteczna w rozróżnianiu struktur i fazy rozrodczej grzybów.

<table><tbody><tr><td>Ostrza DB80 HS</td><td>Leica</td><td>14035838383</td><td>Bufor</td></tr><tr><td>kakodylowy</td><td>do sekcji EMS</td><td># 11652</td><td>Fixation</td></tr><tr><td>Bawełna Niebieski Laktofenol</td><td>Metaqu&iacute; mica</td><td>70SOLSIG024629</td><td>Barwienie</td></tr><tr><td>formaldehydu</td><td></td> <td>EMS#15712</td><td>Utrwalanie</td></tr><tr><td>aldehydu glutarowego</td><td>EMS</td><td>#16216</td><td>Zestaw do utrwalania</td></tr><tr><td>Historesin</td><td>Technovit /EMS</td><td>#14653</td><td>Historesin do zatapiania</td></tr><tr><td>Płyta grzejna</td><td>Dubesser</td><td>SSCD25X30-110V</td><td>Mikroskopia barwienia</td></tr><tr><td></td><td>Zeiss</td><td>#490040-0030-000</td><td>Przechwytywanie obrazu</td></tr><tr><td>Mikrotom (Leica RM 2540)</td><td>Leica</td><td>149BIO000C1 14050238005</td><td>Sekcja</td></tr><tr><td>Plastikowa taca na kubki do formowania</td><td>EMS</td><td>10176-30</td><td>Barwienie</td></tr><tr><td>rutenu czerwonego</td><td>LABHouse</td><td>#006004</td><td>Oprogramowanie do barwienia</td></tr><tr><td>Axion Vision</td><td>Zeiss</td><td>#410130-0909-000</td><td>Przechwytywanie obrazu</td></tr><tr><td>Pompa próżniowa</td><td>Prismatec</td><td>131 TIPO 2 V.C.</td><td>Utrwalenie</td></tr></tbody></table>

metoda podwójnego barwienia do wykrywania pektyn w interakcji roślina-grzyb

Double-Staining Method to Detect Pectin in Plant-Fungus Interaction

Komórki roślinne używają różnych mechanizmów strukturalnych, konstytutywnych lub indukowalnych, aby bronić się przed infekcją grzybiczą. Enkapsulacja jest skutecznym, indukowalnym mechanizmem izolowania haustorii grzyba od protoplastu komórki roślinnej. I odwrotnie, pektyna, jeden z polimerowych składników ściany komórkowej, jest celem kilku enzymów pektolitycznych w interakcjach nekrotroficznych. W tym miejscu przedstawiono protokół wykrywania pektyn i strzępek grzybów za pomocą mikroskopii optycznej. Badana jest bogata w pektyny enkapsulacja w komórkach liści kawy zakażonych grzybem rdzy Hemileia vastatrix oraz modyfikacja ściany komórkowej mezofilu indukowana przez Cercospora coffeicola. Uszkodzone próbki liści utrwalono roztworem Karnovsky'ego, odwodniono i zatopiono w metakrylanie glikolu na 2-4 dni. Po wszystkich krokach przeprowadzono pompowanie próżniowe w celu usunięcia powietrza z przestrzeni międzykomórkowych i poprawy procesu osadzania. Osadzone bloki podzielono na sekcje o grubości 5-7 μm, które osadzano na szkiełku pokrytym wodą, a następnie podgrzewano w temperaturze 40 °C przez 30 minut. Następnie szkiełka zostały podwójnie wybarwione 5% błękitem bawełnianym w laktofenolu w celu wykrycia grzyba i 0,05% czerwieni rutenowej w wodzie w celu wykrycia pektyn (kwaśnych grup kwasów poliuronowych pektyny). Stwierdzono, że grzyby haustoria Hemileia vastatrix są otoczone pektyną. W cerkosporze kawy komórki mezofilu wykazywały rozpuszczanie ścian komórkowych, obserwowano strzępki międzykomórkowe i konidiofory. Przedstawiona tutaj metoda jest skuteczna w wykrywaniu odpowiedzi związanej z pektynami w interakcji roślina-grzyb.

Barwienie błękitem bawełnianym w laktofenolu na przekrojach zatopionych w GMA ujawniło obecność kilku struktur grzybowych pomiędzy i wewnątrz komórek mezofylu kawy w przypadku zarówno biotroficznych, jak i nekrotroficznych interakcji grzybowych.
W biotroficznym patosystemie, po zastosowaniu metody podwójnego barwienia, strzępki Hemileia vastatrix zawierające ściany komórkowe i gęstą treść protoplastu wybarwiają się na ciemnoniebiesko zarówno w parenchymie gąbczastej, jak i palisadowej...

Ten protokół opisuje mikroskopijną metodę wykrywania pektyn w interakcji między kawą a grzybem.

Metoda podwójnego barwienia do wykrywania pektyn w interakcji roślina-grzyb

Plant cells use different structural mechanisms, either constitutive or inducible, to defend themselves from fungal infection. Encapsulation is an ...

Protokół ten jest istotny, ponieważ umożliwia identyfikację interakcji roślina-grzyb. Oprócz barwienia pektyny wykazuje również defekty na polimerze ściany komórkowej patogenu i umożliwia identyfikację struktur grzyba. Ta prosta i nieskomplikowana technika może być wykonywana za pomocą mikroskopii świetlnej i nie wymaga drogiego sprzętu, takiego jak skaningowy mikroskop elektronowy.Ponadto jest to szybka technika, która uzyskuje doskonałe wyróżnienie struktur roślinnych do badań histopatologicznych. Technika ta identyfikuje interakcję roślina-grzyb. W związku z tym współpracuje w diagnostyce chorób wywoływanych przez grzyby biotroficzne i nekrotroficzne, takie jak rdza kawy i cerkossporioza.Na początek zbierz i około 10 milimetrów kwadratowych próbki liści w środkowej części zmiany za pomocą skalpela i pęsety i zanurz ją w 30 mililitrach roztworu utrwalającego Karnovsky'ego. Poddać próbkę liścia działaniu niskiej próżni od 500 do 600 milibarów przez 15 minut za pomocą pompy olejowej, co najmniej cztery razy, aby zwiększyć przepuszczalność roztworu utrwalającego w tkance liścia. Po utrwaleniu przemyć próbkę liści trzykrotnie w 0,5 M buforze kakodylowym rozcieńczonym w wodzie destylo

double-staining-method-to-detect-pectin-in-plant-fungus-interaction

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Ten film demonstruje metodę podwójnego barwienia przy użyciu czerwieni rutenowej i błękitu bawełnianego laktofenolu do wizualizacji pektyn i chityny podczas interakcji roślina-grzyb w roślinie rdzy kawowej. Zabieg pomaga zrozumieć mechanizmy obronne roślin podczas infekcji grzybiczych.

Metoda podwójnego barwienia: technika wizualizacji interakcji roślina-grzyb przy użyciu czerwieni rutenowej i laktofenolu cotton blue

Ten film opisuje metodę hodowli i jakościowej analizy biofilmów bakteryjnych na strzępkach grzybów za pomocą mikroskopii. Biofilmy bakteryjne często tworzą się na powierzchniach grzybów i obejmują liczne procesy interakcji bakteryjno-grzybiczych, takie jak współpraca metaboliczna, konkurencja lub drapieżnictwo.

Metoda przygotowania próbki w celu wizualizacji bakterii tworzących biofilm na strzępkach grzybów

Ten film demonstruje technikę barwienia immunologicznego do lokalizacji białek arabinogalaktanu (AGP) i pektyn w tkankach roślinnych. Utrwalone i zatopione w żywicy skrawki tkanki roślinnej są barwione przeciwciałami pierwszorzędowymi i fluorescencyjnymi specyficznymi dla AGP i pektyny oraz barwnikiem fluorescencyjnym wiążącym celulozę, aby ujawnić ich specyficzną tkankowo kolokalizację w ścianie komórkowej.

Immunolokalizacja białek i pektyn arabinogalaktanu w tkance roślinnej

Skład ściany komórkowej rośliny różni się w zależności od typu tkanki i może zawierać ligninę, celulozę, hemicelulozy i pektyny. Opracowano różne techniki barwienia w celu wizualizacji różnic na poziomie typu komórki. Niniejszy artykuł jest kompilacją powszechnie stosowanych technik barwienia ścian komórkowych.

Barwienie histochemiczne drugorzędowych elementów ściany komórkowej Arabidopsis thaliana

Niezbędne barwniki fluorescencyjne są niezbędnymi narzędziami do analiz obrazowania żywych komórek w nowoczesnej biologii komórek grzybów. W artykule szczegółowo opisano zastosowanie znanych i mniej znanych barwników fluorescencyjnych do śledzenia dynamiki błony plazmatycznej, endo-/egzocytozy i morfogenezy ściany komórkowej u grzybów strzępkowych.

Zastosowanie selektywnych barwników fluorescencyjnych błonowych i ścian komórkowych do obrazowania żywych komórek grzybów strzępkowych

Ten protokół opisuje szczegółowo, w jaki sposób materiał roślinny do immunolokalizacji białek i pektyn Arabinogalaktanu jest utrwalony, osadzony w hydrofilowej żywicy akrylowej, podzielony na sekcje i zamontowany na szkiełkach podstawowych. Pokazujemy, że epitopy związane ze ścianą komórkową zostaną wykryte za pomocą specyficznych przeciwciał.

Immunolokalizacja fluorescencyjna białek i pektyn arabinogalaktanu w ścianie komórkowej tkanek roślinnych

Protokół tutaj opisuje metody oceny wzorców i strategii kolonizacji mikoryzowej w korzeniach dla dwóch gatunków: Zea mays i Festuca rubra. Zastosowanie metody MycoPatt pozwala na obliczanie parametrów, konwersję struktur mikoryzowych na dane cyfrowe oraz odwzorowanie ich rzeczywistego położenia w korzeniach.

Mapy mikoryzowe jako narzędzie do badania wzorców kolonizacji i strategii grzybów w korzeniach Festuca rubra i Zea mays

Ten protokół ma na celu dostarczenie szczegółowych procedur zbierania, utrwalania i utrzymywania próbek roślin mykoheterotroficznych, stosując różne techniki mikroskopowe, takie jak skaningowa i transmisyjna mikroskopia elektronowa, mikroskopia świetlna, konfokalna i fluorescencyjna do badania kolonizacji grzybów w tkankach roślinnych i nasionach kiełkujących z grzybami mikoryzowymi.

Techniki mikroskopowe interpretacji kolonizacji grzybów w tkankach roślin mykoheterotroficznych i symbiotycznego kiełkowania nasion

Ze względu na nieprzezroczystość gleby, interakcje między jej składowymi mikroorganizmami nie mogą być łatwo zobrazowane za pomocą rozdzielczości komórkowej. Zaprezentowano tu dwa narzędzia mikroprzepływowe, które dają nowe możliwości badania interakcji grzybowo-mikrobiologicznych. Urządzenia są wszechstronne i proste w użyciu, umożliwiając wysoką kontrolę czasoprzestrzenną i obrazowanie w wysokiej rozdzielczości na poziomie komórkowym.

Narzędzia mikroprzepływowe do badania interakcji grzybowo-mikrobiologicznych na poziomie komórkowym

Obecny artykuł ma na celu dostarczenie szczegółowych i adekwatnych protokołów do izolacji grzybów endofitycznych związanych z roślinami, długoterminowego przechowywania izolatów, charakterystyki morfologicznej i całkowitej ekstrakcji DNA w celu późniejszej identyfikacji molekularnej i analiz metagenomicznych.

Izolacja, charakterystyka i całkowita ekstrakcja DNA w celu identyfikacji grzybów endofitycznych w roślinach mykoheterotroficznych

Ten raport opisuje podstawowe metody używane do hodowli i eksperymentalnego manipulowania jednokomórkową streptophyte alg, Penium margaritaceum. Zapewnia również podstawowe protokoły obrazowania opartego na mikroskopii, w tym znakowanie żywych komórek za pomocą przeciwciał monoklonalnych i innych sond fluorescencyjnych oraz skaningową mikroskopię elektronową.

Eksperymentalne protokoły badań przesiewowych, immunocytochemia i techniki obrazowania oparte na mikroskopii dla Penium margaritaceum

Poznaj metodę podwójnego barwienia do wykrywania pektyn w interakcjach roślina-grzyb przy użyciu mikroskopii świetlnej. Technika ta umożliwia identyfikację struktur grzybów i defektów polimerów ściany komórkowej patogenów bez konieczności stosowania drogiego sprzętu.

Metoda podwójnego barwienia do wykrywania pektyn w interakcji roślina-grzyb

Przeglądaj więcej filmów