Name: Kauteryzacja pełnego koła rąbka splotu naczyniowego w przypadku jaskry wywołanej chirurgicznie u gryzoni (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: Poznaj model jaskry indukowanej kauteryzacją naczyń limbusu u szczurów. Ta metoda umożliwia badanie neurodegeneracji siatkówki i nerwu wzrokowego oraz analizę funkcji wzrokowej in vivo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dziękujemy naszym technikom laboratoryjnym José; Nilson dos Santos, Daianne Mandarino Torres, José Francisco Tibúrcio, Gildo Brito de Souza i Luciano Cavalcante Ferreira. Badania te zostały sfinansowane przez FAPERJ, CNPq i CAPES.

<ol><li>Weinreb, R. N., Aung, T., Medeiros, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Pathophysiology+and+Treatment+of+Glaucoma+A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">The Pathophysiology and Treatment of Glaucoma A Review.</a> JAMA. 311 (8), 1901-1911 (2014).</li>
<li>Tham, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+prevalence+of+glaucoma+and+projections+of+glaucoma+burden+through+2040%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Global prevalence of glaucoma and projections of glaucoma burden through 2040: A systematic review and meta-analysis.</a> Ophthalmology. 121 (11), 2081-2090 (2014).</li>
<li>Quaranta, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+of+Life+in+Glaucoma%3A+A+Review+of+the+Literature%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Therapy%22%5BJournal%5D)">Quality of Life in Glaucoma: A Review of the Literature.</a> Advances in Therapy. 33 (6), 959-981 (2016).</li>
<li>Heijl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+intraocular+pressure+and+glaucoma+progression%3A+results+from+the+Early+Manifest+Glaucoma+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Reduction of intraocular pressure and glaucoma progression: results from the Early Manifest Glaucoma Trial.</a> Archives of Ophthalmology. 120 (10), Chicago, Ill. 1268-1279 (2002).</li>
<li>Susanna, R., De Moraes, C. G., Cioffi, G. A., Ritch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+Do+People+%28Still%29+Go+Blind+from+Glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Vision+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Why Do People (Still) Go Blind from Glaucoma.</a> Translational Vision Science & Technology. 4 (2), 1(2015).</li>
<li>Fujikawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VAV2+and+VAV3+as+candidate+disease+genes+for+spontaneous+glaucoma+in+mice+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">VAV2 and VAV3 as candidate disease genes for spontaneous glaucoma in mice and humans.</a> PLoS One. 5 (2), 9050(2010).</li>
<li>Mao, M., Hedberg-Buenz, A., Koehn, D., John, S. W., Anderson, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+segment+dysgenesis+and+early-onset+glaucoma+in+nee+mice+with+mutation+of+Sh3pxd2b%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Anterior segment dysgenesis and early-onset glaucoma in nee mice with mutation of Sh3pxd2b.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 52 (5), 2679-2688 (2011).</li>
<li>John, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+iris+atrophy%2C+pigment+dispersion%2C+and+glaucoma+in+DBA%2F2J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Essential iris atrophy, pigment dispersion, and glaucoma in DBA/2J mice.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 39 (6), 951-962 (1998).</li>
<li>Aihara, M., Lindsey, J. D., Weinreb, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+hypertension+in+mice+with+a+targeted+type+I+collagen+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Ocular hypertension in mice with a targeted type I collagen mutation.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 44 (4), 1581-1585 (2003).</li>
<li>Chou, T. H., Tomarev, S., Porciatti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mice+expressing+mutated+Tyr437His+human+myocilin+develop+progressive+loss+of+retinal+ganglion+cell+electrical+responsiveness+and+axonopathy+with+normal+iop%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Transgenic mice expressing mutated Tyr437His human myocilin develop progressive loss of retinal ganglion cell electrical responsiveness and axonopathy with normal iop.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 55 (9), 5602-5609 (2014).</li>
<li>vander Zypen, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+morphological+study+on+structure+and+function+of+the+filtration+angel+of+the+rat+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Experimental morphological study on structure and function of the filtration angel of the rat eye.</a> Ophthalmologica. 174 (5), 285-298 (1977).</li>
<li>Aihara, M., Lindsey, J. D., Weinreb, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aqueous+humor+dynamics+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Aqueous humor dynamics in mice.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 44 (12), 5168-5173 (2003).</li>
<li>Morrison, J. C., Fraunfelder, F. W., Milne, S. T., Moore, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limbal+microvasculature+of+the+rat+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Limbal microvasculature of the rat eye.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 36 (3), 751-756 (1995).</li>
<li>Morrison, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+chronic+pressure-induced+optic+nerve+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage.</a> Experimental Eye Research. 64 (1), 85-96 (1997).</li>
<li>Sappington, R. M., Carlson, B. J., Crish, S. D., Calkins, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microbead+occlusion+model%3A+A+paradigm+for+induced+ocular+hypertension+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">The microbead occlusion model: A paradigm for induced ocular hypertension in rats and mice.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 51 (1), 207-216 (2010).</li>
<li>Zhu, M. D., Cai, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+experimental+chronic+intraocular+hypertension+in+the+rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22Australian+and+New+Zealand+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Development of experimental chronic intraocular hypertension in the rabbit.</a> Australian and New Zealand Journal of Ophthalmology. 20 (3), 225-234 (1992).</li>
<li>Shareef, S. R., Garcia-Valenzuela, E., Salierno, A., Walsh, J., Sharma, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+ocular+hypertension+following+episcleral+venous+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Chronic ocular hypertension following episcleral venous occlusion in rats.</a> Experimental Eye Research. 61 (3), 379-382 (1995).</li>
<li>Levkovitch-Verbin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translimbal+laser+photocoagulation+to+the+trabecular+meshwork+as+a+model+of+glaucoma+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Translimbal laser photocoagulation to the trabecular meshwork as a model of glaucoma in rats.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 43 (2), 402-410 (2002).</li>
<li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+Circumlimbal+Suture+Model+of+Chronic+IOP+Elevation+in+Mice+and+Assessment+of+Changes+in+Gene+Expression+of+Stretch+Sensitive+Channels%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Characterization of the Circumlimbal Suture Model of Chronic IOP Elevation in Mice and Assessment of Changes in Gene Expression of Stretch Sensitive Channels.</a> Frontiers in Neuroscience. 11, (2017).</li>
<li>Biswas, S., Wan, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+rodent+hypertensive+glaucoma+models%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Review of rodent hypertensive glaucoma models.</a> Acta Ophthalmologica. 97 (3), 331-340 (2019).</li>
<li>Pitha, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+Dorzolamide+Release+Prevents+Axonal+and+Retinal+Ganglion+Cell+Loss+in+a+Rat+Model+of+IOP-Glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Vision+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Sustained Dorzolamide Release Prevents Axonal and Retinal Ganglion Cell Loss in a Rat Model of IOP-Glaucoma.</a> Translational Vision Science & Technology. 7 (2), 13(2018).</li>
<li>Grozdanic, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporary+elevation+of+the+intraocular+pressure+by+cauterization+of+vortex+and+episcleral+veins+in+rats+causes+functional+deficits+in+the+retina+and+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Temporary elevation of the intraocular pressure by cauterization of vortex and episcleral veins in rats causes functional deficits in the retina and optic nerve.</a> Experimental Eye Research. 77 (1), 27-33 (2003).</li>
<li>Lani, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+subacute+model+of+glaucoma+based+on+limbal+plexus+cautery+in+pigmented+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">A subacute model of glaucoma based on limbal plexus cautery in pigmented rats.</a> Scientific Reports. 9 (1), 16286(2019).</li>
<li>vander Merwe, E. L., Kidson, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+three-dimensional+organisation+of+the+post-trabecular+aqueous+outflow+pathway+and+limbal+vasculature+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">The three-dimensional organisation of the post-trabecular aqueous outflow pathway and limbal vasculature in the mouse.</a> Experimental Eye Research. 125, 226-235 (2014).</li>
<li>Prusky, G. T., Alam, N. M., Beekman, S., Douglas, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+quantification+of+adult+and+developing+mouse+spatial+vision+using+a+virtual+optomotor+system%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Rapid quantification of adult and developing mouse spatial vision using a virtual optomotor system.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 45 (12), 4611-4616 (2004).</li>
<li>Sasovetz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ketamine+hydrochloride%3A+an+effective+general+anesthetic+for+use+in+electroretinography%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Ketamine hydrochloride: an effective general anesthetic for use in electroretinography.</a> Annals of Ophthalmology. 10 (11), 1510-1514 (1978).</li>
<li>Stabio, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+map+of+the+mouse+eye+for+orienting+retinal+topography+in+anatomical+space%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">A novel map of the mouse eye for orienting retinal topography in anatomical space.</a> The Journal of Comparative Neurology. 526 (11), 1749-1759 (2018).</li>
<li>Blanco, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Chronic+Ocular-Hypertensive+Rat+Model+induced+by+Injection+of+the+Sclerosant+Agent+Polidocanol+in+the+Aqueous+Humor+Outflow+Pathway%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">A Chronic Ocular-Hypertensive Rat Model induced by Injection of the Sclerosant Agent Polidocanol in the Aqueous Humor Outflow Pathway.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (13), 3209(2019).</li>
<li>Paranhos, A., Prata, J. A., de Mello, P. A., da Silva, F. A. Post-Trabecular Glaucomas with Elevated Episcleral Venous Pressure. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aParanhos%2C+A+%22Mechanisms+of+the+Glaucomas%22">Mechanisms of the Glaucomas</a>. , Humana Press. 139-157 (2008).</li>
<li>Ou, Y., Jo, R. E., Ullian, E. M., Wong, R. O. L., Della Santina, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+Vulnerability+of+Specific+Retinal+Ganglion+Cell+Types+and+Synapses+after+Transient+Ocular+Hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%3A+The+Official+Journal+of+The+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Selective Vulnerability of Specific Retinal Ganglion Cell Types and Synapses after Transient Ocular Hypertension.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of The Society for Neuroscience. 36 (35), 9240-9252 (2016).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Kauteryzacja splotu rąbkowego (LPC) jest nowatorskim modelem postbeleczkowym, którego zaletą jest to, że jest ukierunkowana na łatwo dostępne struktury naczyniowe, które nie wymagają rozwarstwienia spojówki lub czopa17,28. W przeciwieństwie do modelu kauteryzacji żył wirowych, renomowanego modelu OHT opartego na chirurgicznym upośledzeniu drenażu żylnego naczyniówki, nie oczekuje się, że przekrwienie żylne wpłynie na wzrost ciśnienia wewnątrzgałkowego w modelu LP...

Literatura medyczna definiuje jaskrę jako niejednorodną grupę neuropatii nerwu wzrokowego charakteryzującą się postępującą degeneracją komórek zwojowych siatkówki (RGC), dendrytów, somy i aksonów, co skutkuje strukturalnym stawianiem baniek (wykopami) tarczy wzrokowej i funkcjonalnym pogorszeniem funkcjonowania nerwu wzrokowego, prowadzącym do ślepoty w niekontrolowanych przypadkach poprzez przerwanie transmisji informacji wzrokowej z oka do mózgu1. Jaskra jest obecnie najczęstszą przyczyną nieodwracalnej ślepoty na świecie, przewiduje się, że w 2040 r. dotrze do około 111,8 miliona osób2, co ma głęboki wpływ na jakość życia pacjentów (QoL) i prowadzi do poważnych problemów społeczno-ekonomicznych3.
Podwyższone ciśnienie wewnątrzgałkowe (IOP) jest jednym z najważniejszych i jedynym modyfikowalnym czynnikiem ryzyka rozwoju i progresji jaskry. Spośród wielu typów jaskry wszystkie, z wyjątkiem jaskry normalnego napięcia (NTG), są związane z podwyższonym ciśnieniem wewnątrzgałkowym w pewnym momencie historii klinicznej choroby. Pomimo niezwykłych postępów klinicznych i chirurgicznych w zakresie celowania w ciśnienie wewnątrzgałkowe i spowalniania lub zatrzymywania postępu choroby, pacjenci nadal tracą wzrok z powodu jaskry4,5. Dlatego dokładne zrozumienie złożonej i wieloczynnikowej patofizjologii tej choroby jest niezbędne do opracowania skuteczniejszych metod leczenia, zwłaszcza w celu zapewnienia neuroprotekcji RGC.
Wśród różnych eksperymentalnych podejść do zrozumienia mechanizmów choroby, modele zwierzęce oparte na nadciśnieniu ocznym (OHT) najbardziej przypominają jaskrę ludzką. Modele gryzoni są szczególnie przydatne, ponieważ są tanie, łatwe w obsłudze, mogą być modyfikowane genetycznie, mają krótką żywotność i wykazują cechy anatomiczne i fizjologiczne oka porównywalne z ludzkimi, takie jak produkcja i drenaż cieczy wodnistej6,7,8,9,10,11,12,13. Obecnie stosowane modele obejmują stwardnienie siatki beleczkowej po wstrzyknięciu hipertonicznego roztworu soli fizjologicznej do żył nadtwardówkowych14, dokomorowe wstrzykiwanie mikrogranulek15 lub substancje lepkosprężyste16, kauteryzacja żył wirowych17, fotokoagulacja siatki beleczkowej za pomocą lasera argonowego18, szew okołolimbowy19oraz wykorzystanie transgenicznego modelu OHT związanego z wiekiem (myszy DBA/2J)8. Jednak inwazyjność, pooperacyjne zmętnienie rogówki, przerwanie przedniego odcinka, rozległe krzywe uczenia się, drogi sprzęt i bardzo zmienne pooperacyjne IOPS to tylko niektóre z niewielu zgłaszanych pułapek związanych z obecnymi modelami, co sprawia, że opracowanie alternatywnego modelu OHT jest wymogiem przezwyciężenia tych problemów20,21,22.
Obecny protokół formalizuje nowatorską procedurę chirurgiczną mającą na celu wywołanie OHT jako wskaźnika jaskry, opartą na kauteryzacji splotu rąbkowego (LPC) u gryzoni23. Jest to łatwy, powtarzalny, dostępny i nieinwazyjny model, który zapewnia wysoką skuteczność i niską zmienność wzrostu ciśnienia wewnątrzgałkowego, co wiąże się z wyjątkowo wysokim wskaźnikiem pełnego powrotu do zdrowia klinicznego, zapewniając w ten sposób ocenę funkcjonalną in vivo u zmniejszonej liczby zwierząt wykorzystanych w każdym eksperymencie. Technika chirurgiczna indukuje podostre OHT ze stopniowym powrotem do poziomów wyjściowych w ciągu kilku dni, co modeluje atak nadciśnieniowy obserwowany w ostrej jaskrze z zamkniętym kątem przesączania. Co więcej, po powrocie do ciśnienia wewnątrzgałkowego w modelu następuje ciągła neurodegeneracja jaskry, co jest przydatne w przyszłych badaniach mechanistycznych wtórnego zwyrodnienia RGC, które występuje w kilku przypadkach jaskry ludzkiej pomimo odpowiedniej kontroli IOP.

<table><tbody><tr><td>Aceton</td><td>Isofar</td><td>201</td><td>Używany do mikroskopii elektronowej Przygotowanie tkanek (krok 5)</td></tr><tr><td>Aktywna elektroda do elektroretinografii</td><td>Hansol Medical</td> <td>Co-Igła</td> <td>ze stali nierdzewnej 0,25 mm i razy; 15 mm</td></tr><tr><td>Anestalcon</td><td>Novartis Bioci&ecirc; ncias S/A</td><td>MS-1.0068.1087</td><td>Chlorowodorek proksymetakainy 0,5%</td></tr> <tr><td>Chlorek wapnia</td><td>Vetec</td><td>560</td><td>Stosowany do przygotowania tkanek za pomocą mikroskopii elektronowej (krok 5)</td></tr> <tr><td>Kauteryzacja Low Temp Fine Tip 10 / bx</td><td>Bovie Medical Corporation</td><td>AA00</td><td>Niskotemperaturowa kauteryzacja okulistyczna</td></tr><tr><td>Cetamin</td><td>Syntec do Brasil Ltda</td><td>000200-3-000003</td><td>Chlorowodorek ketaminy 10%</td></tr> <tr><td>DAKO</td><td>Dako North America</td><td>S3023</td><td>Środek montażowy zapobiegający blaknięciu</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>28718-90-3</td><td>diamidyn-2-fenyloindol; niebieskie fluorescencyjne przeciwbarwienie jądrowe; emisja przy 452&plusmn; 3 nm</td></tr><tr><td>Ecofilm</td><td>Crist&aaostry; lia Produtos Qu&iacute; micos Farmac&ecirc; uticos Ltda</td><td>MS-1.0298.0487</td><td>Karmeloza sodowa 0,5%</td></tr> <tr><td>EPON</td><td>Żywica Polysciences, Inc.</td><td>-</td><td>Żywica epoksydowa stosowana do mikroskopii elektronowej, złożona z mieszaniny czterech odczynników: Żywica Poly / Bed 812 (CAT#08791); DDSA - bezwodnik dodecenylusztynkowy (CAT#00563); NMA - Bezwodnik metylu nadic (CAT#00886); DMP-30 - 2,4,6-tris(dimetyloaminometylo)fenol (CAT#00553)</td></tr><tr><td>Mikroskopia elektronowa</td> <td>aldehydu glutarowego</td><td>Sciences 16110</td><td>Używany do przygotowania tkanek za pomocą mikroskopii elektronowej (krok 5)</td></tr><tr><td>Hyabak</td><td>Uni&atilde; o Qu&iacute; mika Farmac&ecirc; utica Nacional S/A</td><td>MS-8042140002</td><td>Hialuronian sodu 0,15%</td></tr><tr><td>Icare Tonolab</td><td>Icare Finland Oy</td><td>TV02 (numer modelu)</td><td>Ręczny tonometr odbicia</td></tr><tr><td>Przeciwciało przeciw myszom osła IgG + Alexa Fluor 555</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A31570</td><td>Wtórny roztwór przeciwciał</td></tr><tr><td>Monitor LCD 23 cale</td><td>Samsung Electronics Co., Ltd.</td><td>S23B550</td><td>Model LS23B550, do zapisu elektroretinogramu</td></tr><tr><td>LSM 510 Meta</td><td>Carl Zeiss-Konfokalny</td><td></td> <td>mikroskop epifluorescencyjny</td></tr><tr><td>Maxiflox</td><td>Crist&aacute; lia Produtos Qu&iacute; micos Farmac&ecirc; uticos Ltda</td><td>MS-1.0298.0489</td><td>Ciprofloksacyna 3,5 mg / g</td></tr><tr><td>MEB-9400K</td><td>Nihon Kohden</td> <td>Corporation-System</td> <td>do rejestracji elektroretinogramu</td></tr><tr><td>monoklonalnego mysiego IgG1 anty-Brn3a</td><td>MilliporeSigma</td><td>MAB-1585</td><td>Brn3a roztwór przeciwciał pierwotnych</td></tr><tr><td>Neuropack Manager v08.33</td><td>Nihon Kohden</td> <td>Corporation-Oprogramowanie</td> <td>do przetwarzania</td></tr> <tr><td>sygnałów elektroretinogramuOptomotria</td><td>Mechanika</td> <td>mózgowa-System</td> <td>do analizy odpowiedzi optomotorycznej</td></tr><tr><td>Tetratlenek osmu</td><td>Mikroskopia elektronowa Nauki</td><td>19100</td><td>Używany do mikroskopii elektronowej Przygotowanie tkanek (krok 5)</td></tr><tr><td>Żelazocyjanek potasu</td><td>Mikroskopia elektronowa Nauki</td><td>20150</td><td>Używany do przygotowania tkanek w mikroskopii elektronowej (krok 5)</td></tr><tr><td>Elektrody referencyjne i uziemiające do elektroretinografii</td><td>Chalgren Enterprises</td><td>110-63</td><td>Igły ze stali nierdzewnej 0,4 mm i razy; 37 mm</td></tr><tr><td>Bufor kakodylanu sodu</td><td>Mikroskopia elektronowa Sciences</td><td>12300</td><td>Służy do przygotowania tkanek pod mikroskopią elektronową (krok 5)</td></tr><tr><td>Ster MD</td><td>Uni&atilde; o Qu&iacute; mika Farmac&ecirc; utica Nacional S/A</td><td>MS-1.0497.1287</td><td>Octan prednizolonu 0,12%</td></tr><tr><td>Terolac</td><td>Crist&aacute; lia Produtos Qu&iacute; micos Farmac&ecirc; uticos Ltda</td><td>MS-1.0497.1286</td><td>Ketorolac trometamol 0,5%</td></tr><tr><td>Terramicina</td><td>Laborat&oacute; rios Pfizer Ltda</td><td>MS-1.0216.0024</td><td>Chlorowodorek oksytetracykliny 30 mg/g + polimyksyna B 10 000 U/g</td></tr><tr><td>Tono-Pen XL</td><td>Reichert Technologies</td><td>230635</td><td>Ręczny tonometr do oznaczania cyfrowego</td></tr><tr><td>TO-PRO-3</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>T3605</td><td>Dalekosiężne czerwono-fluorescencyjne odbarwienie jądrowe; emisja przy 661 nm</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9036-19-5</td><td>Niejonowy środek powierzchniowo czynny</td></tr><tr><td>Octan uranylu</td><td>Mikroskopia elektronowa Sciences</td><td>22400</td><td>Służy do przygotowania tkanek za pomocą mikroskopii elektronowej (krok 5)</td></tr><tr><td>Xilazin</td><td>Syntec do Brasil Ltda</td><td>7899</td><td>Chlorowodorek ksylazyny 2%</td></tr><tr><td></td> Mikroskop <td>Carl Zeiss-Stereo</td><td></td> <td>do chirurgii i rozwarstwienia siatkówki</td></tr></tbody></table>

kauteryzacja pełnego koła rąbka splotu naczyniowego w przypadku jaskry wywołanej chirurgicznie u gryzoni

Full-Circle Cauterization of Limbal Vascular Plexus for Surgically Induced Glaucoma in Rodents

Jaskra, druga najczęstsza przyczyna ślepoty na świecie, to niejednorodna grupa zaburzeń oczu charakteryzujących się strukturalnym uszkodzeniem nerwu wzrokowego i zwyrodnieniem komórek zwojowych siatkówki (RGC), powodującym dysfunkcję wzroku poprzez przerwanie transmisji informacji wzrokowej z oka do mózgu. Podwyższone ciśnienie wewnątrzgałkowe jest najważniejszym czynnikiem ryzyka; W związku z tym opracowano kilka modeli nadciśnienia ocznego u gryzoni za pomocą podejść genetycznych lub eksperymentalnych w celu zbadania przyczyn i skutków choroby. Wśród nich odnotowano pewne ograniczenia, takie jak inwazyjność chirurgiczna, nieodpowiednia ocena funkcjonalna, wymóg intensywnego szkolenia i bardzo zróżnicowane rozszerzenie uszkodzenia siatkówki. Niniejsza praca charakteryzuje prostą, tanią i skuteczną metodę wywoływania nadciśnienia ocznego u gryzoni, opartą na niskotemperaturowej, pełnej kauteryzacji splotu naczyniowego rąbka, głównego składnika drenażu wodnistego. Nowy model zapewnia technicznie łatwe, nieinwazyjne i powtarzalne podostre nadciśnienie oczne, związane z postępującym RGC i zwyrodnieniem nerwu wzrokowego, oraz unikalny pooperacyjny wskaźnik rekonwalescencji klinicznej, który umożliwia badania funkcjonalne in vivo zarówno metodami elektrofizjologicznymi, jak i behawioralnymi.

Zmienne ilościowe przedstawiono jako średnią ± błąd standardowy średniej (SEM). Z wyjątkiem porównania dynamiki IOP między grupą OHT a grupą kontrolną (Rycina 1F), analiza statystyczna została przeprowadzona przy użyciu dwuczynnikowej analizy wariancji (ANOVA), a następnie testu wielokrotnych porównań Sidaka. Wartość p &lt; 0,05 uznano za istotną statystycznie.
Rysunek 1 przedstawia etapy chirurgiczne modelu pełnego kołowego wypalania...

Celem tego protokołu jest scharakteryzowanie nowego modelu neurodegeneracji jaskry opartej na 360° termicznej kauteryzacji rąbkowego splotu naczyniowego, wywołującej podostre nadciśnienie oczne.

Kauteryzacja pełnego koła rąbka splotu naczyniowego w przypadku jaskry wywołanej chirurgicznie u gryzoni

Glaucoma, the second leading cause of blindness worldwide, is a heterogeneous group of ocular disorders characterized by structural damage to the optic ...

Opracowaliśmy prostą metodę wywoływania silnego i postępującego zwyrodnienia jaskry w oparciu o tymczasowe podwyższenie ciśnienia wewnątrzgałkowego. Stanowi to wyjątkową okazję do zbadania kluczowych punktów patofizjologii jaskry. Jest to łatwy do nauczenia, nieinwazyjny, tani i wysoce powtarzalny model, który umożliwia analizę funkcji in vivo i krótkoterminowe projekty eksperymentalne z wykorzystaniem zmniejszonej liczby zwierząt w każdym eksperymencie.Siatkówka i nerw wzrokowy są możliwymi do oceny częściami ośrodkowego układu nerwowego, więc modelowanie postępującego upośledzenia tych struktur może dostarczyć cennych informacji na temat innych zaburzeń neurodegeneracyjnych. Aby zmierzyć podstawowe ciśnienie wewnątrzgałkowe lub IOP, zarówno eksperymentalnych, jak i przeciwległych oczu kontrolnych, umieść znieczulonego szczura w brzusznej pozycji odleżynowej na blacie stołu, tak aby powierzchnia rogówki była łatwo dostępna dla końcówki tonometru. Ustaw końcówkę tonometru tak, aby lekko dotykała prostopadle środkowej strefy rogówki.Następnie uzyskaj pomiar, naciskając przycisk pomiaru. Następnie umieść szczura w lekkiej bocznej pozycji odleżynowej pod mikroskopem stereoskopowym i zbadaj eksperymentalne oko w 40-krotnym powiększeniu. Podczas zabiegu należy nasmarować przeciwległe oko kontrolne, wkraplając kroplę karmelozy sodowej lub hialuronianu sodu.Następnie, za pomocą zakrzywionych kleszczy, delikatnie popchnij eksperymentalną gałkę oczną do przodu, aby odsłonić naczynia krwionośne otaczające 360 stopni rąbka. Następnie, drugą ręką, za pomocą niskotemperaturowej kauteryzacji okulistycznej, delikatnie kauteryzuj naczynia wokół rogówki. Uważaj, aby nie kauteryzować obwodu rogówki.Potwierdź powodzenie zabiegu chirurgicznego, obserwując pojawienie się małych kolistych śladów kauteryzacji na rąbku twardówki, zatarcie naczyń rąbkowych i rozszerzenie źrenicy w operowanym oku. Po zabiegu należy sprawdzić bezpośrednio po operacji ciśnienie wewnątrzgałkowe w obu oczach, jak pokazano wcześniej. Następnie nałóż kroplę octanu prednizolonu na przednią powierzchnię oka doświadczalnego.Po 40 sekundach zastąp go maścią z antybiotykiem okulistycznym. Stosuj codzienną obserwację kliniczną oka eksperymentalnego za pomocą miejscowych leków składających się z niesteroidowego leku przeciwzapalnego i maści z antybiotykiem. W celu analizy reakcji optomotorycznej umieść szczura w celu przyzwyczajenia się do niego na platformie zbudowanej z czterech monitorów komputerowych w czworokącie.Utrzymuj czerwony kursor celownika na klatce wideo między oczami swobodnie poruszającego się szczura, ponieważ wskazuje on środek wirtualnego cylindra. Obserwuj reakcję optomotoryczną polegającą na odruchowym śledzeniu głowy i szyi szczura wywołanym przez obracające się stopnie. Początkowo wprowadź bodziec o niskiej częstotliwości przestrzennej, a następnie stopniowo zwiększaj częstotliwość, aż ruch śledzenia nie zostanie zauważony.Aby zarejestrować elektroretinogram wzorca, po znieczuleniu szczura ostrożnie włóż aktywną elektrodę na skroniowym obrzeżu rogówki. Dodatkowo należy wprowadzić elektrodę referencyjną do tkanki podskórnej ipsilateralnej kanty skroniowej, a elektrodę masową do jednej z kończyn tylnych. Następnie umieść szczura w odległości 20 centymetrów od ekranu bodźca, monitoruj linię bazową sygnału i rozpocznij akwizycję, naciskając przycisk Analiza w systemie akwizycji.Po wyizolowaniu siatkówki przenieś je do 24-dołkowej płytki hodowlanej zawierającej jeden mililitr PBS, trzymając wewnętrzną siatkówkę skierowaną do góry. Przepuszczalność tkanki poprzez przemycie 0,5% niejonowym środkiem powierzchniowo czynnym rozcieńczonym w PBS. Następnie inkubować tkankę i roztwór blokujący przez godzinę w temperaturze pokojowej, delikatnie wstrząsając.Podczas inkubacji należy przygotować roztwór przeciwciała pierwszorzędowego Brn-3a i przechowywać w temperaturze czterech stopni Celsjusza. Po zablokowaniu tkanek inkubować siatkówki w 200 mikrolitrach roztworu przeciwciała pierwotnego w temperaturze czterech stopni Celsjusza przez 72 godziny, delikatnie wstrząsając. Następnie umyj chusteczkę PBS.Inkubować tkankę w 200 mikrolitrach roztworu przeciwciała wtórnego przez dwie godziny w temperaturze pokojowej, a następnie z roztworem przeciwbarwiącym jądro przez 10 minut w celu barwienia jąder fluorescencyjnych. Po trzech płukaniach PBS przenieś siatkówkę na szklane szkiełko mikroskopowe za pomocą dwóch małych szczotek, utrzymując szklistą stronę do góry. Ustaw kwadrant grzbietowej siatkówki do góry na szkiełku mikroskopowym.Na koniec nałóż 200 mikrolitrów środka mocującego zapobiegającego blaknięciu na szklane szkiełko nakrywkowe i umieść je na płasko zamontowanej siatkówce w celu analizy mikroskopowej. Pod konfokalnym mikroskopem epifluorescencyjnym, używając obiektywu powiększającego 40 razy, zbadaj płaskie mocowania, aby oszacować komórki zwojowe siatkówki. Po wyłuszczeniu gałki ocznej należy usunąć proksymalny odcinek wewnątrzoczodołowej części nerwu wzrokowego, w tym część części wewnątrzgałkowej.Następnie natychmiast umieść próbki w fiolkach lub probówkach zawierających od 200 do 300 mikrolitrów zimnego utrwalacza. Po dwóch godzinach przemyj tkankę zimnym 100 mikromolowym buforem kakodylanu sodu. Następnie utrwalaj tkankę przez godzinę w 1% tetratlenku osmu i pięciu nanomolowym chlorku wapnia w temperaturze czterech stopni Celsjusza pod delikatnym potrząsaniem.Po trzech przepłukaniach zimnym buforem kakodylanu sodu przemyj fragmenty nerwu wzrokowego zimną wodą destylowaną przed inkubacją przez noc i 1% octanem moczu w temperaturze czterech stopni Celsjusza. Następnego dnia, po trzech płukaniach wodą, stopniowo odwadniaj tkankę w rosnącym stężeniu acetonu. Następnie wykonaj trzy rundy zatapiania i roztworów acetonu żywicy epoksydowej przed zatopieniem tkanki w czystej żywicy epoksydowej na 24 godziny.Następnego dnia wyjmij próbki z nośnika próbki i przenieś je do form do zatapiania na 48 godzin w temperaturze 60 stopni Celsjusza. Po polimeryzacji za pomocą ultramikrotomu wyciąć poprzeczne półcienkie odcinki fragmentów nerwu wzrokowego. Następnie zbierz skrawki i przenieś je na szkiełko mikroskopowe.Wybarwić skrawki błękitem toluidynowym i zobrazować je za pomocą mikroskopu optycznego w 100-krotnym powiększeniu. W przypadku ultra analizy statyczno-wytrzymałościowej należy wykonać ultracienkie przekroje i zebrać je na siatce miedzianej. Następnie wybarwić skrawki octanem pisuaru i cytrynianem ołowiu do badania pod mikroskopem transmisyjnym.Kauteryzacja pełnego koła indukowała wzrost ciśnienia wewnątrzgałkowego natychmiast po operacji w porównaniu z oczami kontrolnymi. Szczyt pooperacyjnej wartości IOP obserwowano w pierwszym dniu i stopniowo zmniejszał się do poziomu wyjściowego w szóstym dniu. Ponadto funkcję siatkówki oceniano zarówno behawioralnie, jak i elektrofizjologicznie za pomocą odpowiednio odruchu optomotorycznego i elektroretinogramu wzorcowego.Po operacji oba parametry wykazały dwie odrębne fazy upośledzenia: nadciśnienie oczne w trzeciej dobie i wtórną fazę zwyrodnieniową w 30. dniu. W porównaniu z grupą kontrolną nerwów wzrokowych, liczba aksonów i półcienkie poprzeczne odcinki nerwu wzrokowego zmniejszały się stopniowo po operacji. Transmisyjne mikrografie elektronowe nerwów wzrokowych z oka kontrolnego wykazały gęsto upakowane włókna mielinizowane oddzielone cienkimi wyrostkami komórek glejowych oraz wyraźne mikrotubule aksonalne i neurofilamenty.Natomiast po trzech dniach nadciśnienia ocznego zaobserwowano kilka zdegenerowanych włókien, wakuolizację cytoplazmatyczną w procesach komórek glejowych i skondensowaną chromatynę w jądrach komórek glejowych. Po siedmiu dniach nastąpił wzrost zdegenerowanych włókien aksonalnych i hipertonicznych procesów komórek glejowych. A po 14 dniach zaobserwowano większe rozmieszczenie włókien nerwu wzrokowego związane z inwazją procesów komórek glejowych między aksonami.Ponadto gęstość komórek zwojowych siatkówki zmniejszała się z czasem, głównie w kwadrantach grzbietowych i skroniowych siatkówki. Podczas wykonywania tej procedury staraj się delikatnie dotykać naczyń rąbkowych końcówką kauteryzacyjną, oszczędzając obwód pępowiny i upewniając się, że wokół rąbka twardówki obserwuje się ciągłe ślady kauteryzacji. Po tej procedurze można zastosować różne metody, takie jak funkcjonalna biochemiczna i immunohistochemiczna ocena struktur oka oraz inne metody, które mogą potwierdzić fizjopatologię jaskry.

full-circle-cauterization-limbal-vascular-plexus-for-surgically

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Jaskra jest jedną z głównych przyczyn ślepoty na świecie. Podwyższone ciśnienie wewnątrzgałkowe stanowi główny czynnik ryzyka. Hipertonia oczna indukowana laserową fotokoagulacją jest jednym z dobrze ugruntowanych modeli zwierzęcych. Niniejszy film demonstruje, jak indukować hipertonię oczną za pomocą fotokoagulacji laserem argonowym u szczura.

Model przewlekłego nadciśnienia wewnątrzgałkowego indukowanego laserem u szczurów SD

Źródło: Lani-Louzada, R.,  i wsp., Kauteryzacja pełnego koła rąbkowego splotu naczyniowego w przypadku chirurgicznie wywołanej jaskry u gryzoni. J. Vis. Exp. (2022)Ten film pokazuje indukcję i monitorowanie podwyższonego ciśnienia wewnątrzgałkowego (IOP) w modelu szczurzym. Proces ten polega na kauteryzacji rąbkowych naczyń krwionośnych, co skutkuje niedrożnością naczyń i podwyższonym ciśnieniem wewnątrzgałkowym. Szczur może następnie wyzdrowieć, a ciśnienie wewnątrzgałkowe jest regularnie...

 Indukcja podwyższonego ciśnienia wewnątrzgałkowego w modelu szczurzym

Źródło: Lani-Louzada, R.,  i inni. Kauteryzacja pełnego koła rąbkowego splotu naczyniowego w przypadku jaskry wywołanej chirurgicznie u gryzoni. J. Vis. Exp. (2022). Ten film pokazuje ilościowe oznaczanie komórek zwojowych siatkówki z chemicznie utrwalonych siatkówk szczurów poddanych pełnej kauteryzacji splotu naczyniowego rąbka. Proces obejmuje przenikanie, barwienie przeciwciał i barwienie przeciwjądrowe, a następnie wizualizację pod mikroskopem epifluorescencyjnym w celu oceny wpływu...

Kwantyfikacja somy komórek zwojowych siatkówki po nadciśnieniu ocznym wywołanym kauteryzacją 

Przewlekłe nadciśnienie oczne jest wywoływane za pomocą laserowej fotokoagulacji siatki beleczkowej w oczach myszy. Ciśnienie wewnątrzgałkowe (IOP) utrzymuje się podwyższone przez kilka miesięcy po leczeniu laserowym. Spadek ostrości wzroku i wrażliwości na kontrast u zwierząt doświadczalnych monitoruje się za pomocą testu optomotorycznego.

Mysi model przewlekłego nadciśnienia ocznego indukowany laserem w celu scharakteryzowania wad wzroku

Jaskra charakteryzuje się uszkodzeniem komórek zwojowych siatkówki. Indukowanie jaskry w modelach zwierzęcych może zapewnić wgląd w badania nad tą chorobą. W tym miejscu przedstawiamy procedurę, która indukuje utratę RGC w modelu szczura in vivo i demonstrujemy przygotowanie całych siatkówk do analizy.

Procedura indukująca jaskrę w modelu szczura in vivo i preparat siatkówki z pełnym mocowaniem

Poniższy artykuł przedstawia łatwą, powtarzalną technikę skutecznego tworzenia trwałego mysiego modelu niedoboru rąbków komórek macierzystych (LSCD). Ten model zwierzęcy jest przydatny w testowaniu i porównywaniu skuteczności leczenia chorób rąbkowych komórek macierzystych.

Prosta mechaniczna procedura powodująca niedobór rąbkowych komórek macierzystych u myszy

Przewlekłe nadciśnienie oczne jest wywoływane przez zastosowanie szwu okołokończynowego u szczurów i myszy, co prowadzi do funkcjonalnego i strukturalnego pogorszenia komórek zwojowych siatkówki zgodnego z jaskrą.

Model jaskry indukowanej szwem okołolimbowym u szczurów i myszy

Tutaj opisujemy zoptymalizowany protokół do zamykania żył siatkówki za pomocą róży bengalskiej i sterowanego laserowo systemu obrazowania siatkówki z zaleceniami maksymalizacji jego odtwarzalności w genetycznie modyfikowanych szczepach.

Optymalizacja mysiego modelu niedrożności żyły siatkówki w celu ograniczenia zmienności

Ten protokół opisuje metodę wywoływania dokładnego i powtarzalnego uszkodzenia rogówki i rąbków w modelu mysim. Protokół jest korzystny, ponieważ pozwala na równomierne rozłożenie uszkodzenia silnie zakrzywionej rogówki i rąbka myszy.

Indukcja alkaliów rogówki i rąbka za pomocą techniki stempla i trepanacji w modelu mysim

Protokół ten opisuje Trabeculotome Tunneling Trabeculoplasty (3T) — minimalnie inwazyjną operację jaskry, obejmującą nacięcie traweklarne, rozszerzenie kanału Schlemma (SC) oraz implantację szwów napięciowych w celu przywrócenia fizjologicznego odpływu wodnego — z nieporównywalną serią przypadków.

Trabekulotomia tunelowa z użyciem trabekulotomu (3T): krok po kroku protokół chirurgiczny w leczeniu pierwotnego jaskry z otwartym kątem przesączania

Poznaj model jaskry indukowanej kauteryzacją naczyń limbusu u szczurów. Ta metoda umożliwia badanie neurodegeneracji siatkówki i nerwu wzrokowego oraz analizę funkcji wzrokowej in vivo.

Kauteryzacja pełnego koła rąbka splotu naczyniowego w przypadku jaskry wywołanej chirurgicznie u gryzoni

Przeglądaj więcej filmów