Ocena wiarygodnego biomarkera w mysim modelu sepsy wywołanym podwiązaniem i nakłuciem jelita ślepego

Głównym celem tego badania jest wykorzystanie mysiego modelu podwiązania jelita ślepego i sepsy wywołanej nakłuciem w celu oceny wiarygodnego biomarkera sepsy we krwi. Podwiązanie i nakłucie jelita ślepego, w skrócie CLP, jest klinicznie istotnym modelem sepsy. CLP jest powszechnie stosowanym modelem w badaniach nad sepsą.

Cytrulinowany histon H3 lub CitH3 pochodzi z NETozy wywołanej sepsą. Nasze poprzednie badanie pokazuje, że CitH3 jest wiarygodnym biomarkerem diagnostycznym sepsy. Wybierz samca myszy C57BL/6.

Zważ mysz i znieczul mysz przez inhalację 1,5% izofluranu. Zamocuj mysz na poduszce grzewczej. Nałóż krem do depilacji na brzuch i pozostaw nie dłużej niż minutę przed usunięciem kremu i włosów.

Przygotuj sterylne narzędzia chirurgiczne odpowiednie do chirurgii gryzoni. Zdezynfekuj skórę brzucha jodem co najmniej trzy razy. Przykryj operacyjne pole operacyjne odpowiednią sterylną draperią chirurgiczną.

Użyj sterylnych nożyczek chirurgicznych, aby wykonać około dwucentymetrowe nacięcie w ścianie brzucha, wzdłuż kresy białej. Zidentyfikuj i odizoluj jelito ślepe z jamy otrzewnej za pomocą sterylnej pęsety. Podwiązywać 75 objętość jelita ślepego za pomocą jedwabnego szwu 4-0.

Nie należy podwiązywać naczyń krwionośnych krezki. Należy zauważyć, że różny procent podwiązanego jelita ślepego decyduje o nasileniu sepsy. 25% prowadzi do sepsy o niskim stopniu nasilenia, 50% prowadzi do sepsy średniego stopnia, a 75% prowadzi do sepsy o wysokim stopniu złośliwości.

Nakłuć jelito ślepe przez jedną perforację na wylot za pomocą igły o rozmiarze 21 w punkcie środkowym między końcem ogona a podwiązaniem. Delikatnie wyciśnij kał z jelita ślepego przez otwory penetracyjne. Należy zauważyć, że ilość kału wciśniętego do jamy otrzewnej powinna być stała, ponieważ kał również decyduje o nasileniu sepsy.

Delikatnie włóż jelito ślepe oraz kał do jamy brzusznej. Zamknij warstwę mięśni brzucha i warstwę skóry za pomocą jedwabnego szwu 6-0. Zdezynfekuj nacięcie jodem.

Wstrzyknięcie ketoprofenu, pięć miligramów na kilogram, należy wykonać w lewy dolny kwadrant brzucha, aby uniknąć jelita ślepego. Umieść mysz na poduszce grzewczej do pełnego wyzdrowienia. Mysz jest trzymana w pomieszczeniu o kontrolowanej temperaturze i ma swobodny dostęp do jedzenia i wody.

Zwierzęta zostaną poddane eutanazji w wyniku przedawkowania dwutlenku węgla z objawami sepsy, istotnymi dla naszych wstępnie zdefiniowanych punktów końcowych na podstawie przedstawionego przez nas badania. Myszy są losowo przydzielane do grupy pozorowanej, grupy CLP i grupy leczonej CLP plus Cl-amidyną lub YW3-56. Myszy w grupie pozorowanej otrzymują wszystkie procedury CLP z wyjątkiem podwiązania i nakłucia jelita ślepego.

Krew obwodową należy pobrać po 24 godzinach od operacji i przygotować surowicę przez odwirowanie. Stężenie CitH3 określono za pomocą western blotting i samodzielnie opracowanego zestawu ELISA. Jak pokazano na rycinie drugiej, w grupie pozorowanej nie wykryto CitH3.

Poziomy CitH3 były podwyższone po insercji CLP, która została znacznie osłabiona przez hamowanie PAD. Na podstawie naszych danych wnioskujemy, że krążący CitH3 jest wiarygodnym biomarkerem diagnostycznym sepsy.